CN107921095A

CN107921095A - 包含fgf‑18化合物的复方组合物

Info

Publication number: CN107921095A
Application number: CN201680047327.1A
Authority: CN
Inventors: C·H·雷德尔; H·焦耳林; A·吉古特; C·布莱尼斯
Original assignee: Merck Patent GmbH
Current assignee: Merck Patent GmbH
Priority date: 2015-08-13
Filing date: 2016-08-11
Publication date: 2018-04-17
Also published as: RU2745453C2; US20180236032A1; JP2018528186A; KR20180035911A; IL257492B; RU2018108592A; BR112018002404A2; EP3334450A1; MX2018001816A; CA2994638A1; IL257492A; AU2016306626A1; JP7140677B2; ZA201800974B; WO2017025611A1; RU2018108592A3

Abstract

本发明涉及FGF‑18化合物与选自IL‑6抑制剂，IL‑6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物的其他活性成分组合的用途。所述组合物可以用于治疗软骨疾病，例如骨关节炎或软骨损伤。

Description

包含FGF-18化合物的复方组合物

技术领域

本发明涉及FGF-18化合物与选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物的其他活性成分组合的用途。所述组合物可以用于治疗软骨疾病，例如骨关节炎或软骨损伤。

背景技术

软骨由分散在基质(一种坚固的凝胶状物质)中的软骨细胞(来源于间充质细胞的细胞)组成。软骨基质由这些细胞产生，主要包括II型胶原纤维(除了还包含I型胶原蛋白纤维的纤维软骨)、蛋白多糖和弹性蛋白纤维。在关节，肋骨，耳朵，鼻子，喉咙，气管和椎间盘等部位中发现软骨。软骨有三种主要类型：透明，弹性和纤维软骨，根据其组织学形态提供不同的功能特性。例如，关节软骨是一种透明软骨，具有粘弹性，覆盖骨的关节面。关节软骨的主要目的是提供光滑的表面以确保关节骨的几乎无摩擦的运动。

软骨疾病广义上指以软骨退化/解体为特征的疾病和由受影响的身体部分的炎症、疼痛、僵硬和运动受限所表现的结缔组织异常。这些疾病可能是由于病变或可能是创伤或损伤的结果。成熟的软骨具有非常有限的自我修复能力，这主要是因为成熟的软骨细胞由于缺乏软骨中的血管而有限的营养供应，因此具有很小的增殖潜力。对由损伤或疾病引起的受损软骨，特别是关节软骨的替换对于医生来说是一个主要挑战，并且在没有骨关节炎改变的年轻患者中，现有的手术治疗程序被认为是不可预测并且仅在有限的时间内有效。因此，大部分病人要么不寻求治疗，要么被劝告尽可能延缓治疗。当需要治疗时，标准程序取决于年龄，并且在全部或部分关节置换术、软骨块或软骨细胞移植或骨髓刺激技术(如微骨折)中有所不同。微骨折是一种便宜且常见的手术，涉及软骨下骨的穿刺以由刺激骨髓衍生干细胞引起的软骨沉积。然而，已经表明，该技术不能充分修复软骨缺陷，并且形成的新软骨主要是纤维软骨，导致短寿命的修复组织。事实上，纤维软骨不具有与透明关节软骨相同的生物力学特性，并且经常缺乏适当的侧向整合到周围软骨中。因此，新合成的纤维软骨可能更容易破损(预期时间范围：5-10年)。

对于骨关节炎患者，所有这些软骨修复技术都失败了。其余的非手术治疗主要由以下组成：物理治疗，改变生活方式(如体重减轻)，辅助装置，口服药物(如非甾体抗炎药)和注射药物(如透明质酸和皮质激素，以及食品补充剂。所有这些治疗都无法阻止OA疾病的进展。如果疼痛治疗也失败，那么对于患者而言，例如关节置换术或膝关节高位胫骨截骨术的手术是其余的选择。胫骨或股骨截骨术(切骨以重新平衡关节磨损)可能会减轻症状，有助于保持积极的生活方式，并推迟全面关节置换的需要。全关节置换术可以缓解晚期骨关节炎的症状，但通常需要对患者的生活方式和/或活动水平进行重大改变。

目前可用的药物治疗主要是缓解疼痛。目前还没有市售的治疗方法可以恢复软骨损伤(参见Lotz，2010)。

白细胞介素6(IL-6)或白细胞介素-6受体(IL-6R)是治疗骨关节炎患者疼痛的可能靶点。例如在WO2005080429中，确实显示当将IL-6抗体注射到小鼠OA模型的右关节炎膝盖中时，后爪重量分布(即失能测试)降低，强调了抗IL-6抗体对疼痛的效果。

A型肉毒杆菌毒素也在与OA有关的疼痛的情况中被描述。越来越多的证据支持其在疼痛调节中的作用(Boon等，2010)。人的试验性研究已经表明在几种不同的疼痛状况(包括与脊髓损伤有关的疼痛)下有效。已经通过关节内注射BoNT-A获得肩OA疼痛的一些初步数据(Singh等人，2009)。

抗NGF化合物是在与OA有关的疼痛的情况中描述的另一类化合物。目前，基于I期或II期临床试验的有希望的结果，正在开发用于治疗OA患者的疼痛的他尼珠单抗(Tanezumab)，法斯单抗(Fasinumab)或弗兰单抗(Fulranumab)，并且目前均处于治疗关节炎和/或慢性疼痛的II/III期临床试验(Sanga等，2013；Tiseo等，2014)。

成纤维细胞生长因子18(FGF-18)是成纤维细胞生长因子(FGF)蛋白质家族的成员，其与FGF-8和FGF-17紧密相关。已经显示，FGF-18是软骨细胞和成骨细胞的增殖剂(Ellsworth等，2002；Shimoaka等，2002)。已提出将FGF-18以单独(WO2008/023063)或联合透明质酸(WO2004/032849)的形式治疗软骨疾病，例如骨关节炎和软骨损伤。

已经提出了FGF-18的各种给药方案。例如，Moore等(2005)公开了每周两次给药持续3周，WO2008023063教导了每周一次给药持续3周。最后的给药方案已经在临床试验中进行了研究。

尽管WO2008023063中描述的给药方案在关节软骨修复中提供了良好的结果，但是仍然需要一种用于减少疼痛/改善功能，同时维持治疗软骨疾病的功效的方法。事实上，疼痛不仅经常与软骨疾病有关，而且代表了这些疾病的临床检测的主要症状。

发明内容

本发明目的在于提供FGF-18化合物与至少一种其它活性成分组合的用途，其中所述至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。与其他活性成分组合的FGF-18可以用于治疗软骨疾病。所述软骨疾病是例如骨关节炎或软骨损伤。

本发明还提供包含至少两种活性成分的组合的组合物，其中活性成分之一是FGF-18化合物，并且其中至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。在一个实施方案中，所述至少两种活性成分的组合物用于治疗软骨疾病。所述软骨疾病是例如骨关节炎或软骨损伤。

本文还涵盖FGF-18化合物，其与至少一种其它活性成分组合用于治疗软骨疾病，其中所述至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。所述软骨疾病是例如骨关节炎或软骨损伤。

本文还提供一种试剂盒，其包含FGF-18化合物以及用于与至少一种其他活性成分同时或顺序使用的说明书，其中所述至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。

本文还涵盖一种试剂盒，其包含FGF-18化合物和至少一种其他活性成分以及使用说明书，其中所述其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。

根据本发明整体而言，FGF-18化合物和至少一种其他活性成分可以是药物制剂的部分。FGF-18化合物和至少一种其他活性成分是相同药物制剂的部分或者是分开的药物制剂的各部分。所述药物制剂可以进一步包含至少一种赋形剂。

定义

-本文中所用的术语“FGF-18化合物”或“FGF-18”意指，保留了人FGF-18蛋白(即成纤维细胞生长因子18)的至少一种生物活性的蛋白质。FGF-18可以是原始的(native)，以其成熟形式，重组形式或其截短形式存在。人FGF-18蛋白的生物活性包括显著增加软骨细胞或成骨细胞增殖(参见WO9816644)或增加软骨形成(参见WO2008023063)。原始或野生型的人FGF-18是由关节软骨的软骨细胞表达的蛋白质。人FGF-18是首次指定的zFGF-5，并且其在WO9816644中有完整的介绍。SEQ ID NO:1对应于原始人FGF-18的氨基酸序列，其具有由氨基酸残基1(Met)至27(Ala)组成的信号肽。人FGF-18的成熟形式对应于SEQ ID NO:1的残基28(Glu)至残基207(Ala)的氨基酸序列(180个氨基酸)。

本发明中的FGF-18可通过重组方法产生，例如，如申请WO2006063362所教导的。视表达系统和条件而定，本发明中的FGF-18在重组宿主细胞中表达，具有起始甲硫氨酸(Met)残基或具有用于分泌的信号序列。当在原核宿主(例如，大肠杆菌)中表达时，FGF-18在其序列的N末端包含额外的Met残基。例如，当人FGF-18的氨基酸序列在大肠杆菌中表达时，以N末端(位置1)的Met残基起始，随后是SEQ ID NO:1的残基28(Glu)至残基207(Ala)。

-本文中所用的术语“截短形式”的FGF-18指，包含或由SEQ ID NO:1的残基28(Glu)至196(Lys)组成的蛋白质。优选，截短形式的FGF-18蛋白是标为“trFGF-18”(170个氨基酸；还称为rhFGF-18或斯普弗明)的多肽，其以Met残基(在N末端)起始，随后是野生型人FGF-18的氨基酸残基28(Glu)-196(Lys)。trFGF-18的氨基酸序列示于SEQ ID NO:2(SEQ IDNO:2的氨基酸残基2-170，对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基28-196)。trFGF-18是重组截短形式的人FGF-18，由大肠杆菌生成(参见WO2006063362)。已显示，trFGF-18具有与成熟人FGF-18类似的活性，例如，其增加软骨细胞增殖和软骨沉积，导致多种软骨组织的修复和重建(参见WO2008023063)。

-本文所用的术语“IL-6抑制剂”是指能够部分或完全抑制IL-6活性(即白细胞介素6)的化合物。根据本发明优选的“IL-6抑制剂”是抗体或其片段以及纳米抗体。这种化合物是例如但不限于希妥昔单抗(siltuximab)(参见SEQ ID No.4-5)或PMP6B6(参见SEQ IDNo.6)。达杂单抗(Dazakinumab)，克拉杂单抗(clazakizumab)，希鲁库单抗(Sirukumab)，欧罗单抗(Olokizumab)或OP-R003是已知的IL-6抑制剂的其他示例(具体序列未知)。

-本文所用的术语“IL-6受体抑制剂”是指能够部分或完全抑制IL-6受体的活性(即白细胞介素6受体)的化合物。根据本发明优选的“IL-6受体抑制剂”是抗体或其片段以及纳米抗体。这样的化合物是例如但不限于托珠单抗(参见SEQ ID No.7-8)。SA-237或ALX-0061是已知的IL-6受体抑制剂的其他示例(具体序列未知)。

-本文所用的术语“NGF抑制剂”是指能够部分或完全抑制NGF(神经生长因子)活性的化合物。根据本发明优选的“NGF抑制剂”是抗体或其片段以及纳米抗体。这样的化合物是例如但不限于他尼珠单抗(参见SEQ ID No.9-10)，法斯单抗(参见SEQ ID No.11-12)，弗兰单抗(参见SEQ ID No.13-14)。ANA-02，ABT-110，ALD-906或MEDI-578是已知的NGF受体抑制剂的其他示例(具体序列未知)。

-本文使用的术语“肉毒杆菌毒素化合物”是指由细菌肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)和相关物种产生的神经毒蛋白。根据本发明使用的优选的“肉毒杆菌毒素化合物”是A型肉毒杆菌毒素(也称为BoNT-A或BoNT/A；参见SEQ ID No.3)。这样的化合物是例如以下的化合物：abo肉毒杆菌毒素A(abobotulinumtoxinA)，Ona肉毒杆菌毒素A(OnabotulinumtoxinA)，inco肉毒杆菌毒素A(incobotulinumtoxinA)。

-术语“治疗周期”或“周期”对应于其中FGF-18化合物与至少一种其他活性成分组合的时期。例如，一个周期可以由每周1次的3次将与至少一种其他活性成分组合的FGF-18化合物注射组成。这样的“治疗周期”可以重复。例如，第二个“治疗周期”可以在前一个周期的最后一次注射后的3,4,5或6个月进行。或者，也可以在第一个周期的第一次注射后1年或2年进行第二个周期。

-本文中所用的术语“软骨疾病”涵盖由因损伤(例如创伤性损伤或软骨病疾病或关节炎)造成的损害所致的疾病。可通过给予本文所述的FGF-18制剂来治疗的软骨疾病的示例包括但不限于，关节炎，例如，骨关节炎，和软骨损伤。该措词也包括软骨或关节的退行性病症/疾病，如软骨瘤病，多软骨炎，复发性多软骨炎，强直性脊柱炎或肋软骨炎。国际软骨修复协会提出了评估软骨缺损严重程度的关节镜分级系统：0级：(正常)健康软骨，1级：软骨具有软斑或水疱，2级：软骨中可见微小的撕裂，3级：病灶具有深裂缝(超过软骨层的50％)和4级：软骨撕裂暴露下面的(亚软骨)骨骼(参见ICRS出版物：http://www.cartilage.org/_files/contentmanagement/ICRS_evaluation.pdf，第13页)。

本文使用的术语“关节炎”包括例如骨关节炎、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、感染性关节炎、银屑病关节炎、斯蒂尔病(幼年类风湿性关节炎发作)或剥脱性骨软骨炎的疾病。它优选包括软骨受损的疾病或病症。

-所用术语“骨关节炎”意指关节炎的最常见形式。术语“骨关节炎”涵盖原发性骨关节炎和继发性骨关节炎(参见例如《默克手册(The Merck Manual)》，第17版，第449页)。骨关节炎可由软骨破损造成。少量的软骨可能会脱落，从而造成骨与骨之间的关节中的疼痛和膨胀。随时间推移，该软骨可能会完全磨损，使得骨与骨在一起摩擦。骨关节炎可能会影响任何关节，但长见于手部、肩部和承重关节，例如，髋、膝盖、足部，和脊柱。在一个优选的示例中，骨关节炎可以是膝盖骨关节炎或髋骨关节炎。该措辞主要涵盖根据OARSI分类系统划分为第1级至第4级或第1级至第6级的骨关节炎的形式。本领域技术人员完全知晓本领域中所用的骨关节炎分类，具体而言是OARSI评估系统(还称为OOCHAS；参见例如，Custers等，2007)。骨关节炎是可通过给予本发明的FGF-18化合物治疗的优选的软骨疾病之一。

-本文中所用的术语“软骨损伤”是主要由创伤造成的软骨疾病或软骨损伤。软骨损伤可能主要在创伤性机械破坏后发生，尤其是涉及事故或手术(例如微骨折手术)而发生。术语“软骨损伤”还包括软骨或骨软骨骨折和半月板损伤。该定义中还考虑运动相关损伤或运动相关的关节组织磨损。该术语还包括微损伤或钝性创伤，软骨骨折，骨软骨骨折或半月板损伤。

发明详述

令人惊讶地发现，根据本发明的组合物和用途至少保持了斯普弗明的活性。实际上，发现总体上1)当按照本文所述组合物或用途给药时，FGF-18化合物的作用不受IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物的影响，和2)当按照本文所述组合物和用途给药时，FGF-18化合物不影响IL-6抑制剂、IL-6受体抑制剂、NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物的作用。由于该组合的每种化合物的高分子量，这一发现是不可预料的。同样令人惊讶的是，所述活性得到维持，即使每种化合物的剂量非常低。不仅组合整体保持各自的活性，而且令人惊讶的是，FGF-18的合成代谢作用可被加强(例如参见实施例1和2)。本发明的另一个优点是它将允许减少疼痛/改善功能，同时至少维持FGF-18治疗软骨疾病的功效。

本发明提供了FGF-18化合物与至少一种其他活性成分(在本文中无差别地被称为“额外的活性成分”或“另外的活性成分”)组合的用途，其中所述至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。

在一个实施方案中，FGF-18与至少一种其他活性成分组合用于治疗软骨疾病。所述软骨疾病是例如骨关节炎或软骨损伤。

在另一个具体的实施方案中，与至少一种其他活性成分组合的FGF-18化合物被关节内给药。或者，将FGF-18化合物关节内给药，并将至少一种其他活性成分静脉内或皮下给药。

FGF-18化合物可以与至少一种其他活性成分同时(共同给予)或顺序(以任何顺序)组合给予。如果FGF-18化合物和至少一种其他活性成分顺序给药，则所述顺序给药将优选在同一次访问医生期间完成。

本发明还涵盖FGF-18化合物，其与至少一种其它活性成分组合用于治疗软骨疾病，其中所述至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。所述软骨疾病是例如骨关节炎或软骨损伤。与其他活性成分组合的FGF-18化合物优选地被关节内给药。或者，将FGF-18化合物关节内给药，并将至少其他活性成分静脉内或皮下给药。

FGF-18化合物可以与至少一种其他活性成分同时(共同给予)或顺序(以任何顺序)组合给予。如果化合物是顺序给药，则所述顺序给药将优选在同一次访问医生期间完成。

本发明还提供包含至少两种活性成分的组合的组合物，其中活性成分之一是FGF-18化合物，并且其中至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。

在一个实施方案中，所述至少两种活性成分的组合物用于治疗软骨疾病。所述软骨疾病是例如骨关节炎或软骨损伤。

在另一个具体的实施方案中，所述至少两种活性成分的组合物被关节内给药。

在本发明的情况中，包含至少两种活性成分的组合的组合物还包含至少一种赋形剂。所述至少一种赋形剂是例如缓冲剂，表面活性剂，盐，抗氧化剂，等渗剂，填充剂，稳定剂或其任何组合。

本文还提供一种试剂盒，其包含FGF-18化合物以及用于与至少一种其他活性成分组合同时或顺序使用(以任何顺序)的说明书，其中所述至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。FGF-18化合物和至少一种其他活性成分可以各自是分开的药物制剂的一部分。在这种情况下，每种药物制剂可以进一步包含至少一种药学上可接受的运载体、赋形剂等。

本文还涵盖一种试剂盒，其包含FGF-18化合物和至少一种另外的活性成分以及使用说明书，其中所述至少一种另外的活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。FGF-18化合物和另外的活性成分可以是相同药物制剂的部分或分开的药物制剂的各部分。所述药物制剂还可以包含至少一种药学上可接受的运载体、赋形剂等。

本发明的FGF-18化合物整体优选自：a)包含含有SEQ ID NO：1的残基28-207的人FGF-18成熟形式或由其组成的多肽，或b)包含FGF-18(170AA)(SEQ ID NO.2)或由其组成的多肽。具体地，该化合物选自人野生型成熟FGF-18或trFGF-18。所述化合物增加软骨沉积并允许软骨修复。FGF-18化合物优选以每次给药3-600微克(μg或mcg)，优选3-300微克，或优选10-200微克，或更优选30-150微克，或甚至更优选30-120微克的剂量关节内给药。在一个优选的实施方案中，所述治疗包括以每单次关节内给药约3、10、20、30、40、50、60、90、100、120、150、180、200、240或300μg的剂量给予FGF-18化合物。每单次关节内给予FGF-18化合物的优选剂量包括10、20、30、60、90、120、180、240或300μg。应该理解的是，如果要治疗的患者是人或非人类哺乳动物，则待给予的FGF-18化合物的剂量将是不同的。例如，对于狗，剂量优选比人类低5倍。例如，如果每单次关节内给药的人剂量在30-120μg的范围内，那么狗的剂量可以在每单次关节内给药5-20μg的范围内。

在本发明的整体情况中，IL-6抑制剂优选是针对IL-6的抗体(或者称为抗IL-6抗体)或靶向IL-6的纳米抗体(或者称为抗IL-6纳米抗体)。这些抑制剂的示例见于定义部分。所述IL-6抑制剂可以以每单次给药0.001-1000毫克(mg)，优选0.1-500mg或更优选0.2-250mg的剂量给予。在一个优选的实施方案中，治疗包括以每单次给予约0.01、0.02、0.03、0.1、0.2、0.3、0.5、1、1.5、2、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或300mg的剂量给予IL-6抑制剂。或者，可以使用给定药物的已知给药方案。应该理解，如果待治疗的患者是人类或非人类哺乳动物，则IL-6抑制剂的剂量将不同。例如，对于狗，剂量优选比人类低6倍。例如，如果IL-6抑制剂的人剂量是每单次给药2mg，那么狗的剂量可以是每单次给药约0.35mg。医生会根据患者的情况逐一调整IL-6抑制剂的给药方案。

在本发明的整体情况中，IL-6受体抑制剂优选是针对IL-6受体的抗体(或者称为抗IL-6R抗体)或靶向IL-6受体的纳米抗体(或者称为抗IL-6R纳米抗体)。这些抑制剂的示例见于定义部分。所述IL-6受体抑制剂可以以每单次给药0.001-500毫克(mg)，优选0.1-250mg或更优选0.5-200mg的剂量给予。在一个优选的实施方案中，治疗包括以每单次给予约0.01、0.03、0.1、0.25、0.3、0.5、1、1.5、2、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或300mg的剂量给予IL-6R抑制剂。或者，可以使用给定药物的已知给药方案。例如，托珠单抗被批准在类风湿性关节炎的治疗中以每千克4mg的剂量静脉内给药，或以162mg的剂量皮下给药。应该理解，如果待治疗的患者是人类或非人类哺乳动物，则IL-6R抑制剂的剂量将不同。例如，对于狗，剂量优选比人类低6倍。例如，如果IL-6R抑制剂的人剂量是每单次给药150mg，那么狗的剂量可以是每单次给药25mg。医生会根据患者的情况逐一调整IL-6R抑制剂的给药方案。

在本发明的整体情况中，NGF抑制剂优选是针对NGF的抗体(还称为抗NGF抗体)或靶向NGF的纳米抗体(还称为抗NGF纳米抗体)。这些抑制剂的示例见于定义部分。所述NGF抑制剂可以以每单次给药0.01-250毫克(mg)，优选0.1-100mg或更优选0.5-75mg的剂量给予。在一个优选的实施方案中，治疗包括以每单次给予约0.03、0.1、0.25、0.3、0.5、1、1.5、2、3、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100或150mg的剂量给予NGF抑制剂。或者，可以使用给定药物的已知给药方案。应该理解，如果待治疗的患者是人类或非人类哺乳动物，则NGF抑制剂的剂量将不同。例如，对于狗，剂量优选比人类低6倍。例如，如果NGF抑制剂的人剂量是每单次给药10mg，那么狗的剂量可以是每单次给药约1.5mg。医生会根据患者的情况逐一调整NGF抑制剂的给药方案。

在本发明的整体情况中，肉毒杆菌毒素化合物，优选A型肉毒杆菌毒素(参见定义部分)可以以每单次给药0.1-1000单位(U)、优选0.2-500U或更优选0.5-300U的剂量给予。在一个优选的实施方式中，所述治疗包括以每单次给药约0.3、0.5、1、5、10、15、20、30、50、100、125、150、175、200、250或300U的剂量给予肉毒杆菌毒素化合物。或者，可以使用给定药物的已知给药方案。应该理解，如果待治疗的患者是人类或非人类哺乳动物，则肉毒毒素化合物的剂量将不同。例如，对于狗，剂量优选比人类低6倍。举例来说，如果肉毒毒素化合物的人剂量为每单次给药100U，则狗的剂量可以是每单次关节内给药约15U。医生会根据患者的情况逐一调整肉毒毒素化合物的给药方案。

在本发明的整体情况中，FGF-18化合物和至少一种其他活性成分是药物制剂的部分。FGF-18化合物和/或至少一种另外的活性成分可以配制成药物组合物，即与至少一种药学上可接受的运载体、赋形剂等一起配制。“药学上可接受”的定义意在涵盖任何运载体、赋形剂等，其不干扰活性成分的生物学活性的有效性并且对给予的患者无毒。所述至少一种赋形剂例如选自缓冲剂，表面活性剂，盐，抗氧化剂，等渗剂，填充剂，稳定剂或其任何组合。例如，对于胃肠道外给药，活性蛋白质可配制为用于在载剂中注射的单位剂型，载剂例如盐水、右旋糖溶液、血清白蛋白和林格氏溶液。用于关节内施用的制剂将符合大部分要求，其也适用于其他注射制剂，即它们需要是无菌的并且与施用部位(例如膝关节，滑液)处的生理条件相容。用于关节内注射的赋形剂也可以存在于其他注射制剂中，例如用于静脉内或皮下施用。FGF-18化合物和/或至少一种其他活性成分(包括至少一种其他药学上可接受的运载体，赋形剂等)的这种制剂也可用于本发明的上下文中。

在本发明的整体情况中，FGF-18化合物与至少一种另外的活性成分组合将可用于治疗软骨疾病，例如骨关节炎或软骨损伤。具体地，其可用于治疗，例如由表面纤维性颤动(早期骨关节炎)引起的滑膜关节中的关节软骨缺损，由骨关节炎引起的软骨退化，以及由于损伤或疾病引起的软骨或骨软骨缺损。与至少一种其他活性成分组合的FGF-18化合物也可用于治疗由剥脱性骨软骨炎和退行性关节病引起的关节疾病。在重建和整形手术领域中，与至少一种另外的活性成分组合的FGF-18化合物可用于自体或同种异体软骨扩张和转移以重建广泛的组织缺陷。可以使用FGF-18组合物连同关节的灌洗、骨髓刺激、磨损关节成形术、软骨下钻孔或软骨下骨的微骨折来修复软骨损伤。

在一个优选的实施方式中，待根据本发明治疗的软骨疾病是骨关节炎，例如膝骨关节炎或髋关节骨关节炎。待治疗的骨关节炎可以是例如但不限于原发性骨关节炎或继发性骨关节炎，以及根据OARSI分类系统分类为第1级至第4级或第1级至第6级的骨关节炎。

在另一个优选的实施方式中，根据本发明待治疗的软骨疾病是在有和没有手术介入如微骨折的情况下的软骨损伤。另外，在由于将FGF-18化合物与至少一种其他活性成分组合给予而引起的软骨生长之后，可能需要手术治疗以适当地塑造新形成的软骨表面。

在一个优选的实施方式中，治疗包括单独或与至少一种另外的活性成分一起的FGF-18化合物的滑膜外给药，滑膜内给药，关节外给药或关节内给药。FGF-18化合物可单独或与至少一种另外的活性成分一起施用，所述施用通过直接注射到关节的滑液中或直接注入缺陷中，所述注射为单独注射或与合适的运载体复合注射以延长释放蛋白质(如缓释制剂)或限制性局部释放。如果至少一种另外的活性成分不是按照与FGF-18化合物相同的给药方式给药，则其可以静脉内或皮下给药。关节内给药在关节中进行，所述关节选自髋部、膝盖、肘部、腕部、踝部、脊柱、足部、手指、脚趾、手、肩部、肋骨、肩胛骨、大腿、胫部、脚踝和沿脊柱骨节处的关节。在另一个优选的实施方式中，关节内给药在髋部或膝盖的关节中进行。

为了治疗软骨疾病，可以将FGF-18化合物与至少一种其他活性成分组合给药持续至少一个治疗周期。作为示例，治疗周期可以由将与每周一次的至少一种其他活性成分组合的FGF-18化合物的三次注射组成。这样的治疗周期可以重复。例如，第二个治疗周期可以在前一个周期的最后一次注射后的3,4,5或6个月进行。或者，也可以在第一个周期的第一次注射后1年或2年进行第二个周期。

附图描述：

图1：用CNTO328或PMP6B6，并用斯普弗明(方形)或不用斯普弗明(圆形)培养48小时的BaF3/FGFR3细胞。CTR+是用仅斯普弗明培养的细胞获得的O.D.，CTR-是不用斯普弗明培养的细胞获得的O.D.。将用CNTO328或PMP6B6和斯普弗明培养的细胞与CTR+进行比较，而将不用斯普弗明培养的细胞与CTR-进行比较。符号代表平均值+/-SEM。“*”表示“差异”，p<0.05

图2：在存在斯普弗明(方形)或不存在斯普弗明(圆形)的情况下，在CNTO328或PMP6B6存在的情况下培养七天的人软骨细胞。评估细胞密度和GAG产量。符号代表平均值+/-SEM。“*”表示与相同CNTO328或PMP6B6浓度但不含FGF-18相比的“差异”，p<0.05。“#”表示与不含CNTO328或PMP6B6(0ng/mL)的对照相比的“差异”，p<0.05。

图3：在存在斯普弗明(方形)或不存在斯普弗明(圆形)的情况下，在CNTO328或PMP6B6存在的情况下培养七天的人软骨细胞。评估I型、II型胶原蛋白、Sox9的表达。符号代表平均值+/-SEM。-.“*”表示与相同CNTO328或PMP6B6浓度但不含FGF-18的差异，p<0.05。“#”表示与不含CNTO328或PMP6B6(0ng/mL)的对照相比的差异，p<0.05。

图4：用Actemra，并用斯普弗明(方形)或不用斯普弗明(圆形)培养48小时的BaF3/FGFR3细胞。CTR+是仅用100ng/mL斯普弗明培养的细胞获得的O.D.，CTR-是不用斯普弗明培养的细胞获得的O.D.。将用Actemra和斯普弗明培养的细胞与CTR+进行比较，而将不用斯普弗明培养的细胞与CTR-进行比较。符号代表平均值+/-SEM。“*”表示差异，p<0.05

图5：在存在斯普弗明(方形)或不存在斯普弗明(圆形)的情况下，在Actemra存在的情况下培养七天的人软骨细胞。评估细胞密度和GAG产量。符号代表平均值+/-SEM。“*”表示与相同Actemra浓度但不含FGF-18相比的差异，p<0.05。“#”表示与不含Actemra(0ng/mL)的对照相比的“差异”，p<0.05。

图6：在存在斯普弗明(方形)或不存在斯普弗明(圆形)的情况下，在Actemra存在的情况下培养七天的人软骨细胞。评估I型、II型I型胶原蛋白、Sox9的表达。符号代表平均值+/-SEM。-.“*”表示与相同Actemra浓度但不含FGF-18相比的差异，p<0.05。“#”表示与不含Actemra(0ng/mL)的对照相比的“差异”，p<0.05。

图7：用他尼珠单抗，并用斯普弗明(方形)或不用斯普弗明(圆形)培养48小时的BaF3/FGFR3细胞。CTR+是仅用100ng/mL斯普弗明培养的细胞获得的O.D.。用他尼珠单抗和斯普弗明培养的细胞与CTR+比较。符号代表平均值+/-SEM。“*”表示差异，p<0.05

图8：用并用斯普弗明(方形)或不用斯普弗明(圆形)培养48小时的BaF3/FGFR3细胞。CTR+是用仅斯普弗明培养的细胞获得的O.D.，CTR-是不用任何化合物培养的细胞获得的O.D.。将用和斯普弗明培养的细胞与CTR+进行比较，而将不用斯普弗明培养的细胞与CTR-进行比较。“*”表示差异，p<0.01。

图9：在存在斯普弗明(正方形)或不存在斯普弗明(圆形)的情况下，在存在的情况下培养七天的牛软骨细胞。评估细胞密度和GAG产量。将用培养的细胞与其各自的对照(0mU/mL Xeomin，有或无斯普弗明)进行比较。符号代表平均值+/-SEM。“*”表示差异，p<0.01。

图10：在存在斯普弗明(正方形)或不存在斯普弗明(圆形)的情况下，在存在的情况下培养七天的牛软骨细胞。评估I型、II型胶原蛋白、Sox9和蛋白聚糖聚合物的表达。将用培养的细胞与其各自的对照(0mU/mL Xeomin，有或无斯普弗明)进行比较。符号代表平均值+/-SEM。“*”表示差异，p<0.01。

序列说明：

SEQ ID NO.1:原始人FGF-18的氨基酸序列。

SEQ ID NO.2:重组截短的FGF-18(trFGF-18)的氨基酸序列。

SEQ ID NO.3:A型肉毒杆菌神经毒素的氨基酸序列

SEQ ID NO.4:CNTO328(希妥昔单抗)的重链的氨基酸序列

SEQ ID NO.5:CNTO328(希妥昔单抗)的轻链的氨基酸序列

SEQ ID NO.6:PMP6B6的氨基酸序列

SEQ ID NO.7:托珠单抗的重链的氨基酸序列

SEQ ID NO.8:托珠单抗的轻链的氨基酸序列

SEQ ID NO.9:他尼珠单抗的重链的氨基酸序列

SEQ ID NO.10:他尼珠单抗的轻链的氨基酸序列

SEQ ID NO.11:法斯单抗的重链的氨基酸序列

SEQ ID NO.12:法斯单抗的轻链的氨基酸序列

SEQ ID NO.13:弗兰单抗的重链的氨基酸序列

SEQ ID NO.14:弗兰单抗的轻链的氨基酸序列

实施例

材料

FGF-18化合物：根据申请WO2006063362中描述的技术，通过在大肠杆菌中表达来制备实施例的重组截短的FGF-18(trFGF-18)。在下述实施例中，trFGF-18和FGF-18可互换使用。将其配制在7mM Na₂HPO₄,1mM KH₂PO₄,2.7mM KCl中，pH 7.3。

肉毒杆菌毒素化合物：实施例的A型肉毒杆菌神经毒素是(Merz公司，德国法兰克福)。它被配制在4,7mg/mL蔗糖，1mg/mLHAS中。

IL-6抑制剂：实施例的IL-6抑制剂是：

-CNTO328(希妥昔单抗)是抗IL-6抗体。它在PBS中配制。

-PMP6B6是靶向IL-6的纳米抗体。它在BMM2中配制。

IL-6受体抑制剂：实施例的IL-6受体抑制剂是托珠单抗

NGF抑制剂：实施例的NGF抑制剂是他尼珠单抗。

实施例1-FGF-18和IL-6抑制剂的组合

方法：

BaF3/FGFR3c生物测定法：在试验开始前一天，将1x10⁷个细胞于75cm²烧瓶中的20mL试验培养基中接种24小时，37℃，5％CO₂，用于IL-3饥饿步骤。在试验当天，将20000个细胞/孔接种在96孔板中50μL试验培养基中，所述培养基含有0.1、1、10、100、1000和10000ng/mL的CNTO328或0.001、0.01、0.1、1、10和100ng/mL的PMP6B6，并且包含或不包含100ng/mL斯普弗明。作为对照，还用单独的斯普弗明100ng/mL(阳性对照，图上的CTR+)，BMM2 1/2200或没有任何化合物(均是阴性对照，图上的CTR-)培养细胞。所有条件均以N＝6实现。细胞在37℃，5％CO₂下培养2天，用WST-1试剂(罗氏公司)测定代谢活性。

原代人软骨细胞培养：细胞分离后，将人软骨细胞以14-18百万个细胞接种在75cm²烧瓶中中，并在完全HAM's F12中培养7-12天。然后用accutase酶收获细胞并计数，然后以200000个细胞/孔接种于24孔板中的补充有不同浓度CNTO328(1，10，100，1000ng/mL)或PMP6B6(0.1，1，10和100ng/mL)的1mL完全HAM's F12中，存在或不存在100ng/mL斯普弗明。作为对照，还用单独的斯普弗明100ng/mL(阳性对照)和BMM2 1/2200或没有任何化合物(两种阴性对照)培养细胞。在PMP6B6和CNTO328浓度为0ng/mL值处显示阴性对照的结果。所有条件均以N＝3实现。细胞在37℃，5％CO₂下培养7天，3天后进行培养基完全更换。在培养结束时，用accutase酶(西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))分离细胞，用Vicell评估细胞浓度。(贝克曼库仑特公司(Beckman-Coulter))。

使用二甲基亚甲基蓝(DMMB)试验来定量在培养七天后收获的培养基中的葡糖胺聚糖(GAG)。将50μL样品与200μL DMMB试剂(乙醇、甲酸和甲酸氮中的16mg/mL DMMB)在96孔板中混合。读取525nm处的吸光度并与硫酸软骨素C标准品(西格玛-奥德里奇公司)的吸光度比较。将GAG浓度(μg/mL)除以细胞浓度(百万细胞/mL)以使GAG产量标准化至(μg/百万细胞)

通过定量PCR分析基因表达。首先用RNeasy微试剂盒(凯杰公司(Qiagen))分离RNA，用Superscript III第一链合成SuperMix(西格玛-奥德里奇公司)合成cDNA。然后用RNA酶H消化cDNA以消化RNA，并在热循环仪Mx3000P(安捷伦科技公司(AgilentTechnologies))中在200nM的反向和正向引物存在下用SYBRGreen Jumpstart Taq ReadyMix通过qPCR进行分析。

结果：

BaF/FGFR3细胞试验(图1)：在没有施用斯普弗明时，CNTO328或PMP6B6浓度的增加不影响细胞增殖并且O.D.保持低位。如所预期的，在斯普弗明存在下，BaF3/FGFR3细胞增殖增加，导致光密度(O.D.)从约0.12(CTR-)增加至约0.5(CTR+)。在斯普弗明的存在下，CNTO328和PMP6B6没有显示出任何明显的趋势。观察到O.D.的一些波动，但是它停留在单独使用斯普弗明所观察到的O.D.的范围内。因此，可以得出结论，CNTO328和PMP6B6均不利于斯普弗明对BaF3/FGFR3细胞的作用。

人软骨细胞-增殖和GAG生产(图2)：斯普弗明增加软骨细胞增殖，在培养结束时产生更高的细胞浓度(无斯普弗明时约70万细胞/孔，有斯普弗明时约90万细胞/孔)。在CNTO328和PMP6B6的存在下这种作用得以维持。类似地，在没有斯普弗明的情况下，均没有观察到抗IL-6对增殖的影响。当在斯普弗明的连续存在下培养细胞时，GAG产量略微降低。无论是否存在斯普弗明，都发现CNTO328对GAG生产没有作用。相反，发现PMP6B6在存在和不存在斯普弗明的情况下均剂量依赖性地增加GAG生产。

人软骨细胞-基因表达(图3)：在单层培养的人OA软骨细胞中，斯普弗明下调I型胶原蛋白表达(从0.12至0.025)同时增加Sox9表达(从0.00060至0.0018)并且对II型胶原蛋白表达没有影响。

发现CNTO328和PMP6B6均以剂量依赖性方式增加II型胶原蛋白的表达。使用CNTO328 1 000ng/mL，无斯普弗明时II型胶原蛋白表达增加了2.5倍，而有斯普弗明时令人惊讶地增加了2.9倍。在PMP6B6 100ng/mL存在下，在不存在或存在斯普弗明时II型胶原蛋白表达分别增加1.6倍和惊人地增加了2.6倍。

类似地，CNTO328和PMP6B6增加Sox9的表达，但仅在斯普弗明存在下。在CNTO328(100-1000ng/mL)或PMP6B6(10-100ng/mL)的存在下用斯普弗明培养的软骨细胞中的表达令人惊讶地增加了3.85倍和2.5倍。

与仅斯普弗明相比，在斯普弗明的存在下，由CNTO328和PMP6B6大都没有改变I型胶原蛋白的表达。然而，在没有斯普弗明并且用浓度增加的CNTO328和PMP6B6时，I型胶原蛋白表达降低。

结论：

结论是，抗IL-6抗体或其片段如CNTO328和PMP6B6不干扰FGF-18。IL-6的抑制剂还显示出对人OA软骨细胞的清楚的、剂量依赖性的合成代谢作用，特别是当与FGF-18结合时。令人惊讶的是，FGF-18与IL-6抑制剂的组合对Sox9表达具有协同作用，Sox9表达已知是软骨形成所需的和软骨细胞特异性基因表达所需的。这种令人惊讶的作用可能是由于抗-IL-6化合物引起的炎症环境的减少，从而增强了FGF-18对Sox9表达的作用。总之，IL-6抑制剂能够增加FGF-18的合成代谢作用。

实施例2-FGF-18和IL-6受体抑制剂的组合

方法：

BaF3/FGFR3c生物测定法：使用与实施例1中所述相同的方法和条件。在试验当天，将20000个细胞/孔接种在96孔板中50μL试验培养基中，所述培养基含有0.001、0.01、0.1、1、10或100μg/mL的托珠单抗(罗氏公司)，并且包含或不包含100ng/mL斯普弗明。使用(CTR+)或不使用(CTR-)斯普弗明培养的细胞并且在托珠单抗制剂的赋形剂(15mM磷酸钠，0.5mg/mL聚山梨酯80，50mg/mL蔗糖，pH6,5，在培养基中1/200稀释以对应于最高的托珠单抗浓度)存在下实现对照。所有条件均以N＝6实现。细胞在37℃，5％CO₂下培养2天，用WST-1试剂(罗氏公司)测定代谢活性。

原代人软骨细胞培养：使用与实施例1中所述相同的方法和条件。然后用accutase酶收获细胞并计数，然后以200000个细胞/孔接种于24孔板中的补充有不同浓度托珠单抗(罗氏公司)的1mL完全HAM's F12中，存在或不存在100ng/mL斯普弗明。通过用或不用斯普弗明培养的细胞和托珠单抗制剂的赋形剂(见上文)存在下实现对照(0ng/mL托珠单抗)。所有条件均以N＝6实现。

使用与实施例1类似的分析方法(用于GAG定量和基因表达分析)。

结果：

BaF/FGFR3细胞试验(图4)：托珠单抗对细胞增殖没有影响并且不干扰斯普弗明。在没有斯普弗明时，托珠单抗浓度的增加不影响细胞增殖并且O.D.保持低位。在斯普弗明存在下，BaF3/FGFR3细胞增殖增加，导致O.D.从约0.10(CTR-)增加至约0.5(CTR+)。在斯普弗明的存在下，托珠单抗没有显示出任何明显的趋势。观察到O.D.的一些小波动，但是它停留在单独使用斯普弗明所观察到的O.D.的范围内。

人软骨细胞-增殖和GAG生产(图5)：如所预期，斯普弗明增加软骨细胞增殖，在培养结束时产生更高的细胞浓度(无斯普弗明时约70万细胞/孔，有斯普弗明时约90万细胞/孔)。这种作用在托珠单抗存在下维持，而不管浓度如何，在不存在斯普弗明的情况下对增殖均无影响。当在斯普弗明的连续存在下培养细胞时，GAG产量略微降低。发现托珠单抗剂量依赖性地增加人类软骨细胞的GAG生产。在斯普弗明存在或不存在的情况下可以观察到这种作用。

人软骨细胞-基因表达(图6)：如所预期，斯普弗明下调I型胶原蛋白的表达。这种作用不受托珠单抗的影响。有趣的是，在斯普弗明不存在的情况下，托珠单抗仅在10μg/mL或更高的浓度下调I型胶原蛋白表达。还预期斯普弗明增加Sox9的表达。托珠单抗浓度超过1μg/mL时，这种作用下降，尽管没有被抑制。最后，托珠单抗对II型胶原蛋白的作用尚不清楚。然而，在托珠单抗存在下，与单独的斯普弗明(相对丰度从0.0014到0.003)相比，用100μg/mL观察到的II型胶原蛋白的表达显著增加了2.2倍。

结论：

托珠单抗不干扰斯普弗明的生物活性。托珠单抗对斯普弗明的作用没有负面影响，并且在人骨关节炎软骨细胞中显示出一些正面作用：它剂量依赖性地增加GAG生产并降低I型胶原蛋白的表达。此外，其使在斯普弗明存在下培养的软骨细胞中II型胶原蛋白的表达增加了2倍。尽管IL-6R抑制剂对Sox9表达的作用尚不清楚，但总的来说，IL-6抑制剂似乎能增加FGF-18的合成代谢作用。

实施例3-FGF-18和NGF抑制剂的组合

方法：

BaF3/FGFR3c生物测定法：使用与实施例1中所述相同的方法和条件。在试验当天，将20000个细胞/孔接种在96孔板中50μL试验培养基中，所述培养基含有0.01、0.1、1、10、100或1000nM的他尼珠单抗，并且包含或不包含100ng/mL斯普弗明。在没有他尼珠单抗的情况下，用100ng/mL斯普弗明培养的细胞实现阳性对照(CTR+)。所有条件均以N＝6实现。细胞在37℃，5％CO₂下培养2天，用WST-1试剂(罗氏公司)测定代谢活性。

结果(图7)：

他尼珠单抗对细胞增殖没有影响并且不干扰斯普弗明。在没有施用斯普弗明时，他尼珠单抗浓度的增加不影响细胞增殖并且O.D.保持为0。在斯普弗明存在下，BaF3/FGFR3细胞增殖增加，导致O.D.从约0(CTR-)增加至约0.15(CTR+)。在斯普弗明的存在下，托珠单抗没有显示出任何具体的趋势。观察到O.D.的一些小波动，但是它停留在单独使用斯普弗明所观察到的O.D.的范围内。

实施例4-FGF-18和肉毒杆菌毒素化合物的组合

方法：

BaF3/FGFR3c生物测定法：使用与实施例1中所述相同的方法和条件。在试验当天，将20000个细胞/孔接种在96孔板中50μL试验培养基中，所述培养基含有0.01、0.1、1、10或100mU/mL的并且包含或不包含100ng/mL斯普弗明。作为对照，还用单独的100ng/mL斯普弗明(阳性对照)或不用任何化合物(阴性对照)培养细胞。所有条件均以N＝3实现。细胞在37℃，5％CO₂下培养2天，用WST-1试剂(罗氏公司)测定代谢活性。

原代牛软骨细胞培养：使用与实施例1中所述相同的方法和条件。然后用accutase酶收获细胞并计数，然后以15,000个细胞/孔接种于24孔板中的补充有不同浓度的(1,10,100,1 000mU/mL)的1mL完全HAM's F12中，存在或不存在100ng/mL斯普弗明。作为对照，还用单独的100ng/mL斯普弗明(阳性对照)或不用任何化合物(阴性对照)培养细胞。所有条件均以N＝4实现。

结果：

BaF/FGFR3细胞试验(图8)：在没有斯普弗明的情况下，浓度从0.01到10U/mL的增加不影响细胞增殖，但在最高测试浓度(100U/mL)时，代谢活性细胞明显减少。如所预期，在斯普弗明存在下，BaF3/FGFR3细胞增殖增加，导致O.D.从0.011(CTR-)增加至0.194(CTR+)。在斯普弗明的存在下观察到相同的结果。由于在存在或不存在斯普弗明下观察到代谢活性的这种降低，可以得出结论，这是Xeomin的直接作用而不是斯普弗明生物活性的调节。

牛软骨细胞增殖和GAG生产(图9)：如所预期，斯普弗明增加软骨细胞增殖，在培养结束时产生更高的细胞浓度(无斯普弗明时78万细胞/孔，有斯普弗明时104万细胞/孔)。这种作用在1至1000mU/mL的存在下维持。类似地，在没有斯普弗明时，没有观察到对增殖的影响。当连续存在斯普弗明的情况下培养细胞时，GAG生产从9.6降至7.2μg/百万细胞。在存在或不存在斯普弗明时，发现1至1000mU/ml的对GAG生产没有作用。

牛软骨细胞-基因表达(图10)：如所预期，连续存在的斯普弗明下调I型胶原蛋白表达(从0.9到0.05)，同时增加Sox9表达(从7.8×10^-5到5.1×10^-4)和蛋白聚糖聚合物表达(从0.11到0.3)。斯普弗明对II型胶原蛋白的表达也有小的作用，在斯普弗明存在下从0.031降至0.018。在不存在或存在斯普弗明时，1至1000mU/mL的不影响I型、II型胶原蛋白、Sox9和蛋白聚糖聚合物的表达。

结论：

结论是，令人惊讶的是，预期在人类关节中可以发现最大的浓度(约10U/mL)：1)没有观察到对BaF3/FGFR3细胞和原代软骨细胞的负面影响(增殖、表型和基质生产没有受到影响)，和2)没有观察到对斯普弗明作用的干扰。这是意想不到的，因为FGF-18和A型肉毒杆菌毒素都结合相同的受体，即FGFRIII。

参考文献

1.Lotz,2010,《关节炎研究治疗(Arthritis research therapy)》,12:211

2.WO2005080429

3.Boon等2010,PM&R,Vol.2,268-276

4.Singh JA等,2009,Transl Res；153:205-216

5.Sanga等,2013,Pain,154:1910-1919

6.Tiseo等,2014,Pain,155:1245-1252.

7.Ellsworth等,2002,Osteoarthritis and Cartilage,10:308-320

8.Shimoaka等,2002,JBC 277(9):7493-7500

9.WO2008023063

10.WO2004032849

11.Moore等,2005,Osteoarthritis and Cartilage,13:623-631.

12.WO9816644

13.WO2006063362

14.Custers等,2007,Osteoarthritis and Cartilage,15:1241-1248

15.《默克手册(The Merck Manual)》，第17版，1999

16.ICRS公开:http://www.cartilage.org/_files/contentmanagement/ICRS_evaluation.pdf,第13页

序列表

<110> 默克专利有限公司（Merck Patent GmbH）

<120> 包含FGF-18化合物的组合组合物

<130> P 15/135

<150> 15180859.9

<151> 2015-08-13

<160> 14

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 207

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

Met Tyr Ser Ala Pro Ser Ala Cys Thr Cys Leu Cys Leu His Phe Leu

1 5 10 15

Leu Leu Cys Phe Gln Val Gln Val Leu Val Ala Glu Glu Asn Val Asp

20 25 30

Phe Arg Ile His Val Glu Asn Gln Thr Arg Ala Arg Asp Asp Val Ser

35 40 45

Arg Lys Gln Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Tyr Ser Arg Thr Ser Gly Lys

50 55 60

His Ile Gln Val Leu Gly Arg Arg Ile Ser Ala Arg Gly Glu Asp Gly

65 70 75 80

Asp Lys Tyr Ala Gln Leu Leu Val Glu Thr Asp Thr Phe Gly Ser Gln

85 90 95

Val Arg Ile Lys Gly Lys Glu Thr Glu Phe Tyr Leu Cys Met Asn Arg

100 105 110

Lys Gly Lys Leu Val Gly Lys Pro Asp Gly Thr Ser Lys Glu Cys Val

115 120 125

Phe Ile Glu Lys Val Leu Glu Asn Asn Tyr Thr Ala Leu Met Ser Ala

130 135 140

Lys Tyr Ser Gly Trp Tyr Val Gly Phe Thr Lys Lys Gly Arg Pro Arg

145 150 155 160

Lys Gly Pro Lys Thr Arg Glu Asn Gln Gln Asp Val His Phe Met Lys

165 170 175

Arg Tyr Pro Lys Gly Gln Pro Glu Leu Gln Lys Pro Phe Lys Tyr Thr

180 185 190

Thr Val Thr Lys Arg Ser Arg Arg Ile Arg Pro Thr His Pro Ala

195 200 205

<210> 2

<211> 170

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> trFGF-18

<400> 2

Met Glu Glu Asn Val Asp Phe Arg Ile His Val Glu Asn Gln Thr Arg

1 5 10 15

Ala Arg Asp Asp Val Ser Arg Lys Gln Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Tyr

20 25 30

Ser Arg Thr Ser Gly Lys His Ile Gln Val Leu Gly Arg Arg Ile Ser

35 40 45

Ala Arg Gly Glu Asp Gly Asp Lys Tyr Ala Gln Leu Leu Val Glu Thr

50 55 60

Asp Thr Phe Gly Ser Gln Val Arg Ile Lys Gly Lys Glu Thr Glu Phe

65 70 75 80

Tyr Leu Cys Met Asn Arg Lys Gly Lys Leu Val Gly Lys Pro Asp Gly

85 90 95

Thr Ser Lys Glu Cys Val Phe Ile Glu Lys Val Leu Glu Asn Asn Tyr

100 105 110

Thr Ala Leu Met Ser Ala Lys Tyr Ser Gly Trp Tyr Val Gly Phe Thr

115 120 125

Lys Lys Gly Arg Pro Arg Lys Gly Pro Lys Thr Arg Glu Asn Gln Gln

130 135 140

Asp Val His Phe Met Lys Arg Tyr Pro Lys Gly Gln Pro Glu Leu Gln

145 150 155 160

Lys Pro Phe Lys Tyr Thr Thr Val Thr Lys

165 170

<210> 3

<211> 1295

<212> PRT

<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

<400> 3

Pro Phe Val Asn Lys Gln Phe Asn Tyr Lys Asp Pro Val Asn Gly Val

1 5 10 15

Asp Ile Ala Tyr Ile Lys Ile Pro Asn Val Gly Gln Met Gln Pro Val

20 25 30

Lys Ala Phe Lys Ile His Asn Lys Ile Trp Val Ile Pro Glu Arg Asp

35 40 45

Thr Phe Thr Asn Pro Glu Glu Gly Asp Leu Asn Pro Pro Pro Glu Ala

50 55 60

Lys Gln Val Pro Val Ser Tyr Tyr Asp Ser Thr Tyr Leu Ser Thr Asp

65 70 75 80

Asn Glu Lys Asp Asn Tyr Leu Lys Gly Val Thr Lys Leu Phe Glu Arg

85 90 95

Ile Tyr Ser Thr Asp Leu Gly Arg Met Leu Leu Thr Ser Ile Val Arg

100 105 110

Gly Ile Pro Phe Trp Gly Gly Ser Thr Ile Asp Thr Glu Leu Lys Val

115 120 125

Ile Asp Thr Asn Cys Ile Asn Val Ile Gln Pro Asp Gly Ser Tyr Arg

130 135 140

Ser Glu Glu Leu Asn Leu Val Ile Ile Gly Pro Ser Ala Asp Ile Ile

145 150 155 160

Gln Phe Glu Cys Lys Ser Phe Gly His Glu Val Leu Asn Leu Thr Arg

165 170 175

Asn Gly Tyr Gly Ser Thr Gln Tyr Ile Arg Phe Ser Pro Asp Phe Thr

180 185 190

Phe Gly Phe Glu Glu Ser Leu Glu Val Asp Thr Asn Pro Leu Leu Gly

195 200 205

Ala Gly Lys Phe Ala Thr Asp Pro Ala Val Thr Leu Ala His Glu Leu

210 215 220

Ile His Ala Gly His Arg Leu Tyr Gly Ile Ala Ile Asn Pro Asn Arg

225 230 235 240

Val Phe Lys Val Asn Thr Asn Ala Tyr Tyr Glu Met Ser Gly Leu Glu

245 250 255

Val Ser Phe Glu Glu Leu Arg Thr Phe Gly Gly His Asp Ala Lys Phe

260 265 270

Ile Asp Ser Leu Gln Glu Asn Glu Phe Arg Leu Tyr Tyr Tyr Asn Lys

275 280 285

Phe Lys Asp Ile Ala Ser Thr Leu Asn Lys Ala Lys Ser Ile Val Gly

290 295 300

Thr Thr Ala Ser Leu Gln Tyr Met Lys Asn Val Phe Lys Glu Lys Tyr

305 310 315 320

Leu Leu Ser Glu Asp Thr Ser Gly Lys Phe Ser Val Asp Lys Leu Lys

325 330 335

Phe Asp Lys Leu Tyr Lys Met Leu Thr Glu Ile Tyr Thr Glu Asp Asn

340 345 350

Phe Val Lys Phe Phe Lys Val Leu Asn Arg Lys Thr Tyr Leu Asn Phe

355 360 365

Asp Lys Ala Val Phe Lys Ile Asn Ile Val Pro Lys Val Asn Tyr Thr

370 375 380

Ile Tyr Asp Gly Phe Asn Leu Arg Asn Thr Asn Leu Ala Ala Asn Phe

385 390 395 400

Asn Gly Gln Asn Thr Glu Ile Asn Asn Met Asn Phe Thr Lys Leu Lys

405 410 415

Asn Phe Thr Gly Leu Phe Glu Phe Tyr Lys Leu Leu Cys Val Arg Gly

420 425 430

Ile Ile Thr Ser Lys Thr Lys Ser Leu Asp Lys Gly Tyr Asn Lys Ala

435 440 445

Leu Asn Asp Leu Cys Ile Lys Val Asn Asn Trp Asp Leu Phe Phe Ser

450 455 460

Pro Ser Glu Asp Asn Phe Thr Asn Asp Leu Asn Lys Gly Glu Glu Ile

465 470 475 480

Thr Ser Asp Thr Asn Ile Glu Ala Ala Glu Glu Asn Ile Ser Leu Asp

485 490 495

Leu Ile Gln Gln Tyr Tyr Leu Thr Phe Asn Phe Asp Asn Glu Pro Glu

500 505 510

Asn Ile Ser Ile Glu Asn Leu Ser Ser Asp Ile Ile Gly Gln Leu Glu

515 520 525

Leu Met Pro Asn Ile Glu Arg Phe Pro Asn Gly Lys Lys Tyr Glu Leu

530 535 540

Asp Lys Tyr Thr Met Phe His Tyr Leu Arg Ala Gln Glu Phe Glu His

545 550 555 560

Gly Lys Ser Arg Ile Ala Leu Thr Asn Ser Val Asn Glu Ala Leu Leu

565 570 575

Asn Pro Ser Arg Val Tyr Thr Phe Phe Ser Ser Asp Tyr Val Lys Lys

580 585 590

Val Asn Lys Ala Thr Glu Ala Ala Met Phe Leu Gly Trp Val Glu Gln

595 600 605

Leu Val Tyr Asp Phe Thr Asp Glu Thr Ser Glu Val Ser Thr Thr Asp

610 615 620

Lys Ile Ala Asp Ile Thr Ile Ile Ile Pro Tyr Ile Gly Pro Ala Leu

625 630 635 640

Asn Ile Gly Asn Met Leu Tyr Lys Asp Asp Phe Val Gly Ala Leu Ile

645 650 655

Phe Ser Gly Ala Val Ile Leu Leu Glu Phe Ile Pro Glu Ile Ala Ile

660 665 670

Pro Val Leu Gly Thr Phe Ala Leu Val Ser Tyr Ile Ala Asn Lys Val

675 680 685

Leu Thr Val Gln Thr Ile Asp Asn Ala Leu Ser Lys Arg Asn Glu Lys

690 695 700

Trp Asp Glu Val Tyr Lys Tyr Ile Val Thr Asn Trp Leu Ala Lys Val

705 710 715 720

Asn Thr Gln Ile Asp Leu Ile Arg Lys Lys Met Lys Glu Ala Leu Glu

725 730 735

Asn Gln Ala Glu Ala Thr Lys Ala Ile Ile Asn Tyr Gln Tyr Asn Gln

740 745 750

Tyr Thr Glu Glu Glu Lys Asn Asn Ile Asn Phe Asn Ile Asp Asp Leu

755 760 765

Ser Ser Lys Leu Asn Glu Ser Ile Asn Lys Ala Met Ile Asn Ile Asn

770 775 780

Lys Phe Leu Asn Gln Cys Ser Val Ser Tyr Leu Met Asn Ser Met Ile

785 790 795 800

Pro Tyr Gly Val Lys Arg Leu Glu Asp Phe Asp Ala Ser Leu Lys Asp

805 810 815

Ala Leu Leu Lys Tyr Ile Tyr Asp Asn Arg Gly Thr Leu Ile Gly Gln

820 825 830

Val Asp Arg Leu Lys Asp Lys Val Asn Asn Thr Leu Ser Thr Asp Ile

835 840 845

Pro Phe Gln Leu Ser Lys Tyr Val Asp Asn Gln Arg Leu Leu Ser Thr

850 855 860

Phe Thr Glu Tyr Ile Lys Asn Ile Ile Asn Thr Ser Ile Leu Asn Leu

865 870 875 880

Arg Tyr Glu Ser Asn His Leu Ile Asp Leu Ser Arg Tyr Ala Ser Lys

885 890 895

Ile Asn Ile Gly Ser Lys Val Asn Phe Asp Pro Ile Asp Lys Asn Gln

900 905 910

Ile Gln Leu Phe Asn Leu Glu Ser Ser Lys Ile Glu Val Ile Leu Lys

915 920 925

Asn Ala Ile Val Tyr Asn Ser Met Tyr Glu Asn Phe Ser Thr Ser Phe

930 935 940

Trp Ile Arg Ile Pro Lys Tyr Phe Asn Ser Ile Ser Leu Asn Asn Glu

945 950 955 960

Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met Glu Asn Asn Ser Gly Trp Lys Val Ser

965 970 975

Leu Asn Tyr Gly Glu Ile Ile Trp Thr Leu Gln Asp Thr Gln Glu Ile

980 985 990

Lys Gln Arg Val Val Phe Lys Tyr Ser Gln Met Ile Asn Ile Ser Asp

995 1000 1005

Tyr Ile Asn Arg Trp Ile Phe Val Thr Ile Thr Asn Asn Arg Leu

1010 1015 1020

Asn Asn Ser Lys Ile Tyr Ile Asn Gly Arg Leu Ile Asp Gln Lys

1025 1030 1035

Pro Ile Ser Asn Leu Gly Asn Ile His Ala Ser Asn Asn Ile Met

1040 1045 1050

Phe Lys Leu Asp Gly Cys Arg Asp Thr His Arg Tyr Ile Trp Ile

1055 1060 1065

Lys Tyr Phe Asn Leu Phe Asp Lys Glu Leu Asn Glu Lys Glu Ile

1070 1075 1080

Lys Asp Leu Tyr Asp Asn Gln Ser Asn Ser Gly Ile Leu Lys Asp

1085 1090 1095

Phe Trp Gly Asp Tyr Leu Gln Tyr Asp Lys Pro Tyr Tyr Met Leu

1100 1105 1110

Asn Leu Tyr Asp Pro Asn Lys Tyr Val Asp Val Asn Asn Val Gly

1115 1120 1125

Ile Arg Gly Tyr Met Tyr Leu Lys Gly Pro Arg Gly Ser Val Met

1130 1135 1140

Thr Thr Asn Ile Tyr Leu Asn Ser Ser Leu Tyr Arg Gly Thr Lys

1145 1150 1155

Phe Ile Ile Lys Lys Tyr Ala Ser Gly Asn Lys Asp Asn Ile Val

1160 1165 1170

Arg Asn Asn Asp Arg Val Tyr Ile Asn Val Val Val Lys Asn Lys

1175 1180 1185

Glu Tyr Arg Leu Ala Thr Asn Ala Ser Gln Ala Gly Val Glu Lys

1190 1195 1200

Ile Leu Ser Ala Leu Glu Ile Pro Asp Val Gly Asn Leu Ser Gln

1205 1210 1215

Val Val Val Met Lys Ser Lys Asn Asp Gln Gly Ile Thr Asn Lys

1220 1225 1230

Cys Lys Met Asn Leu Gln Asp Asn Asn Gly Asn Asp Ile Gly Phe

1235 1240 1245

Ile Gly Phe His Gln Phe Asn Asn Ile Ala Lys Leu Val Ala Ser

1250 1255 1260

Asn Trp Tyr Asn Arg Gln Ile Glu Arg Ser Ser Arg Thr Leu Gly

1265 1270 1275

Cys Ser Trp Glu Phe Ile Pro Val Asp Asp Gly Trp Gly Glu Arg

1280 1285 1290

Pro Leu

1295

<210> 4

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CNTO328的重链

<400> 4

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Lys Leu Leu Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ser Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Glu Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val

50 55 60

Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Leu Trp Gly Tyr Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 5

<211> 212

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CNTO328的轻链

<400> 5

Ile Val Leu Ile Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu

1 5 10 15

Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr

20 25 30

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp

35 40 45

Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp

65 70 75 80

Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Gly Tyr Pro Tyr Thr Phe

85 90 95

Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser

100 105 110

Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala

115 120 125

Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val

130 135 140

Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser

145 150 155 160

Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr

165 170 175

Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys

180 185 190

Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn

195 200 205

Arg Gly Glu Cys

210

<210> 6

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> PMP6B6

<400> 6

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Ala Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Ile Phe Ser Ile Asn

20 25 30

Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Arg Glu Leu Val

35 40 45

Ala Asp Ile Met Pro Tyr Gly Ser Thr Glu Tyr Ala Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His

85 90 95

Ser Tyr Asp Pro Arg Gly Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 7

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 托珠单抗的重链

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa可为任何天然产生的氨基酸

<400> 7

Xaa Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

His Ala Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 8

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 托珠单抗的轻链

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 9

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 他尼珠单抗的重链

<400> 9

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Gly Tyr

20 25 30

Asp Leu Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ile Ile Trp Gly Asp Gly Thr Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys

210 215 220

Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 10

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 他尼珠单抗的轻链

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Glu His Thr Leu Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 11

<211> 446

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 法斯单抗的重链

<400> 11

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Thr Leu Thr Glu Leu

20 25 30

Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Thr Ile Phe Gly Val Val Thr Asn Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125

Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu

130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro

195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro

210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe

225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 12

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 法斯单抗的轻链

<400> 12

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ala Ile Arg Asn Asp

20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Phe Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 13

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 弗兰单抗的重链

<400> 13

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Arg Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Arg Ser Ser His Thr Ile Phe Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Tyr Ser Ser Gly Trp His Val Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Ile Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val

195 200 205

Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys

210 215 220

Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Lys

<210> 14

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 弗兰单抗的轻链

<400> 14

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

Claims

1.FGF-18化合物与至少一种其它活性成分组合的用途，其中所述至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。

2.包含至少两种活性成分的组合的组合物，其中活性成分之一是FGF-18化合物，并且其中至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。

3.如权利要求2所述的组合物，用于治疗软骨疾病。

4.如权利要求2所述的组合物，其中所述组合物将被关节内给药。

5.用于治疗软骨疾病用途的FGF-18化合物，其与至少一种其它活性成分组合，其中所述至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。

6.如权利要求3所述的组合物或如权利要求5所述用途的FGF-18化合物，其中软骨疾病是骨关节炎。

7.如权利要求3所述的组合物或如权利要求5所述用途的FGF-18化合物，其中软骨疾病是软骨损伤。

8.如前述权利要求中任一项所述的用途、组合物或所述用途的FGF-18化合物，其中所述FGF-18化合物选自：

a)多肽，所述多肽包含人FGF-18成熟形式或由其组成，其包含SEQ ID NO：1的残基28-207，或

b)包含SEQ ID NO:2或由其组成的多肽。

9.如前述权利要求中任一项所述的用途、组合物或所述用途的FGF-18化合物，其中所述肉毒杆菌毒素化合物是A型肉毒杆菌毒素。

10.如权利要求1至8中任一项所述的用途、组合物或所述用途的FGF-18化合物，其中所述IL-6抑制剂为抗IL-6抗体或抗IL-6纳米抗体。

11.如权利要求1至8中任一项所述的用途、组合物或所述用途的FGF-18化合物，其中所述IL-6受体抑制剂为抗IL-6受体抗体或抗IL-6受体纳米抗体。

12.如权利要求1至8中任一项所述的用途或组合物或所述用途的FGF-18化合物，其中所述NGF抑制剂为抗NGF抗体或抗NGF纳米抗体。

13.一种试剂盒，其包含FGF-18化合物以及用于与至少一种其他活性成分同时或顺序使用的说明书，其中所述至少一种其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。

14.一种试剂盒，其包含FGF-18化合物和至少一种其他活性成分以及使用说明书，其中所述其他活性成分选自IL-6抑制剂，IL-6受体抑制剂，NGF抑制剂或肉毒杆菌毒素化合物。

15.如前述权利要求中任一项所述的用途、组合物、所述用途的FGF-18化合物或试剂盒，其中所述FGF-18化合物和所述至少一种其他活性成分是药物制剂的部分。

16.如权利要求15所述的用途、组合物、所述用途的FGF-18化合物或试剂盒，其中所述FGF-18化合物和所述至少一种其他活性成分是相同药物制剂的部分或者是分开的药物制剂的各部分。

17.如权利要求15或16中任一项所述的用途、组合物、所述用途的FGF-18化合物或试剂盒，其中所述药物制剂还包含至少一种赋形剂。

18.如权利要求17所述的用途、组合物、所述用途的FGF-18化合物或试剂盒，其中所述至少一种赋形剂选自缓冲剂、表面活性剂、盐、抗氧化剂、等渗剂、填充剂、稳定剂或其任何组合。