CN107988300A - 一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法 - Google Patents

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刘宇
李世杰
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    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
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Abstract

本发明涉及一种多肽的制备方法，具体涉及一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法。该方法采用高效、绿色的间歇式超声波辅助酶解，酶解效率高，操作简单，获得的目的多肽活性较高。

Description

一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及一种多肽的制备方法，具体涉及一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法。
背景技术
金枪鱼是世界上最重要的远洋深海经济鱼类之一，我国金枪鱼的年捕获量约为8万吨左右，在其加工过程中产生50％-70％的下脚料，包括红肉、鱼头、鱼骨等。金枪鱼红肉因肌纤维密度大、脂肪含量低而使其韧性强、口感极差，不利于直接食用，多数直接用于饲料或生产鱼粉，大大降低了其附加值。金枪鱼所处深海环境及自身无间断的巡游特点，造就了其肌纤维中蛋白质的独特殊性，红肉对金枪鱼的生存起到了重要作用。
目前对于金枪鱼红肉的利用很少，仅有专利“一种金枪鱼蛋白胨的制备方法”，公开号CN106086128A，是通过双酶酶解和絮凝沉淀法利用金枪鱼红肉制备出一种可提供微生物培养用的有机氮源；专利“金枪鱼暗色肉蛋白抗宫颈癌多肽的制备方法”，公开号CN104774899A，是利用碱性蛋白酶酶解金枪鱼暗色肉，通过凝胶层析、细胞膜色谱纯化和反相高效液相纯化而获得的一种多肽，可抑制人宫颈癌细胞的生长；专利“金枪鱼暗色肉蛋白抗氧化铁螯合肽制备方法”，公开号CN105002245A，是利用中性蛋白酶酶解金枪鱼暗色肉，通过凝胶层析和反相高效液相纯化而获得的一种抗氧化肽。对于金枪鱼红肉可供高值化利用的技术手段缺乏是金枪鱼红肉未有效合理利用的主要限制因素。
发明内容
为了填补技术空白，本发明利用间歇式超声波辅助复合酶酶解法，提出一种制备金枪鱼红肉抗疲劳多肽的方法，该方法工艺简单，可操作性强，获得的目的多肽抗疲劳活性较高。
一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法，包括以下步骤：
1)以金枪鱼红肉为原料，加入5-6倍质量的蒸馏水于斩拌机打碎红肉，得碎红肉浆；
2)步骤1)所得的加入脂肪酶(20000-40000U/g红肉)、木瓜蛋白酶(25000-50000U/g红肉)和风味酶(25000-50000U/g红肉)进行复合酶解，酶解温度35-55℃，酶解pH值6.5-8.5，酶解时间4-8h，期间每隔1h进行超声波辅助酶解，处理时间为15-30min；酶解结束后于95-100℃下灭酶10-15min；先用3层纱布过滤，再用3层滤纸过滤，滤渣用蒸馏水冲洗，合并滤液；
3)滤液过2000Da的有机膜过滤，过膜液经喷雾干燥器干燥后，可得金枪鱼红肉多肽，该多肽经动物实验证明具有较高的抗疲劳活性。
作为优选，所述步骤2)中的酶解温度为45℃。
作为优选，所述步骤2)中的酶解pH值7.5。
作为优选，所述步骤2)中的酶解时间5.5h。
作为优选，所述步骤2)中的超声波处理强度为40-45W/cm2，超声处理频率为20～25kHz。
作为优选，所述步骤2)中的灭酶时间为12min。
本发明提供一种间歇式超声波辅助复合酶酶解金枪鱼红肉获得抗疲劳多肽的方法，该方法采用高效、绿色的间歇式超声波辅助酶解，酶解效率高，操作简单，获得的目的多肽活性较高。
具体实施方式
本发明所使用的试剂没有特别的限制，可采用商购的常规试剂。如实施例中木瓜蛋白酶购买于山东西唐生物科技有限公司，脂肪酶购买于山东康勤生物科技有限公司，风味酶购买于南宁庞博生物工程有限公司，本实施例中金枪鱼红肉由浙江海力生集团有限公司提供。
实施例1
1)以金枪鱼红肉1kg为原料，加入6L蒸馏水于斩拌机打碎红肉，得碎红肉浆6.92kg；
2)加入脂肪酶(20000U/g红肉)、木瓜蛋白酶(25000U/g红肉)和风味酶(25000U/g红肉)进行复合酶解，酶解温度55℃，酶解pH值8.5，酶解时间4h，期间每隔1h进行超声波辅助酶解，处理时间为15min，超声波强度为40W/cm2，超声频率为25kHz；酶解结束后于100℃下灭酶15min；先用3层纱布过滤，再用3层滤纸过滤，滤渣用蒸馏水冲洗，合并滤液；
3)滤液过2000Da的有机膜过滤，过膜液经喷雾干燥器干燥后，可得金枪鱼红肉多肽78g。
实施例2
1)以金枪鱼红肉1.5kg为原料，加入7.5L的蒸馏水于斩拌机打碎红肉，得碎红肉8.91kg；
2)加入脂肪酶(30000U/g红肉)、木瓜蛋白酶(4000U/g红肉)和风味酶(50000U/g红肉)进行复合酶解，酶解温度35℃，酶解pH值6.5，酶解时间8h，期间每隔1h进行超声波辅助酶解，处理时间为20min，超声波强度为45W/cm2，超声频率为20kHz；酶解结束后于95℃下灭酶10min；先用3层纱布过滤，再用3层滤纸过滤，滤渣用蒸馏水冲洗，合并滤液；
滤液过2000Da的有机膜过滤，过膜液经喷雾干燥器干燥后，可得金枪鱼红肉多肽136g。
实施例3
1)以金枪鱼红肉2kg为原料，加入12L的蒸馏水于斩拌机打碎红肉，得碎红肉13.88kg；
2)加入脂肪酶(40000U/g红肉)、木瓜蛋白酶(25000U/g红肉)和风味酶(30000U/g红肉)进行复合酶解，酶解温度45℃，酶解pH值7.5，酶解时间6h，期间每隔1h进行超声波辅助酶解，处理时间为30min，超声波强度为42W/cm2，超声频率为22kHz；酶解结束后于100℃下灭酶12min；先用3层纱布过滤，再用3层滤纸过滤，滤渣用蒸馏水冲洗，合并滤液；
3)滤液过2000Da的有机膜过滤，过膜液经喷雾干燥器干燥后，可得金枪鱼红肉多肽191g。
实施例4
1)以金枪鱼红肉2.5kg为原料，加入7.5L的蒸馏水于斩拌机打碎红肉，得碎红肉9.89kg
2)加入脂肪酶(40000U/g红肉)、木瓜蛋白酶(50000U/g红肉)和风味酶(50000U/g红肉)进行复合酶解，酶解温度40℃，酶解pH值7，酶解时间5h，期间每隔1h进行超声波辅助酶解，处理时间为25min，超声波强度为45W/cm2，超声频率为25kHz；酶解结束后于95℃下灭酶10min；先用3层纱布过滤，再用3层滤纸过滤，滤渣用蒸馏水冲洗，合并滤液；
3)滤液过2000Da的有机膜过滤，过膜液经喷雾干燥器干燥后，可得金枪鱼红肉多肽223g。
实施例5
1)以金枪鱼红肉3kg为原料，加入15L的蒸馏水于斩拌机打碎红肉，得碎红肉17.90kg；
2)加入脂肪酶(35000U/g红肉)、木瓜蛋白酶(25000U/g红肉)和风味酶(40000U/g红肉)进行复合酶解，酶解温度45℃，酶解pH值75，酶解时间6h，期间每隔1h进行超声波辅助酶解，处理时间为30min，超声波强度为45W/cm2，超声频率为20kHz；酶解结束后于95℃下灭酶15min；先用3层纱布过滤，再用3层滤纸过滤，滤渣用蒸馏水冲洗，合并滤液；
3)滤液过2000Da的有机膜过滤，过膜液经喷雾干燥器干燥后，可得金枪鱼红肉多肽280g。
实施例6 动物实验
取实施例1-5制备的金枪鱼红肉多肽。选择体重20±2g雄性昆明种小鼠，将小鼠适应饲养7天后，依体重将小鼠随机分为实验组和对照组，每组20只；实验组每日每只鼠分别灌胃金枪鱼红肉多肽一次，剂量分别为50mg/kg.d，对照组灌胃生理盐水，灌胃量为0.2mL/10g。实验期为40d。每组取10只小鼠进行爬杆实验；另每组取10只小鼠进行游泳实验，游泳实验结束后测定相关指标，结果如表1：
表1 金枪鱼红肉多肽抗疲劳动物实验结果
注：*表示与对照组相比p＜0.05。
本处实施例对本发明要求保护的技术范围中点值未穷尽之处以及在实施例技术方案中对单个或者多个技术特征的同等替换所形成的新的技术方案，同样都在本发明要求保护的范围内；同时本发明方案所有列举或者未列举的实施例中，在同一实施例中的各个参数仅仅表示其技术方案的一个实例(即一种可行性方案)，而各个参数之间并不存在严格的配合与限定关系，其中各参数在不违背公理以及本发明述求时可以相互替换，特别声明的除外。
本发明方案所公开的技术手段不仅限于上述技术手段所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。以上所述是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)以金枪鱼红肉为原料，加入5-6倍质量的蒸馏水于斩拌机打碎红肉，得碎红肉浆；
2)步骤1)所得的加入脂肪酶(20000-40000U/g红肉)、木瓜蛋白酶(25000-50000U/g红肉)和风味酶(25000-50000U/g红肉)进行复合酶解，酶解温度35-55℃，酶解pH值6.5-8.5，酶解时间4-8h，期间每隔1h进行超声波辅助酶解，处理时间为15-30min；酶解结束后于95-100℃下灭酶10-15min；先用3层纱布过滤，再用3层滤纸过滤，滤渣用蒸馏水冲洗，合并滤液；
3)滤液过2000Da的有机膜过滤，过膜液经喷雾干燥器干燥后，可得金枪鱼红肉多肽，该多肽经动物实验证明具有较高的抗疲劳活性。
2.根据权利要求1所述的一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的酶解温度为45℃。
3.根据权利要求1所述的一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的酶解pH值7.5。
4.根据权利要求1所述的一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的酶解时间6h。
5.根据权利要求1所述的一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的超声波处理强度为40-45W/cm2，超声处理频率为20～25kHz。
6.根据权利要求1所述的一种金枪鱼红肉抗疲劳多肽的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的灭酶时间为12min。
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章超桦 等: "南海圆鮀鲣肌肉组织酶解产物抗疲劳活性的初步研究", 《食品科学技术学报》 *
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