CN107926774B - 大泷六线鱼野生亲鱼池塘网箱培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种大泷六线鱼野生亲鱼池塘网箱培育方法，从而解决了大泷六线鱼野生亲鱼培育成功率低的问题，野生亲鱼培育成功率提高到47.4％，提高了苗种质量和生产能力，为海水鱼类野生亲鱼培育提供了一条可行途径。另一方面，部分亲鱼在池塘网箱内实现自然产卵，省去了人工采卵、授精等复杂操作，降低了人工繁育过程的工作强度，有利于规模化苗种生产的实现。
Description
技术领域
本发明属于鱼类养殖技术领域，具体涉及一种大泷六线鱼野生亲鱼池塘网箱培育方法。
背景技术
大泷六线鱼(Hexagrammos otakii)又名欧氏六线鱼、六线鱼，俗称黄鱼，隶属鲉形目(Scorpaeniformes)、六线鱼科(Hexagrammidate)、六线鱼属(Hexagrammos)，为冷温性近海底层岩礁鱼类。主要分布于黄海和渤海沿岸，也见于朝鲜、日本和俄罗斯远东诸海。此鱼耐低温，生存温度2～26℃，在中国主要产自山东和辽宁等地的近海多岩礁海区。其肉质细嫩、味道鲜美，素有“北方石斑”之称，深受广大消费者喜爱，经济价值较高。大泷六线鱼是中国北方网箱养殖的理想种类，也是开拓礁湾增殖和发展游钓业的理想品种，作为北方特有的名贵海水鱼类具有广阔的推广前景。
大泷六线鱼亲鱼怀卵量低，鱼卵为粘性卵，易粘结成块，是水产界公认的人工繁育技术难度大的品种。直到本世纪初，大泷六线鱼人工繁育技术才取得突破，从而解决了大泷六线鱼产业发展的苗种困境，为大泷六线鱼产业的发展奠定了基础。
为了提高繁育苗种的品质，防止种质退化，野生亲鱼比人工养殖亲鱼优势更加明显，成为海水鱼类人工育苗的首选，但是野生亲鱼存在资源量小、驯化困难、培育成熟率低等难题。目前，大泷六线鱼亲鱼培育在工厂化车间内进行，据统计大泷六线鱼野生亲鱼工厂化培育的成功率仅为18.7％，野生亲鱼直接从海洋大环境到工厂化室内小型水泥池进行培育，其生活环境和条件发生巨大改变，初期野生亲鱼易出现聚堆、易受惊吓、满池乱窜、不摄食等不适应的现象，导致鱼体受伤感染、烂鳍烂尾，降低了鱼体免疫水平，进而导致性腺退化，甚至大量死亡，大大制约了野生亲鱼培育的成功率。
发明内容
本发明提供了一种大泷六线鱼野生亲鱼池塘网箱培育方法，从而解决了大泷六线鱼野生亲鱼培育成功率低的问题，野生亲鱼培育成功率提高到47.4％，提高了苗种质量和生产能力，为海水鱼类野生亲鱼培育提供了一条可行途径。另一方面，部分亲鱼在池塘网箱内实现自然产卵，省去了人工采卵、授精等复杂操作，降低了人工繁育过程的工作强度，有利于规模化苗种生产的实现。
本发明的方法，包括如下的步骤：
1)亲鱼选择
野生亲鱼捕获后，选择3～4龄大泷六线鱼，雄鱼体重300～500g，雌鱼体重400～800g；采用塑料袋海水打包充氧或活水车运输至架设在围堰池塘中的亲鱼培育网箱内；
所述的池塘，选优为海边围堰池塘，水深≥3米；
所述的网箱，为方形网箱，规格为4米×4米×2.5米；
所属的网衣，为聚乙烯网衣，网孔直径为2～3厘米；
所述的网箱中悬挂有贝壳礁，并设置有遮阳网；
2)亲鱼放养与投喂
水温为16～18℃时放养亲鱼，每个网箱放养野生亲鱼80～100尾，雌雄比例为4:1；养殖期间投喂玉筋鱼等小杂鱼，早晚各投喂1次，初期投喂量为鱼体重的1％；10～15天后，在投喂小杂鱼的基础上，添加投喂沙蚕、牡蛎肉等，间隔1天添加投喂适量复合维生素、胡萝卜素、免疫多糖、卵磷脂和抗菌肽，并将日投喂量恢复至鱼体重的3％；
作为优选，在野生亲鱼放养前，先在每个网箱放养人工养殖的大泷六线鱼成鱼，养殖成鱼与野生亲鱼的放养比例为1:10；
3)自然产卵
在亲鱼培育过程中，观察到亲鱼有起水蹭网现象，即为产卵前兆，如观察到网衣、贝壳礁、遮阳网片上有自然产的卵块出现，应及时将卵块取下，经清洁海水清洗后，移至室内孵化池孵化；
第一次发现受精卵块7天后，进行一次彻底检查，将成熟但未能自然产卵的亲鱼移至室内进行人工授精；
已经产过卵的亲鱼继续留在原来的网箱，使其逐渐恢复。
更进一步的，本发明的方法中使用氨基酸序列为SEQ ID NO:1的抗菌肽。
本发明采用池塘网箱进行野生亲鱼驯化培育，野生亲鱼比在工厂化车间能够更快更好的适应环境，大大降低了野生亲鱼性腺退化、死亡等发生的几率，避免了亲鱼性腺退化等问题，可以及时检查亲鱼性腺成熟情况，避免错过产卵盛期，大大提高了野生亲鱼培育的成功率。同时在池塘网箱内设置贝壳礁、黑色遮阳网片等人工遮蔽物，为亲鱼提供躲藏去处，待亲鱼培育成熟后，部分亲鱼可自然产卵于网衣、牡蛎礁、遮阳网片上，实现自然产卵。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细的描述。
本发明的方法的基本步骤如下：
1、池塘选择
池塘一般选择海边围堰池塘，要求靠近水质良好、天然饵料丰富、有野生大泷六线鱼分布的海域，同时应紧靠大泷六线鱼育苗场。池塘一般以20～50亩为宜，进排水方便，水深2.5～3米，供气系统完备。
2、网箱设置
培育网箱规格为4米×4米×2.5米，底部锚定，避免网衣随水流移动擦伤亲鱼。网箱采用“田字型”或“链条型”设置，以方便检查亲鱼。每个网箱底部设置4个曝气石，保证水体溶解氧达5mg/L以上。
网衣为聚乙烯网，网孔直径为2～3厘米，网衣深度设置为2.5米，避免网衣托底，减少污物附着。
3、遮蔽物设置
网箱和网衣设置好后，在每个网箱内悬挂4袋人工贝壳礁和10片黑色塑料遮阳网。将扇贝、牡蛎等贝壳洗刷干净后，装入聚乙烯网袋内制成人工贝壳礁，每个网袋装入贝壳3～5kg。在每个网箱设置黑色塑料遮阳网10片(长1.5m，宽20cm)，网片下端系有1块坠石，防止网片漂浮。
由于大泷六线鱼为恋礁性鱼类，人工贝壳礁和黑色遮阳网可作为遮蔽物供其栖息躲藏，有利于加快野生亲鱼适应环境。
网箱、网衣、贝壳礁、遮阳网片应该在亲鱼放养前15～20天设置完成。
4、亲鱼选择
野生亲鱼一般选择3～4龄大泷六线鱼，雄鱼体重300～500g，雌鱼体重400～800g。选择亲鱼须色泽正常、体形完整、无病无伤，摄食良好、活力良好。野生亲鱼捕获后，采用塑料袋海水打包充氧或活水车运输至亲鱼培育网箱，期间操作要仔细，避免损伤亲鱼。
5、亲鱼放养与投喂
网箱、网衣和贝壳礁设置一般在8月底9月初进行，设置好15～20天后，9月底水温下降到18～16℃时即可放养亲鱼。
在野生亲鱼放养前，先在每个网箱放养人工养殖的大泷六线鱼成鱼8～10尾，并投喂玉筋鱼等鲜杂鱼，早晚各投喂1次，投喂量为鱼体重3％，放养人工养殖成鱼的目的是为野生亲鱼提供示范作用，带动野生亲鱼摄食，缩短野生亲鱼适应环境时间，3～5天后人工养殖成鱼开始正常摄食，此时即可放养野生亲鱼。
每个网箱放养野生亲鱼80～100尾(网箱养殖成鱼与野生亲鱼的放养比例为1:10，雌雄比例为4:1)，投喂玉筋鱼等小杂鱼，早晚各投喂1次，初期投喂量为鱼体重的1％，此时野生亲鱼基本不摄食，投喂目的一方面是为人工养殖成鱼提供必要的饵料，另一方面人工养殖成鱼摄食的过程能够引起野生亲鱼注意，吸引野生亲鱼摄食，此过程一般需要10～15天时间，10～15天后多数野生亲鱼开始摄食。此时，在投喂小杂鱼的基础上，添加投喂沙蚕、牡蛎肉等，间隔1天添加投喂适量复合维生素、胡萝卜素、免疫多糖和卵磷脂等，并将日投喂量恢复至鱼体重的3％，根据亲鱼摄食情况适当增减。饵料投喂采用“慢、快、慢”的步骤，即开始投饵时少投慢投，把鱼引到网箱中上层后多投快投，当大部分鱼已吃饱散去或下沉时，则减慢投喂速度，以照顾尚未吃饱的鱼。
每天在投饵的同时必须检查网衣有无破损，缆绳有无松劲，发现问题及时修整。大风前后必须仔细检查一次。网衣易被各种生物和杂藻附着，一旦网目被堵死，就会导致网箱内的水体交换不畅，不但导致网箱重量增加，而且易衍生致病微生物和繁生致病生物中间宿主，危及亲鱼健康，为此必须及时清除附着物。
6、自然产卵
亲鱼培育过程中，观察到亲鱼有起水蹭网现象，即为产卵前兆，随时可能产卵。此时应加强看护，除每日投喂饵料外，尽量减少对亲鱼的干扰，避免亲鱼受到惊吓。
如观察到网衣、贝壳礁、遮阳网片上有自然产的卵块出现，应及时取下，防止被其它亲鱼啄食。卵块取下后，经过清洁海水清洗后，即可放到室内孵化池孵化。
第一次出现受精卵块7天后，进行一次彻底检查，将成熟但未能自然产卵的亲鱼移至室内进行人工授精。检查操作：用柔软捞网小心捞取亲鱼，观察腹部膨大情况，生殖孔是否红肿，如观察发现雌鱼腹部膨大、松软、生殖孔红肿，轻挤腹部有鱼卵排出，鱼卵圆润、规格均匀，即发育成熟，轻挤雄鱼腹部，泄殖孔有乳白色精液流出即已成熟。
已经产过卵的亲鱼继续留在原来的网箱，并少量投喂，使其逐渐恢复。
下面结合具体实施例对本发明方法及效果进行描述。
2016年9月-11月，在山东省海洋生物研究院中试基地开展了野生亲鱼培育试验。
1、池塘选择
池塘为海边围堰池塘，位于青岛市崂山湾近岸，此海区水质良好、天然饵料丰富、有野生大泷六线鱼分布，同时紧靠山东省海洋生物研究院中试基地育苗场。池塘面积43亩，进排水方便，水深3.2米，供电、供气系统完备。
2、网箱设置
培育网箱规格为4米×4米×2.5米，底部锚定，避免网衣随水流移动擦伤亲鱼。网箱采用“链条型”设置。每个网箱底部设置4个曝气石，保证水体溶解氧达5mg/L以上。
网衣为聚乙烯网，孔径为3厘米，网衣深度设置为2.5米，避免网衣托底，减少污物附着。
3、遮蔽物设置
网箱和网衣设置好后，在每个网箱内悬挂4袋人工贝壳礁和10片黑色塑料遮阳网。将扇贝、牡蛎等贝壳洗刷干净后，装入聚乙烯网袋内制成人工贝壳礁，每个网袋装入贝壳4kg。在每个网箱设置黑色塑料遮阳网10片(长1.5m，宽20cm)，网片下端系有1块坠石，防止网片漂浮。
由于大泷六线鱼为恋礁性鱼类，人工贝壳礁和黑色遮阳网可作为遮蔽物供其栖息躲藏，有利于加快野生亲鱼适应环境。
网箱、网衣、贝壳礁、遮阳网片应该在亲鱼放养前15天设置完成。
4、亲鱼选择
野生亲鱼一般选择3～4龄大泷六线鱼，雄鱼体重300～500g，雌鱼体重400～800g。选择亲鱼须色泽正常、体形完整、无病无伤，摄食良好、活力良好。野生亲鱼捕获后，采用塑料袋海水打包充氧运输至亲鱼培育网箱，期间操作要仔细，避免损伤亲鱼。
5、亲鱼放养与投喂
网箱、网衣和贝壳礁设置好15天后，9月底水温下降到18时开始放养亲鱼。
在野生亲鱼放养前，先在每个网箱放养人工养殖的大泷六线鱼成鱼10尾，并投喂玉筋鱼等鲜杂鱼，早晚各投喂1次，投喂量为鱼体重3％，放养人工养殖成鱼的目的是为野生亲鱼提供示范作用，带动野生亲鱼摄食，缩短野生亲鱼适应环境时间，5天后人工养殖成鱼开始正常摄食，此时即可放养野生亲鱼。
每个网箱放养野生亲鱼100尾(网箱养殖成鱼与野生亲鱼的放养比例为1:10，雌雄比例为4:1)，投喂玉筋鱼等小杂鱼，早晚各投喂1次，初期投喂量为鱼体重的1％，此时野生亲鱼基本不摄食，投喂目的一方面是为人工养殖成鱼提供必要的饵料，另一方面人工养殖成鱼摄食的过程能够引起野生亲鱼注意，吸引野生亲鱼摄食，15天后多数野生亲鱼开始摄食。此时，在投喂小杂鱼的基础上，添加投喂沙蚕、牡蛎肉等，间隔1天添加投喂适量复合维生素、胡萝卜素、免疫多糖和卵磷脂等，并将日投喂量恢复至鱼体重的3％，根据亲鱼摄食情况适当增减。饵料投喂采用“慢、快、慢”的步骤，即开始投饵时少投慢投，把鱼引到网箱中上层后多投快投，当大部分鱼已吃饱散去或下沉时，则减慢投喂速度，以照顾尚未吃饱的鱼。
每天在投饵的同时必须检查网衣有无破损，缆绳有无松劲，发现问题及时修整。大风前后必须仔细检查一次。网衣易被各种生物和杂藻附着，一旦网目被堵死，就会导致网箱内的水体交换不畅，不但导致网箱重量增加，而且易衍生致病微生物和繁生致病生物中间宿主，危及亲鱼健康，为此必须及时清除附着物。
6、自然产卵
亲鱼培育过程中，观察到亲鱼有起水蹭网现象，即为产卵前兆，随时可能产卵。此时除每日投喂饵料外，应尽量减少对亲鱼的干扰，避免亲鱼受到惊吓。
如观察到网衣、贝壳礁、遮阳网片上有自然产的卵块出现，应及时取下，防止被其它亲鱼啄食。卵块取下后，经过清洁海水清洗后，即可放到室内孵化池孵化。
第一次出现受精卵块7天后，进行一次彻底检查，将成熟但未能自然产卵的亲鱼移至室内进行人工授精。检查操作：用柔软捞网小心捞取亲鱼，观察腹部膨大情况，生殖孔是否红肿，如观察发现雌鱼腹部膨大、松软、生殖孔红肿，轻挤腹部有鱼卵排出，鱼卵圆润、规格均匀，即发育成熟，轻挤雄鱼腹部，泄殖孔有乳白色精液流出即已成熟。
已经产过卵的亲鱼继续留在原来的网箱，并少量投喂，使其逐渐恢复。
2016年，共计在围堰池塘网箱放养野生亲鱼805尾(雌644:雄161＝4:1)，产卵雌鱼305尾，培育成功率为47.4％，自然产卵雌鱼167尾，自然产卵率25.9％。同时开展的野生亲鱼室内工厂化培育放养野生亲鱼535尾，(雌428:雄107＝4:1)，产卵雌鱼80尾，培育成功率为18.7％，自然产卵雌鱼27尾，自然产卵率6.3％。由此可见，围堰池塘网箱野生亲鱼培育成功率远高于室内工厂化。
表1：2016年野生亲鱼室内工厂化和池塘网箱培育对比试验结果
为了提高大泷六线鱼的免疫力，在投喂的饵料中添加氨基酸序列为IHSILSCRGCCCNSRDTDCGPCCFK(SEQ ID NO:1)的抗菌肽，该抗菌肽对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌和迟缓爱德华氏菌具有明显的抑菌能力(表2)。
表2：抗菌肽对多种水产致病菌的最低抑菌浓度
考虑到外源抗菌肽会使鱼体产生应激反应，从而影响饲料利用率和生长率。将序列为SEQ ID NO:1的多肽作为饲料添加剂添加到大泷六线鱼饲料中进行投喂，通过测量血清中皮质醇素的含量来检测多肽对大泷六线鱼的应激效果。
选用当年人工孵化的同一批大泷六线鱼作为实验鱼，平均体重为110±10g。将添加HO-AP-1多肽的饲料作为实验组，而添加牙鲆抗菌肽hepcidin的饲料作为实验组；每组养殖10条鱼。
其中使用的饲料组成配比如下：人工配合粉末饲料28-30份、玉筋鱼16-18份、甲壳类8-10份、牡蛎肉8-10份、贻贝肉8-10份、沙蚕8-10份；
血清中皮质醇是评价鱼类抗应激能力的重要指标，鱼类遭受应激源刺激时，皮质醇含量会显著升高，进而促进血糖含量增加，血糖的增加为肌肉和神经提供更多能量，使得鱼类适应应激环境。在此基础上，鱼体对应激源产生了适应性，其生物学功能恢复正常；或随应激程度的加深，鱼类个体或群体水平上出现的诸如生长速率、繁殖能力及抗病能力降低等变化。
血清中皮质醇含量的测定采用北京北方生物技术研究所的试剂盒进行检测。
实验组和对照组的鱼投喂的多肽含量为40mg/Kg，早晚各投喂1次，投喂量为鱼体重3％。实验结束后，每组取5尾鱼，尾静脉采集血液制备血清，测定血清中皮质醇素的含量。采用SPSS17.0对数据进行方差分析。当差异达到显著时用Tukey检验进行多重比较分析。结果表明，对照组饲料中皮质醇含量显著高于实验组饲料P<0.05；表明筛选的内源抗菌肽能有效的减少鱼体的应激反应，可用于制备大泷六线鱼的饲料添加剂。
序列表
<110> 山东省海洋生物研究院
<120> 大泷六线鱼野生亲鱼池塘网箱培育方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> PRT
<213> 大泷六线鱼(Hexagrammos otakii)
<400> 1
Ile His Ser Ile Leu Ser Cys Arg Gly Cys Cys Cys Asn Ser Arg Asp
1 5 10 15
Thr Asp Cys Gly Pro Cys Cys Phe Lys
20 25
Claims (5)
1.一种大泷六线鱼野生亲鱼池塘网箱培育方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：
1)亲鱼选择
野生亲鱼捕获后，选择3～4龄大泷六线鱼，雄鱼体重300～500g，雌鱼体重400~800g；采用塑料袋海水打包充氧或活水车运输至架设在围堰池塘中的亲鱼培育网箱内；
2）亲鱼放养与投喂
水温为16～18℃时放养亲鱼，每个网箱放养野生亲鱼80～100尾，雌雄比例为4:1；养殖期间投喂玉筋鱼以及其他小杂鱼，早晚各投喂1次，初期投喂量为鱼体重的1%；10～15天后，在投喂小杂鱼的基础上，添加投喂沙蚕、牡蛎肉，间隔1天添加投喂复合维生素、胡萝卜素、免疫多糖、卵磷脂和抗菌肽，并将日投喂量恢复至鱼体重的3%；
在野生亲鱼放养前，先在每个网箱放养人工养殖的大泷六线鱼成鱼；
所述的抗菌肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:1的抗菌肽；
3）自然产卵
在亲鱼培育过程中，观察到亲鱼有起水蹭网现象，即为产卵前兆， 如观察到网衣、贝壳礁、遮阳网片上有自然产的卵块出现，应及时将卵块取下，经清洁海水清洗后，移至室内孵化池孵化；
第一次发现受精卵块7天后，进行一次彻底检查，将成熟但未能自然产卵的亲鱼移至室内进行人工授精；
已经产过卵的亲鱼继续留在原来的网箱，使其逐渐恢复；
所述的网箱中悬挂有贝壳礁，并设置有遮阳网。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1）中所述的池塘为水深3米以上的海边围堰池塘。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1）中所述的网箱，为方形网箱。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的网箱的网衣为聚乙烯网衣，网孔直径为2～3厘米。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2）中人工养殖的大泷六线鱼成鱼与野生亲鱼的放养比例为1:10。
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