CN107904176A - 一种液体培养基的除氧方法 - Google Patents

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李安军
刘国英
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Abstract

本发明提供了一种液体培养基的除氧方法，其步骤是：S1、制备刃天青水溶液作为厌氧指示剂，其在有溶氧状态下呈深蓝色或浅蓝色、微溶氧状态下呈粉红色、无溶氧状态下显无色；S2、将L‑半胱氨酸盐酸盐、生物缓冲剂MES与厌氧指示剂添加到装有1L液体培养基的厌氧瓶中并混匀；S3、向S2的厌氧瓶底部通入50‑100min的氮气，预处理液体培养基中的部分溶解氧，使液体培养基颜色由深蓝色变为浅蓝色或浅粉红色；S4、静置已去除部分溶解氧的液体培养基，通过S2中添加的L‑半胱氨酸盐酸盐消耗厌氧瓶内余下的溶解氧，使液体培养基颜色由浅蓝色或浅粉红色变为无色，完成除氧。本发明能去除液体培养基中的溶解氧，利于对厌氧微生物的富集和培养研究。

Description

一种液体培养基的除氧方法
技术领域
本发明涉及厌氧微生物的培养及发酵试验技术领域，特别是涉及严格厌氧微生物的富集与培养，更具体地说是一种液体培养基的除氧方法。
背景技术
厌氧微生物的氧毒害机制——SOD学说：严格厌氧微生物并不是被气态的氧所杀死，而是由于不能解除某些氧代谢产物的毒性而死亡。在氧还原为水的过程中，可形成某些有毒的中间产物，例如，过氧化氢(H2O2)、超氧阴离子(O2°—)等。超氧阴离子为活性氧，兼有分子和离子的性质，反应力极强，极不稳定，可破坏膜和重要生物大分子，对微生物造成毒害或致死。好氧微生物具有降解这些产物的酶，如过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶等，而严格厌氧菌缺乏SOD，故易被生物体内极易产生的超氧阴离子自由基毒害致死。
人类生活的环境和人体本身都生存有种类众多的厌氧微生物，它们与人类的关系密切。然而由于对厌氧微生物的分离和纯种培养十分困难，研究厌氧微生物的技术和方法进展又相当缓慢，特别是一些小型实验室，致使人类对厌氧微生物的认识和利用远远落后于对好氧和兼性厌氧微生物的研究工作。
因此，有必要提供一种简单快速的液体培养基的除氧方法来解决上述问题。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一。为此，本发明提出一种液体培养基的除氧方法，能去除液体培养基含有的溶解氧，避免由于溶解氧产生的超氧根负离子和过氧化氢对严格厌氧微生物的毒害，有利于对厌氧微生物的富集和培养研究。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种液体培养基的除氧方法，是按如下步骤进行：
S1、制备刃天青水溶液作为厌氧指示剂，所述厌氧指示剂在有溶氧状态下呈深蓝色或浅蓝色、微溶氧状态下呈粉红色、无溶氧状态下显无色；
S2、将L-半胱氨酸盐酸盐、生物缓冲剂MES与S1所得厌氧指示剂添加到装有1L液体培养基的厌氧瓶中并混匀；
S3、向S2的厌氧瓶底部通入50-100min的氮气，预处理液体培养基中的部分溶解氧，使液体培养基颜色由深蓝色变为浅蓝色或浅粉红色；
S4、静置已去除部分溶解氧的液体培养基，通过S2中添加的L-半胱氨酸盐酸盐消耗厌氧瓶内余下的溶解氧，使液体培养基颜色由浅蓝色或浅粉红色变为无色，即完成除氧。
L-半胱氨酸盐酸盐具有抗氧化除氧作用，可消耗步骤S3余下的溶解氧，生物缓冲剂MES(2-吗啉乙磺酸)可维持液体培养基的酸碱平衡。
其中：
步骤S1中：刃天青水溶液中刃天青与双蒸水的质量体积比为1-5g/L。
步骤S2中：L-半胱氨酸盐酸盐与液体培养基的质量体积比的0.5-5g/L、生物缓冲剂MES与液体培养基的质量体积比为0.5-2.5g/L、厌氧指示剂与液体培养基的体积比为0.5-5mL/L。
与已有技术相比，本发明有益效果体现在：
本发明能去除液体培养基含有的溶解氧，并维持液体培养基的酸碱平衡，避免由于液体培养基含有的溶解氧产生的超氧根负离子和过氧化氢对严格厌氧微生物的毒害，有助于实验室对厌氧微生物的富集和培养等相关研究工作的顺利进行。
具体实施方式
下述实施例中，除氧前及除氧后对厌氧瓶中的溶解氧含量可经溶解氧测定仪检测得出，当溶解氧测定仪检测到厌氧瓶中的溶解氧含量趋近于零(小于0.05mg/L)时，表明液体培养基中的溶解氧被消耗完全。
实施例一：
本实施例的液体培养基的除氧方法，是按如下步骤进行：
S1、制备刃天青水溶液作为厌氧指示剂，所述厌氧指示剂在有氧状态下呈深蓝色、微氧状态下呈粉红色、无氧状态下显无色；刃天青水溶液中刃天青与双蒸水的质量体积比为1.00g/L；
S2、将L-半胱氨酸盐酸盐、生物缓冲剂MES与S1所得厌氧指示剂添加到装有1L液体培养基的厌氧瓶中并混匀；其中，L-半胱氨酸盐酸盐与液体培养基的质量体积比的0.50g/L、生物缓冲剂MES与液体培养基的质量体积比为0.50g/L、厌氧指示剂与液体培养基的体积比为0.50mL/L；
S3、向S2的厌氧瓶底部通入50min的氮气，预处理液体培养基中的部分溶解氧，使液体培养基颜色由深蓝色变为浅蓝色或浅粉红色；
S4、静置已去除部分溶解氧的液体培养基，通过S2中添加的L-半胱氨酸盐酸盐消耗厌氧瓶内余下的溶解氧，使液体培养基颜色由浅蓝色或浅粉红色变为无色，即完成除氧。
步骤S4中，为节约时间，也可在对去除部分溶解氧的液体培养基灭菌的过程中通过S2中添加的L-半胱氨酸盐酸盐消耗厌氧瓶内余下的溶解氧。
实施例二：
本实施例的液体培养基的除氧方法，是按如下步骤进行：
S1、制备刃天青水溶液作为厌氧指示剂，所述厌氧指示剂在有氧状态下呈深蓝色、微氧状态下呈粉红色、无氧状态下显无色；刃天青水溶液中刃天青与双蒸水的质量体积比为1.50g/L；
S2、将L-半胱氨酸盐酸盐、生物缓冲剂MES与S1所得厌氧指示剂添加到装有1L液体培养基的厌氧瓶中并混匀；其中，L-半胱氨酸盐酸盐与液体培养基的质量体积比的1.00g/L、生物缓冲剂MES与液体培养基的质量体积比为1.00g/L、厌氧指示剂与液体培养基的体积比为1.00mL/L；
S3、向S2的厌氧瓶底部通入60min的氮气，预处理液体培养基中的部分溶解氧，使液体培养基颜色由深蓝色变为浅蓝色或浅粉红色；
S4、静置已去除部分溶解氧的液体培养基，通过S2中添加的L-半胱氨酸盐酸盐消耗厌氧瓶内余下的溶解氧，使液体培养基颜色由浅蓝色或浅粉红色变为无色，即完成除氧。
步骤S4中，为节约时间，也可在对去除部分溶解氧的液体培养基灭菌的过程中通过S2中添加的L-半胱氨酸盐酸盐消耗厌氧瓶内余下的溶解氧。
实施例三：
本实施例的液体培养基的除氧方法，是按如下步骤进行：
S1、制备刃天青水溶液作为厌氧指示剂，所述厌氧指示剂在有氧状态下呈深蓝色、微氧状态下呈粉红色、无氧状态下显无色；刃天青水溶液中刃天青与双蒸水的质量体积比为2.00g/L；
S2、将L-半胱氨酸盐酸盐、生物缓冲剂MES与S1所得厌氧指示剂添加到装有1L液体培养基的厌氧瓶中并混匀；其中，L-半胱氨酸盐酸盐与液体培养基的质量体积比的1.50g/L、生物缓冲剂MES与液体培养基的质量体积比为1.50g/L、厌氧指示剂与液体培养基的体积比为1.50mL/L；
S3、向S2的厌氧瓶底部通入70min的氮气，预处理液体培养基中的部分溶解氧，使液体培养基颜色由深蓝色变为浅蓝色或浅粉红色；
S4、静置已去除部分溶解氧的液体培养基，通过S2中添加的L-半胱氨酸盐酸盐消耗厌氧瓶内余下的溶解氧，使液体培养基颜色由浅蓝色或浅粉红色变为无色，即完成除氧。
步骤S4中，为节约时间，也可在对去除部分溶解氧的液体培养基灭菌的过程中通过S2中添加的L-半胱氨酸盐酸盐消耗厌氧瓶内余下的溶解氧。

Claims (3)

1.一种液体培养基的除氧方法，其特征是按如下步骤进行：
S1、制备刃天青水溶液作为厌氧指示剂，所述厌氧指示剂在有溶氧状态下呈深蓝色或浅蓝色、微溶氧状态下呈粉红色、无溶氧状态下显无色；
S2、将L-半胱氨酸盐酸盐、生物缓冲剂MES与S1所得厌氧指示剂添加到装有1L液体培养基的厌氧瓶中并混匀；
S3、向S2的厌氧瓶底部通入50-100min的氮气，预处理液体培养基中的部分溶解氧，使液体培养基颜色由深蓝色变为浅蓝色或浅粉红色；
S4、静置已去除部分溶解氧的液体培养基，通过S2中添加的L-半胱氨酸盐酸盐消耗厌氧瓶内余下的溶解氧，使液体培养基颜色由浅蓝色或浅粉红色变为无色，即完成除氧。
2.根据权利要求1所述的液体培养基的除氧方法，其特征是步骤S1中：刃天青水溶液中刃天青与双蒸水的质量体积比为1-5g/L。
3.根据权利要求1所述的液体培养基的除氧方法，其特征是步骤S2中：L-半胱氨酸盐酸盐与液体培养基的质量体积比的0.5-5g/L、生物缓冲剂MES与液体培养基的质量体积比为0.5-2.5g/L、厌氧指示剂与液体培养基的体积比为0.5-5mL/L。
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