CN107991477A - 一种甘油三酯的检测试剂及甘油三酯的检测试纸 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种甘油三酯的检测试剂及甘油三酯的检测试纸，该检测试剂包括80‑400KU/L的脂蛋白脂酶、9‑65KU/L的甘油激酶、6‑45KU/L的甘油三磷酸氧化酶、2‑25KU/L的辣根过氧化物酶、0.8‑1.2mmol/L的4‑氨基安替比林、0.6‑1mmol/L的色原、1.0‑5mmol/L的Mg²⁺。本发明所述的甘油三酯的检测试剂能够去除干扰，能够快速准确测量甘油三酯的水平。

Description

一种甘油三酯的检测试剂及甘油三酯的检测试纸

技术领域

本发明属于检测领域，尤其是涉及一种甘油三酯的检测试剂及甘油三酯的检测试纸。

背景技术

对样本的分析一般可分为两类技术：干化学分析技术和湿化学分析技术。干化学分析技术是相对于湿化学技术而言的，是指将液体检测样品直接加到干燥的试纸(干式试纸)上，以被测样品的水分作为溶剂引起特定的化学反应，从而进行化学分析的方法。

根据液体样本在干化学试纸上的流动路径，分为侧向横流方法(lateral-flow)或垂直流方法(vertical-flow)。

采用侧向横流方法的干式试纸条的结构一般包括硬质不透水的底板，在底板上从左到右(或从右到左)依次粘有样品垫、结合垫、检测垫和吸收垫。采用垂直流方法的干式试纸条的结构一般由上而下包括样品垫、过滤垫和检测垫。

纵向垂直检测试纸其反应试剂载体的面积都较小，因此只需要较少的液体样本量就可以完成检测。然而因为个体差异，在指尖采血的过程中，采集的样本量难以精确控制。

而反应试剂载体对液体的吸收有一定的饱和度，若加入的血液样本量过多，达到液体饱和的反应层不能再吸收多余的样本时，这些多余的血样就会溢出检测试纸，污染环境或者接触到检测者。多余的血液还会聚集在反应试剂层上形成液滴，不仅影响光学等检测仪器对结果的判读，还会严重的污染检测仪器。上下层之间的接触表面的平滑度以及厚度决定了血液的流速和需要量。

现有技术中的纵向垂直检测试纸包括：基板粘附并支撑着反应层，反应层上覆盖有亲水层(有的没有)、过滤层(样本分离层)、扩散层(加样层)。

当血液通过上外壳的孔(或者长方形)滴加到扩散层后，垂直流经过滤层(样本分离层)，亲水层，最终到达反应层发生化学反应。

这种结构中，不足之处首先是血液用量比较大，这主要由试纸结构决定的。一是扩散层、过滤层、亲水层的面积比较大，相应的吸血量也会增大。二是上壳只有一个加样孔(或者是圆形孔或者是长方形孔)，血液必须向左右两边进行扩散才能使两边的检测孔也能有血液进行检测。这无疑也必须增大吸血量。

第二个不足，正是由于上壳只有一个加样孔(或者是圆形孔或者是长方形孔)，血液在向左右两边进行扩散的时候，存在左右两侧的反应层血样不均的可能性。

专利CN 102128918A采用了一种锁液结构，此结构试纸包括：底板上粘附并支撑着反应层，在反应层相对于底板的另一侧覆盖有加样层，加样层上有一加样口。反应层沿着底板方向的至少一侧搭接着锁液部件，锁液部件被固定在底板上。在底板相对于反应层处有一用于读取反应结果的检测窗。所有结构通过粘合片更牢固的固定他们之间的位置。当液体样本加到加样层时，先垂直流入反应层并被反应层所吸收。当反应层液体饱和时，液体通过横向测流的方式扩散到与反应层搭接的锁液部件中。由于锁液部件吸收液体的速度小于或等于反应层的吸收液体速度，所以当多余液体扩散到锁液部件时，反应层上的液体已经足够进行相关的检测反应，从而并不影响检测反应所需的有效用量。当加入过量的样本时，多余的样本被锁液部件所吸收，因此多余的样本不会形成液滴溢出试纸之外。然而此结构血液用量仍然比较高，且其制作工艺比较繁琐。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种甘油三酯的检测试剂及甘油三酯的检测试纸，该试纸能够去除干扰，并快速准确测量甘油三酯。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种甘油三酯的检测试剂，该检测试剂包括80-400KU/L的脂蛋白脂酶、9-65KU/L的甘油激酶、6-45KU/L的甘油三磷酸氧化酶、2-25KU/L的辣根过氧化物酶、0.8-1.2mmol/L的4-氨基安替比林、0.6-1mmol/L的色原、1-5mmol/L的Mg²⁺。

优选的，所述的检测试剂包括300-400KU/L的脂蛋白脂酶、40-65KU/L的甘油激酶、30-45KU/L的甘油三磷酸氧化酶、10-25KU/L的辣根过氧化物酶、0.8-1.2mmol/L的4-氨基安替比林、0.6-1mmol/L的色原、1-5mmol/L的Mg²⁺。

进一步，所述的检测试剂还包括0.1％-1.0％BSA；优选的，所述的检测试剂还包括0.1％-5％Trition-100。

进一步，所述的色原为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺(TOOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺(MAOS)、N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺(HDAOS)或N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺(ADOS)中的一种。

一种甘油三酯的检测试纸，包括自上而下依次设置的扩散层、过滤层、亲水层与反应层，所述的反应层的表面涂覆有所述的检测试剂。

进一步，所述的扩散层的材质为聚醚砜树脂(PES)或尼龙66(N66)；所述的过滤层的材质为PES、玻璃纤维或硝酸纤维素膜(NC)膜中的一种；所述的亲水层的材质为PES或N66；所述的反应层的材质为PES或N66。

优选的，所述的扩散层的材质为PES；所述的过滤层的材质为PES；所述的亲水层的材质为PES；所述的反应层的材质为PES。

所述的扩散层的厚度为218μm-295μm；所述的过滤层的厚度为279μm-388μmm；所述的亲水层的厚度为218μm-295μm；所述的反应层的厚度为86μm-182μm。

优选的，所述的扩散层的厚度为242μm-268μm；所述的过滤层的厚度为310μm-353μm；所述的亲水层的厚度为242μm-268μm；所述的反应层的厚度为95μm-165μm，优选114μm-165μm。

所述的扩散层的材料的孔径为18μm或285μm；所述的过滤层的材质为不对称PES膜；所述的亲水层的材料的孔径为18μm或285μm；所述的反应层的材料的孔径为0.45μm。

进一步，所述的检测试纸还包括上壳、下壳，所述的反应层位于所述的下壳上，所述的上壳位于所述的扩散层上，所述的上壳上设有若干的加样孔，所述的下壳上设有与所述的加样孔的位置相对应的若干的检测口。

进一步，所述的下壳上设置有若干的隔板，所述的隔板与下壳相互垂直，所述的上壳上设置有若干的与隔板相配合的插接槽，所述的隔板将所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层分别等分，所述的下壳与上壳之间设置有两个侧板，所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层均位于所述的侧板之间，所述的侧板与隔板相互平行；所述的下壳的一侧设置有手柄。

所述的甘油三酯的检测试纸的制备方法，包括如下步骤：

(1)将所述的检测试剂喷涂到所述的反应层材料上，然后进行干燥，干燥温度35-50℃，干燥时间20-45min，得到含反应试剂的反应层材料；

(2)将扩散层、过滤层、亲水层与反应层的材料分别裁切为所需要尺寸，得到所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层；

(3)在下壳上自下而上依次叠放上反应层、亲水层、过滤层、扩散层；

(4)在所述的扩散层上盖上上壳，然后进行裁切即得所述的甘油三酯的检测试纸。

其中，过滤层使用不对称PES膜，其性能优势如下：

1)高效率：从全血中高效分离血浆，血浆分离时间小于等于2min，血浆回收率大于等于80％，减少了单次检测所需要的全血样本量。

2)低溶血：膜材的不对称结构可以捕获全血中的细胞组分且不发生裂解，血浆不会受到红细胞溶血的污染。

3)低非特异性结合：经过检测，膜材不会结合关键性的生物标记物，如肌钙蛋白。

相对于现有技术，本发明所述的甘油三酯的检测试剂及甘油三酯的检测试纸具有以下优势：

(1)本发明所述的甘油三酯的检测试剂能够去除干扰，能够快速准确测量甘油三酯的水平。

(2)本发明所述的甘油三酯的检测试纸能够限定血液用量，同时能够避免多余血液的流出。

附图说明

构成本发明的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1为本发明实施例所述的甘油三酯的检测试纸的示意图。

附图标记说明：

1-下壳；2-上壳；3-扩散层；4-过滤层；5-亲水层；6-反应层；7-隔板；8-侧板；9-手柄；10-检测口；11-加样孔；12-插接槽。

具体实施方式

需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。

一种甘油三酯的检测试剂，该检测试剂包括80-400KU/L的脂蛋白脂酶、9-65KU/L的甘油激酶、6-45KU/L的甘油三磷酸氧化酶、2-25KU/L的辣根过氧化物酶、0.8-1.2mmol/L的4-氨基安替比林、0.6-1mmol/L的色原、1-5mmol/L的Mg²⁺、0.1％-1.0％BSA、0.1％-5％Trition-100。所述的色原为TOOS、DAOS、MAOS、HDAOS或ADOS中的一种。

一种甘油三酯的检测试纸，包括自上而下依次设置的扩散层、过滤层、亲水层与反应层，所述的反应层的表面涂覆有所述的检测试剂。

所述的扩散层的材质为聚醚砜树脂(PES)或N66；所述的过滤层的材质为PES、玻璃纤维或硝酸纤维素膜(NC)膜中的一种；所述的亲水层的材质为PES或N66；所述的反应层的材质为PES或N66。

所述的扩散层的厚度为218μm-295μm；所述的过滤层的厚度为279μm-388μmm；所述的亲水层的厚度为218μm-295μm；所述的反应层的厚度为86μm-182μm。

所述的扩散层的材料的孔径为18μm或285μm；所述的过滤层的材质为不对称PES膜；所述的亲水层的材料的孔径为18μm或285μm；所述的反应层的材料的孔径为0.45μm。

所述的检测试纸还包括上壳、下壳，所述的反应层位于所述的下壳上，所述的上壳位于所述的扩散层上，所述的上壳上设有若干的加样孔，所述的下壳上设有与所述的加样孔的位置相对应的若干的检测口。

所述的下壳上设置有若干的隔板，所述的隔板与下壳相互垂直，所述的上壳上设置有若干的与隔板相配合的插接槽，所述的隔板将所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层分别等分，所述的下壳与上壳之间设置有两个侧板，所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层均位于所述的侧板之间，所述的侧板与隔板相互平行；所述的下壳的一侧设置有手柄。

所述的甘油三酯的检测试纸的制备方法，包括如下步骤：

(1)将所述的检测试剂喷涂到所述的反应层材料上，然后进行干燥，干燥温度35-50℃，干燥时间20-45min，得到含反应试剂的反应层材料；

(2)将扩散层、过滤层、亲水层与反应层的材料分别裁切为所需要尺寸，得到所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层；

(3)在下壳上自下而上依次叠放上反应层、亲水层、过滤层、扩散层；

(4)在所述的扩散层上盖上上壳，然后进行裁切即得所述的甘油三酯的检测试纸。

实施例1

一种甘油三酯的检测试剂，该检测试剂包括400KU/L的脂蛋白脂酶、45KU/L的甘油激酶、30KU/L的甘油三磷酸氧化酶、10KU/L的辣根过氧化物酶、1mmol/L的4-氨基安替比林、1mmol/L的色原、5mmol/L的Mg²⁺、0.2％BSA、1％Trition-100。

一种甘油三酯的检测试纸，包括自上而下依次设置的扩散层、过滤层、亲水层与反应层，所述的反应层的表面涂覆有所述的检测试剂。

所述的扩散层的材质为PES，所述的过滤层的材质为PES，所述的亲水层的材质为PES，所述的反应层的材质为PES。

所述的扩散层的厚度为242μm；所述的过滤层的厚度为353μm；所述的亲水层的厚度为268μm；所述的反应层的厚度为114μm。

所述的扩散层的材料的孔径为285μm；所述的过滤层的材质为不对称PES膜；所述的亲水层的材料的孔径为285μm；所述的反应层的材料的孔径为0.45μm。

所述的检测试纸还包括上壳、下壳，所述的反应层位于所述的下壳上，所述的上壳位于所述的扩散层上，所述的上壳上设有若干的加样孔，所述的下壳上设有与所述的加样孔的位置相对应的若干的检测口。

所述的下壳上设置有若干的隔板，所述的隔板与下壳相互垂直，所述的上壳上设置有若干的与隔板相配合的插接槽，所述的隔板将所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层分别等分，所述的下壳与上壳之间设置有两个侧板，所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层均位于所述的侧板之间，所述的侧板与隔板相互平行；所述的下壳的一侧设置有手柄。

所述的甘油三酯的检测试纸的制备方法，包括如下步骤：

(1)将所述的检测试剂喷涂到所述的反应层材料上，然后进行干燥，干燥温度40℃，干燥时间30min，得到含反应试剂的反应层材料；

(2)将扩散层、过滤层、亲水层与反应层的材料分别裁切为所需要尺寸，得到所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层；

(3)在下壳上自下而上依次叠放上反应层、亲水层、过滤层、扩散层；

(4)在所述的扩散层上盖上上壳，然后进行裁切即得所述的甘油三酯的检测试纸。

实施例2

一种甘油三酯的检测试剂，该检测试剂包括400KU/L的脂蛋白脂酶、45KU/L的甘油激酶、37.5KU/L的甘油三磷酸氧化酶、15KU/L的辣根过氧化物酶、1mmol/L的4-氨基安替比林、1mmol/L的色原、5mmol/L的Mg²⁺、1％BSA、1％Trition-100。

一种甘油三酯的检测试纸，包括自上而下依次设置的扩散层、过滤层、亲水层与反应层，所述的反应层的表面涂覆有所述的检测试剂。

所述的扩散层的材质为PES，所述的过滤层的材质为PES，所述的亲水层的材质为PES，所述的反应层的材质为PES。

所述的扩散层的厚度为242μm；所述的过滤层的厚度为353μm；所述的亲水层的厚度为268μm；所述的反应层的厚度为114μm。

所述的扩散层的材料的孔径为285μm；所述的过滤层的材质为不对称PES膜；所述的亲水层的材料的孔径为285μm；所述的反应层的材料的孔径为0.45μm。

所述的检测试纸还包括上壳、下壳，所述的反应层位于所述的下壳上，所述的上壳位于所述的扩散层上，所述的上壳上设有若干的加样孔，所述的下壳上设有与所述的加样孔的位置相对应的若干的检测口。

所述的下壳上设置有若干的隔板，所述的隔板与下壳相互垂直，所述的上壳上设置有若干的与隔板相配合的插接槽，所述的隔板将所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层分别等分，所述的下壳与上壳之间设置有两个侧板，所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层均位于所述的侧板之间，所述的侧板与隔板相互平行；所述的下壳的一侧设置有手柄。

所述的甘油三酯的检测试纸的制备方法同实施例1。

实施例3

一种甘油三酯的检测试剂，该检测试剂包括400KU/L的脂蛋白脂酶、60.3KU/L的甘油激酶、41.8KU/L的甘油三磷酸氧化酶、23.3KU/L的辣根过氧化物酶、1.2mmol/L的4-氨基安替比林、1mmol/L的色原、5mmol/L的Mg²⁺、1％BSA、1％Trition-100。

一种甘油三酯的检测试纸，包括自上而下依次设置的扩散层、过滤层、亲水层与反应层，所述的反应层的表面涂覆有所述的检测试剂。

所述的扩散层的材质为PES，所述的过滤层的材质为PES，所述的亲水层的材质为PES，所述的反应层的材质为PES。

所述的扩散层的厚度为242μm；所述的过滤层的厚度为353μm；所述的亲水层的厚度为268μm；所述的反应层的厚度为114μm。

所述的扩散层的材料的孔径为285μm；所述的过滤层的材质为不对称PES膜；所述的亲水层的材料的孔径为285μm；所述的反应层的材料的孔径为0.45μm。

所述的检测试纸还包括上壳、下壳，所述的反应层位于所述的下壳上，所述的上壳位于所述的扩散层上，所述的上壳上设有若干的加样孔，所述的下壳上设有与所述的加样孔的位置相对应的若干的检测口。

所述的下壳上设置有若干的隔板，所述的隔板与下壳相互垂直，所述的上壳上设置有若干的与隔板相配合的插接槽，所述的隔板将所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层分别等分，所述的下壳与上壳之间设置有两个侧板，所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层均位于所述的侧板之间，所述的侧板与隔板相互平行；所述的下壳的一侧设置有手柄。

所述的甘油三酯的检测试纸的制备方法同实施例1。

实验检测：

1、针对实施例4中所述的检测试剂，进行不同干扰物质影响试验。一般情况下，血液内的主要干扰物质有抗坏血酸、胆红素、尿酸等。为考察干扰物浓度与干扰程度之间的关系，特准备两个浓度水平的静脉血样本，并将该样本的红细胞压积(HCT)调整为42％。根据CLSI EP07-A2的推荐方案准备不同浓度干扰物质，测试结果如表1-3所示。

表1胆红素对检测试剂的影响试验数据

表2抗坏血酸对检测试剂的影响试验数据

表3尿酸对检测试剂的影响试验数据

上表中，干扰误差＝(干扰物质样本的平均值–无干扰物质样本的平均值)/(无干扰物质样本的平均值)×100％。

从上表可以看出，抗坏血酸会使甘油三酯检测结果偏低，但是，抗坏血酸≤568μmol/L(10mg/dL)、胆红素≤240μmol/L(20mg/dL)、尿酸≤0.6mmol/L(10mg/dL)时干扰程度＜5％。也就是说，这些还原性物质在正常血液或是正常治疗浓度下，对测量结果基本不会有影响。

2、不同的加样量在实施例4中所述的检测试纸上检测甘油三酯

准备甘油三酯浓度为3.9mmol/L的全血，并将该样本的红细胞压积(HCT)调整为42％。分别取5μL、10μL、15μL和20μL的上述全血溶液，滴加到本发明实施例1所述的干化学试纸上进行检测。当样本用量达到10μL时，实施例1所述的检测试纸的反应层吸收达到饱和。样本用量为15μL和20μL时被认为是过量的加样量。

测试结果表明所述的检测试纸不受加样量的影响，检测结果稳定、准确。检测结果见表4。

表4不同的加样量在检测试纸上检测甘油三酯的数据

3、不同加样量受HCT浓度的影响实验

分别配制HCT为30％，42％，55％的全血，滴加到实施例1所述的检测试纸上进行检测，加样量分别为5μL、10μL，15μL、20μL。当样本用量达到10μL时，实施例1所述的检测试纸其反应层试纸的吸收度达到饱和。样本用量为15μL和20μL时被认为是过量的加样量。

结果表明，使用检测试纸不受血细胞压积的影响，也不受加样量的影响，检测结果稳定、一致。结果见表5。

表6不同加样量受HCT浓度的影响数据

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种甘油三酯的检测试剂，其特征在于：该检测试剂包括80-400KU/L的脂蛋白脂酶、9-65KU/L的甘油激酶、6-45KU/L的甘油三磷酸氧化酶、2-25KU/L的辣根过氧化物酶、0.8-1.2mmol/L的4-氨基安替比林、0.6-1mmol/L的色原、1-5mmol/L的Mg²⁺。

2.根据权利要求1所述的甘油三酯的检测试剂，其特征在于：所述的检测试剂包括300-400KU/L的脂蛋白脂酶、40-65KU/L的甘油激酶、30-45KU/L的甘油三磷酸氧化酶、10-25KU/L的辣根过氧化物酶、0.8-1.2mmol/L的4-氨基安替比林、0.6-1mmol/L的色原、1-5mmol/L的Mg²⁺。

3.根据权利要求1或2所述的甘油三酯的检测试剂，其特征在于：所述的检测试剂还包括0.1％-1.0％BSA；优选的，所述的检测试剂还包括0.1％-5％ Trition-100。

4.根据权利要求1或2所述的甘油三酯的检测试剂，其特征在于：所述的色原为TOOS、DAOS、MAOS、HDAOS或ADOS中的一种。

5.一种甘油三酯的检测试纸，其特征在于：包括自上而下依次设置的扩散层、过滤层、亲水层与反应层，所述的反应层的表面涂覆有如权利要求1-4中任一项所述的检测试剂。

6.根据权利要求5所述的甘油三酯的检测试纸，其特征在于：所述的扩散层的材质为聚醚砜树脂(PES)或N66；所述的过滤层的材质为PES、玻璃纤维或硝酸纤维素膜(NC)膜中的一种；所述的亲水层的材质为PES或N66；所述的反应层的材质为PES或N66。

7.根据权利要求6所述的甘油三酯的检测试纸，其特征在于：所述的扩散层的材质为PES网纱；所述的过滤层的材质为PES膜；所述的亲水层的材质为PES；所述的反应层的材质为PES。

8.根据权利要求5或6所述的甘油三酯的检测试纸，其特征在于：所述的检测试纸还包括上壳、下壳，所述的反应层位于所述的下壳上，所述的上壳位于所述的扩散层上，所述的上壳上设有若干的加样孔，所述的下壳上设有与所述的加样孔的位置相对应的若干的检测口。

9.根据权利要求8所述的甘油三酯的检测试纸，其特征在于：所述的下壳上设置有若干的隔板，所述的隔板与下壳相互垂直，所述的上壳上设置有若干的与隔板相配合的插接槽，所述的隔板将所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层分别等分，所述的下壳与上壳之间设置有两个侧板，所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层均位于所述的侧板之间，所述的侧板与隔板相互平行；所述的下壳的一侧设置有手柄。

10.权利要求5-9中任一项所述的甘油三酯的检测试纸的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将所述的检测试剂喷涂到所述的反应层材料上，然后进行干燥，干燥温度35-50℃，干燥时间20-45min，得到含反应试剂的反应层材料；

(2)将扩散层、过滤层、亲水层与反应层的材料分别裁切为所需要尺寸，得到所述的扩散层、过滤层、亲水层与反应层；

(3)在下壳上自下而上依次叠放上反应层、亲水层、过滤层、扩散层；

(4)在所述的扩散层上盖上上壳，然后进行裁切即得所述的甘油三酯的检测试纸。