CN108014119B - 苯丙素糖苷Smiglaside A在制备治疗脓毒症的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种天然产物苯丙素糖苷Smiglaside A新的用途，具体涉及到化合物苯丙素糖苷Smiglaside A在制备改善或者治疗脓毒症的药物中的应用，主要表现在：Smiglaside A可明显降低脂多糖造成的巨噬细胞炎症，Smiglaside A可以明显缓解脂多糖造成的脓毒症小鼠死亡；可明显改善脂多糖造成的急性肺损伤；可明显降低血液以及肺组织中的炎症反应，有望成为治疗脓毒症等炎症相关疾病的新药。

Description

苯丙素糖苷Smiglaside A在制备治疗脓毒症的药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术，特别是涉及苯丙素糖苷Smiglaside A在制备治疗脓毒症等炎症相关疾病的药物中的应用。

背景技术

苯丙素糖苷Smiglaside A(CAS登记号：288254-95-5)是从百合科菝葜属植物牛尾菜、土茯苓中分离出来的一种化学成分，其结构式如下

菝葜属中的很多植物为我国民间常用的民族药，据文献报道，该属植物中存在二萜、三萜、黄酮类等成分，显示出抗炎、抗肿瘤、抗病毒等多种药理活性。但是到目前为止，还未见关于Smiglaside A抗炎生物活性研究的相关报道。

脓毒症是严重创伤、烧伤、缺血再灌注损伤等多种疾病中由感染引发的常见并发症。脓毒症进行性发展可以造成严重的脓毒性休克以及多器官功能紊乱，最终导致病人死亡。据统计，全球每年约有1800万人发病，死亡率高达30％，即使康复后也会留有严重的后遗症，是现代危重病医学尚未解决的重大难题。并且其发病率仍呈上升趋势，目前尚缺乏有效的治疗手段。脓毒症的发病机制尚不完全清楚。目前认为，致病微生物感染机体造成的炎症反应失控及免疫紊乱是脓毒症发病的主要原因。脓毒症感染时，内毒素等刺激免疫细胞产生大量炎性介质，促使炎性反应细胞尤其是巨噬细胞在组织中募集活化，进一步产生细胞因子、趋化因子、氧自由基等，形成瀑布样级联反应，导致器官受损甚至衰竭，最终造成病人死亡。因此，调控炎症应答是脓毒症治疗的重要方向，也是药物研发的热点。

发明内容

本发明的目的是提供苯丙素糖苷Smiglaside A用于制备治疗脓毒症等炎症相关疾病的药物的应用，特别是用于制备治疗细菌内毒素所致脓毒症及其造成的肺损伤药物中的应用。

本发明的技术方案是：如下所示的化合物苯丙素糖苷Smiglaside A在制备改善或者治疗脓毒症等炎症相关疾病的药物中的应用。

所述化合物苯丙素糖苷Smiglaside A能够缓解脂多糖所致脓毒症死亡以及肺损伤。

所述化合物苯丙素糖苷Smiglaside A能够抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α的表达。

一种药物组合物在制备改善或者治疗脓毒症的药物中的应用，所述药物组合物包括有效剂量的如下所示的苯丙素糖苷Smiglaside A和药学上可接受的载体和/或辅料。

上述苯丙素糖苷Smiglaside A由牛尾菜中分离提取所得，可通过本领域已知方法提取制备。

有益效果：(1)本发明发现了一种全新的天然产物苯丙素糖苷Smiglaside A缓解脓毒症的制药应用；(2)本发明首次发现了苯丙素糖苷Smiglaside A具有抑制巨噬细胞炎症的作用，并且在有效剂量下无明显毒性；(3)本发明首次发现了苯丙素糖苷Smiglaside A具有缓解小鼠脓毒症及其造成的肺损伤的作用，预示着其具有较好的治疗脓毒症等炎症相关疾病的临床应用前景。

附图说明

图1是Smiglaside A对脂多糖刺激的RAW264.7巨噬细胞中炎症因子TNF-α表达的影响；

图2是Smiglaside A对RAW264.7的细胞活力影响；

图3是Smiglaside A对脓毒症小鼠死亡率的影响；

图4是Smiglaside A对脓毒症小鼠肺组织病理的影响；

图5是Smiglaside A对脓毒症小鼠血清、肺组织中炎症因子TNF-α的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本申请作出详细说明。

药物：本实验所用苯丙素糖苷Smiglaside A由牛尾菜中分离提取，本领域技术人员采用常规方法即可提取获得。

本实验的提取方法为：称取牛尾菜根茎药材10kg，粉碎，用95％乙醇回流提取，三次，分别1h，2h，3h，合并粗提取液，残渣备用。粗提取液静置过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪除去溶剂，直至基本无醇味。得到约600g粗提物。粗提取物扩散到4L水中，搅拌均匀，倒入HPD-600的大孔树脂，大孔树脂事先用乙醇浸泡洗净并用水平衡好。待样品上完，静置半天，用纯水冲柱子，直至洗脱下来的液体基本无色。然后，用95％乙醇洗脱被吸附的物质，直至有明显条带下来后，洗脱液变成淡黄色为止。合并乙醇洗脱液，用旋转蒸发仪除去溶剂，直至基本无醇味，得到提取物约350g，提取物扩散到水中(3L)，用乙酸乙酯萃取，四次，每次1L，合并萃取液，并用旋转蒸发仪除去溶剂至干，得到乙酸乙酯提取物约77.6g。乙酸乙酯部位提取物先经过硅胶柱(200×10cm)划分为9段，第9段再反复进行硅胶柱、C18柱、葡聚糖柱和MCI柱反复柱层析，得到化合物Smiglaside A，约650mg。

试剂：脂多糖(LPS)购置于碧云天生物技术有限公司，其它试剂为市售的分析纯试剂。

细胞：RAW264.7巨噬细胞系购置于中国典型培养物保藏中心。

试剂盒：TNF-α的ELISA试剂盒购置于深圳达科为生物技术有限公司。

实施例1

细胞中炎症因子表达测定：取提取所得Smiglaside A(0.1-20μM)预处理RAW264.7，2h后加入脂多糖LPS(100ng/ml)作用2小时后，依据商品化试剂盒操作说明ELISA技术检测细胞上清中炎症因子TNF-α的表达。试验结果如图1所示，其中###p<0.001,vsControl；*p<0.05,***p<0.001,vs LPS(Graphpad 6.0,Bonferroni's test)，由此可见，脂多糖明显造成巨噬细胞RAW264.7中炎症因子TNF-α的表达上调，苯丙素糖苷Smiglaside A具有良好的抗炎活性，能很好的抑制巨噬细胞中炎症因子TNF-α的表达，有效量为5-20μM，优选10-20μM。

实施例2

细胞活力测定：取提取所得Smiglaside A(0.1-40μM)预处理RAW264.7细胞24小时，MTT方法测定细胞活力。试验结果如图2所示，由图可见，苯丙素糖苷Smiglaside A在40μM下对RAW264.7细胞未见明显毒性。

实施例3

动物给药分组：实验动物为C57BL/6小鼠，随机地将实验小鼠分为对照组、模型组、给药组；对照组、模型组腹腔注射含1％DMSO的生理盐水，给药组腹腔注射10mg/kg的提取所得Smiglaside A(溶于含1％DMSO的生理盐水)，连续3天，末次给药2h后腹腔注射LPS 10mg/kg。

结果统计：

死亡率观察：腹腔注射LPS后，每隔4小时观察小鼠生存情况，持续48小时。观察结果见图3所示，其中**p<0.01,vs LPS(Graphpad 6.0,Bonferroni's test)。

肺病理、血清和肺组织炎症因子测定：在手术后6小时收集血清及肺脏，依据商品化试剂盒操作说明，ELISA技术检测血清及肺脏中TNF-α的表达，并进行肺脏H&E染色。肺组织病理结果见图4，血清、肺组织中炎症因子TNF-α影响结果见图5所示，其中，###p<0.001,vs Control；***p<0.001,vs LPS(Graphpad 6.0,Bonferroni's test)。

综上可见，腹腔注射脂多糖后，小鼠明显死亡；注射脂多糖6小时后血清和肺组织中的炎症因子TNF-α有明显增多；肺组织明显受损。Smiglaside A能明显抑制小鼠死亡，明显降低血清和肺组织中炎症因子TNF-α的释放，并对肺部病理损伤有明显改善。

Claims (6)

1.如下所示的化合物苯丙素糖苷Smiglaside A在制备改善或者治疗脓毒症的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物苯丙素糖苷Smiglaside A能够缓解脂多糖所致脓毒症死亡。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物苯丙素糖苷Smiglaside A能够缓解脂多糖所致脓毒症肺损伤。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化合物苯丙素糖苷Smiglaside A能够抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α的表达。

5.一种药物组合物在制备改善或者治疗脓毒症的药物中的应用，其特征在于，所述药物组合物包括有效剂量的如下所示的苯丙素糖苷Smiglaside A和药学上可接受的辅料。

6.根据权利要求1-5中任一所述应用，其特征在于，所述苯丙素糖苷Smiglaside A由牛尾菜中分离提取所得。

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