CN108004289A - 一种扇贝多肽保健品的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物提取技术领域，具体涉及一种扇贝多肽保健品的提取方法，首先将扇贝粉末在液氮中进行低温冷冻处理，能够使扇贝变脆，使扇贝充分粉碎，有利于多肽物质的溢出；通过对扇贝粉进行酸解处理，除去扇贝中的碳酸钙，使多肽从扇贝壳体中分离出来，再利用纤维素酶、蛋白酶对扇贝进行酶解，最后通过吸附剂能够吸附扇贝中的重金属离子和其他杂质，提高多肽的纯度，再利用碱性物质使蛋白发生沉淀，使多肽溢出，从而提高多肽的纯度和提取效率。通过本发明的方法提高了蛋白质的酶解效率，并且利用高压均质，提高了产品的得率，使得原料利用率提高，产品质量稳定，有利于工业化生产。

Description

一种扇贝多肽保健品的提取方法

技术领域

本发明涉及生物提取技术领域，具体涉及一种扇贝多肽保健品的提取方法。

背景技术

扇贝是扇贝属双壳类软体动物的代称，扇贝科约有400多种品种，其中有60多个品种是世界上重要的海洋渔业资源之一，其壳、肉、珍珠层都具有很高的利用价值。扇贝营养丰富，肉质鲜美可口具有很高的食用价值，研究还发现，其富含多种生物活性成分，也具有很高的药用和保健价值。扇贝具有很高经济价值，但是目前国内对其精深加工、生物活性成分的提取及食用安全等方面的研究相对滞后。扇贝食用加工过程中会产生大量的扇贝边下脚料，扇贝边的外套膜、内脏团、腮也富含蛋白质、牛磺酸等物质，营养价值毫不逊色于扇贝柱，但饭店或食品厂很少对其再开发利用，从而造成资源的浪费，同时还会严重污染环境。贝类养殖的快速发展，产生了大量贝壳废弃物。长期以来，大量的贝壳资源未能得到充分利用，作为废弃物倾倒于海岸、沙滩，造成了严重的海岸带污染。贝壳污染已成为沿海地区亟待解决的环境问题，且逐年堆积所造成的环境问题越来越严重。贝壳处理问题成为制约贝类养殖产业进一步发展的瓶颈之一，贝壳废弃物的资源化开发利用势在必行。

公开号为CN106720914A的中国专利申请提供了一种扇贝边多肽干粉的制备方法，包括如下步骤：将清洗干净的扇贝边烘干后粉碎，得到扇贝边干粉；将所述扇贝边干粉加入水中，并超声混匀，得到混合溶液；往所述混合溶液中加入蛋白酶进行酶解，酶解完成后灭活，得到酶解液；将所述酶解液冷却后离心，取上清液；往所述上清液中加入活性碳进行脱腥处理；接着离心，取上清液并冷冻干燥，得到所述扇贝边多肽干粉。本发明能够将扇贝加工过程中弃用的扇贝边充分利用，而且克服了扇贝边腥味太重的口感问题，有利于扇贝边制品的大规模推广。公开号为CN105385744A的中国专利申请提供了一种扇贝边多肽提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)将新鲜扇贝去掉扇贝柱，洗去泥沙和胃的内容物，用绞肉机搅碎，称重后置于烧杯中，加入2～3倍体积乙醇静置5～7h；(2)静置后，放进冷冻离心机3000～5000r/min离心15～20min， 除去上清液，将残渣称重按一定固液比加入生理盐水并搅拌均匀，加入到酶解罐中，升高温度，以残渣重量为标准加入一定量的蛋白酶，用酸碱调节pH，1000～3000r/min匀速搅拌，保温酶解；(3)酶解完成后，将酶解液置于恒温水浴中95～100℃灭酶15～20 min，冷却后5000～10000r/min离心15～20min，取上清液置于旋转蒸发仪中旋蒸，然后冷冻干燥，即得到扇贝多肽的粗制品。该方法提高了生物资源的利用率，反应条件温和，原料来源广，成本低，操作简单，可应用于工业化生产，具有很高的经济价值。

根据上述，现有扇贝多肽的提取效率较低，为此，进行高效的扇贝多肽提取研究对大范围推广扇贝多肽保健品极其重要。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种扇贝多肽保健品的提取方法，它具有产品质量稳定，有利于工业化生产的优点。

为解决上述问题，本发明采用以下技术方案：

一种扇贝多肽保健品的提取方法，包括以下步骤：

（1）对扇贝进行预处理后，将扇贝研磨成粉，过200目筛，然后在放入液氮中浸泡3~5min后进行高压均质，得到扇贝粉末；

（2）将扇贝粉末用酸性溶液进行酸解，然后加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、纤维素酶、蛋白酶和吸附剂，在20~50℃下搅拌处理30~120min，然后过滤，取滤液备用；

（3）在滤液中加入碱性物质，在50~80℃下静置5~12h，用超声处理5~30min，得到处理液；

（4）将步骤（3）中的处理液用超滤膜过滤，得到澄清液和浓缩液，采用有机溶剂对浓缩液进行提取、分离、纯化，得到多肽。

本发明中，首先将扇贝粉末在液氮中进行低温冷冻处理，能够使扇贝变脆，使扇贝充分粉碎，有利于多肽物质的溢出，便于后期处理。通过对扇贝粉进行酸解处理，可以除去扇贝中的碳酸钙，使多肽从扇贝壳体中分离出来，再利用纤维素酶、蛋白酶对扇贝进行酶解，最后通过吸附剂能够吸附扇贝中的重金属离子和其他杂质，提高多肽的纯度，再利用碱性物质使蛋白发生沉淀，使多肽溢出，从而提高多肽的纯度和提取效率。

根据本发明，本发明对扇贝的种类没有特殊的要求，可以为人们常知的贝壳类，例如，所述贝壳选自厚壳贻贝壳、紫贻贝壳、珍珠贝壳、扇贝壳、蛤蜊壳、河蚌壳和蛎壳中的至少一种。

本发明通过对扇贝进行预处理，除去扇贝表面附着的污染物，提高扇贝的清洁度，优选条件下，所述扇贝的预处理工艺为：将贝壳在清洗液中超声清洗5~15min，所述清洗液选自乙醇或丙酮中的至少一种。

为了提高多肽的收率，本发明还对扇贝粉末进行了高压均质处理，优选条件下，所述高压均质处理工艺为：压力为5~30MPa，温度为50~80℃，时间为5~20min。

本发明通过将扇贝放置在酸性溶液中浸泡，以除去扇贝中的碳酸钙，使多肽从扇贝基体中溢出，本发明对酸性物质的种类没有特殊的要求，可以为所属领域技术人员所常知，例如所述酸为无机酸和/或有机酸，所述无机酸可以为盐酸、硝酸、硫酸、硼酸、高氯酸、硫氰酸、亚硫酸、磷酸、亚磷酸、次氯酸等中的至少一种；所述有机酸可以为甲酸、乙酸、苯甲酸、苯磺酸等中的至少一种。优选条件下，在步骤（2）中，所述酸性溶液选自盐酸、硝酸、硫酸、硼酸、高氯酸、硫氰酸、亚硫酸、磷酸、亚磷酸、次氯酸等中的至少一种。

优选的，在步骤（2）中，所述纤维素酶选自葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶、β－葡萄糖苷酶、纤维二糖酶，氧化纤维素酶，纤维素磷酸化酶中的至少一种。

优选的，所述蛋白酶选自木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白酶中的至少一种。

根据本发明，为了除去扇贝中的重金属盐，提高多肽的提取效率，本发明采用吸附剂对扇贝中杂质和重金属进行吸附，本发明对吸附剂的种类没有特殊的要求，可以为现有技术中常用的重金属离子吸附剂，优选条件下，在步骤（2）中所述吸附剂选自活性炭、腐植酸、海泡石和聚糖树脂中的至少一种。

本发明通过在滤液中加入碱性物质，可以使滤液中的蛋白质发生沉淀，本发明对碱性物质的种类没有特殊的要求，可以为所属领域技术人员所公知，例如，所述碱为无机碱和/或有机碱，具体可以为碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、脲及其衍生物和有机胺中的至少一种，进一步优选的，在步骤（3）中，所述碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、四甲基氢氧化铵中的至少一种。

根据本发明优选条件下，所述微波的功率为400~500W，微波处理时间为15~30min。

根据本发明优选条件下，所述有机溶剂选自丙酮、甘油、乙二醇、甲醇、乙醇、乙丙醇、正丙醇、醋酐、正丁醇、甲乙酮、醋酸戊脂和醋酸乙酯中的至少一种。

本发明供一种扇贝多肽保健品的提取方法，与现有技术相比，其突出的特点和优异的效果在于：本发明中，首先将扇贝粉末在液氮中进行低温冷冻处理，能够使扇贝变脆，使扇贝充分粉碎，有利于多肽物质的溢出，便于后期处理。通过对扇贝粉进行酸解处理，可以除去扇贝中的碳酸钙，使多肽从扇贝壳体中分离出来，再利用纤维素酶、蛋白酶对扇贝进行酶解，最后通过吸附剂能够吸附扇贝中的重金属离子和其他杂质，提高多肽的纯度，再利用碱性物质使蛋白发生沉淀，使多肽溢出，从而提高多肽的纯度和提取效率。通过本发明的方法提高了蛋白质的酶解效率，并且利用高压均质，提高了产品的得率，使得原料利用率提高，此外本发明工艺简单，超声酶解得到的扇贝多肽富含蛋白质、脂肪等营养成分，具有降血压和抗氧化等多种作用有利于人体的吸收，而且可溶性好，产品质量稳定，有利于工业化生产。

具体实施方式

以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述方法思想的情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包含在本发明的范围内。

实施例1

一种扇贝多肽保健品的提取方法，包括以下步骤：

（1）将珍珠贝壳在乙醇中超声清洗15min，将扇贝研磨成粉，过200目筛，然后在放入液氮中浸泡5min，接着在压力为25MPa，温度为75℃的条件下高压均质10min，得到扇贝粉末；

（2）将扇贝粉末在浓度为0.5mol/L的硝酸溶液中浸泡5h，然后加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、氧化纤维素酶、木瓜蛋白酶和活性炭，在40℃下搅拌处理90min，然后过滤，取滤液备用；其中，扇贝粉末、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、氧化纤维素酶、木瓜蛋白酶、活性炭的用量质量比为：100：3:0.2：0.15:8；

（3）在滤液中加入氢氧化钠，调节溶液pH为9.7，在75℃下静置10h，接着在超声功率为400W的条件下超声20min，得到处理液；

（4）将步骤（3）中的处理液用超滤膜过滤，所述超滤膜的透过量为3000，得到澄清液和浓缩液，接着采用丙酮对浓缩液进行提取、分离、纯化，得到多肽。

对本发明得到的多肽进行应用测试，本发明方法得到的多肽具有良好的生理活性，用于保健品具有显著的效果，通过测试，对调节分泌失衡和亚健康状态具有显著的效果。特别是对60-70岁的敏感人群，具有明显的调节平衡分泌功效。

实施例2

一种扇贝多肽保健品的提取方法，包括以下步骤：

（1）将扇贝壳在丙酮中超声清洗10min，将扇贝研磨成粉，过200目筛，然后在放入液氮中浸泡3min，接着在压力为15MPa，温度为75℃的条件下高压均质15min，得到扇贝粉末；

（2）将扇贝粉末在浓度为0.5mol/L的硫酸溶液中浸泡3.5h，然后加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、纤维素磷酸化酶、胃蛋白酶和腐植酸，在35℃下搅拌处理60min，然后过滤，取滤液备用；

（3）在滤液中加入氢氧化钾，调节溶液pH为10.5，在60℃下静置6h，接着在微波功率为400W的条件下处理15min；

（4）将步骤（3）中的处理液用超滤膜过滤，所述超滤膜的透过量为3000，得到澄清液和浓缩液，接着采用甲醇对浓缩液进行提取、分离、纯化，得到多肽。

实施例3

一种扇贝多肽保健品的提取方法，包括以下步骤：

（1）将紫贻贝壳在乙醇中超声清洗15min，将扇贝研磨成粉，过200目筛，然后在放入液氮中浸泡5min，接着在压力为20MPa，温度为60℃的条件下高压均质12min，得到扇贝粉末；

（2）将扇贝粉末在浓度为1mol/L的硫酸溶液中浸泡4h，然后加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、纤维二糖酶、菠萝蛋白酶和聚糖树脂，在30℃下搅拌处理90min，然后过滤，取滤液备用；

（3）在滤液中加入氢氧化钠，调节溶液pH为10.3，在60℃下静置8h，接着在超声功率为500W的条件下超声30min，得到处理液；

（4）将步骤（3）中的处理液用超滤膜过滤，所述超滤膜的透过量为3000，得到澄清液和浓缩液，接着采用正丙醇对浓缩液进行提取、分离、纯化，得到多肽。

实施例5

一种扇贝多肽保健品的提取方法，包括以下步骤：

（1）将蛤蜊壳在乙醇中超声清洗15min，将扇贝研磨成粉，过200目筛，然后在放入液氮中浸泡3min，接着在压力为5MPa，温度为80℃的条件下高压均质5min，得到扇贝粉末；

（2）将扇贝粉末在浓度为1mol/L的盐酸溶液中浸泡3h，然后加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、葡聚糖外切酶、木瓜蛋白酶和海泡石，在50℃下搅拌处理30min，然后过滤，取滤液备用；

（3）在滤液中加入氢氧化锂，调节溶液pH为9，在80℃下静置12h，接着在微波功率为500W的条件下处理30min；

（4）将步骤（3）中的处理液用超滤膜过滤，所述超滤膜的透过量为3000，得到澄清液和浓缩液，接着采用甘油对浓缩液进行提取、分离、纯化，得到多肽。

实施例6

一种扇贝多肽保健品的提取方法，包括以下步骤：

（1）将厚壳贻贝壳在丙酮中超声清洗5min，将扇贝研磨成粉，过200目筛，然后在放入液氮中浸泡5min，接着在压力为30MPa，温度为50℃的条件下高压均质20min，得到扇贝粉末；

（2）将扇贝粉末在浓度为1mol/L的盐酸溶液中浸泡5h，然后加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、葡聚糖外切酶、胃蛋白酶和海泡石，在20℃下搅拌处理120min，然后过滤，取滤液备用；

（3）在滤液中加入四甲基氢氧化铵，调节溶液pH为8.3，在50℃下静置5h，接着在超声功率为300W的条件下超声15min，得到处理液；

（4）将步骤（3）中的处理液用超滤膜过滤，所述超滤膜的透过量为2500，得到澄清液和浓缩液，接着采用乙丙醇对浓缩液进行提取、分离、纯化，得到多肽。

Claims (9)

1.一种扇贝多肽保健品的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对扇贝进行预处理后，将扇贝研磨成粉，过200目筛，然后在放入液氮中浸泡3~5min后进行高压均质，得到扇贝粉末；

（2）将扇贝粉末用酸性溶液进行酸解，然后加入柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、纤维素酶、蛋白酶和吸附剂，在20~50℃下搅拌处理30~120min，然后过滤，取滤液备用；

（3）在滤液中加入碱性物质，在50~80℃下静置5~12h，用超声处理5~30min，得到处理液；

（4）将步骤（3）中的处理液用超滤膜过滤，得到澄清液和浓缩液，采用有机溶剂对浓缩液进行提取、分离、纯化，得到多肽。

2.根据权利要求1所述的扇贝多肽保健品的提取方法，其特征在于，所述贝壳选自厚壳贻贝壳、紫贻贝壳、珍珠贝壳、扇贝壳、蛤蜊壳、河蚌壳和蛎壳中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的扇贝多肽保健品的提取方法，其特征在于，所述扇贝的预处理工艺为：将贝壳在清洗液中超声清洗5~15min，所述清洗液选自乙醇或丙酮。

4.根据权利要求1所述的扇贝多肽保健品的提取方法，其特征在于，所述高压均质处理工艺为：压力为5~30MPa，温度为50~80℃，时间为5~20min。

5.根据权利要求1所述的扇贝多肽保健品的提取方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述酸性溶液选自盐酸、硝酸、硫酸、硼酸、高氯酸、硫氰酸、亚硫酸、磷酸、亚磷酸、次氯酸等中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的扇贝多肽保健品的提取方法，其特征在于，在步骤（2）中，纤维素酶选自葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶、β－葡萄糖苷酶、纤维二糖酶，氧化纤维素酶，纤维素磷酸化酶中的至少一种；所述蛋白酶选自木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胃蛋白酶中的至少一种。

7.根据权利要求1所述的扇贝多肽保健品的提取方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述吸附剂选自活性炭、腐植酸、海泡石和聚糖树脂中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的扇贝多肽保健品的提取方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述碱性溶液选自氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、四甲基氢氧化铵中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的扇贝多肽保健品的提取方法，其特征在于，所述有机溶剂选自丙酮、甘油、乙二醇、甲醇、乙醇、乙丙醇、正丙醇、醋酐、正丁醇、甲乙酮、醋酸戊脂和醋酸乙酯中的至少一种。