CN107929301A - 新北美圣草苷在制备蛋白表达调节剂中的应用 - Google Patents

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CN107929301A CN201711136762.4A CN201711136762A CN107929301A CN 107929301 A CN107929301 A CN 107929301A CN 201711136762 A CN201711136762 A CN 201711136762A CN 107929301 A CN107929301 A CN 107929301A
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Abstract

本发明涉及新北美圣草苷在制备蛋白表达调节剂中的应用,具体为新北美圣草苷在制备LRP1促进剂、RAGE蛋白和/或ICAM‑1蛋白和/或VCAM‑1蛋白抑制剂、ApoE蛋白调节剂中的应用。现有研究显示新北美圣草苷具有补肾强骨、养伤止痛等功效,本发明发现其新用途,具有很好的临床应用价值。

Description

新北美圣草苷在制备蛋白表达调节剂中的应用
技术领域
本发明涉及生物制剂领域,具体涉及新北美圣草苷在制备蛋白表达调节剂中 的应用,新北美圣草苷在制备LRP1促进剂、RAGE蛋白和/或ICAM-1蛋白和/ 或VCAM-1蛋白抑制剂、ApoE蛋白调节剂中的应用。
背景技术
新北美圣草苷(Neoeriocitrin,XBMSCG)是骨碎补的活性成分,浅黄色结 晶,易溶于甲醇、热水,微溶于水,熔点在192-193℃,CAS编号为13241-32-2, 研究显示其可能具有补肾强骨、养伤止痛等功效。
LRP1是LDL受体家族成员,在脑膜血管和血管平滑肌细胞中大量表达。分 为细胞表面结合LRP1和可溶性s LRP1两种形式,前者参与Aβ在大脑和全身 的清除,后者通过与周边Aβ结合保持Aβ的恒定,是血浆中Aβ的主要转运蛋 白,抑制血浆游离Aβ再入脑。存在于血管内皮细胞近脑侧的LRP1是脑血管内 皮上的主要Aβ外向转运体,通过BBB的跨膜转运,直接将Aβ从脑间质液中 清除出脑组织。脑实质内的Aβ由LRP1运输到血管内皮细胞上,再由三磷酸腺 苷(ATP)结合盒转运蛋白(ABC)转运体从血管内皮细胞运输进入血液。临床 研究显示,在阿尔茨海默病(AD)患者中已发现BBB处LRP1表达降低,不利 Aβ清除。体内实验显示,脑内皮特异性LRP1缺失,则脑Aβ水平上调,加重 小鼠学习和记忆缺陷。
本研究首先证明新北美圣草苷对小鼠学习记忆障碍具有明显改善作用,进一 步,采用Aβ25-35刺激体外培养的大鼠脑微血管内皮细胞,模拟AD细胞损伤, 建立AD损伤模型,进行XBMSCG抗AD机制深入研究。结果显示XBMSCG 对AD的治疗作用主要是通过影响LRP1来实现的,XBMSCG可直接作用于细 胞,显著上调外排转运体LRP1的表达,并上调其关键配体ApoE的表达;下调 内向转运体RAGE的表达,并能抑制核转录因子NF-κBp65信号通路,有利于恢复BBB功能,调整Aβ中枢代谢而起到防治AD的作用。本发明发现新北美 圣草苷可用于制备LRP1促进剂、RAGE蛋白和/或ICAM-1蛋白和/或VCAM-1 蛋白抑制剂、ApoE蛋白调节剂的新用途,具有很好的临床应用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供含新北美圣草苷的中药材在制备LRP1蛋白调节剂中 的应用。
含新北美圣草苷的中药材包括骨碎补、枳实、常山胡柚中的一种或几种。
骨碎补为硕龙骨科植物槲蕨Drynaria fortune(Kunze)J.Sm.的干燥根茎。
枳实为芸香科植物酸橙(Citrus aurantium L.)及其栽培变种或甜橙(Citrussinensis Osbeck)的干燥幼果。
常山胡柚(Citrus chang shan-huyou Y.B.Chang)为芸香科植物柚Citrusgrandis(L)Osbeck与甜橙Citrus sinensis(L)O sbeek的杂交品种。
进一步,含新北美圣草苷的中药材在制备LRP1蛋白促进剂中的应用。
优选的,新北美圣草苷在制备LRP1蛋白促进剂中的应用。XBMSCG对LRP1 蛋白表达呈正相关,为剂量依赖关系,随着XBMSCG剂量的增加LRP1蛋白表 达有明显上升。
进一步,新北美圣草苷的浓度为0.001mg/mL-10mg/mL,优选为 0.1mg/mL-10mg/mL。
进一步,上述含新北美圣草苷的中药材在制备RAGE蛋白抑制剂中的应用。
优选的,新北美圣草苷在制备RAGE蛋白抑制剂中的应用。XBMSCG对 RAGE蛋白表达呈负相关,为剂量依赖关系,随着XBMSCG剂量的增加RAGE 蛋白表达有明显下降。
进一步,上述含新北美圣草苷的中药材在制备ICAM-1蛋白抑制剂中的应用。
优选的,新北美圣草苷在制备ICAM-1蛋白抑制剂中的应用。XBMSCG对 ICAM-1蛋白表达呈负相关,为剂量依赖关系,随着XBMSCG剂量的增加ICAM-1 蛋白表达有明显下降。
进一步,上述含新北美圣草苷的中药材在制备VCAM-1蛋白抑制剂中的应用。
优选的,新北美圣草苷在制备VCAM-1蛋白抑制剂中的应用。XBMSCG对 VCAM-1蛋白表达呈负相关,为剂量依赖关系,随着XBMSCG剂量的增加 VCAM-1蛋白表达有明显下降。
进一步,新北美圣草苷的浓度为0.001mg/mL-10mg/mL,优选为 0.1mg/mL-10mg/mL。
进一步,上述含新北美圣草苷的中药材在制备ApoE蛋白调节剂中的应用。
优选的,新北美圣草苷在制备ApoE蛋白调节剂中的应用。XBMSCG高浓度 组对ApoE蛋白表达有上调作用,浓度阈值为0.1mg/mL。
进一步,上述含新北美圣草苷的中药材在制备NF-κBp65蛋白调节剂中的应 用。
优选的,新北美圣草苷在制备NF-κBp65蛋白调节剂中的应用。XBMSCG中 浓度组对NF-κBp65蛋白表达有下调作用,最佳浓度值为0.1mg/m
本发明的目的在于提供新北美圣草苷在制备改善动物或人学习能力、记忆能 力药物中的应用。
优选的,新北美圣草苷的浓度为0.01mg/mL-10mg/mL。
附图说明
图1是LRP1、ApoE、RAGE、NFκB p65蛋白表达图
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明,仅用于解释本发明,而不能理解 为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解:在不脱离本发明的原理和 宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范 围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常 按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。
实施例1XBMSCG改善小鼠学习记忆障碍作用
实验原理:
水是啮齿类动物极度厌恶的刺激或环境。小鼠进入水池后会急于寻找出路, 不断在水池四周寻找逃路,但是光滑而深的池壁阻碍了小鼠的企图。实验中设置 的水下平台(常为水面下可提供老鼠栖身的场所)。在广阔的水面上,小鼠不能 看到水下平台,他们若要快速找到平台以避免被淹死就要学会用周围环境中的线 索进行定位,以此检测小鼠记住周围环境与水下平台之间关系,以对平台进行定 位的学习记忆能力。平台的位置与小鼠自身的位置没有关系,与周围的环境有关 系,是一种与自我参照点无关的参考认知,所形成的记忆是空间参考记忆,这种 记忆进入大脑意识系统,其存储主要涉及海马边缘系统以及大脑皮层的有关脑区。 实验材料:
药材:XBMSCG(CAS:13241-32-2),阳性对照药多奈哌齐(Donepezil) 粉末,二者均购于北京百灵威。
动物及分组:清洁级C57BL/6J小鼠,雄性,7月龄,体质量(40±10)g。 购于北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证号:SCXK(京)2015-0001 号。APP/PS1双转基因小鼠,雄性,7月龄,体质量(40±10)g。100只APP/PS1 双转基因小鼠和20只C57BL/6J小鼠。饲养空间为无菌环境,温度控制在(21 ±1)℃的条件下,相对湿度(60±10)%,保持12h白天/12h黑夜的循环。动 物自由饮食和进水。实验前,小鼠在安静和光照节律如常的条件下饲养1w(周)。 双转基因小鼠随机分为5组,每组20只,分别为:XBMSCG高、中、低剂量组, 多奈哌齐组(Donepezil),Model组,XBMSCG高(0.1mg/mL)、中(0.01mg/mL)、 低(0.001mg/mL)剂量组,Donepezil组小鼠每天以多奈哌齐0.001g/kg的剂量给 予灌胃,Model组和Control组每d灌胃相同体积的生理盐水,灌胃持续35d, 持续5周,20只C57小鼠作为Control组。
实验方法:
Morris水迷宫(MWM)由直径150cm,高70cm的圆形水池组成,水温22~ 24℃,水中加入适量的脱脂奶粉,使其呈现白色不透明状。并在实验过程中,每 3d更换一次水。水迷宫实验由两部分组成,第一部分为,灌胃30d后,4d的定 位航行实验:将圆形平台放在第四象限处,没入水下2cm,在实验过程中保持平 台位置不动。于1、2、3象限规定的入水点,面向池壁将小鼠至于水迷宫中。90s 内,能找到目标平台的小鼠,使其在平台上停留30s,未能找到平台的小鼠,人 为将其放置在平台上30s,以加强记忆。实验结束后擦干,放回鼠笼。每天进行 3次训练。(1、2、3象限入水点各一次)。实验过程中记录小鼠的逃避潜伏期。 水迷宫实验第二部分,空间探索实验:撤去平台,于1、2、3象限入水点将小鼠 置于水迷宫中,90s内,记录其在目标象限(第4象限)的停留时间。平台位置、 有效区域(2倍平台直径区域)穿过的次数。数据采用SPSS18.0统计软件包处 理。数据用平均值±标准差表示,采用单因素方差分析进行显著性分析。
实验结果:
小鼠一般状态:观察各组小鼠的一般状态。Control组小鼠活动自如,食量正 常,毛发光泽和皮肤弹性好。Model组小鼠毛发偏黄、精神状态差、运动少、皮 肤弹性差、毛发枯萎斑白。阳性药对照组和XBMSCG高、中、低剂量组小鼠一 般状态好,饮水、饮食正常,毛发光泽。
XBMSCG对AD小鼠定位航行能力的影响:定位航行能力使用小鼠的逃避 潜伏期进行表示,结果见表1,随着训练时间的延长,各组小鼠的逃避潜伏期缩 短,小鼠的学习能力提高。训练第4d测小鼠的逃避潜伏期,与Control组比较, Model组AD小鼠的逃避潜伏期明显增加(P<0.05),说明模型小鼠存在着明显 的学习障碍。与Model组比较,Donepezil组、XBMSCG高剂量组、XBMSCG 中剂量组的逃避潜伏期明显下降,说明XBMSCG高、中剂量能够不同程度地改 善AD小鼠学习能力。
表1小鼠水迷宫定位航行实验逃避潜伏期(n=20)
分组 第1d 第2d 第3d 第4d
对照组 49.350±0.113 40.968±0.523 29.696±1.300 20.802±1.679
Model 56.194±1.403* 47.858±3.209** 45.672±2.038*** 41.694±1.762***
XBMSCG高 56.528±0.159 43.508±0.457 31.238±2.664^^ 22.986±0.632^^
XBMSCG中 55.580±2.206 42.012±1.851 40.366±1.734 33.388±2.257^^
XBMSCG低 56.534±0.154 50.458±0.245 41.638±1.396 40.260±1.168
Donepezil 56.422±0.262 48.412±0.543 39.982±1.904^ 31.718±1.574^^^
注:与Control组相比,P<0.05表示为*,P<0.01表示为**,P<0.001表示为***; 与Model组相比,P<0.05表示为^,P<0.01表示为^^,P<0.001表示为^^^。
AD小鼠的空间探索能力用穿越平台次数和靶象限停留时间表示,结果如表 2。与Control组比较,Model组小鼠的穿越平台次数和靶象限停留时间明显减少 (P<0.05),说明Model组小鼠存在学习记忆障碍。与Model组比较,XBMSCG 高剂量组、XBMSCG中剂量和阳性药组的平台穿越次数和靶象限停留时间明显 增加(P<0.05),说明XBMSCG能够不同程度地改善AD小鼠学习记忆能力。而 XBMSCG低剂量组小鼠穿越平台次数和靶象限停留时间较Model组,没有明显 差异,说明低剂量XBMSCG的对AD小鼠的学习记忆能力没有明显改善作用。
表2Morris水迷宫测试小鼠空间探索实验
group 穿越平台次数(次) 靶象限停留时间(s)
Control 2.456±0.162 33.260±0.910
Model 1.724±0.200** 24.760±6.340*
Donepezil 2.102±0.216 30.570±4.360
XBMSCG低 1.856±0.353^^^ 26.590±2.130^
XBMSCG中 2.316±0.300^ 33.480±2.060^
XBMSCG高 2.454±0.309^^ 34.400±4.480^^
注:与Control组相比,P<0.05表示为*;与Model组相比,P<0.05表示为^。
XBMSCG高、中剂量和阳性对照药多奈哌齐能够不同程度地改善AD小鼠 的学习记忆能力。
实施例2XBMSCG对脑微血管内皮细胞(BMEC)LRP1的调控
1.实验材料:
BMEC细胞株购自上海赛齐生物工程,Aβ25-35购自北京博奥森生物技术,多 奈哌齐(Donepezil)购自北京百灵威科技,姬姆萨染液购自北京索莱宝科技。 2.实验方法:
2.1AD细胞模型的制备
将Aβ25-35溶于无菌双蒸水,配成浓度为150μmol/L溶液,于37℃孵育7d 后,置于-20℃冰箱保存备用,使用时按所需浓度溶于培养基中。
将处于对数生长期的BMEC细胞,用细胞培养液调节成1.0×105/mL的细胞 悬液,将细胞悬液接种在25cm2细胞培养瓶中,每瓶约5mL。于37℃、5%CO2的培养箱中培养24h细胞贴壁后,将原培养液吸弃,加入含24μmol/L的Aβ25-35细胞培养液,继续培养24h,造成AD细胞模型。
2.2主要药物配制
XBMSCG配制:实验前称取所需的XBMSCG冻干粉,无菌水溶解,配成饱 和溶液,过滤后备用,使用前37℃水浴加热。
25-35受试液的配制:将Aβ25-35冻干粉5mg溶解于33.3mL灭菌水配制成 150μmol/L的储备液,过滤后37℃恒温孵育7d,-20℃冰箱保存备用
多奈哌齐的配制:5mg溶于500μLDMSO浓度为52.7mg/L,取7μL溶于 10mL培养基浓度为37.6μm/L,细胞培养液的配制:500mLDMEM培养基、胎 牛血清(FBS)56mL和双抗5.6mL混合均匀,4℃保存使用前水浴。
2.3主要试剂的配制
磷酸盐缓冲液(PBS)的配制:取一袋干粉(磷酸二氢钾)用去离子水定溶 至2000mL,充分搅拌混合均匀,分装高压灭菌消毒,4℃保存。
MTT溶液的配制:250mg MTT,加入50mL无菌的磷酸盐缓冲液(PBS)将 其溶解,用0.22μm的滤膜过滤除菌后,于-20℃避光保存。
30%聚丙烯酰胺的配制:称取0.8gN,N-亚基双丙烯酰胺,29.2g丙烯酰胺, 去离子水溶解,并定容至100mL,滤纸过滤,置棕色瓶中避光,4℃保存。
10%SDS的配制:称取10gSDS,溶解于100mL去离子水中,室温保存。
10%过硫酸铵(AP)溶液的配制:称取1g过硫酸铵,溶于10mL去离子水 中,分装保存于-20℃冰箱中。
10×电泳缓冲液的配制:称取30.2gTris碱,188g甘氨酸,10gSDS,加去 离子水充分溶解后,定容至1L。
10×转膜缓冲液的配制:称取37.85gTris碱,180.18g甘氨酸,加去离子水定 容至1L。
1×转膜缓冲液的配制:10×转膜缓冲80mL、甲醇200mL、去离子水720mL, 混匀,现用现配。
10×TBS缓冲液的配制:称取80gNaCl,Tris-HCl(PH=7.5)100mL(31.52g), 加900mL去离子水充分溶解,定容至1000mL。
1×TBST缓冲液的配制:每100mL的10×TBS缓冲液中加入1mL Tween-20 (20%),再加去离子水混匀后定容至1L。
封闭液的配制:称取2.5g脱脂奶粉,溶于50mL的1×TBST缓冲液中,现 用现配。
2.4分组与给药
将对数生长期的BMEC细胞接种于25cm2细胞培养瓶中,分为Control组、 Model组、Donepezil组和XBMSCG低、中、高剂量组,于24h细胞贴壁后,吸 弃原培养液,Model组和各药物组均造成Aβ25~35诱导的AD细胞模型,Control 组不加药物,继续培养24h后,将原培养液吸弃,Donepezil组加入37.6μmol/L 的多奈哌齐细胞培养液,XBMSCG低、中、高剂量组分别加入浓度为0.001mg/mL、 0.01mg/mL、0.1mg/mL XBMSCG细胞培养液,Control组和Model组加入不含药 物的细胞培养液,继续培养24h。
2.5倒置显微镜观察细胞生长状态
将各组BMEC细胞分别放置在倒置显微镜下观察BMEC的形态及生长变化。
2.6Western blot检测
2.6.1蛋白样品制备
经药物处理过的细胞,弃掉培养基,每瓶加入3mL 4℃预冷的PBS洗涤细胞 2次,把PBS吸净后置培养瓶于冰上,裂解液为RIPA裂解液(预先加入PMSF), 每瓶加入200μL裂解液,快速用干净的细胞刮将细胞刮于培养瓶的一侧,冰上 裂解,用移液器将刮下细胞裂解产物吸至1.5mL EP管中,4℃,14000rpm,离 心15min,将上清液移至新的0.2mL离心管中,取适量蛋白进行浓度测定,将蛋 白样品加入5×上样缓冲液,终浓度为1×,在沸水煮10min变性,分装,放入 -20℃保存。
2.6.2BCA法测定蛋白浓度
用蛋白标准品配制成浓度为25mg/mL BSA蛋白标准液,PBS稀释至终浓度 为0.5mg/mL蛋白标准,将BCA试剂盒中的A液与B液按比例(50:1)混匀 为工作液。依次将0.5mg/mL蛋白标准品0、4、8、12、16、20μL加到96孔板 孔中,用PBS将各孔补足总体积至20μL,每一个浓度设三个复孔,取1μL待测 样品加到96孔板孔中,并加19μLPBS补足总体积至20μL,设三个复孔,每孔 内均加入BCA工作液200μL,置恒温培养振荡器37℃反应,30min,在酶标仪 上测定,于562nm波长处读取各孔吸光度值,横坐标为浓度,纵坐标为吸光度 值,绘制成标准曲线,并计算出各样品的蛋白浓度。适量稀释,使各组蛋白样品 浓度一致。
2.6.3SDS-PAGE凝胶电泳
将清洗干净的两块玻璃板对齐卡紧组装在制胶器上,用移液枪向两块玻璃板 夹层中沿玻璃一角缓缓注入预先配制好的分离胶,待胶灌注至梳子下边缘1cm 即可,确保玻璃板中没有气泡且液面平整。然后缓慢向玻璃板中间加去离子水进 行液封。室温静置至少45min,直至在去离子水与分离胶之间出现明显折射线时, 倒去上层的去离子水并用滤纸吸净残留的水滴,缓慢加5%浓缩胶至玻璃板顶, 迅速插入梳子以免气泡产生,室温放置40min。
将凝固好的胶板移至电泳槽中,加电泳缓冲液至没过梳子,小心拔出梳子, 用移液枪将预染蛋白Marker和各组蛋白样品加到上样孔底部,加样时要缓慢, 以免使样品溢出加样孔。80V,电泳约30min,120V电泳至溴酚蓝跑到分离胶底 部即可停止。
2.6.4转膜
取1张PVDF膜和6张滤纸,大小与分离胶一致,将PVDF膜放入无水甲醇 中激活5min,再放入转膜缓冲液中平衡30min,滤纸和海绵垫也一起放入转膜缓 冲液中浸润。电泳结束后,小心切掉浓缩胶,取下分离胶,放入转膜缓冲液中平 衡30min,按照从下向上的顺序依次是滤纸、PVDF膜、胶、滤纸,用玻璃棒轻 轻滚动,擀走各层之间气泡,铺好后放在转膜仪上,注意电极方向,10V,30min。
2.6.5封闭
将转膜后PVDF膜的右上角剪一小角作为正面标记,转移至装有封闭液的平 皿中,水平摇床上慢速摇动,室温封闭1h。
2.6.6一抗孵育
将PVDF膜从封闭液中取出放入大小合适的杂交袋中,加入按说明书的抗体 稀释比例配制好的一抗,内参为GAPDH、TUBLIN抗体,用塑封机封好,在摇 床上4℃冰箱过夜。
2.6.7二抗孵育
一抗孵育结束后,取出PVDF膜,用1×TBST洗膜,每次5min洗3次,按 1:10000比例用新鲜封闭液稀释HRP标记的二抗,室温摇床上孵育1h后用1 ×TBST洗涤3次,每次5min。
2.6.8ECL显影
将化学发光液A和B按照试剂盒说明1:1混匀,镊子夹住PVDF膜用滤纸 吸去多余液体,放在化学发光板上,将混合好的化学发光剂滴加在膜上,使膜与 其充分接触,然后放入凝胶成像系统进行拍照并分析。
3.实验结果
3.1倒置显微镜观察细胞生长状态
Control组BMEC细胞贴壁生长,细胞呈梭形、多角形,生长连接成片,胞 质饱满,生长迅速,呈多角形铺路石样外观。
Model组经Aβ25-35处理后细胞增殖明显减慢,培养基中可见散在漂浮的 细胞悬浮,贴壁性减弱,贴壁细胞由多角形渐变为圆形,细胞皱缩,连接松解。 与Model组相比,Donepezil组漂浮的细胞减少,细胞贴壁性和生长速度增强, 细胞数量增多,细胞形态有所恢复。
XBMSCG高、中、低剂量组,随着剂量的升高,细胞贴壁性和生长速度逐 渐增强,细胞数量逐渐增多,高剂量组细胞形态接近Control组。
XBMSCG能够改善Aβ诱导的BMEC细胞损伤引起的形态学改变,推断 XBMSCG对BMEC损伤具有一定的保护作用。
3.2XBMSCG对AD细胞模型LRP1蛋白表达的影响
通过体外培养BMEC,Aβ25-35干预,观察Aβ对BMEC细胞核LRP1、LRP1 配体载脂蛋白E(Apo E)、RAGE、转录因子NFκB p65等蛋白表达的影响,进 一步探讨XBMSCG影响中枢Aβ含量的可能机制。
表3LRP1、ApoE、RAGE、NFκB p65蛋白表达
分组 LRP1 ApoE RAGE NF-κBp65
Control组 1.605±0.044 1.666±0.064 0.686±0.019 0.229±0.016
Model组 0.780±0.052* 0.987±0.049* 0.870±0.027* 0.389±0.029*
Donepezil组 1.107±0.095^ 1.007±0.106^ 0.744±0.020^ 0.286±0.025^
XBMSCG低 1.371±0.033 0.926±0.098 0.719±0.041 0.364±0.015
XBMSCG中 1.469±0.043^ 0.957±0.082^ 0.696±0.029^ 0.314±0.014^
XBMSCG高 1.644±0.050^ 1.284±0.029^ 0.639±0.0278^ 0.333±0.020^
注:与Control组相比,P<0.05表示为*;与Model组相比,P<0.05表示为^
由表3可知,与Control组相比,Aβ25-35组可明显下调LRP1和Apo E(P<0.01), 上调RAGE蛋白(P<0.05)和NF-κBp65的表达(P<0.01),差异有统计学意义, 提示经Aβ25-35预处理的脑微血管内皮细胞产生与AD相似的病理改变,模型复 制成功。
与Model组相比,XBMSCG三个浓度组对LRP1蛋白表达有明显促进作用, 呈剂量依赖关系,低浓度组即有明显作用(P<0.01),高浓度效果更好;XBMSCG 三个浓度组中仅高浓度组对Apo E蛋白表达有上调作用(P<0.05),低浓度和中 浓度组相对Model组均没有作用;XBMSCG三个浓度组对RAGE蛋白表达有明 显下调作用,呈剂量依赖关系,高浓度组作用最明显(P<0.01);XBMSCG中浓 度组对NF-κBp65蛋白表达有明显下调作用,(P<0.05),不过随着浓度的升高 下调作用并不明显,具体见图1。
研究XBMSCG对血管内皮细胞炎症关键因子ICAM-1、VCAM-1及NF-κB P65信号通路的影响,以阐明其防治AD的作用机制,结果如下表4所示。
表4XBMSCG对AD细胞模型ICAM-1、VCAM-1和NF-κBp65蛋白表达
group ICAM-1 VCAM-1 NF-κBp65
Control 0.704±0.051 0.745±0.061 0.497±0.013
Model 0.867±0.057* 1.545±0.048* 0.729±0.022*
Donepezil 0.742±0.031^ 0.889±0.076^ 0.460±0.017^
XBMSCG低 0.728±0.040 0.837±0.039 0.692±0.029
XBMSCG中 0.722±0.010^ 0.794±0.018^ 0.542±0.029^
XBMSCG高 0.664±0.042^ 0.559±0.050^ 0.503±0.012^
注:与Control组相比,*P<0.05,**P<0.01;与Model组相比,^P<0.05, ^^P<0.05。
与Control组相比,Aβ25-35组可明显刺激血管内皮细胞产生炎症,上调ICAM、 VCAM-1蛋白(P<0.01)和NF-κB p65的表达(P<0.01),差异有统计学意义; 提示经Aβ25-35作用24h,可造成脑微血管内皮细胞炎性的病理改变,影响内皮 细胞通透性和BBB功能;与Model组相比,XBMSCG三个浓度组对ICAM-1、 VCAM-1蛋白表达有明显下调作用,呈剂量依赖关系,中浓度组(P<0.05)、高 浓度组(P<0.01)作用最明显,差异有统计学意义;XBMSCG三个浓度组对NF- κBp65蛋白表达有明显下调作用,呈剂量依赖关系,中、高浓度组作用最明显, 差异有统计学意义(P<0.01)。

Claims (10)

1.含新北美圣草苷的中药材在制备LRP1蛋白促进剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,含新北美圣草苷的中药材包括骨碎补、枳实、常山胡柚中的一种或几种。
3.根据权利要求1或2任意一项所述的应用,其特征在于,新北美圣草苷在制备LRP1蛋白促进剂中的应用。
4.权利要求1或2任意一项所述的含新北美圣草苷的中药材在制备RAGE蛋白和/或ICAM-1蛋白和/或VCAM-1蛋白抑制剂中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,新北美圣草苷在制备RAGE蛋白和/或ICAM-1蛋白和/或VCAM-1蛋白抑制剂中的应用。
6.权利要求1或2任意一项所述的含新北美圣草苷的中药材在制备ApoE蛋白调节剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,新北美圣草苷在制备ApoE蛋白调节剂中的应用。
8.根据权利要求1-7所述的应用,其特征在于,新北美圣草苷的浓度为0.001mg/mL-10mg/mL。
9.新北美圣草苷在制备改善动物或人学习能力、记忆能力药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,新北美圣草苷的浓度为0.01mg/mL-10mg/mL。
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