CN107974489A - 一种检测人hla-b*5801等位基因的方法 - Google Patents

一种检测人hla-b*5801等位基因的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107974489A
CN107974489A CN201711158599.1A CN201711158599A CN107974489A CN 107974489 A CN107974489 A CN 107974489A CN 201711158599 A CN201711158599 A CN 201711158599A CN 107974489 A CN107974489 A CN 107974489A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reaction
pcr
sample
allele
dna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711158599.1A
Other languages
English (en)
Inventor
王家亮
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Mei Yin Kang Bio Technology Co Ltd
Original Assignee
Jiangsu Mei Yin Kang Bio Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu Mei Yin Kang Bio Technology Co Ltd filed Critical Jiangsu Mei Yin Kang Bio Technology Co Ltd
Priority to CN201711158599.1A priority Critical patent/CN107974489A/zh
Publication of CN107974489A publication Critical patent/CN107974489A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6858—Allele-specific amplification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明是检测人HLA‑B*5801等位基因的方法，包括：1)设计序列特异性引物查找目的基因的DNA序列，针对目的基因的检测位点设计筛选合适的引物对，并根据不同位点，组合成不同的PCR反应体系；2)提取人外周血细胞样本的基因组DNA，利用筛选出的引物进行扩增；3)对扩增的PCR产物进行SAP处理，进行单碱基延伸反应，纯化后得样品分析物；4)将样品分析物点样至芯片基质，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析，获得样品分子量，检出等位基因对应位点信息，完成基因分型分析。本发明的优点：一张芯片可对384个样本进行多重检测，每个体系最多可实现30重反应，同时检测多个HLA‑B*5801等位基因位点。

Description

一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法
技术领域
本发明涉及的是一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法，具体涉及 一种检测人HLA-B*5801基因的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方 法，属于药物基因组学和基因诊断领域。
背景技术
人类白细胞抗原(HLA)是迄今已知基因中等位基因多态性最高的基 因复合体，全世界已发现接近3000种等位基因，其中多数等位基因十分 罕见。该基因是目前为止人类最复杂的遗传多态性系统，其多态性分布 存在明显的族群特征。对来自不同国家和地区的汉族人的研究表明， HLA-B*5801基因与药物别嘌醇导致的严重皮肤不良反应存在着很强的相 关性。非汉族人群中，则该药物与其相关性非常低。
痛风是嘌呤代谢异常致使尿酸合成增加而导致的代谢性疾病。痛风 与人体的代谢失衡有关，与血尿酸水平升高关系密切。在我国，别嘌醇 被作为首选治疗痛风的药物。但是别嘌醇的使用会出现一定的药物不良 反应。近年来，许多研究显示，该药物引起的严重药疹与HLA-B*5801基 因密切相关。目前中国台湾地区在服用别嘌醇前必须进行HLA-B*5801基 因检测。美国风湿病学会痛风治疗指南中也强调，发生别嘌醇相关的严 重过敏性药疹危险性增高，在使用别嘌醇前，应该进行HLA-B*5801基因 检测。因此，在服用抗痛风药物之前，进行HLA-B*5801基因检测，实现 了个体化用药。
目前，国内外对HLA-B*5801等位基因进行检测的方法主要有DNA直 接测序法和Taqman探针法等，DNA直接测序法是目前等位基因检测的金 标准，但存在费时费力等缺陷，是一种低通量的检测方法，不适用于大 量样本检测；Taqman是高度特异的定量PCR技术，其特点是适应于大样 本少量等位基因的位点检测，是一种中等通量的等位基因检测，而对于同时检测多个等位基因的位点，则费用较高，并不适合使用。
发明内容
本发明提出的是一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法，其目的旨 在克服现有技术存在的上述缺陷，基于基质辅助激光解吸电离飞行时间 质谱(Matrix-AssistedLaser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF MS)方法检测人HLA-B*5801等位基因， 实现高效、灵敏、准确的同时检测人HLA-B*5801等位基因中的多个位点， 同时适应于大样本或小样本，为协助别嘌醇的临床个体化给药、保证用 药的安全和有效提供技术支撑。
本发明的技术解决方案：一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法， 该方法包括以下步骤：
1)设计序列特异性引物查找目的基因的DNA序列，针对目的基因的 检测位点设计筛选合适的引物对，并根据不同的位点，组合成不同的PCR 反应体系；
2)提取人外周血细胞样本的基因组DNA，利用步骤1)筛选出的引物 进行扩增；
3)对扩增的PCR产物进行SAP处理，进行单碱基延伸反应，纯化后 得样品分析物；
4)将样品分析物点样至芯片基质，用基质辅助激光解吸电离飞行时 间质谱进行分析，获得样品的分子量，检出等位基因对应的位点信息， 完成基因分型分析。
优选的，所述的步骤1)，包括以下步骤：
(1)标注每孔对应的DNA样品的编号及所用反应体系和引物；
(2)在反应孔中分别加入1μl DNA模板，贴膜，2000rpm离心10秒 后备用；
(3)按下表配制PCR反应液：
(4)将PCR反应液4μl，加入已有1μl DNA的反应孔板中，使各孔 终体积为5μl；
(5)将每孔装有5μl反应液的孔板2000rpm离心30秒后放入PCR仪， 进行基因片段扩增反应程序，该PCR反应程序为：37℃5mi n，95℃10mi n， 40个循环，每循环95℃15s、60℃45s；
(6)PCR反应程序结束后，将孔板2000rpm离心30秒后备用，4℃保 存。
优选的，所述的步骤2)中的提取外周血细胞样本的基因组DNA，包 括：采用DNA提取试剂盒提取人外周血细胞样本的基因组DNA，调整DNA 浓度为20-50ng/μl。
优选的，所述的步骤3),包括以下步骤：
(1)按下表配制SAP反应液：
(2)向PCR反应孔板内加入SAP反应液，每孔加2μl，封膜、2000rpm 离心30秒；
(3)将已加入SAP反应液的PCR反应孔板放入PCR仪中，反应程序： 37℃40min，85℃5min；
(4)反应结束后将PCR反应孔板取出，2000rpm离心30秒备用，4℃ 保存；
(5)延伸反应
(a)按下表配制iPlex反应试剂：
(b)将iPlex反应液加入PCR反应孔板，每孔加2μl，封膜、2000rpm 离心30秒；
(c)将已加入iPlex反应液的PCR反应孔板放入PCR仪中，反应程序， 延伸反应条件为：94℃30sec；40个大循环，每个大循环包括94℃5sec 和5个小循环，每个小循环包括55℃5sec、80℃5sec；72℃3min；
(d)反应结束后，将PCR反应孔板取出，2000rpm离心30秒备用，4℃ 保存；
(6)产物纯化
(a)取树脂在树脂刮板上，均匀覆盖，刮去多余的树脂，放置20min；
(b)将反应结束的PCR反应孔板2000rpm离心1min，每孔加入25μl 去离子水，倒置在树脂板上，然后将树脂板扣在孔板上，敲击使树脂落 入孔板，封膜；
(c)翻转孔板20min，3500rpm离心5min后备用。
优选的，所述的步骤4)中采用TYPER软件分析实验结果。
本发明的优点：操作简便、无需序列特异性探针，一张芯片可对384 个样本进行多重检测，每个体系最多可实现30重反应，同时检测多个 HLA-B*5801等位基因位点，通量能够实现个性化调整，从低通量高分辨 率到高通量高分辨率，适用范围广，适用于几十到上千个样本，可同时 检测几十到成百上千个位点；无需荧光标记，仅需合成普通引物，单个分析成本低于测序法和Taqman定量PCR方法；具有高灵活度，一张芯片 上样本和位点检测匹配可随意选择；分析所需样本量少(20ng)，具有高 灵敏度，检测精度高，SNP检测准确率可达99.99％。适合临床常规基因 检测，进一步为临床个体化合理用药提供了技术支撑。
附图说明
图1是一个样本一个反应体系的HLA-B*5801基因检测图。
图2是rs2257269位点CC/CT分型图。
具体实施方式
下面结合实施例和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
本发明采用时间飞行质谱(MALDI-TOF)方法，首先通过PCR扩增含有 SNP的基因组片段，然后通过序列特异性引物实现单碱基延伸，随后样品 与芯片基质共结晶后在真空管中受瞬时纳秒(10-9秒)强激光激发，核酸 分子因此解吸附成为单电荷离子，由于电场中离子飞行时间与离子质量 成反比，通过检测核酸分子在真空管中的飞行时间获得样品分析物的精 确分子量，从而检测出SNP位点信息，进而判断是否含有HLA-B*5801等 位基因。本方法适用于同时检测多个样本多个SNP位点。
更具体的，本发明是一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法，对待 测样品基因组DNA提取，经PCR扩增后，SAP处理、单碱基延伸后，产物 纯化，用飞行时间质谱仪进行检测，进行等位基因检测。
以下实施例中所用飞行质谱仪为MassARRAY Compact System(SEQUENOM公司)，型号PT007040。点样仪为MassArray TM Nanodispenser(SAMSUNG公司)。
实施例1
检测人HLA-B*5801等位基因
按下述步骤：
(1)人全血基因组DNA提取
用DNA提取试剂盒提取全血基因组DNA，并调整浓度为20-50ng/μl；
(2)多重PCR反应
(a)查找目的基因序列，针对突变位点，设计并合成PCR引物，
(b)根据已抽提样品编制384孔反应表，注明每孔对应的DNA样品的 编号所用引物，
(c)按表在384孔板各孔中分别加入1μl DNA模板，贴膜，2000rpm， 10秒离心后备用，
(d)按下表配制PCR反应液：(以384个样本为例)
注：以上384孔反应液有5％过量，
(e)取一排12联管，每孔加入配置好的PCR反应液133μl，2000rpm 离心30秒后备用，
(f)用10μl排枪取12联管中PCR反应液4μl，加入已有1μl DNA 的384孔板中，使各终体积为5μl，
(g)将装有5μl反应液的384孔板2000rpm离心30秒后放入PCR仪， 运行名为“PCR”的反应程序，PCR反应程序为：37℃5mi n，95℃10mi n， 40个循环(95℃ 15sec，60℃45sec)，
(h)PCR反应程序结束后，将384孔板2000rpm离心30秒后备用，可 在4℃保存；
(3)SAP处理
(a)配制SAP反应液
按以下表次序配制SAP反应液(以384个样本为例)
注：以上384孔反应液有5％过量，
(b)取一排12联管，将SAP反应液以每孔66μl分装，2000rpm离心 30秒后，用10μl排枪分装于384孔PCR反应板，每孔加2μl，封膜、 2000rpm离心30秒，
(c)将已加入SAP反应液的384孔板放入PCR仪中，运行名为“SAP” 的反应程序。SAP反应程序：37℃40min，85℃5min，
(d)反应结束，将384孔板取出，2000rpm离心30秒备用，可在4℃ 保存；
(4)延伸反应
(a)配制iPlex反应试剂
注：以上384孔反应液有5％过量，
(b)取一排12联管，将iPlex反应液以每孔66μl分装，2000rpm离 心30秒后，用10μl排枪分装于384孔PCR反应板，每孔加2μl，封膜、 2000rpm离心30秒。将已加入iPlex反应液的384孔板放入PCR仪中， 运行名为“extension”的反应程序。延伸反应条件为：[94℃5sec，5 个循环(55℃ 5sec，80℃ 5sec)]，72℃3min，
(c)反应结束，将384孔板取出，2000rpm离心30秒备用，可在4℃ 保存；
(5)产物纯化
(a)取6mg树脂在384孔树脂刮板上，均匀覆盖，刮去多余的树脂， 放置20min，
(b)将反应结束的384孔板1000rpm离心1分钟，每孔加入25μl去 离子水，倒置在树脂板上面(注意固定，不能移位)，然后将树脂板扣在 384孔板上，敲击使树脂落入384孔板，封膜，
(c)以384孔板的长轴为轴心，翻转384孔板20分钟，3500rpm，5 分钟离心后备用；
(6)质谱检测
(a)Nanodispenser SpectroCHIP芯片点样：将检测样品从384孔反 应板转移到表面覆盖基质的MassARRAY SpectroCHIP芯片，
(b)MassARRAY Analyzer Compact质谱检测：将样品转移到 SpectroCHIP芯片后，即可放入质谱仪进行检测，每个检测点只需3-5秒， 全自动分析，
(c)TYPER软件分析实验结果，获得分型数据。
检测结果表明，本发明方法操作简便、无需序列特异性探针，一张 芯片可对384个样本进行多重检测，每个体系最多可实现30重反应，同 时检测多个HLA-B*5801等位基因位点，通量能够实现个性化调整，从低 通量高分辨率到高通量高分辨率，适用范围广，几十到上千个样本，同 时检测几十到成百上千个位点；无需荧光标记，仅需合成普通引物，单 个分析成本低于测序法和Taqman定量PCR方法；高灵活度，一张芯片上 样本和位点检测匹配可随意选择；分析所需样本量少(20ng)，高灵敏度， 检测精度高，SNP检测准确率可达99.99％。
实施例2
利用飞行时间质谱技术检测10例痛风患者HLA-B*5801等位基因的 29个SNP位点
(1)人全血基因组DNA提取
用DNA提取试剂盒提取全血基因组DNA，并调整浓度为20-50ng/μl；
(2)多重PCR反应
(a)查找目的基因序列，针对等位基因位点信息，设计并合成PCR引 物，同时检测HLA-B基因中29个HLA-B*5801等位基因，设计的引物如 下表所示,
下表为HLA-B*5801等位基因中29个位点的基因型检测所用引物及 产生的单碱基延伸物：
注：W1、W2、W3、W4分别代表4个多重PCR反应体系；
(b)根据已抽提样品编制384孔反应表，注明每孔对应的DNA样品的 编号，所用引物,
(c)按表在384孔板各孔中分别加入1μl DNA模板，贴膜，2000rpm， 10秒离心后备用,
(d)按下表配制PCR反应液：
(e)PCR反应液4μl，加入已有1μl DNA的反应孔板中，使各孔终 体积为5μl,
(f)将每孔装有5μl反应液的孔板2000rpm离心30秒后放入PCR仪， 进行基因片段扩增反应程序，该PCR反应程序为：37℃5mi n，95℃10mi n， 40个循环(95℃ 15sec，60℃45sec),
(g)PCR反应程序结束后，将孔板2000rpm离心30秒后备用，4℃保 存；
(3)SAP处理
(a)按下表配制SAP反应液：
(b)PCR反应孔板，加入SAP反应液，每孔加2μl，封膜、2000rpm 离心30秒，
(c)将已加入SAP反应液的孔板放入PCR仪中，反应程序：37℃ 40min，85℃ 5min，
(d)反应结束，将孔板取出，2000rpm离心30秒备用，可在4℃保存；
(4)延伸反应
(a)按下表配制iPlex反应试剂：
(b)将iPlex反应液加入PCR反应孔板，每孔加2μl，封膜、2000rpm 离心30秒，
(c)将已加入iPlex反应液的孔板放入PCR仪中，反应程序，延伸反 应条件为：94℃30sec 40个循环[94℃5sec，5个循环(55℃ 5sec，80℃ 5sec)]，72℃ 3min，
(d)反应结束，将孔板取出，2000rpm离心30秒备用，4℃保存；
(5)产物纯化
(a)取6mg树脂在384孔树脂刮板上，均匀覆盖，刮去多余的树脂， 放置20min，
(b)将反应结束的384孔板1000rpm离心1分钟，每孔加入25μl去 离子水，倒置在树脂板上面，然后反置将树脂板扣在384孔板上，敲击 使树脂落入384孔板，封膜，
(c)以384孔板的长轴为轴心，翻转384孔板20分钟，3500rpm，5 分钟离心后备用；
(6)质谱检测
(a)Nanodispenser Spectro CHIP芯片点样
将检测样品从384孔反应板转移到表面覆盖基质的MassARRAY Spectro CHIP芯片,
(b)MassARRAY Analyzer Compact质谱检测
将样品转移到SpectroCHIP芯片后，即可放入质谱仪进行检测，每 个检测点只需3-5秒，全自动分析,
(7)TYPER软件分析实验结果，获得分型数据。
本实施例中，对10例痛风患者进行了HLA-B*5801检测，基因中29 个位点的基因型检测结果显示，与现有的直接测序方法比较，本方法能 同时检测多个样本的多个HLA-B*5801位点，且操作简便，效率高，基因 分型准确率可达99.99％(如下表所示)。
下表为10例痛风患者HLA-B*5801等位基因中29个位点的基因型检 测结果
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的 普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若 干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法，其特征是该方法包括以下步骤：
1)设计序列特异性引物查找目的基因的DNA序列，针对目的基因的检测位点设计筛选合适的引物对，并根据不同的位点，组合成不同的PCR反应体系；
2)提取人外周血细胞样本的基因组DNA，利用步骤1)筛选出的引物进行扩增；
3)对扩增的PCR产物进行SAP处理，进行单碱基延伸反应，纯化后得样品分析物；
4)将样品分析物点样至芯片基质，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析，获得样品的分子量，检出等位基因对应的位点信息，完成基因分型分析。
2.如权利要求1所述的一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法，其特征是所述的步骤1)，包括以下步骤：
(1)标注每孔对应的DNA样品的编号及所用反应体系和引物；
(2)在反应孔中分别加入1μl DNA模板，贴膜，2000rpm离心10秒后备用；
(3)按下表配制PCR反应液：
(4)将PCR反应液4μl，加入已有1μl DNA的反应孔板中，使各孔终体积为5μl；
(5)将每孔装有5μl反应液的孔板2000rpm离心30秒后放入PCR仪，进行基因片段扩增反应程序，该PCR反应程序为：37℃5min，95℃10min，40个循环，每循环95℃15s、60℃45s；
(6)PCR反应程序结束后，将孔板2000rpm离心30秒后备用，4℃保存。
3.如权利要求1所述的一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法，其特征是所述的步骤2)中的提取外周血细胞样本的基因组DNA，包括：采用DNA提取试剂盒提取人外周血细胞样本的基因组DNA，调整DNA浓度为20-50ng/μl。
4.如权利要求1所述的一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法，其特征是所述的步骤3),包括以下步骤：
(1)按下表配制SAP反应液：
(2)向PCR反应孔板内加入SAP反应液，每孔加2μl，封膜、2000rpm离心30秒；
(3)将已加入SAP反应液的PCR反应孔板放入PCR仪中，反应程序：37℃40min，85℃5min；
(4)反应结束后将PCR反应孔板取出，2000rpm离心30秒备用，4℃保存；
(5)延伸反应
(a)按下表配制iPlex反应试剂：
(b)将iPlex反应液加入PCR反应孔板，每孔加2μl，封膜、2000rpm离心30秒；
(c)将已加入iPlex反应液的PCR反应孔板放入PCR仪中，反应程序，延伸反应条件为：94℃30sec；40个大循环，每个大循环包括94℃5sec和5个小循环，每个小循环包括55℃5sec、80℃5sec；72℃3min；
(d)反应结束后，将PCR反应孔板取出，2000rpm离心30秒备用，4℃保存；
(6)产物纯化
(a)取树脂在树脂刮板上，均匀覆盖，刮去多余的树脂，放置20min；
(b)将反应结束的PCR反应孔板2000rpm离心1min，每孔加入25μl去离子水，倒置在树脂板上，然后将树脂板扣在孔板上，敲击使树脂落入孔板，封膜；
(c)翻转孔板20min，3500rpm离心5min后备用。
5.如权利要求1所述的一种检测人HLA-B*5801等位基因的方法，其特征是所述的步骤4)中采用TYPER软件分析实验结果。
CN201711158599.1A 2017-11-20 2017-11-20 一种检测人hla-b*5801等位基因的方法 Pending CN107974489A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711158599.1A CN107974489A (zh) 2017-11-20 2017-11-20 一种检测人hla-b*5801等位基因的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711158599.1A CN107974489A (zh) 2017-11-20 2017-11-20 一种检测人hla-b*5801等位基因的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107974489A true CN107974489A (zh) 2018-05-01

Family

ID=62010445

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711158599.1A Pending CN107974489A (zh) 2017-11-20 2017-11-20 一种检测人hla-b*5801等位基因的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107974489A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108977524A (zh) * 2018-06-26 2018-12-11 苏州道尔盾基因科技有限公司 一种hla-b＊5801基因的检测方法及检测试剂盒
CN111235239A (zh) * 2020-03-18 2020-06-05 浙江大学医学院附属妇产科医院 一种多重pcr_snp基因分型检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104232781A (zh) * 2014-09-26 2014-12-24 陕西佰美基因股份有限公司 一种检测HLA-B*5801等位基因的TaqMan探针实时荧光PCR方法
CN104928375A (zh) * 2015-06-03 2015-09-23 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人环孢素作用靶点基因多态性的方法
CN105238853A (zh) * 2015-08-20 2016-01-13 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人他克莫司作用靶点基因多态性的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104232781A (zh) * 2014-09-26 2014-12-24 陕西佰美基因股份有限公司 一种检测HLA-B*5801等位基因的TaqMan探针实时荧光PCR方法
CN104928375A (zh) * 2015-06-03 2015-09-23 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人环孢素作用靶点基因多态性的方法
CN105238853A (zh) * 2015-08-20 2016-01-13 复旦大学附属华山医院 一种同时测定人他克莫司作用靶点基因多态性的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
S-I HUNGA等: "HLA-B*5801 allele as a genetic marker for severe cutaneous adverse reactions caused by allopurinol", 《PROC NATL ACAD SCI U. S. A.》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108977524A (zh) * 2018-06-26 2018-12-11 苏州道尔盾基因科技有限公司 一种hla-b＊5801基因的检测方法及检测试剂盒
CN111235239A (zh) * 2020-03-18 2020-06-05 浙江大学医学院附属妇产科医院 一种多重pcr_snp基因分型检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105255999A (zh) 一种检测耳聋基因20个突变位点的方法
CN107022641B (zh) 一种检测耳聋基因的引物及其应用
CN105238853A (zh) 一种同时测定人他克莫司作用靶点基因多态性的方法
CN114134236A (zh) 检测snp分子标记的试剂在山羊rbp4基因分型和/或山羊分子标记辅助育种中的应用
CN104830852A (zh) 一种检测hla-b*15:02等位基因的多重实时荧光pcr方法
CN106399479A (zh) 一种用于ⅱ型糖尿病易感基因检测的snp分型试剂盒
CN107974489A (zh) 一种检测人hla-b*5801等位基因的方法
US20150024390A1 (en) Method and kit for detecting specific single nucleotide polymorphism associated with ankylosing spondylitis
CN104928375B (zh) 一种同时测定人环孢素作用靶点基因多态性的方法
CN109868316A (zh) 一种检测遗传性高度近视基因21个突变位点的方法
CN113502324A (zh) 用于孕期维生素d缺乏风险评估检测试剂盒与应用方法
CN113337598A (zh) 用于孕期维生素b12缺乏风险评估检测试剂盒与应用方法
CN112831557A (zh) 一种用于检测药物代谢相关snp位点的引物组及其方法
CN111321216A (zh) 用于检测人类mthfr和mtrr基因多态性的引物组、试剂盒以及检测方法
CN111206085A (zh) 降高血压药物群多普利用药指导基因检测试剂盒
CN111206086A (zh) 通过检测产品进行质谱法判别群多普利个体化用药的方法
CN111206087A (zh) 通过引物组合物进行质谱法判别群多普利个体化用药的方法
CN111206088A (zh) 一种用于判别群多普利个体化用药型的检测产品
CN111187815A (zh) 通过检测产品进行质谱法判别洛沙坦个体化用药的方法
CN111206089A (zh) 一组判别群多普利个体化用药型的引物组合物
CN109439742A (zh) 用于质子泵抑制药代谢和耐药基因snp检测的核苷酸组合
CN111172268A (zh) 通过检测产品进行质谱法判别维拉帕米个体化用药的方法
CN111172266A (zh) 降高血压药物维拉帕米用药指导基因检测试剂盒
CN113337597B (zh) 用于孕期维生素a缺乏风险评估检测试剂盒与应用方法
CN111321223A (zh) 基于多重pcr飞行核酸质谱技术检测胰腺癌相关位点多态性的引物、探针及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180501