CN107922385B

CN107922385B - Cgrp受体拮抗剂

Info

Publication number: CN107922385B
Application number: CN201680047028.8A
Authority: CN
Inventors: D.A.科亚茨; K.C.福尔特纳; S.M.马西; J.K.迈尔斯; A.纳瓦罗; M.G.西格尔; R.D.斯塔基
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2015-08-12
Filing date: 2016-08-05
Publication date: 2020-09-08
Anticipated expiration: 2036-08-05
Also published as: HRP20211013T1; CA2992622A1; CN107922385A; ECSP18009366A; HK1249095A1; TN2018000026A1; WO2017027345A1; NZ738990A; CY1124413T1; DK3334721T3; ZA201800452B; PH12018500282A1; KR20180030582A; HUE055609T2; CR20180043A; EA201890156A1; RS62041B1; US9708297B2; TW201718481A; US20170044138A1

Abstract

本发明提供式II化合物：

Description

CGRP受体拮抗剂

本发明关于某些新型降钙素基因相关肽(CGRP)受体拮抗剂化合物、包含该化合物的药物组合物、使用该化合物预防或治疗某些生理病症例如偏头痛的方法，和用于合成该化合物的中间体和方法。

本发明关于预防及治疗偏头痛及其他认为由CGRP介导的神经性疾病及病症的领域（参见例如S. Benemei, et. al., Current Opinion in Pharmacology, 9, 9-14(2009)）。偏头痛是全世界数百万人口罹患的使人衰弱的疾病。偏头痛的治疗选项包括曲普坦类(triptans)，例如舒马曲坦(sumatriptan)和佐米曲坦(zolmitriptan)。不幸地是，患者可用的当前获批的药剂并不总是提供有效治疗，且这些药剂可与各种不利副作用相关联，例如眩晕、感觉异常和胸痹。另外，曲普坦类具有某些心血管问题，此导致其在遭受实质性潜在心血管疾病或不受控高血压的患者中是禁忌（参见T.W. Ho, et. al., The Lancet, 372, 2115-2123 (2008)）。因此，在预防及治疗偏头痛方面存在重大未满足需求。期望CGRP受体拮抗剂为某些神经性疾病例如偏头痛提供更有效的治疗或预防。

美国专利No. 6,680,387公开某些5-苄基-或5-苄叉基-噻唑烷-2,4-二酮，其用于治疗II型糖尿病、动脉粥样硬化、高胆固醇血症和高脂血症。

本发明提供为CGRP受体的拮抗剂的某些新型化合物。此外，本发明提供为CGRP受体拮抗剂的某些新型化合物，其在治疗或预防偏头痛方面具有改善副作用特征的潜力。

因此，本发明提供式II化合物：

其中

Y为CH或N；

Z为CH或N；

条件是当Y为CH时，Z为N，当Y为N时，Z为CH；

X为CH或N；和

R为C1-C3烷基、C3-C5环烷基或CN，

或其药学上可接受的盐。

因此，本发明进一步提供式I化合物：

或其药学上可接受的盐。

本发明还提供一种预防患者偏头痛的方法，包括对需要其的患者给予有效量的式I或式II化合物或其药学上可接受的盐。

本发明还提供一种治疗患者偏头痛的方法，包括对需要其的患者给予有效量的式I或式II化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供一种对抗患者 CGRP受体的方法，包括对需要其的患者给予有效量的式I或式II化合物或其药学上可接受的盐。

此外，本发明提供式I或式II化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗，特别是用于治疗偏头痛。另外，本发明提供式I或式II化合物或其药学上可接受的盐，其用于预防偏头痛。此外，本发明提供式I或式II化合物或其药学上可接受的盐制备药物的用途，所述药物用于治疗偏头痛或用于预防偏头痛。

本发明还提供一种药物组合物，其包含式I或式II化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明还提供一种用于制备药物组合物的方法，其包括将式I或式II化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。本发明还包括用于合成式I和式II化合物的新型中间体和方法。

本文中所使用的术语“C1-C3烷基”是指甲基、乙基、丙基和异丙基。

本文中所使用的术语“C3-C5环烷基”是指环丙基、环丁基和环戊基。

本文中所使用的术语“治疗”包括遏制、减缓、停止或逆转现有症状或病症的进展或严重程度。

本文中使用的术语“预防”是指保护易患某一疾病或病症例如偏头痛、但当前尚未遭受该疾病或病症的症状例如偏头痛的症状的患者。

本文中使用的术语“患者”是指哺乳动物，特别是人类。

本文中使用的术语“有效量”是指本发明化合物或其药学上可接受的盐在单一剂量或多剂量给予患者时在诊断或治疗下在患者中提供期望效果的量或剂量。

有效量可由熟悉此项技术的主治诊断医师通过利用已知技术并通过观察类似情形下所获得的结果容易地确定。在确定患者的有效量中，主治诊断医师需考虑多种因素，其包括但不限于：患者的物种；其体型大小、年龄及一般健康状况；所涉及的具体疾病或病症；疾病或病症的涉及或严重的程度；个体患者的反应；所给予的特定化合物；给予方式；所给予制剂的生物利用度特性；所选剂量方案；伴随药物的使用；及其他相关状况。

本发明化合物通常在宽剂量范围内有效。例如，每天剂量正常地在约0.01至约20mg/kg体重的范围内。在一些情形下，低于上述范围下限的剂量值可能多于足量，而在其他情况下可采用更大剂量且副作用可接受，且因此上述剂量范围并非意欲以任一方式限制本发明的范围。

本发明化合物优选配制为通过任一使得化合物生物可用的途径（包括口服及透皮途径）给药的药物组合物。最优选地，此类组合物口服给药。此类药物组合物及其制备方法在本领域熟知。（参见例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy; D.B.Troy编辑, 第21版, Lippincott, Williams & Wilkins, 2006）。

式I及式II化合物或其药学上可接受的盐特别可用于本发明的预防及治疗方法中，但某些基团、取代基及构型是优选的。下列段落叙述此类优选基团、取代基及构型。尽管本发明涵盖所有各个对映异构体及非对映异构体以及此类化合物的对映异构体混合物（包括外消旋体），但具有下文所述绝对构型的化合物尤其优选。应了解，这些优选适用于预防及治疗方法以及本发明的新型化合物二者。

式III化合物：

或其药学上可接受的盐是优选的。

式IV化合物：

或其药学上可接受的盐也是优选的。另外，式I、II、III 和IV的化合物或盐（其中X为CH）为优选的。式I、II、III和IV的化合物或盐（其中 Y为CH和Z为N）是进一步优选的。式I、II、III和IV的化合物或盐（其中 R为C1-C3烷基）是进一步优选的，甲基是特别优选的。

以下化合物是更优选的：

和其药学上可接受的盐。

以下化合物是特别优选的：

和其药学上可接受的盐，其中相应的游离碱是特别优选的。相应游离碱的结晶无水物是最特别优选的，其由X射线衍射谱中13.4°的衍射角2-θ处的主峰和一个或多个选自14.4^o、18.1^o、19.4^o、20.9^o、21.2^o、21.5^o和26.5°的峰表征，衍射角的公差为0.2 ^o。

N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺甲磺酸盐是特别优选的化合物。结晶的N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺甲磺酸盐是特别优选的，其由X射线衍射谱中18.8^o的衍射角2-θ处的主峰和一个或多个选自23.2^o、24.7^o和15.2^o的峰表征，衍射角的公差为0.2 ^o。

另外，下文制备例中所述的某些中间体可能含有一个或多个氮保护基。理解为，保护基可以如本领域技术人员所理解地变化，取决于具体反应条件和进行的具体转变。保护和脱保护条件是技术人员所熟知的并在文献中描述(参见例如“Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis”, 第四版, Peter G.M. Wuts和Theodora W. Greene,John Wiley and Sons, Inc. 2007)。

各个异构体、对映异构体和非对映异构体可以由本领域普通技术人员通过方法例如选择性结晶技术或手性层析法在合成本发明化合物中在任何方便的点分离或拆分(参见例如J. Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wileyand Sons, Inc., 1981, 以及E.L. Eliel和S.H. Wilen,” Stereochemistry of Organic Compounds”, Wiley-Interscience, 1994)。

例如可以通过本发明化合物的适当的游离碱、适当的药学上可接受的酸例如盐酸在合适的溶剂例如乙醚中在本领域熟知的标准条件下的反应形成本发明化合物的药学上可接受的盐，例如盐酸盐。另外，此类盐的形成可能与氮保护基的脱保护同时发生。此类盐的形成是本领域熟知和理解的。参见例如Gould, P.L., “Salt selection for basicdrugs,” International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); Bastin,R.J., et al. “Salt Selection and Optimization Procedures for PharmaceuticalNew Chemical Entities,” Organic Process Research and Development, 4: 427-435(2000); 和Berge, S.M., et al., “Pharmaceutical Salts,” Journal of Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19, (1977)。

某些缩写定义如下：“ACN”是指乙腈；“BOP”是指(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐；“c-Bu”是指环丁基；“c-Pr”是指环丙基；“DCM”是指DCM或二氯甲烷；“DMEA”是指N,N-二甲基乙胺；“DIPEA”是指N,N-二异丙基乙胺；“DMF”是指N,N-二甲基甲酰胺；“DMSO”是指二甲亚砜；“EDCI”是指1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺；“Et”是指乙基；“Et₂O”是指乙醚；“EtOAc”是指乙酸乙酯；“EtOH”是指乙醇；“HOAT”是指1-羟基-7-氮杂苯并三唑；“HATU”是指N-[(二甲基氨基)-1H-1,2,3-三唑并-[4,5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物；“HPLC”是指高效液相色谱；“HOBt”是指羟基苯并三唑；“hr”是指小时；“HTRF”是指均相时间分辨荧光；“IC₅₀”是指产生对于试剂而言可能的最大抑制响应的50%的药剂浓度；“i-Pr”是指异丙基；“kPa”是指千帕；“kV”是指千伏；“LAH”是指氢化铝锂；“LC-ES/MS”是指液相色谱-电喷雾质谱；“LDA”是指二异丙基氨基锂；“mA”是指毫安；“min”是指分钟；“Me”是指甲基；“MeOH”是指甲醇；“MTBE”是指甲基叔丁基醚；“n-BuLi”是指正丁基锂；“psi”是指磅/平方英寸；“rpm”是指每分钟转速；“RT”是指室温；“SEM”是指平均值的标准误差；“SFC”是指超临界流体色谱；“T3P”是指2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物溶液；“t-BuOH”是指叔丁醇；“TEA”是指三乙胺；“THF”是指四氢呋喃；“t_R”是指保留时间；“U/mL”是指每毫升单位。

本领域普通技术人员理解为，术语“甲磺酸盐”和“甲磺酸”分别是指具有以下结构的化合物：

。

可以通过本领域普通技术人员已知的各个程序制备本发明化合物或其盐，其中的一部分在下文的方案、制备例和实施例中示例。本领域普通技术人员意识到所述的各路径的具体合成步骤可以不同方式与不同方案的步骤合并或结合从而制备本发明化合物或其盐。下文方案中的各步骤的产物可以通过本领域熟知的常规方法包括萃取、蒸发、沉淀、层析、过滤、研磨和结晶回收。在下文的方案中，全部取代基，除非另外指明，如上文定义。试剂和起始原料是本领域普通技术人员容易获得的。下文的方案、制备例、实施例和分析进一步示例本发明，但不应该理解为以任何方式限定本发明的范围。

方案1

在方案1步骤A中，在惰性气氛例如氮气下将约1.1当量的2-甲基丙二酸二甲酯与约1当量的4-{(1S)-1-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}苯甲酸甲酯合并在适当的有机溶剂例如DMF中。将该溶液冷却至约0℃，在约0℃下伴随搅拌持续添加约1.3当量的适当的无机碱例如Cs₂CO₃（其在极性有机溶剂中是相对可溶解的）约1小时。然后，将该反应逐渐温热至室温，分离产物并使用本领域熟知的标准技术例如萃取方法然后层析纯化。例如，边混合边用合适的有机溶剂例如DCM和饱和碳酸氢钠水溶液处理该反应混合物。分离各层，用DCM萃取水层，合并有机层，经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供步骤A的粗产物。然后，可以通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，用合适的有机溶剂混合物例如己烷/乙酸乙酯洗脱以提供步骤A的经纯化的{(1R)-1-[4-(甲氧基羰基)苯基]乙基}(甲基)丙二酸二甲酯。

在方案1步骤B中，在室温下在氮气下将{(1R)-1-[4-(甲氧基羰基)苯基]乙基}(甲基)丙二酸二甲酯与合适的湿有机溶剂例如二甲亚砜 : 水(约43 mL:1 mL)合并，并边搅拌边添加约1.3当量的氯化钠。然后，经约50 min加热该反应至约190℃，然后保持该反应在约190℃持续约3.5小时。然后，冷却该反应至室温，分离产物并使用本领域熟知的技术例如萃取方法和层析纯化。例如，用水稀释该反应并用合适的有机溶剂例如乙醚萃取。然后，用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供步骤B的粗产物。然后，可以通过快速层析法在硅胶上纯化这个粗产物，用合适的有机溶剂混合物例如己烷/乙酸乙酯洗脱以提供非对映异构体混合物形式的经纯化的4-[(2S)-4-甲氧基-3-甲基-4-氧代丁-2-基]苯甲酸甲酯。

在方案1步骤C中，在惰性气氛例如氮气下，将约1.1当量的合适有机碱在合适有机溶剂中的溶液，例如二异丙基氨基锂(LDA)在己烷中的溶液，冷却至约-75℃。经约40 min将在步骤B中制备的4-[(2S)-4-甲氧基-3-甲基-4-氧代丁-2-基]苯甲酸甲酯在合适有机溶剂例如四氢呋喃中的溶液滴加至所述LDA溶液。然后在约–75℃下搅拌该反应混合物约75min。经约12 min将约1.5当量的溴乙腈在合适有机溶剂例如THF中的溶液滴加至该反应混合物。然后，使该反应混合物缓慢温热至室温并搅拌约12小时。然后，分离产物并使用本领域熟知技术例如萃取方法和层析纯化。例如，用饱和氯化铵水溶液淬灭该反应，并用合适有机溶剂例如乙酸乙酯萃取该反应。然后，用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供步骤C的粗产物。然后，通过快速层析法在硅胶上纯化粗产物，采用合适有机溶剂混合物例如己烷/乙酸乙酯洗脱，以提供非对映异构体混合物形式的4-[(2R)-3-(氰基甲基)-4-甲氧基-3-甲基-4-氧代丁-2-基]苯甲酸甲酯。

在方案1步骤D中，将在步骤C中制备的净4-[(2R)-3-(氰基甲基)-4-甲氧基-3-甲基-4-氧代丁-2-基]苯甲酸甲酯冷却在冰/水浴中，并经约20 min采用约10当量的浓硫酸逐滴处理。然后，除去冷浴，在室温下搅拌该反应约3小时。然后，将该反应混合物冷却在冰/水浴中，用冰水淬灭，使用标准萃取技术分离粗中间体酰胺。例如，采用合适有机溶剂例如DCM萃取所淬灭的反应，用水洗涤合并的有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供粗中间体酰胺。然后，将粗中间体溶解于合适有机溶剂例如四氢呋喃和水中，用约2.5当量的无机碱例如碳酸钠处理，并在约50℃下加热约5小时。然后，将该反应混合物冷却在冰/水浴中，用5 N HCl水溶液酸化至约pH约2，用合适有机溶剂例如乙酸乙酯萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供步骤D的粗产物。然后，通过本领域熟知的标准技术例如硅胶上的快速层析法纯化粗产物，用合适有机洗脱液例如己烷/乙酸乙酯洗脱以提供步骤D的经纯化的产物4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸甲酯作为主要非对映异构体。

在方案1步骤E中，将约3当量的合适碱例如氢氧化锂一水合物添加至4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸甲酯在合适有机溶剂混合物例如四氢呋喃和水中的溶液。然后，在约室温下搅拌该反应混合物约16小时，然后采用合适的酸例如1 N HCl水溶液酸化至约pH ~2。然后，可以在真空下除去有机溶剂，通过过滤收集固体并在真空下在约45℃下干燥以提供步骤E的产物4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸，其可以在不经进一步纯化的情况下用于接下来的步骤。

在方案1步骤F中，使用本领域熟知的标准酰胺化合成方法将步骤E的产物4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸与1-(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐偶联。例如，可以将步骤E的产物与约1.2当量的1-(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐(方案3，步骤B)、约1.2当量的EDCI和约1.2当量的HOBt合并在合适有机溶剂例如N,N-二甲基甲酰胺中。然后，在室温下边搅拌边添加约4当量的合适非亲核有机碱例如三乙胺。然后，搅拌该反应混合物约16小时，然后可以分离产物并使用本领域熟知的技术例如萃取方法和层析纯化。例如，然后可以添加水至该反应混合物，其然后采用合适有机溶剂例如DCM萃取。合并有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供步骤F的粗产物。然后，通过快速层析法在硅胶上采用合适洗脱液例如DCM/甲醇梯度纯化该粗产物以提供步骤F的经纯化产物N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺。

或者，在方案1步骤F中，可以将步骤E的产物与约1.05当量的1-(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐(方案3步骤B)合并在合适有机溶剂例如DMF中。在室温下在搅拌下，可以采用约6当量DIPEA，然后偶联剂例如BOP处理该反应混合物约1-2小时，可以使用本领域熟知技术例如萃取方法和层析分离产物。例如，然后可以将水添加至该反应混合物，然后采用合适酸例如5 N HCl将其酸化至pH约7-8，并采用合适有机溶剂例如MTBE萃取。合并有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤，在减压下浓缩，并可以通过层析法在硅胶上采用合适洗脱液例如己烷中的甲醇/乙酸乙酯梯度纯化粗产物以获得步骤F的经纯化的产物N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺。

方案2

在方案2步骤A中，可以使用具有高对应选择性的过渡金属催化剂例如铑在偶联条件下完成(E)-丁-2-烯酸异丙酯的不对称芳化。铑催化产物(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸异丙酯。例如，可以采用约0.01当量的铑催化剂特别是双(降冰片二烯)铑(I)四氟硼酸盐处理约1.05-1.1当量的4-溴苯基硼酸，然后添加在合适溶剂混合物例如湿1,4-二氧六环或THF和水(约8:1)中的合适的有机配体例如0.01-0.015当量(R)-(+)-2,2'-双(二苯基膦)-1,1'-联萘、约1当量TEA和约1当量(E)-丁-2-烯酸异丙酯。可以将所得反应混合物加热至约40℃持续约18小时。然后，可以分离产物并使用本领域熟知的技术例如萃取方法和层析纯化。例如，可以采用水稀释该反应混合物并用合适的非极性有机溶剂例如MTBE或DCM萃取。可以合并有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供步骤A的粗产物。然后，通过快速层析法在硅胶上采用合适洗脱液例如己烷/EtOAc梯度纯化粗产物，以提供高对映异构体过量的步骤A的经纯化产物(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸异丙酯。

在方案2步骤B中，可以在本领域熟知的皂化条件下完成方案2步骤A的产物的水解。例如，可以将(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸溶解于合适醇溶剂例如MeOH中并用过量的无机碱NaOH水溶液处理。在加热约1小时后，然后可以分离产物并使用本领域熟知的技术例如萃取、研磨和蒸发法纯化。例如，可以采用合适有机溶剂例如DCM萃取该反应混合物，并可以采用过量无机酸例如浓HCl处理所得分离的水层至pH约4。然后，可以用合适有机溶剂例如DCM萃取酸化的水层。可以合并有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩以提供步骤B的粗产物。可以采用非极性有机溶剂例如庚烷研磨粗产物，可以过滤掉所得沉淀物，并可以在减压下浓缩滤液以获得非常高对映异构体过量的步骤B的产物(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸。

在方案2步骤C中，可以在本领域熟知的宽范围的酸/碱酯化方法下或通过采用重氮甲烷的直接酯化进行方案2步骤B的产物的酯化。例如，可以采用过量的无机酸例如浓H₂SO₄处理溶解于合适醇溶剂例如MeOH中的(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸。可以加热所得混合物约2小时，然后可以通过使用本领域熟知技术例如萃取分离产物。可以在减压下浓缩反应混合物，并可以在水和合适有机溶剂例如MTBE之间分配所得残余物。可以合并有机萃取物，用水洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩以提供步骤C的产物(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸甲酯，适合不经另外纯化使用。

在方案2步骤D中，可以使用文献中熟知的各种烷基化条件实现方案2步骤C的产物的烷基化。例如，在合适溶剂例如无水THF中在低温下，可以通过用1.5-1.75当量的非亲核碱例如正丁基锂的处理，然后采用约1.5-1.6当量碘甲烷进行所得阴离子的淬灭完成(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸甲酯的甲基化。然后，可以通过使用本领域熟知的技术例如萃取分离产物。可以将该反应混合物分配在水和合适有机溶剂例如MTBE之间。可以采用水、饱和NaCl水溶液顺序地洗涤合并的有机萃取物，经硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩以获得非对映异构体混合物形式的步骤D的产物(3S, 2R/S)-3-(4-溴苯基)-2-甲基丁酸甲酯，适合不经另外纯化使用。

在方案2步骤E中，在低温下，可以采用合适有机溶剂例如无水THF中的约1当量的强有机碱例如正丁基锂处理步骤D的产物, 非对映异构体混合物形式的(3S, 2R/S)-3-(4-溴苯基)-2-甲基丁酸甲酯。然后，可以采用约0.9当量2-溴乙酸丁酯的溶液处理所得混合物。然后，可以通过使用本领域中熟知的技术例如萃取分离产物。该反应混合物可以在水和合适有机溶剂例如MTBE之间分配，可以采用水和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤合并的有机萃取物。可以经硫酸镁干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩以获得非对映异构体混合物形式的步骤E的产物，(S/R)-2-((R)-1-(4-溴苯基)乙基)-2-甲基琥珀酸4-(叔丁酯)1-甲酯，适合不经另外纯化使用。

在方案2步骤F中，在本领域熟知的条件下，可以水解方案2步骤E的产物的非对映异构酯混合物。例如，可以将(S/R)-2-((R)-1-(4-溴苯基)乙基)-2-甲基琥珀酸4-(叔丁酯)1-甲酯溶于合适有机溶剂例如DCM中并采用过量有机酸例如TFA处理。可以在室温下搅拌所得混合物约18小时，然后通过使用本领域熟知的技术例如萃取分离产物。可以采用水和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤该反应混合物，可以经硫酸镁干燥有机萃取物，过滤并在减压下浓缩以获得非对映异构体混合物形式的步骤F的产物, (3S/R,4R)-4-(4-溴苯基)-3-(甲氧基羰基)-3-甲基戊酸，适合不经另外纯化使用。

在方案2步骤G中，可以将方案2步骤F的非对映异构体混合物形式的(3S/R,4R)-4-(4-溴苯基)-3-(甲氧基羰基)-3-甲基戊酸溶解于合适极性有机溶剂例如无水DMF中并采用非亲核碱例如约3当量TEA或DIPEA、约1.2当量的酰胺偶联试剂例如HATU和过量甲醇氨(methanolic ammonia)溶液顺序地处理。可以在室温下搅拌所得混合物约2-12小时，然后可以通过使用本领域熟知的技术例如萃取分离产物。该反应混合物可以在水和合适有机溶剂例如DCM之间分配，可以分离各层，用水和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤合并的有机萃取物。然后，可以经硫酸镁干燥萃取物，过滤，并在减压下浓缩以获得非对映异构体混合物形式的步骤G的产物(2S/R)-4-氨基-2-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-2-甲基-4-氧代-丁酸甲酯，适合不经另外纯化使用。

在方案2步骤H中，可以通过在非亲核碱存在下加热使方案2步骤G的非对映异构体产物的混合物环化然后在手性层析条件下分离非对映异构体。例如，可以将(2S/R)-4-氨基-2-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-2-甲基-4-氧代-丁酸甲酯溶解于THF/水(约1:1)的混合物中，用约2.5当量的非亲核碱例如碳酸钠处理，并可以加热所得混合物至约60℃持续约2小时。然后，可以通过使用本领域熟知的技术例如萃取然后在手性层析条件下非对映异构体的分离来分离产物。例如，采用 EtOAc萃取反应混合物，经硫酸镁干燥合并的有机萃取物，过滤并在减压下浓缩以提供非对映异构体的粗混合物。可以通过手性SFC技术，使用含少量非亲核胺例如N,N-二乙基甲基胺/CO₂(约1:9)的EtOH的等度溶剂体系分离非对映异构体以获得步骤H的分离产物, (3S)-3-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮和(3R)-3-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮。

在方案2步骤I中，可以在本领域中常常述及的条件下采用原位酰胺化来羰基化步骤H的产物。例如，可以在一氧化碳气氛下在加压至约60 psi 的密封反应容器中将(3S)-3-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮、约1.2当量的(2,6-二甲基-4-吡啶基)甲胺二盐酸盐(方案3步骤B)、约0.033当量的过渡金属试剂例如乙酸钯(II)、约0.064当量的合适配体试剂例如4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基呫吨和约3.5当量的非亲核碱例如DIPEA在非极性有机溶剂例如甲苯中制浆。可以在100℃下将所得混合物加热约12-18小时，然后冷却至室温，经硅藻土床过滤，并在减压下浓缩。然后，可以通过使用本领域中熟知的技术例如沉淀和过滤分离产物。例如，可以用水和合适有机溶剂例如DCM（1:1混合物）稀释在溶剂蒸发后获得的粗残余物，并可以通过过滤收集所得固体并用乙醚研磨以提供步骤I的产物, N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺。

方案3

在方案3步骤A中，可以将约1.0-1.2当量 Zn(CN)₂添加至4-溴-2,6-二甲基吡啶在合适极性有机溶剂例如含约5-10 mol%的合适过渡金属催化剂/配体络合物例如四(三苯基膦)钯(0)的DMF中的溶液。在加热约5-18小时后，可以将该反应混合物冷却至室温，可以分离产物并使用本领域熟知的标准技术例如萃取方法然后溶剂蒸发或通过层析纯化。例如，边混合边采用合适有机溶剂例如EtOAc和NH₄OH水溶液处理该反应混合物。分离各层，采用EtOAc萃取水层，并合并有机层，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，在减压下浓缩以提供步骤A的粗产物。然后，可以通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，采用合适有机溶剂混合物例如己烷/乙酸乙酯洗脱以提供步骤A的产物4-氰基-2,6-二甲基吡啶。或者，采用合适有机溶剂例如MTBE，然后碱性(pH约10)水溶液例如30% NH₄OH稀释粗反应混合物，分离各层，另外采用MTBE萃取水层，并采用10% NH₄OH洗涤合并的有机萃取物，经无水Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供步骤A的产物4-氰基-2,6-二甲基吡啶，适合不经另外纯化使用。

在方案3步骤B中，可以在本领域熟知的各个方法（例如采用还原剂例如LiBH₄或NaBH₄的化学氢化物还原或通过采用过渡金属例如Pd(OH)₂或Pd/C加氢）下还原步骤A的产物4-氰基-2,6-二甲基吡啶。另外，可以在水中或在合适有机溶剂例如THF或DMF中的无机酸的存在下进行加氢以提供HCl盐形式的还原产物。例如，在水中或在1,4-二氧六环中的过量HCl存在下，将步骤A的产物4-氰基-2,6-二甲基吡啶溶解在合适有机溶剂例如MeOH或EtOH中，并用过量5-10% Pd/C处理该溶液。在约60 psi的压力下在室温下使该反应混合物加氢过夜。过滤该混合物，并浓缩滤液以提供步骤B的粗产物。可以通过本领域技术人员熟知的方法例如研磨、结晶或重结晶实现步骤B的产物的随后沉淀。例如，可以采用沸腾EtOH/EtOAc的混合物处理步骤B的粗产物直到溶解；随后的冷却结晶和通过过滤进行的产物收集可以提供步骤B的产物1-(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐。或者，可以将粗产物悬浮在MeOH/MTBE混合物中，其中通过过滤收集步骤B产物，所得固体1-(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐。

方案4

方案4描述2-取代-6-甲基-吡啶基甲胺的制备。在方案4，步骤A中，本领域普通技术人员可以理解使用格式试剂、烷基锂、硼酸烷基酯或烷基锌试剂进行的2-氯吡啶至2-烷基吡啶的转化。例如，在合适极性溶剂例如NMP或1,4-二氧六环中或在合适有机溶剂例如含水的甲苯、苯或DMF的双相混合物中在约0.1-0.2当量的过渡金属催化剂例如乙酰乙酸铁(III) (R=Et), Pd(OAc)₂存在下在合适膦配体例如三环己基膦三氟硼酸盐或[1,1'-双(二苯基膦)-二茂铁]二氯化钯 (II) (R= i-Pr, c-Pr, c-Bu, c-戊基)存在下采用约1.0-1.5当量的合适取代的格式试剂、硼酸烷基酯或烷基锌试剂从约室温至约120℃处理约3.0-3.6当量2-氯-6-甲基异烟腈 (Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 20(2), 576-580; 2010)提供方案4步骤A的粗2-烷基产物，其可以分离并在本领域熟知的条件例如萃取和层析下纯化。例如，采用水稀释该反应并经硅藻土床过滤，采用合适有机溶剂例如EtOAc或DCM萃取滤液。经Na₂SO₄干燥有机萃取物，过滤，在减压下浓缩，并通过在硅胶上使用己烷或庚烷/EtOAc的快速层析法纯化以获得方案4步骤A的产物，期望的2-烷基-6-甲基-4-吡啶甲腈。在本领域熟知的系列条件下，可以将甲腈基团还原成甲胺。例如，可以在20-60 psi氢气气氛下在合适极性溶剂混合物例如NH₃/MeOH中采用过量雷尼镍处理约1当量的方案4，步骤A的产物，期望的2-烷基-6-甲基-4-吡啶甲腈。可以过滤该反应混合物，浓缩，并采用有机溶剂例如甲苯、ACN、MeOH/甲苯和ACN/甲苯的合适混合物顺序地研磨所得残余物，随后过滤，以获得二盐酸盐形式的合适取代的(2-甲基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺。或者，可以在本领域熟知的条件例如萃取和层析方法下分离并纯化所得粗产物以获得合适取代的游离碱形式的(2-甲基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺。

方案5

方案5描述6-(氨基甲基)-4-甲基-吡啶-2-甲腈二盐酸盐的制备。在方案5步骤A中，可以在本领域常常描述的系列方法下完成2-吡啶-甲酸乙酯的还原。例如，在室温下采用约1.7当量的硼氢化钠/EtOH处理约1当量的6-氯-4-甲基吡啶-2-甲酸乙酯(Y=CH, Z=N)以获得(6-氯-4-甲基-2-吡啶基)甲醇，方案5步骤A的产物(Y=CH, Z=N)，适合不经另外纯化使用。本领域普通技术人员可以意识到在各种卤化条件下卤化成烷基卤化物。例如，在合适有机溶剂例如DCM或CHCl₃中采用约2当量的氯化亚砜从室温至回流处理约1当量的方案5步骤A的产物(6-氯-4-甲基-2-吡啶基)甲醇(Y=CH, Z=N)，溶剂的蒸发可以获得方案5步骤B的产物，期望的2-氯-6-(氯甲基)-4-甲基-吡啶(Y=CH, Z=N)，适合不经另外纯化使用。可以采用各种适合抵御另外官能化的受保护的胺处理方案5步骤B的产物2-氯-6-(氯甲基)-4-甲基-吡啶 (Y=CH, Z=N)。例如，可以在合适极性溶剂例如DMF中采用2-氯-6-(氯甲基)-4-甲基-吡啶，方案5步骤B(Y=CH, Z=N)的产物处理约1当量的酞酰亚胺钾。用水进行的随后稀释可以产生方案5步骤C (Y=CH, Z=N)的固体产物, 2-[(6-氯-4-甲基-2-吡啶基)甲基]异吲哚啉-1,3-二酮，其可以通过本领域熟知的方法例如过滤分离。可以用文献中常常描述的大量亲核物质例如置换2-[(6-氯-4-甲基-2-吡啶基)甲基]异吲哚啉-1,3-二酮，方案5步骤C的产物 (Y=CH, Z=N)的氯原子，如通过SNAR反应或通过过滤金属参与的方法。例如，可以在约0.05当量的[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)和约0.25当量的元素锌存在下在合适极性有机溶剂例如DMF或DMSO中伴随100-140℃的加热采用约0.75当量的氰化锌处理约1当量的方案5步骤C的产物 (Y=CH, Z=N), 2-[(6-氯-4-甲基-2-吡啶基)甲基]异吲哚啉-1,3-二酮。本领域技术人员会理解可以分离这个转化的产物并通过本领域熟知的标准技术例如萃取和层析纯化。例如，可以采用水稀释该冷却的反应混合物并采用合适溶剂例如DCM或EtOAc萃取，用NH₄OH和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤，并经Na₂SO₄或MgSO₄干燥有机萃取物。可以在硅胶上用合适有机溶剂混合物例如己烷/乙酸乙酯洗脱对所得粗产物施以快速层析法以提供方案5步骤D(Y=CH, Z=N)的产物6-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-4-甲基-吡啶-2-甲腈。可以通过本领域普通技术人员完成胺保护基的脱除。例如，在合适极性有机溶剂例如EtOH 中在回流下，采用约2当量的水合肼处理约1 当量的6-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-4-甲基-吡啶-2-甲腈，方案5步骤D的产物(Y=CH, Z=N)可以在溶剂蒸发后获得粗脱保护胺。可以通过本领域已知的标准技术例如选择性阳离子交换和盐制备完成随后的粗胺的分离和纯化。例如，可以使粗胺经过SCX柱，采用NH₃/MeOH混合物洗脱；可以使甲醇氨级分蒸发，使所得残余物再溶解于MeOH中，在合适有机溶剂例如Et₂O或1,4-二氧六环中采用2-10当量的HCl处理所得溶液以在通过过滤收集后获得固体6-(氨基甲基)-4-甲基-吡啶-2-甲腈二盐酸盐。可以通过类似方法进行化合物（其中Y=N和Z=CH）的合成。

方案6

方案6描述5-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]吡啶-2-甲酸的合成。在方案2步骤A中，可以在系列过渡金属催化剂存在下通过加氢立体选择性还原1-(6-溴吡啶-3-基)乙酮。例如，在适当密封和排空的加氢容器中，采用约0.00075当量的氯{(R)-(+)-2,2'-双[二(3,5-二甲苯基)膦]-1,1'-联萘}[(2R)-(-)-1-(4-甲氧基苯基)-1-(4-甲氧基苯基-kC)-3-甲基-1,2-丁二胺]钌(II) [(R)-RUCY^TM-XylBINAP]和约0.0075当量的KO^tBu处理合适极性溶剂例如EtOH:2-丙醇(约1.2 mL:1 mL)中的约1当量1-(6-溴吡啶-3-基)乙酮。然后，采用氢气填充该体系并在约室温下搅拌约6小时。分离粗产物并使用本领域熟知的标准技术例如过滤、除溶剂和层析纯化。例如，过滤反应混合物，在减压下蒸发以提供步骤A的粗产物。然后，通过在硅胶上的快速层析法，用合适有机溶剂混合物例如DCM/MTBE 洗脱纯化粗产物以提供方案6步骤A的(1S)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙醇。

在方案6步骤B中，在约0℃下将方案6步骤A的产物 (1S)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙醇溶解于合适有机溶剂例如DCM中并用约1.3当量的合适有机非亲核碱例如TEA处理。添加约1.2当量的合适磺酰化试剂例如甲磺酰氯，分离产物并使用本领域熟知的标准技术例如萃取纯化。例如，采用水处理反应混合物，分离各层；采用DCM萃取水层两次，合并有机层，用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，经无水Na₂SO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供方案6步骤B的甲磺酸(1S)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙酯，其可以不经进一步纯化即用于接下来的步骤。

在与方案1步骤A-F中所述的那些类似的条件下进行方案6步骤C-H以获得必要的5-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]吡啶-2-甲酸。

方案7

方案7描述琥珀酰亚胺甲酰胺化合物的制备，其中可以在本领域熟知的系列酰胺偶联条件下使合适的甲酸偶联至合适的吡啶胺或吡啶胺二盐酸盐。例如，可以类似于方案1步骤F中所述地进行或可以采用文献中常常描述的偶联试剂例如HOBt、HOAT、HATU或T3P进行酰胺偶联反应。或者，可以在各种本领域熟知的条件下，包括但不限于在密封容器中在合适非极性有机溶剂例如甲苯或二甲苯中在约150-170℃的温度下加热合适羧酸酯和合适吡啶胺或吡啶胺盐例如（二盐酸盐）的混合物，在羧酸酯(R¹=CH₃)上进行酰胺偶联。

制备例和实施例

下文的制备例和实施例进一步示例本发明并代表本发明化合物的典型合成。试剂和起始原料容易获得或可以由本领域普通技术人员容易地合成。应该理解，制备例和实施例以示例而非限制的方式描述，并且本领域普通技术人员可以进行各种变化。

可以通过例如X射线分析和与手性-HPLC保留时间相关的标准技术测定本发明化合物的R-或S-构型。

LC-ES/MS在AGILENT^® HP1100液相色谱系统上进行。在与HP1100 HPLC 界面接合的质量选择检测器四极质谱仪上进行电喷雾质谱测量(以正极和/或负极模式获得)。LC-MS条件(低pH)：柱：PHENOMENEX^® GEMINI^® NX C18 2.1 × 50 mm 3.0 µm；梯度：5-100% B，在3 min内，然后100% B持续0.75 min，柱温：50℃ +/-10℃；流速：1.2 mL/min；溶剂A：含0.1%HCOOH的去离子水；溶剂B：含0.1%甲酸的ACN；波长：214 nm。替代LC-MS条件(高pH)：柱：XTERRA^® MS C18柱2.1×50 mm, 3.5 µm；梯度：5%的溶剂A持续0.25 min，梯度5%至100%的溶剂B，在3 min内，和100%的溶剂B，持续0.5 min，或10%至100%的溶剂B，在3 min 内，和在100%的溶剂B下，持续0.75 min；柱温：50℃ +/-10℃；流速：1.2 mL/min；溶剂A：10 mMNH₄HCO₃ pH 9；溶剂B：ACN；波长214 nm。

在配备质量选择检测器质谱和LEAP®自动进样器/级分收集器的AGILENT® 1200LC-ES/MS上进行制备型反相层析。在75 x 30 mm PHENOMENEX^® GEMINI^®-NX, 具有10 x 20mm保护柱的5 µ粒度柱上进行高pH方法。流速85 mL/min。洗脱液为10 mM碳酸氢铵(pH10)/乙腈。

使用残余溶剂[CDCl₃, 7.26 ppm; (CD₃)₂SO, 2.05 ppm]作为参照标准，在BrukerAVIII HD 400 MHz NMR 波谱仪上进行NMR谱测量（以ppm报道的CDCl₃或(CD₃)₂SO溶液获得）。当报道峰重数时，可以使用以下缩写：s (单峰)、d (双峰)、t (三峰)、q (四重峰)、m(多重峰)、br-s (宽单峰)、dd (双重双峰)、dt (双重三峰)。耦合常数(J)，当报道时，报道为赫兹(Hz)。

制备例1

{(1R)-1-[4-(甲氧基羰基)苯基]乙基}(甲基)丙二酸二甲酯

方案1步骤A：在0℃下在氮气下向2-甲基丙二酸二甲酯 (12.2 g, 82.9 mmol)和4-{(1S)-1-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}苯甲酸甲酯 (21.8 g, 75.4 mmol)在DMF (150 mL)中的搅拌溶液中添加Cs₂CO₃ (32.2 g, 98.0 mmol)。采用氮气充分吹扫该反应混合物，在0℃下搅拌1小时，逐渐温热至环境温度。添加DCM和饱和NaHCO₃水溶液并分离各层。采用DCM萃取水层两次。合并有机层，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供黄色油。通过硅胶上的快速层析法纯化粗产物，用己烷/乙酸乙酯 (49:1至7:3的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供标题化合物(22.62 g, 93%)。

制备例2

4-[(2S)-4-甲氧基-3-甲基-4-氧代丁-2-基]苯甲酸甲酯

方案1步骤B：在氮气下在室温下向{(1R)-1-[4-(甲氧基羰基)苯基]乙基} (甲基)丙二酸二甲酯 (22.6 g, 73.7 mmol)在二甲亚砜(200 mL)/水(4.67 mL)中的搅拌溶液添加NaCl (5.58 g, 95.4 mmol)。将反应烧瓶置于油浴中并经50 min加热至190℃，所得反应保持在190℃持续3.5小时，此时TLC (30% EtOAc /乙烷)示出起始原料消失。在冷却至室温之后，用水(400 mL)稀释该反应并采用Et₂O(3 x 150 mL)萃取。用饱和NaCl水溶液洗涤萃取物，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供棕色油。通过硅胶上的快速层析法纯化粗产物，用己烷/乙酸乙酯 (19:1至4:1的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供非对映异构体混合物形式的标题化合物(13.35 g, 72%)。

制备例3

4-[(2R)-3-(氰基甲基)-4-甲氧基-3-甲基-4-氧代丁-2-基]苯甲酸甲酯

方案1步骤C：在氮气下冷却LDA溶液 [从二异丙基胺(11.3 mL, 80.4 mmol)和正丁基锂(2.5 M 在己烷中, 32.2 mL, 80.4 mmol)新鲜制备]至–75℃。经40 min将4-[(2S)-4-甲氧基-3-甲基-4-氧代丁-2-基]苯甲酸甲酯 (18.3 g, 73.1 mmol)在THF (50 mL)中的溶液滴加至LDA溶液。在–75℃下老化该反应混合物75 min，然后经12 min滴加溴乙腈溶液(7.87 mL, 110 mmol)/THF (20 mL)的溶液。使该反应混合物缓慢温热至室温并搅拌过夜。在用饱和NH₄Cl水溶液淬灭之后，用EtOAc (3 x 100 mL)萃取该反应。用饱和NaCl水溶液洗涤该萃取物，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供暗色油。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，用己烷/乙酸乙酯 (19:1至3:2的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供非对映异构体混合物形式的标题化合物(12.08 g, 57%)。

制备例4

4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸甲酯 (主要非对映异构体) 和

4-{(1R)-1-[(3R)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸甲酯 (次要非对映异构体)

方案1步骤D：将净4-[(2R)-3-(氰基甲基)-4-甲氧基-3-甲基-4-氧代丁-2-基]苯甲酸甲酯 (33.4 g, 115 mmol)冷却至冰/水浴中并经20 min的时间采用浓H₂SO₄ (66.8mL, 1180 mmol)逐滴处理。除去冷浴并在室温下搅拌该反应3小时。然后，将该反应混合物冷却在冰/水浴中，用冰水(400 mL)淬灭，用DCM (2 x 250 mL)萃取。用水洗涤萃取物，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供黄色泡沫形式的粗中间体酰胺。将粗中间体溶解于THF (200 mL)和水(200 mL)中，用Na₂CO₃ (30.7 g, 289 mmol)处理，并在50℃下加热5小时。在冰/水浴中冷却之后，采用5 N HCl 水溶液将该反应混合物酸化至pH 约2并用EtOAc(2 x 150 mL)萃取。用饱和NaCl水溶液洗涤萃取物，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供黄色泡沫。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，用己烷/乙酸乙酯 (9:1至1:1的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供作为第一洗脱物质的主要非对映异构体4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸甲酯, (17.23 g, 54%)和作为第二洗脱物质的次要非对映异构体4-{(1R)-1-[(3R)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸甲酯, (5.01 g, 16%)。

制备例5

4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸

方案1步骤E：将氢氧化锂一水合物(3.16 g, 75.3 mmol)添加至4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸甲酯 (6.91 g, 25.1 mmol)溶解在THF (84 mL)和水(36 mL)中的溶液。在室温下搅拌16小时之后，采用1 N HCl水溶液将该反应混合物酸化至pH约2并在真空下除去THF。通过过滤收集所得固体并在真空炉中在45℃下干燥以提供标题化合物(5.96 g, 91%)。

制备例6

(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸异丙酯

方案2步骤A：在N₂气氛下向(4-溴苯基)硼酸(110 g, 547.73 mmol)在1,4-二氧六环(750 mL)中的脱氧溶液添加双(降冰片二烯)铑(I)四氟硼酸盐(2 g, 5.13 mmol)，然后添加(R)-(+)-2,2'-双(二苯基膦)-1,1'-联萘(4.5 g, 7.2 mmol)。在室温下老化该混合物1小时，然后添加H₂O (100 mL)、TEA (70 mL, 502 mmol)和(E)-丁-2-烯酸异丙酯(65 g,507.14 mmol)。将所得红色溶液加热至40℃持续18小时。在减压下浓缩该反应混合物至一半体积并用500 mL MTBE稀释。用500 mL水洗涤有机溶液，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩至干。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，用己烷/EtOAc (1:0至9:1的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供标题化合物(144 g, 94.6%, 94.5% ee)。主要对映异构体t_R = 2.20 min；次要对映异构体t_R = 2.69 min (Chiral SFC Lux Amylose-2, 5%MeOH/CO₂, 5 mL/min, 225 nm)。

制备例7

(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸

方案2步骤B：在室温下搅拌的同时向(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸异丙酯 (1042 g,3471.0 mmol)在MeOH (8 L)中的溶液添加5 M NaOH水溶液(2 L)。在N₂气氛下将该反应加热至50℃持续40 min。在冷却至30℃之后，在减压下浓缩该反应混合物并用2 L水稀释残余物。用DCM (约2 L)萃取所得混合物水溶液一次。用约1 kg冰处理水层并经20 min时间通过缓慢添加用浓HCl (1 L)酸化至pH约4。然后，用DCM (约4 L)萃取浑浊的水层。经Na₂SO₄干燥有机层，过滤，并在减压下浓缩成透明黄褐色油，其固化成灰白色固体。添加庚烷(约4 L)至该固体并加热所得混合物至45℃持续2小时，之后固体析出。通过过滤收集固体并用庚烷(200-250 mL)洗涤。然后，在减压下浓缩滤液至干以提供灰白色固体形式的标题化合物(771 g, 91.4%, 99% ee)。LC-ES/MS (m/z): 241.0 (M-H).主要对映异构体t_R = 2.35min；次要对映异构体t_R = 2.82 min (Chiral SFC Lux Amylose-2, 5% MeOH/CO₂, 5 mL/min, 225 nm)。

制备例8

(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸甲酯

方案2步骤C：将浓H₂SO₄ (45 mL, 802 mmol)添加至(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸(450g, 1851.1 mmol)在MeOH (4.5 L)中的溶液。在65℃下加热该混合物2小时，冷却至室温，并在减压下浓缩成干残余物。用MTBE (2.5 L)和H₂O (2.5 L)稀释固体并用MTBE (2 x 2.5L)萃取所得混合物。用H₂O (2.5 L)洗涤合并的萃取物，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩以提供浅黄色油形式的标题化合物(469.8 g, 定量收率)，其可以不经进一步纯化使用。

制备例9

(3S, 2R)-3-(4-溴苯基)-2-甲基丁酸甲酯

和

(3S, 2S)-3-(4-溴苯基)-2-甲基丁酸甲酯

方案2步骤D：在-40℃下经30 min将2.5 M n-BuLi在己烷(1250 mL)中的溶液滴加至DIPEA (444 mL, 3150 mmol)在无水THF (2.3 L)中的溶液。在30 min之后，经40 min添加(3S)-3-(4-溴苯基)丁酸甲酯 (468.90 g, 1750.7 mmol)在无水THF (3.3 L)中的溶液，并在-40℃下将该反应混合物老化40 min。经30 min添加CH₃I (176 mL, 2798 mmol)并在-40℃下搅拌该混合物15 min。在-40℃下用MeOH (283 mL)，然后用H₂O (2.5 L)缓慢淬灭该反应混合物，使该混合物温热至室温。用H₂O (2.5 L)稀释该反应混合物并分离所得层。用MTBE (7.5 L)再次萃取水层并用H₂O (3 L)和饱和NaCl水溶液(2.5 L)顺序地洗涤合并的有机萃取物。经MgSO₄干燥有机萃取物，过滤并在减压下浓缩以提供非对映异构体混合物(7:3)形式的浅棕色油标题化合物(489 g, 93%)，其可以不经进一步纯化使用。主要非对映异构体t_R= 1.29 min；次要非对映异构体t_R= 1.32 min (XBRIDGE® C18柱, 3.5 m, 2.1x 50 mm, 1.2 mL/min, 50℃, 10-95% 10 mM NH₄CO₃ (pH 10) /ACN)。LC-ES/MS (m/z 对于⁷⁹Br/⁸¹Br): 288.0, 290.0 (M+NH₄ ⁺)。

制备例10

(S)-2-((R)-1-(4-溴苯基)乙基)-2-甲基琥珀酸4-(叔丁酯) 1-甲酯

和

(R)-2-((R)-1-(4-溴苯基)乙基)-2-甲基琥珀酸4-(叔丁酯) 1-甲酯

方案2步骤E：在-40℃下经20 min将2.5 M n-BuLi在己烷中的溶液(1150 mL,2900 mmol)添加至DIPEA (410 mL, 2910 mmol)在无水THF (3 L)中的溶液。在-40℃下搅拌所得混合物30 min，经1小时的时间添加非对映异构体混合物(2R/S,3S)-3-(4-溴苯基)-2-甲基-丁酸甲酯 (488.00 g, 1619.8 mmol)在无水THF (3 L)中的溶液。在-40℃下老化该反应混合物45 min，并经30min添加2-溴乙酸叔丁酯(391 mL, 2596 mmol)在无水THF(250 mL)中的溶液。在-40℃下再搅拌所得混合物30 min。添加MeOH (250 mL)，然后添加H₂O (2.5 L)，使所得混合物温热至室温。用H₂O (2.5 L)稀释该混合物并分离所得层。用MTBE (5 L)萃取水层，用H₂O (5 L)，然后用饱和NaCl水溶液(2.5 L)顺序地洗涤有机萃取物，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供非对映异构体混合物形式的稠棕色油标题化合物(786 g, 87%)，其可以不经进一步纯化使用。主要非对映异构体t_R= 1.51 min；次要非对映异构体t_R= 1.53 min (XBRIDGE^® C18柱, 3.5 m, 2.1 x 50 mm, 1.2 mL/min, 50℃,10-95% 10 mM NH₄CO₃ (pH 10)/ACN).LC-ES/MS (m/z 对于⁷⁹Br/⁸¹Br): 328.8, 330.8 (M-tBu+H)。

制备例11

(3S,4R)-4-(4-溴苯基)-3-(甲氧基羰基)-3-甲基戊酸

和

(3R,4R)-4-(4-溴苯基)-3-(甲氧基羰基)-3-甲基戊酸

方案2步骤F：用TFA (1.06 L)处理非对映异构体混合物(R/S)-2-((R)-1-(4-溴苯基)乙基)-2-甲基琥珀酸4-(叔丁酯) 1-甲酯 (785 g, 1406 mmol)在DCM (6 L)中的溶液并在室温下搅拌18小时。用H₂O (2 x 5 L)和饱和NaCl水溶液 (5 L)顺序地洗涤该反应混合物。经MgSO₄干燥有机萃取物，过滤，并在减压下浓缩以提供非对映异构体混合物(8:2)形式的深棕色胶标题化合物(604 g, 91%)，其不经进一步纯化使用。LC-ES/MS (m/z 对于⁷⁹Br/⁸¹Br): 329.0, 331.0 (M+H)。

制备例12

(2S)-4-氨基-2-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-2-甲基-4-氧代-丁酸甲酯

和

(2R)-4-氨基-2-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-2-甲基-4-氧代-丁酸甲酯

方案2步骤G：经15min在0℃下向非对映异构体混合物(3R/S,4R)-4-(4-溴苯基)-3-甲氧基羰基-3-甲基戊酸(603g, 1282 mmol)和TEA (550 mL, 3870 mmol)在无水DMF (4L)中的溶液添加HATU (597 g, 1538.69 mmol)。在室温下将该反应混合物老化 2小时。在10℃下经30 min添加7 M NH₃/MeOH (1.83 L)的溶液，并将所得混合物温热至室温并搅拌1小时。将该反应混合物冷却至10℃，然后用DCM (5 L)，然后用H₂O (5 L)缓慢稀释。分离所得层，并用DCM (2.5L)再次萃取水层。用H₂O (5L)和饱和NaCl水溶液(5 L)顺序地洗涤合并的萃取物，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供非对映异构体混合物(8:2)形式的暗色胶标题化合物(520 g, 87%)，其可以不经进一步纯化使用。主要非对映异构体t_R= 0.97min；次要非对映异构体t_R= 0.99 min (XBRIDGE^® C18柱, 3.5 m, 2.1 x 50 mm, 1.2 mL/min, 50℃, 10-95% 10 mM NH₄CO₃ (pH 10) /ACN).LC-ES/MS (m/z 对于⁷⁹Br/⁸¹Br)328.0/330.0 (M+H/M+H+2)。

制备例13

(3S)-3-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮

和

(3R)-3-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮

方案2步骤H：向溶解于THF (4.2 L)和H₂O (4.2 L)中的非对映异构体混合物(2R/S)-4-氨基-2-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-2-甲基-4-氧代-丁酸甲酯(519g, 1107 mmol)添加Na₂CO₃ (293 g, 2764.46 mmol)并在60℃下加热该混合物2小时。将该反应冷却至室温并用EtOAc (2.5 L)萃取。用H₂O (3 L)洗涤有机层。用EtOAc (5 L)萃取所得萃取物水溶液并经 MgSO₄干燥合并的有机萃取物，过滤并在减压下浓缩以提供两种非对映异构体的粗混合物，其通过SFC分离 [柱：AS-H, 150 x 50mm; 10% EtOH (0.2% DEMA), 340 g/min; BPR150 bar; Inj vol: 4 ml; 220 nm]。(3R)-3-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮：第一洗脱化合物(43.8g, 11%)。LC-ES/MS (m/z 对于⁷⁹Br/⁸¹Br): 313.0, 315.0(M+H).¹H NMR (CDCl₃) δ 1.33 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.40 (s, 3H), 2.34 (d, J= 18.4Hz, 1H), 2.80 (, J= 18.4 Hz, 1H), 3.23 (q, J= 7.2 Hz, 1H), 7.07 (d, 2H), 7.40(d, 2H), 7.54 (br-s, 1H).(3S)-3-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮：第二洗脱化合物(241.8 g, 55%)。LC-ES/MS (m/z 对于⁷⁹Br/⁸¹Br): 313.0, 315.0 (M+H)。

制备例14

2,6-二甲基吡啶-4-甲腈

方案3步骤A：将氰化锌(3.82g, 31.9 mmol)添加至在氮气下在室温下搅拌的4-溴-2,6-二甲基吡啶 (5.09 g, 26.5 mmol)和DMF (40 mL)的混合物。将氮气鼓泡通过搅拌的悬浮液15 min，添加四(三苯基膦)钯(0) (1.54 g, 1.33 mmol)。在120℃下加热该反应混合物5.5小时之后，将该混合物冷却至室温并用EtOAc (150 mL)稀释。通过纸过滤除去固体并用EtOAc (50 mL)洗涤滤饼。用15% NH₃水溶液 (2 x 50 mL)、水(50 mL)和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤合并的有机滤液和洗液，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供黄色固体。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，用己烷/乙酸乙酯 ( 9:1至1:1的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供标题化合物(2.79 g, 77%)。¹H NMR (CDCl₃): δ2.61 (s, 6H), 7.21 (s, 2H)。

制备例14的替代程序

方案3步骤A：在配备机械搅拌器、回流冷凝器和N₂入口的的三颈圆底烧瓶中，将4-溴-2,6-二甲基吡啶 (235.0 g, 1263.1 mmol)溶解于无水DMF (250 mL)并将N₂鼓泡通过该溶液20 min。在N₂下通过套管将一部分该溶液(约150 mL)转移至加料漏斗。将氰化锌(150.0 g, 1277.4 mmol)和四(三苯基膦)钯(0) (15.0 g, 13.0 mmol)添加至该反应混合物并通过将N2鼓泡至该混合物中15 min吹扫。加热该反应混合物至90℃。经30 min滴加4-溴-2,6-二甲基吡啶的DMF溶液并继续加热过夜。将该混合物冷却至室温，添加MTBE (约2L)，然后添加水(1.5 L)和30%NH₄OH水溶液 (800 mL)；在室温下搅拌所得混合物30 min。分离各层，采用MTBE (约2 L)萃取水层一次；合并有机相，用10% NH₄OH水溶液 (2 L)洗涤一次，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下蒸发滤液以获得淡黄色固体形式的被约10%三苯基膦副产物污染的粗标题化合物(153 g, 91.7 %收率)，其适合不经另外纯化使用。¹H NMR(CDCl₃): δ 2.61 (s, 6H), 7.21 (s, 2H)。

制备例15

1-(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐

方案3步骤B：将2,6-二甲基吡啶-4-甲腈(2.26 g, 16.7 mmol)在EtOH (40 mL)中的溶液添加至10% Pd/碳(405 mg)、EtOH (10 mL)和浓 HCl水溶液 (6.9 mL)的悬浮液。排空该反应容器，用氮气填充，并伴随在室温下搅拌随后的反应混合物16小时引入H₂ (55psi)。通过硅藻土过滤该反应混合物。用 MeOH洗涤滤饼并将合并的滤液浓缩以提供黄色固体。用沸腾30% EtOH/EtOAc研磨粗物质，冷却至室温，并通过过滤收集以提供标题化合物(2.64 g, 75%)。LC-ES/MS (m/z): 137.0 (M+H)。

制备例15的替代程序

方案3步骤B：接下来在两批中进行，并在完全加氢反应之后合并两批：将2,6-二甲基吡啶-4-甲腈(77.39 g, 527.0 mmol)添加至配备机械搅拌器的含10% Pd/C (45.8 g)在MeOH (800 mL)中混合物和4M HCl在二氧六环中的溶液(500 mL)的2 L Parr高压釜。密封该高压釜，并采用N₂然后H₂充分吹扫所得混合物并在室温下在搅拌的同时采用H₂加压至60psi持续过夜。过滤该反应混合物并在减压下蒸发滤液。将MeOH (约250 mL)添加至所得残余物并搅拌15小时，并缓慢添加MTBE (2.5 L)。在室温下搅拌该混合物1小时，过滤并采用MTBE (1 L)洗涤固体。在真空下在室温下干燥该固体过夜以获得浅黄色固体形式的标题化合物(217.0 g, 91.6% 收率, 两次运行的组合)，适合不经进一步纯化使用。LC-ES/MS (m/z): 137.2 (M+H), 92.5% 纯度，其中存在7.5% 三苯基膦杂质 (1.57 min, m/z: 263.0)。

制备例16

6-环丙基-4-甲基-吡啶-2-甲腈

方案4步骤A：将环丙基硼酸(1.98g, 21.9 mmol)添加至在室温下在氮气下搅拌的6-氯-4-甲基-吡啶-2-甲腈(US 20140256734 A1, 2.15 g, 13.7 mmol,)、K₃PO₄ (5.98g,27.3 mmol)、甲苯(40mL)和水(2 mL)的混合物。使氮气鼓泡通过所搅拌的悬浮液10 min，并添加乙酸钯(II) (0.313 g, 1.37 mmol)和三环己基鏻四氟硼酸盐(1.02g, 2.73 mmol)。在氮气下在110℃下加热该反应混合物15.5小时之后，将该混合物冷却至室温并用EtOAc(50 mL)稀释。通过硅藻土过滤除去固体并用EtOAc (20 mL)洗涤滤饼。用饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机滤液和洗液，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供琥珀色油。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，采用己烷/乙酸乙酯 (50:1至2:1的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供标题化合物(1.52 g, 70%收率)。LC-ES/MS (m/z): 159.0(M+H)。

制备例17

(6-环丙基-4-甲基-2-吡啶基)甲胺二盐酸盐

方案4步骤B：基本上通过制备例15中所述的方法从6-环丙基-4-甲基-吡啶-2-甲腈 (1.52g, 9.63mmol)制备以获得标题化合物(1.86 g, 82%收率)。LC-ES/MS (m/z):163.0 (M+H)。

制备例18

2-环丙基-6-甲基-吡啶-4-甲腈

AG2-E14219-088

方案4步骤A：基本上通过制备例16中所述的方法从2-氯-6-甲基-吡啶-4-甲腈(J. Med. Chem., 59(1), 313-327, 2016, 2.0 g, 12.7 mmol)制备以提供标题化合物(1.66 g, 82%收率)。

制备例19

(2-环丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺二盐酸盐

3344731, AG2-E14219-090

方案4步骤B：基本上通过制备例15中所述的方法从2-环丙基-6-甲基-吡啶-4-甲腈 (2.52g, 15.9mmol)制备以获得标题化合物(3.57 g, 95%收率)。LC-ES/MS (m/z):163.0 (M+H)。

制备例20

2-异丙基-6-甲基-吡啶-4-甲酸甲酯

将2M 异丙基氯化镁在THF中的溶液 (7.53 mL, 15.1 mmol)经8分钟滴加至在氮气下在冰/水浴中搅拌的2-氯-6-甲基-吡啶-4-甲酸甲酯(1.92g, 10.0 mmol)、MnCl₂(0.065g, 0.502 mmol)和THF (25 mL)的混合物。在冷浴中搅拌4小时之后，用饱和NH₄Cl水溶液淬灭该反应并用EtOAc (2 x 50 mL)萃取。用饱和NaCl水溶液洗涤合并的萃取物，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供琥珀色油。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，采用己烷/乙酸乙酯 (50:1至2:1的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供标题化合物(0.683 g, 35%收率)。

制备例21

2-[(2-异丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲基]异吲哚啉-1,3-二酮

在室温下将硼氢化钠(0.231g, 6.01 mmol)添加至2-异丙基-6-甲基-吡啶-4-甲酸甲酯(0.683g, 3.53 mmol)在EtOH (15 mL)中的溶液。在搅拌过夜之后，在减压下除去溶剂，用饱和NaCl 水溶液稀释剩余油并采用EtOAc (2 x 50 mL)萃取。经Na₂SO₄干燥合并的萃取物，过滤并在减压下浓缩以提供652mg的琥珀色固体形式的粗(2-异丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲醇。将粗醇溶解于DCM (20 mL)中并用氯化亚砜(0.514 mL, 7.02 mmol)处理。在室温下搅拌4小时之后，在减压下浓缩该反应混合物；溶解于甲苯中并再次浓缩(2x)。将粗烷基氯化物溶解于DMF (10 mL)中并添加酞酰亚胺钾(1.32g, 7.02 mmol)。在室温下搅拌该悬浮液3.5小时并用水(100 mL)稀释。在室温下搅拌所得悬浮液1小时并通过过滤收集固体。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，采用DCM/乙酸乙酯(50:1至4:1的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供标题化合物(0.332 g, 32%收率)。

制备例22

(2-异丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺

AG2-E14044-027

在室温下将一水合肼(0.70 mL, 1.41 mmol)添加至2-[(2-异丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲基]异吲哚啉-1,3-二酮 (0.332 g, 1.13 mmol)和EtOH (10 mL)的悬浮液中。在回流1.5小时之后，将该反应混合物冷却至室温并通过纸过滤除去固体。采用EtOH (10 mL)洗涤滤饼并在减压下浓缩合并的滤液/洗液以提供标题化合物(0.179 g, 96%收率)。

制备例23

(1S)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙醇

方案6步骤A：在氮气下的600 mL Parr高压釜中，在氮气下将氯{(R)-(+)-2,2'-双[二(3,5-二甲苯基)膦]-1,1'-联萘}[(2R)-(-)-1-(4-甲氧基苯基)-1-(4-甲氧基苯基-kC)-3-甲基-1,2-丁二胺]钌(II) (103 mg, 0.087 mmol)和KO^tBu (1.0 M 在t-BuOH中,0.88 mL, 0.88 mmol)在无水2-丙醇(15 mL)中的溶液添加至1-(6-溴吡啶-3-基)乙酮(23.5 g, 117.0 mmol)在无水EtOH (100 mL)/无水2-丙醇(85 mL)中的溶液。密封高压釜，排空，用氢气加压至207 kPa并在室温下搅拌约6小时。在减压下浓缩该反应混合物以提供固体残余物并在真空下干燥过夜。通过在硅胶上的快速层析法纯化残余物，用DCM/MTBE(9:1至3:1的梯度)洗脱以提供标题化合物(23.7 g, 94%收率)。LC-ES/MS (m/z 对于⁷⁹Br/⁸¹Br)：202.0/204.0 (M+H)。Chiral HPLC示出99.3% ee；t_R = 6.32 min [254 nm；LC柱：CHIRALCEL^® OD-H 4.6 x 150 mm；5.0 µL注射；10% 2-丙醇/庚烷(含0.2% DMEA)；柱温：25℃；流速：1.0 mL/min]。

制备例24

甲磺酸(1S)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙酯

方案6步骤B：在0℃下向(1S)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙醇(3.00 g, 14.8 mmol)和TEA (2.69 mL, 19.3 mmol)在DCM (30 mL)中的搅拌溶液添加甲磺酰氯(1.38 mL, 17.8mmol)。在0℃下2小时之后，添加水和DCM并分离各层。采用DCM萃取水层。合并有机层并用饱和NaHCO₃和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤，经Na₂SO₄干燥；过滤并在减压下浓缩以提供标题化合物(4.13 g, 99%收率)。LC-ES/MS (m/z 对于⁷⁹Br/⁸¹Br): 280.0/282.0 (M+H)。

制备例25

2-[(1R)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]-2-甲基-丙二酸二甲酯

方案6步骤C：基本上通过制备例1中所述的方法从甲磺酸(1S)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙酯 (17.9 g, 63.9 mmol)制备以获得标题化合物(18.9 g, 89%收率).%)。

制备例26

(3S)-3-(6-溴-3-吡啶基)-2-甲基-丁酸甲酯

方案6步骤D：基本上通过制备例2中所述的方法从 2-[(1R)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]-2-甲基-丙二酸二甲酯 (18.9 g, 57.2 mmol)制备以获得非对映异构体混合物形式的标题化合物(12.5 g, 80%收率)。LC-ES/MS (m/z): 271.9 (M+H)。

制备例27

(3R)-3-(6-溴-3-吡啶基)-2-(氰基甲基)-2-甲基-丁酸甲酯

方案6步骤E：基本上通过制备例3中所述的方法从(3S)-3-(6-溴-3-吡啶基)-2-甲基-丁酸甲酯 (12.5 g, 46.1 mmol)制备以获得非对映异构体混合物形式的标题化合物(7.66 g, 53 %收率)。

制备例28

(3S)-3-[(1R)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮 (主要非对映异构体)

和

(3R)-3-[(1R)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮 (次要非对映异构体)

方案6步骤F：基本上通过制备例4中所述的方法从(3R)-3-(6-溴-3-吡啶基)-2-(氰基甲基)-2-甲基-丁酸甲酯 (7.66 g, 24.6 mmol)制备以提供6.57g的非对映异构混合物。在Chiralpak AD柱 (8x35 cm, 100% EtOH)上分离非对映异构体以提供作为第一洗脱物质的次要非对映异构体，(3R)-3-[(1R)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮, (0.74 g, 10%)和作为第二洗脱物质的主要非对映异构体，(3S)-3-[(1R)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮, (5.21 g, 71%)。

制备例29

5-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]吡啶-2-甲酸甲酯

方案6步骤G：方案3步骤B：在配有机械搅拌器的300 mL Parr高压釜中将乙酸钯(II)(115 mg, 0.49 mmol)、1,1’-双(二苯基膦)二茂铁(340 mg, 0.6 mmol)、(3R)-3-[(1R)-1-(6-溴吡啶-3-基)乙基]-3-甲基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(1.5 g, 5.07 mmol)、无水MeOH (25 mL)、无水ACN (40mL)和TEA (1.8 mL, 13 mmol)合并。密封高压釜，用CO吹扫，用CO加压至100 psi并在搅拌下加热至85℃。在1小时之后，将该反应混合物冷却至室温过夜并过滤。在减压下浓缩滤液以提供固体残余物。将残余物悬浮于EtOAc (200 mL)中并再次过滤。在减压下浓缩滤液以提供橙色残余物。通过在硅胶上的快速层析法纯化橙色残余物，经35 min采用5-60%EtOAc/DCM的梯度洗脱，以在期望级分的溶剂蒸发之后提供标题化合物(1.34 g, 95%收率)。

制备例30

方案6步骤H：将固体LiOH水合物(3.16 g, 75.3 mmol)添加至溶解于THF (28 mL)和水(12 mL)的混合物中的4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酸甲酯 (6.9 g, 25.1 mmol)溶液。在室温下搅拌所得混合物过夜，采用1N HCl水溶液调节 pH至约3，并在减压下除去溶剂。在真空炉中在45℃下干燥所得残余物过夜以获得标题化合物(5.96 g, 91%收率)，适合不经另外纯化即进一步使用。LC-ES/MS (m/z): 260.0(M-H)。

制备例31

(6-氯-4-甲基-2-吡啶基)甲醇

方案5步骤A (Y=CH, Z=N)：将硼氢化钠(905 mg, 23.4 mmol)一次性添加至溶解于EtOH (25 m L)中的6-氯-4-甲基吡啶-2-甲酸乙酯(2.81 g, 13.8 mmol)溶液。在室温下搅拌该反应混合物 18小时并在减压下浓缩。采用饱和NaCl水溶液稀释所得残余物并采用EtOAc萃取两次，经Na₂SO₄干燥有机萃取物，过滤并在减压下浓缩以获得标题化合物，适合不经另外纯化使用。LC-ES/MS (m/z ³⁵Cl/³⁷Cl): 158.0/160.0 (M+H)。

制备例32

2-氯-6-(氯甲基)-4-甲基-吡啶

方案5步骤B (Y=CH, Z=N)：在氮气气氛下向(6-氯-4-甲基-2-吡啶基)甲醇(2.3g, 13.8 mmol)在DCM (25 mL)中的溶液添加氯化亚砜(2 mL, 27.5 mmol)。在室温下搅拌该反应混合物4.5小时，在减压下浓缩并将残余物再次溶于甲苯中并在减压下再浓缩两次，然后在45℃下在真空炉中干燥过夜，以获得浅琥珀色油形式的标题化合物(2.36 g, 97%收率)。¹H NMR (CDCl₃): δ 2.37 (s, 3H), 4.59 (s, 2H), 7.11 (s, 1H), 7.24 (s, 1H)。

制备例33

2-[(6-氯-4-甲基-2-吡啶基)甲基]异吲哚啉-1,3-二酮

方案5步骤C (Y=CH, Z=N)：在室温下在氮气流下将酞酰亚胺钾(2.98 g, 15.8mmol)添加至2-氯-6-(氯甲基)-4-甲基-吡啶 (2.36 g, 13.1 mmol)在DMF (25 mL)中的溶液。继续搅拌3.5小时，并伴随在室温下连续搅拌72小时，添加另外的酞酰亚胺钾(523 mg,2.8 mmol)。采用水(150 mL)稀释该反应混合物并搅拌该混合物 30 min。通过真空过滤收集所得白色沉淀物，并在真空炉中在35℃下干燥固体过夜以获得白色固体形式的标题化合物(3.6 g, 96%收率)。

制备例34

6-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-4-甲基-吡啶-2-甲腈

方案5步骤D (Y=CH, Z=N)：将氮气鼓泡通过2-[(6-氯-4-甲基-2-吡啶基)甲基]异吲哚啉-1,3-二酮 (1.3 g, 4.6 mmol)、氰化锌(0.23 mL, 3.5 mmol)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(174 mg, 0.23 mmol)和元素锌(76 mg, 1.2 mmol)在DMF中的悬浮液 10 min。在120℃下在油浴中加热该反应混合物5.5小时。将该混合物冷却至室温，用EtOAc (100 mL)稀释并通过纸过滤以除去任何不溶物。采用15% NH₄OH水溶液、水和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤滤液，经Na₂SO₄干燥有机层，过滤并在减压下浓缩。通过在硅胶上快速层析法纯化所得残余物，经35 min采用10-60% EtOAc/己烷洗脱以在溶剂蒸发之后获得浅黄色固体形式的标题化合物(1.04 g, 80.5%收率)。

制备例35

6-(氨基甲基)-4-甲基-吡啶-2-甲腈二盐酸盐

方案5步骤E (Y=CH, Z=N)：将水合肼(371 µL, 7.5 mmol)添加至6-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-4-甲基-吡啶-2-甲腈 (1.04 g, 3.7 mmol)在EtOH (20 mL)中的悬浮液并在回流下加热所得混合物1.5小时。冷却该反应混合物，过滤并在减压下浓缩滤液。将所得残余物溶解于MeOH (约25 mL)中并装载在SCX柱 (10 g)上，用1:1 MeOH:DCM (30mL)、MeOH (20 mL)和2M NH₃/MeOH (50 mL)洗脱。在减压下浓缩甲醇氨级分以提供浅黄色油，其溶解于THF (15 mL)中并用4N HCl/1,4-二氧六环(2.5 mL)处理。在室温下搅拌该混合物15 min，并通过真空过滤收集所得固体。在真空炉中在45℃下干燥结晶滤饼过夜以获得浅黄色固体形式的标题化合物(541 mg, 66%收率)。

制备例36

(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)甲醇

方案5步骤A (Y=N, CH)：基本上通过在制备例31中所述的方法从2-氯-6-甲基吡啶-4-甲酸甲酯(2.4g, 12.5 mmol)制备以获得标题化合物(2.0 g, 97%收率)。

制备例37

2-氯-4-(氯甲基)-6-甲基吡啶

方案5步骤B (Y=N, CH)：基本上通过在制备例32中所述的方法从(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)甲醇(1.97 g, 12.1 mmol)制备以获得标题化合物(2.28 g, 99.5%收率)。

制备例38

2-[(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)甲基]异吲哚啉-1,3-二酮

方案5步骤C (Y=N, CH)：基本上通过在制备例33中所述的方法从2-氯-4-(氯甲基)-6-甲基吡啶 (2.28 g, 12 mmol)制备以获得标题化合物(3.67 g, 98.7%收率)。

制备例39

4-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-6-甲基-吡啶-2-甲腈

方案5步骤D (Y=N, CH)：基本上通过在制备例34中所述的方法从2-[(2-氯-6-甲基-4-吡啶基)甲基]异吲哚啉-1,3-二酮(3.66 g, 11.9 mmol)制备以获得标题化合物(1.7g , 51.5%收率)。

制备例40

4-(氨基甲基)-6-甲基吡啶-2-甲腈

方案5步骤E (Y=N, CH)：基本上通过在制备例35中所述的方法从4-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]-6-甲基-吡啶-2-甲腈(1.69 g, 6.1mmol)制备以获得标题化合物(379 mg , 41%收率)。

制备例41

2-乙基-6-甲基吡啶-4-甲腈

方案4步骤A：将乙基溴化镁 (18 ml, 17.7 mmol)逐份添加至在氮气下在室温下搅拌的2-氯-6-甲基异烟腈(Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 20(2), 576-580; 2010) (10.0 g, 63.7 mmol)、1-甲基-2-吡咯烷酮(10 ml)、THF (10 mL)和乙酰乙酸铁(III)(521 mg, 1.47 mmol)的混合物。将该反应混合物浓缩以除去大部分THF并用水淬灭。采用乙酸乙酯萃取水层。用水和饱和NaCl水溶液顺序地洗涤合并的有机物，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以提供粗产物。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，用15% 己烷/乙酸乙酯洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供标题化合物(0.53 g, 37%收率). LC-ES/MS (m/z): 147.2 (M+H)。

制备例42

1-(2-乙基-6-甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐

方案4步骤B：将2-乙基-6-甲基吡啶-4-甲腈 (0.37 g, 2.5 mmol)在2M NH₃ (2mol/l)/MeOH (12.5 mL)中的溶液添加至雷尼镍(0.5 g)在2M NH₃/MeOH中 (12.5 mL)的悬浮液。采用氮气吹扫反应容器，并引入H₂ (60 psi)，在 40℃下摇动随后的反应混合物15分钟。采用H₂ (60 psi)将该反应混合物再次加压并继续摇动4小时。过滤该反应混合物。采用过量3N HCl/MeOH稀释粗物质并浓缩以提供绿色油。研磨粗油并在以下溶剂中顺序地浓缩：甲苯、乙腈、甲醇/甲苯和乙腈/甲苯，以在除去溶剂之后提供绿色固体形式的标题化合物(0.56 g, 94%收率)。LC-ES/MS (m/z): 151.0 (M+H)。

制备例43

2-环丁基-6-甲基-吡啶-4-甲腈

方案4步骤A：将环丁基溴化锌(0.5M 在THF中, 3.28 mmol)滴加至2-氯-6-甲基-吡啶-4-甲腈 (250 mg, 1.64 mmol,)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II) (122mg, 0.164 mmol)在1,4-二氧六环中的脱气溶液。加热至80℃持续1小时，然后冷却至室温。添加水(5mL)并快速搅拌5分钟。通过硅藻土过滤除去固体。用EtOAc洗涤并分离各层。用水和饱和NaCl水溶液洗涤有机层。经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。通过在硅胶上的快速层析法纯化所得残余物，采用10-30% EtOAc/庚烷的梯度洗脱，以在溶剂蒸发之后提供标题化合物(232 mg, 82%)。LC-ES/MS (m/z): 173.0 (M+H)。

制备例44

(2-环丁基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺二盐酸盐

方案4步骤B：基本上通过制备例42中所述的方法使用2-环丁基-6-甲基-吡啶-4-甲腈制备标题化合物。LC-ES/MS (m/z): 177.0 (M+H)。

制备例45

2-环戊基-6-甲基-吡啶-4-甲腈

方案4步骤A：基本上通过制备例43中所述的方法使用环戊基溴化锌制备标题化合物。

制备例46

(2-环戊基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺二盐酸盐

方案4步骤B：基本上通过制备例42中所述的方法使用2-环戊基-6-甲基-吡啶-4-甲腈制备标题化合物。LC-ES/MS (m/z): 191.0 (M+H)。

实施例1：第一程序

N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺

方案1步骤F：向4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸(1.20 g, 4.59 mmol)、1-(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐 (1.15 g, 5.51 mmol)、EDCI (1.08 g, 5.51 mmol)、HOBt (768 mg, 5.51 mmol)和DMF (25 mL)的溶液添加TEA(2.59 mL, 18.4 mmol)。在室温下搅拌16小时之后，添加水，并采用DCM (2 x 75 mL)萃取混合物。经Na₂SO₄干燥有机层，过滤并在减压下浓缩以提供油，其通过在硅胶上的快速层析法纯化，采用DCM/MeOH (1:0至9:1的梯度)洗脱以在溶剂蒸发之后获得标题化合物(1.56g, 89%收率)。

实施例1：第二程序

向4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸(9.3 g,36.0 mmol)和1-(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐 (7.8 g, 37.0 mmol)在无水DMF(100 mL)中的悬浮液添加DIPEA (2.25 mL, 210 mmol)，然后经10 min以小份添加BOP(17.5 g, 39 mmol)。在室温下搅拌所得混合物80 min，倾倒至1500 mL冰/水中并剧烈搅拌。采用5.0 N HCl 调节pH 至约7-8并在室温下将该混合物搅拌过夜，采用MTBE萃取，用水洗涤有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤，在真空下浓缩并通过在硅胶上的快速层析法纯化，采用己烷中的10% 甲醇/乙酸乙酯(3:5至1:0的梯度)洗脱，合并含产物的级分并在真空下蒸发。在水(150 mL)中将所得残余物制浆1.5天，并通过过滤收集随后的白色固体并在真空下干燥以获得细白色粉末形式的标题化合物(9.8 g, 73%收率)。LC-ES/MS (m/z): 380.2 (M+H)。

实施例1：第三程序

方案2步骤I：在不锈钢反应容器中，合并(3S)-3-[(1R)-1-(4-溴苯基)乙基]-3-甲基-吡咯烷-2,5-二酮 (120 g, 401.1 mmol)、(2,6-二甲基-4-吡啶基)甲胺二盐酸盐(100g, 481.3 mmol)、乙酸钯(II)(2.97g, 13.24 mmol)、4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基呫吨(14.85 g, 25.67 mmol)、DIPEA (181 g, 1404 mmol)和甲苯(1.2 L)的混合物，用N₂吹扫，在60 psi下在一氧化碳(401.1 mmol)的气氛下密封并加热至100℃持续18h。将该反应混合物冷却至室温并采用N₂吹扫四次。添加少量MeOH和DCM并使该混合物过滤通过硅藻土垫。在减压下浓缩滤液以提供深棕色油。添加DCM (1.5 L)和H₂O (1.5 L)，通过过滤收集所得棕色固体并采用Et₂O研磨以提供灰白色固体形式的标题化合物(124.8 g, 92%收率)。LC-ES/MS (m/z): 380.2 (M+H)。

X射线粉末衍射(XRPD)

结晶固体的XRD图在于35 kV和50 mA下操作的配备有CuKa源(λ = 1.54060 Å)及Vantec检测器的Bruker D4 Endeavor X射线粉末衍射计上获得。在4至40° 2θ扫描样品，其中步长尺寸为0.0087° 2θ且扫描速率为0.5 秒/步，且使用0.6 mm散度、5.28mm固定防散射器及9.5 mm检测器狭缝。将干燥粉末堆积于石英样品架上并使用载玻片获得光滑表面。晶体学领域中已众所周知，对于任一既定晶型而言，衍射峰的相对强度可由于由例如晶体形态及习性等因素产生的优选定向而变化。在存在优选定向的影响的情况下，峰强度改变，但多晶型物的特征峰位置不变。参见例如The United States Pharmacopeia #38, NationalFormulary #35 Chapter <941> Characterization of crystalline and partially crystalline solids by X-ray powder diffraction (XRPD), Official 2015年5月1日。此外，晶体学领域中也已熟知，对于任一既定晶型而言，角峰位置可略有变化。例如，峰位置可由于分析样品时的温度或湿度的变化、样品位移或存在或不存在内标而发生移位。在此情况下，± 0.2 2θ的峰位置变化性将考虑到此类潜在变化，此并不妨碍所指示晶型的明确鉴定。晶型的鉴定可基于区别峰(以° 2θ为单位)、通常更突出的峰的任一独特组合来实施。在8.85°及26.77 ° 2θ下基于NIST 675标准峰调整于环境温度及相对湿度下收集晶型衍射图。

实施例1的晶型

N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺 (结晶无水物)

通过在70℃下将N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺 (150 mg, 0.40 mmol)溶解于3 mL的1:1甲醇: 水中以提供几乎透明溶液，实施例1的化合物，N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺可以游离碱的无水物的形式结晶。使该混合物冷却至室温并搅拌，在2小时之后可以观察到固体的稠白色浆液。在真空下在70℃下过滤并干燥固体2h以获得期望的标题化合物结晶无水物(126 mg, 84%收率)。

因此，N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺 (结晶无水物)的制得的样品使用CuKa辐射由具有下表1中所述的衍射峰(2θ值)的XRPD图表征。具体地，该图含在13.4^o处的峰和一个或多个选自14.4^o、18.1^o、19.4^o、20.9^o、21.2^o、21.5^o和26.5^o的峰，其中衍射角的公差为0.2^o。

表1：实施例1的结晶无水物的X射线粉末衍射峰

实施例1A：第一程序

结晶的N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺甲磺酸盐

将N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺甲磺酸盐 (509 mg, 1.34 mmol)以1000 rpm/60℃在5 mL丙酮中制浆。添加甲磺酸(105 µL, 1.6 mmol)，并搅拌该混合物以提供透明黄色溶液，在小瓶的底部存在一些胶状物。将该样品制浆约10 min，一些胶状物溶解，然后混合物变浑浊并且从溶液中析出白色固体沉淀物。再搅拌20 min之后除去加热，在冷却至室温的同时以1000 rpm搅拌样品。通过真空过滤分离所得白色固体，用500 µL的丙酮冲洗，并在空气流下在滤纸上干燥15分钟以获得白色结晶固体形式的标题化合物(605 mg, 94.8%收率)。

实施例1A：第二程序

在以1000 rpm搅拌1小时的同时，在回流下加热N-[(2,6-二甲基-4-吡啶基)甲基]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酰胺 (23.6 g, 62.2mmol)在丙酮(500 mL)中的溶液。添加甲磺酸(4.5 mL, 69 mmol)并加热该混合物1小时。在冷却至室温之后，通过过滤收集所得沉淀物，用丙酮洗涤，并在真空下干燥以获得灰白色粉末形式的标题化合物(28.3 g, 96%收率)。

手性分析：>99% de, t_R = 2.32 min (Chiral SFC OD-H柱, 17% EtOH在20 mMNH₃/MeOH中, 5 mL/min, 100 bar, 35℃, 220 nm)。

结晶样品N-[(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺甲磺酸盐使用CuKa辐射由具有如下表2中所述的衍射峰 (2θ值)，特别是具有在18.8^o处的峰和一个或多个选自23.2^o、24.7^o和15.2^o的峰的XRD图表征，其中衍射角的公差为0.2^o。

表2：实施例1A的X射线粉末衍射峰

实施例2

N-[(4,6-二甲基-2-吡啶基)甲基]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酰胺

方案7步骤A (X=CH, Y=N, Z=CH, R=Me)：基本上通过实施例1中所述的方法：第一程序从1-(4,6-二甲基吡啶-2-基)甲胺 (Aldrich, CAS# 76457-15-3, 30 mg, 0.21mmol)和4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酸(45 mg, 0.17mmol)制备以获得标题化合物(61 mg, 93%收率)。LC-ES/MS (m/z): 380.0 (M+H)。

实施例3

N-[(6-氰基-4-甲基-2-吡啶基)甲基]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酰胺

方案7步骤A (X=CH, Y=N, Z=CH, R=CN)：基本上通过实施例1中所述的方法：第一程序从6-(氨基甲基)-4-甲基-吡啶-2-甲腈(35 mg, 0.23 mmol)和4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酸(50 mg, 0.191 mmol)制备以获得标题化合物(36 mg, 48%收率)。LC-ES/MS (m/z): 391.0 (M+H)。

实施例4

N-[(2-氰基-6-甲基-4-吡啶基)甲基]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酰胺

方案7步骤A (X=CH, YCH, Z=N, R=CN)：基本上通过实施例1中所述的方法：第一程序从4-(氨基甲基)-6-甲基-吡啶-2-甲腈(53 g, 0.289 mmol)和4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酸(50 mg, 0.19 mmol)制备以获得标题化合物(52 g, 69%收率)。LC-ES/MS (m/z): 391.0 (M+H)。

实施例5

N-[(2-异丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲基]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酰胺

方案7步骤A (X=CH, Y=CH, Z=N, R=i-Pr)：基本上通过实施例1中所述的方法：第一程序从(2-异丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺 (42 mg, 0.23 mmol)和4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酸(50 mg, 0.19 mmol)制备以获得标题化合物(60 mg, 77%收率)。LC-ES/MS (m/z): 408.2 (M+H)。

实施例6

N-[(2-环丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲基]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酰胺

方案7步骤A (X=CH, YCH, Z=N, R=c-Pr)：基本上通过实施例1中所述的方法：第一程序从(2-环丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺二盐酸盐(54 mg, 0.23 mmol)和4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酸(50 mg, 0.19 mmol)制备以获得标题化合物(0.068 g, 88%收率)。LC-ES/MS (m/z): 406.2 (M+H)。

实施例7

N-[(6-环丙基-4-甲基-2-吡啶基)甲基]-4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酰胺

方案7步骤A (X=CH, Y=N, Z=CH, R=c-Pr)：基本上通过实施例1中所述的方法：第一程序从(6-环丙基-4-甲基-2-吡啶基)甲胺二盐酸盐(54 mg, 0.23 mmol)和4-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]苯甲酸(50 mg, 0.19 mmol)制备以获得标题化合物(64 g, 83%收率)。LC-ES/MS (m/z): 406.2 (M+H)。

实施例8

N-[(2,6-二甲基-4-吡啶基)甲基]-5-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]吡啶-2-甲酰胺

方案7步骤A (X=N, Y=CH, Z=N, R=Me)：在150℃下加热5-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]吡啶-2-甲酸甲酯(110 mg, 0.39 mmol)、(2,6-二甲基吡啶-4-基)甲胺(Aurora Building Blocks, CAS # 324571-98-4, 83 mg, 0.59 mmol)和甲苯(10 mL)2天并在165℃下持续一天。冷却并浓缩该反应混合物。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，采用DCM/MeOH (99:1至92:8的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供标题化合物(64 mg, 42%收率)。LC-ES/MS (m/z): 381.0 (M+H)。

实施例9

N-[(2-环丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲基]-5-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]吡啶-2-甲酰胺

方案7步骤A (X=N, Y=CH, Z=N, R=c-Pr)：在微波炉中在170℃下加热5-[(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代-吡咯烷-3-基]乙基]吡啶-2-甲酸甲酯(100 mg, 0.36 mmol)、(2-环丙基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺二盐酸盐(126 mg, 0.54 mmol)、三乙胺(0.15 mL,1.07 mmol)和甲苯(3 mL)1小时并在油浴中在160℃下加热20小时。冷却并浓缩该反应混合物。通过在硅胶上的快速层析法纯化粗产物，采用DCM/MeOH (99:1至92:8的梯度)洗脱。合并纯层析级分并在减压下浓缩以提供标题化合物(34 mg, 23%收率). LC-ES/MS (m/z):407.0 (M+H)。

实施例10

N-[(2-乙基-6-甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺

方案7步骤A (X=CH, Y=CH, Z=N, R=Et)：在室温下向4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸(40 mg, 0.153 mmol)在DMF (0.76 mL)中的溶液添加1-(2-乙基-6-甲基吡啶-4-基)甲胺二盐酸盐(51 mg, 0.23 mmol)、DIPEA (0.15 mL,0.92 mmol)和HATU (71 mg, 0.18 mmol)。在17小时之后，通过反相层析法纯化该反应混合物(PHENOMENEX^® GEMINI^®-NX C18柱)，采用10 mmol碳酸氢铵(pH约10，含5%甲醇)和ACN洗脱以在溶剂蒸发后提供标题化合物(43.0 mg, 71%收率)。LC/MS (m/z): 394.4 (M+H)。

实施例11

N-[(2-环丁基-6-甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺

方案7步骤A (X=CH, Y=CH, Z=N, R=c-Bu)：基本上通过实施例10中所述的方法从4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸(40 mg, 0.15 mmol)和(2-环丁基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺二盐酸盐(57 mg, 0.23 mmol)制备以提供标题化合物(38 mg, 60%收率)。LC/MS (m/z): 420.2 (M+H)。

实施例12

N-[(2-环戊基-6-甲基吡啶-4-基)甲基]-4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酰胺

方案7步骤A (X=CH, Y=CH, Z=N, R=c-戊基)：基本上通过实施例10中所述的方法从4-{(1R)-1-[(3S)-3-甲基-2,5-二氧代吡咯烷-3-基]乙基}苯甲酸(40 mg, 0.15 mmol)和(2-环戊基-6-甲基-4-吡啶基)甲胺二盐酸盐(60 mg, 0.23 mmol)制备以提供标题化合物(47.7 mg, 72%收率)。LC/MS (m/z): 434.2 (M+H)。

通过CGRP受体拮抗剂抑制cAMP产生

hCGRP（人类降钙素基因相关肽）受体官能地偶联至Gαs蛋白。刺激hCGRP导致细胞内cAMP的合成增加并可通过添加受体拮抗剂阻断。因此，受体活性是细胞内所存在的cAMP的量的反映，其可使用标准体外技术检测。

细胞培养：使内源性表达hCGRP受体的经培养的SK-N-MC神经胚细胞瘤细胞(ATCC^®HTB-10^TM)在Eagle氏最低必需培养基(HYCLONE^TM)中生长至约70%融合，该培养基补充有10%热灭活胎牛血清(FBS；GIBCO^®)、非必需氨基酸(GIBCO^®)、1 mM丙酮酸钠、2 mM L-谷氨酰胺、100 U/mL盘尼西林和10 µg/mL链霉素。提供新鲜培养基之后，将细胞在37℃下孵育过夜。在分析当日，使用ACCUTASE^® (MP Biomedicals)将细胞分离，重新悬浮于分析缓冲液[Hank氏平衡盐溶液/Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水，含有各自100 mg/mL 1:2混合的CaCl₂和MgCl₂、3.3 mM 4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸、0.03%牛血清白蛋白和0.5 mM 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(作为cAMP抑制剂)]，并以3-5K/孔接种至384-孔、聚-D-赖氨酸涂布的白板(BDBiosciences)。

cAMP产生的抑制：对于剂量响应研究，将化合物以1:3连续稀释于二甲亚砜中然后1:10稀释于分析缓冲液中。将作为hCGRP受体的受体特异性激动剂的人类CGRP (0.8 nM;Bachem)与经稀释化合物混合并作为攻击刺激剂以其EC₈₀浓度添加至细胞。

数据分析：使用 HTRF技术(Cisbio)根据供应商说明书定量细胞内cAMP的量。简言之，将溶解缓冲液中的cAMP-d2缀合物和抗- cAMP-穴状缀合物偶联物与经处理细胞一起在RT下孵育90 min。立即使用ENVISION^®板读数器(Perkin-Elmer)检测HTRF信号以计算665至620 nM下的荧光比率。使用自每一实验生成的cAMP标准曲线将原始数据转换成cAMP量(pmole/孔)。自浓度响应曲线的顶部-底部范围使用四参数逻辑斯谛曲线拟合程式(ACTIVITYBASE^® v5.3.1.22或GENEDATA SCREENER^® v12.0.4)计算相对EC₅₀值，且K_b值使用以下等式估算为激动剂校正的IC₅₀值：

K_b = (IC₅₀) / [ 1+ ([激动剂] / EC₅₀) ]。

估算的K_b值报告为平均值 + SEM，自运行次数(n)进行平均。

按照基本上如上所述的程序，实施例1-12的化合物具有表3中所示的针对人类CGRP受体所测量的K_b。这表明实施例1-12的化合物在体外是人类CGRP受体的拮抗剂。

表3. 在体外针对人类CGRP受体所测量的Kb

CGRP (降钙素基因相关肽)非人类灵长类动物研究

使用辣椒素诱导的皮肤血流量(DBF)作为靶标接合生物标记以评价非人类灵长类动物(NHP)中的CGRP受体活性。方法改编自早期公布的程序[Hershey等人, Regulatory Peptides, 第127卷, 第1-3期, 第71-77页, 2005]。

研究群体：动物研究可根据Covance Institutional Animal Care and UseCommittee批准的方案实施。考虑到NHP与人类CGRP受体之间的接近同源性，可使用猕猴NHP。研究群体可包括重约3-4 kg的健康的、未经CGRP拮抗剂处理的雄性猕猴NHP。

猕猴NHP基于针对辣椒素反应性的预筛选入选于研究中。将在所筛选臂中响应于辣椒素利用超过基线的2 mg (20 μL/环)局部辣椒素处理（平均3个O环）展现血流量超过基线的≥50%增加且在成像时期期间具有稳定的生理机能的NHP包括在利用实施例1的化合物的研究中。NHP用于交叉设计中，其中所有NHP在两周冲洗期之后接受所有计量。总n = 10NHP/组。

计量给予. 在激光多普勒成像(LDI)实验中，NHP各自接受口服给予的媒介物、0/33和30 mg/kg的拮抗剂实施例1(10% Acacia w/v / 0.05% Antifoam 1510-US v/v /在PW中)，90 min后给予辣椒素。

药效学取样. 使动物禁食过夜，然后各自进行辣椒素挑战。在试验当日，NHP利用1% Isoflurane麻醉大约30 min，然后扫描。将NHP置于安静、温度控制的室中，仰卧于温暖的小手术毯上并将剃毛的臂置于激光头下方的加热垫上。将三个氯丁橡胶O环(尺寸 = 8mm ID)置于NHP前臂上，相距大约1 cm。在30-min稳定时期期间，获得初步扫描以确认O环的正确定位。一旦基线温度(大约37℃)稳定，即收集基线扫描。完成基线扫描之后，将20 µl辣椒素溶液(50 mg辣椒素于170 µl EtOH、80 µl TWEEN® 20、250 µl纯化的 H2O中的溶液)施加至各O环。继续每5 min进行扫描，再持续25 min (利用CGRP受体拮抗剂化合物处理后85、90、95、100、105、110、115和120 min)。

分析和统计：使用Moor软件v.5.2 (Moor Instruments, Wilmington, DE)通过所关注区域信号分析来分析LDI重复扫描，并使用Microsoft Excel工作表在既定时间点将来自所关注区域的信号进行平均。DBF的变化报告为自基线DBF的变化百分比。将所分析数据输入至Graphpad PRISM® 4.0中用于绘制图表并将SAS® 9.1中的重复测量混合的效果模型用于统计分析。数据表示为平均值 +/- SD。

使用具有重复测量(经由AR1程序的自回归相关)和错误发现率多次调整的混合效果模型，与媒介物相比，3和30 mg/kg的实施例1的化合物在辣椒素挑战后给予统计上显著降低的血流量增加，其中组平均抑制分别为27.4% (p < 0.003)和40.6% (p < 0.00001)。