CN107847452A - 应答选择性C5a激动剂EP67的构象稳定类似物 - Google Patents

Abstract

本申请涉及一种应答选择性C5a激动剂EP67的构象稳定肽类似物，其具有式Tyr‑Ser‑Phe‑Lys‑Asp‑Met‑Xaa‑(Xaa2)‑(D‑Ala)‑Arg(SEQ ID NO：1)，其中Xaa是被修饰的脯氨酸残基或者脯氨酸的残基替换，并且Xaa2是亮氨酸或者N‑甲基亮氨酸。构象稳定的肽选择性地结合并激活APC，而不直接接合/结合参与天然C5a的促炎活性的、具有C5a受体的细胞。本申请还描述了使用该肽类似物的组合物和方法。

Description

应答选择性C5a激动剂EP67的构象稳定类似物

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年3月11日递交的名称为“Modulation of cis/trans PeptideBond Isomerization in Analogs of the Response Selective C5a Agonist EP67(在应答选择性C5a激动剂EP67类似物中顺/反肽键异构化的调节)”、序列号为62/131,393的美国临时专利申请的优先权权益，通过引用将其全部合并到本申请中。

序列表

下述申请包括计算机可读格式(CRF)的序列表，其以名称为“Sequence_Listing_47892-PCT”、格式为ASCII的文本文件(3KB)递交，该文本文件的创建日期为2016年3月11日。CRF的内容通过引用合并到本申请中。

发明背景

发明领域

一种被命名为EP67的C5a应答选择性C端类似物的构象稳定类似物。

相关技术描述

血液补体(C)在宿主抵御外来物质中发挥着重要作用。缺乏某些C成分的个体通常遭受反复性且有时是致命性的感染。C系统的激活造成过敏毒素C3a和C5a的产生。这些片段分别是较大C蛋白C3和C5的具有生物活性的裂解产物。C5a是通过酶裂解C5而产生的短(人类中74个残基)糖蛋白。

C5a被认为是局部和全身性炎性应答的主要介质(mediator)，因为其能够激活并募集(recruit)中性粒细胞，诱导痉挛生成(spasmogenesis)，增加血管通透性，并且刺激来自多种细胞类型(例如，白细胞和巨噬细胞)次级炎性介质的释放。C5a还在先天免疫应答和获得性免疫应答的调节中发挥着作用，这是由于其接合(engage)并激活抗原呈递细胞(APC)直接或间接地诱导诸如白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-12(IL-12)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的细胞因子的合成和释放，并且加强这些APC的抗原加工和抗原呈递的能力。据信，这些炎性活性和免疫调节活性是在C5a配体与其在某些循环和组织细胞类型的表面上表达的受体相互作用时，通过跨膜G蛋白介导的信号传导机制来表达的。

C5a的促炎活性可分为两大类。第一类活性(第1类(class 1))一般与组织胺和其他次级介质(例如，血管收缩剂和血管扩张剂类花生酸(eicosanoids))的释放相关。C5a的这些活性影响许多系统，并与痉挛生成现象和某些细胞聚集活性(例如，血小板聚集)现象相关。第二类活性(第2类(class 2))涉及中性粒细胞的募集和激活，以及这种中性粒细胞累积与激活的后续作用，诸如增加血管通透性、释放细胞因子和其他促炎应答。由于C5a的促炎活性，C5a被暗示为某些炎性疾患(诸如类风湿关节炎、成人呼吸窘迫综合征、牙龈炎和与动脉硬化和心肌梗塞相关的组织损伤)表达中的致病因子。因此，已经进行了相当多的研究工作来开发在这些疾病的治疗中用作抗炎试剂的特异性C5a拮抗剂。然而，与C5a受体激动剂和拮抗剂相关的大多数文献均未对具有C5a受体的巨噬细胞上的C5a受体和具有C5a受体的粒细胞上的C5a受体进行区分。因此，在本领域中几乎没有对选择性地结合/激活其中一类C5a受体而不是另一类的认识。

美国专利No.5,696,230和No.5,942,599描述了人C5a的C端肽类似物的构象表征。美国专利No.6,821,517描述了通过独特的C5aR递送特异性抗原至APC的组合物及方法，该独特的C5aR被表达在这些APC上且与表达在炎性粒细胞上的C5aR不同。共同待决的于2012年11月30日递交的U.S.2012/0314839和于2011年6月29日递交的U.S.2015/0297668证实了这样的优点：选择性结合具有C5a受体的APC但不结合具有C5a受体的中性粒细胞。每个前述专利和待决申请，除了与本公开范围不一致的，都通过引用将其全部合并到本申请中。

发明内容

命名为EP67(Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-(MethylLeu)-D-Ala-Arg(YSFKDMP(MeL)aR，SEQ ID NO：2)的示例性C5aC端类似物已经被证实是一种针对具有C5a受体的APC的有效的选择性激动剂。该合成肽类似物中的关键氨基酸是位置7处的脯氨酸残基，该脯氨酸残基对于在紧接其N端的残基中施加伸展主链构象(extended backbone conformation)是必需的——其已经被证明是对其应答选择性生物活性有重要意义的至少一个结构要求。然而，该同一Pro残基经历快速的顺/反异构化，并因此在溶液中产生两个构象异构体群体：分别为约25％∶75％的顺式/反式。因此，需要开发保持其生物活性和选择性，但却构象稳定的EP67类似物。

本发明涉及使用一系列EP67类似物的组合物和方法，在该EP67类似物中，这个Pro被这样的残基替换：该残基施加与EP67中位置7处的Pro相同/相似构象效应，但却没有与Pro-7相关的顺/反异构化作用，并因此导致溶液中的单一构象异构体群体。这消除了顺/反异构化作用可能对肽在其结合被表达于APC上的C5aR并诱导符合期望的免疫结果的能力方面产生的破坏性整体结构效应。

通过提供用于选择性接合/激活具有C5aR的APC的材料，并因此用C5a的寡肽C端类似物诱导宿主(host)先天免疫以治疗和预防感染性疾病和非感染性疾病的能力，以及通过提供微调寡肽化合物构象的方法，本发明实现了现有技术的上述需求。本发明广泛地涉及一类能够在不引发有害炎性应答的情况下，诱发有利免疫结果的新型的多肽产物，并涉及生产这些产物的方法。

我们先前已在U.S.2015/0297668中描述过C5a的应答选择性肽激动剂——EP67的合成及效力。EP67通过诱导有效的免疫应答并避免有害的炎性应答，实现了许多治疗目标，但却倾向于发生不能预料的顺/反异构化，从而产生一种具有所需作用的期望的化合物(反式异构体)和一种可能缺乏这些作用和/或与生物活性(反式)构象异构体竞争的不期望的异构体(顺式异构体)。

这种转化的结果是：一部分产物总是会无活性或者比符合期望的产物活性差。这种不稳定性导致一种产物的不可避免存在——该产物潜在地能够表现出不可预见的或不符合期望的作用，并造成剂量中活性成分浓度的不确定性。

为了解决该治疗试剂的稳定性问题，已经设计了一种表现出原肽所有的期望作用但又消除了不期望的异构化活性的新型的肽。这些EP67类似物不仅比迄今报道的其他类似物更加显著地有效和结构一致，而且还具有诱发与天然C5a相关的不同类的生物应答的应答选择性。

在一方面，本申请描述了新型的肽，该肽为应答选择性C5a激动剂EP67的构象稳定的类似物。这些肽具有式：

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Xaa-(Xaa2)-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：1)，

其中Xaa是被修饰的脯氨酸残基或者针对脯氨酸的残基替换，并且Xaa2是亮氨酸或者N-甲基亮氨酸。当使用了被修饰的脯氨酸残基时，被修饰的脯氨酸残基是没有未修饰的脯氨酸的顺反异构化作用的。有利地，该肽具有固定的构象且具有选择性C5a受体结合活性。

根据本发明的一方面，这些肽选择性地诱发免疫应答。特别地，构象稳定的肽选择性地结合并激活APC，而不直接接合/结合参与C5a促炎活性(第1类或者第2类)的具有C5a受体的细胞。由此，构象稳定的肽是具有C5aR的APC的选择性激动剂。所述肽在与APC上的C5aR结合时，激活受试者的先天免疫系统，先天免疫系统可用于在受试者中诱导非特异性免疫应答。非特异性免疫应答可以用于治疗微生物感染，以及非感染性疾病诸如癌症等，如本申请所讨论。

同样，在一些方面，构象稳定的肽的选择性可以用于通过将构象稳定的肽在功能地连接至特定的免疫原(如，抗原)上来将特异性免疫原剂(immunogenic agent)靶向至APC。当构象稳定的肽与APC结合时，所连接的免疫原被APC内在化，并对该免疫原产生特异性免疫应答。这种利用肽去靶向APC在美国专利No.6,821,517中有更详细的描述，该专利通过引用合并到本申请中。

在另外的方面，本公开还涉及组合物，该组合物包括分散在药学上可接受的载体中的本发明的构象稳定的肽。

本申请还描述了通过在受试者中选择性地接合和激活具有C5aR的APC来诱导针对感染的免疫应答的方法。该方法一般包括向受试者施用治疗有效量的本发明的构象稳定的肽，该构象稳定的肽是应答选择性C5a激动剂并具有选择性C5a受体结合活性。

根据一方面，本公开还涉及试剂盒，该试剂盒包括本发明的构象稳定的肽和用于向有需要的受试者施用该肽的说明书。

本申请还描述了本发明的构象稳定的肽的用途。在一方面，所述肽用于制备在受试者中诱导针对感染的免疫应答的治疗药物或预防药物。

具有本文所述构象并包括本文所述式的肽是高效价的C5a类似物，其可以选择性地诱发与天然C5a相关的不同类别的生物应答。这些高效价的类似物可以用作选择性地诱发与天然C5a相关的所需免疫应答的激动剂，并且将会在免疫缺陷患者的治疗上得到广泛利用，而优选地没有炎性副作用。

附图说明

专利或者申请文件包含至少一副彩色绘制的附图。如果提出请求并缴纳必要的费用，当局将会提供带有彩色附图的这种专利公布副本或者申请文件公布副本。

图1示出了在DMSO-d6中的EP67的2维NMR分析，其中，针对主要构象异构体(反式，约80％)和次要构象异构体(顺式，约20％)的特征性奥氏核效应(NOE)明显。

图2是一系列显微图片，其描绘了位置7处的Pro被替换的两种EP67类似物(即，EP144和EP145)在体外驱使单核细胞分化为巨噬细胞的能力。

具体实施方式

本发明广泛地涉及一类能够在不引发有害的炎性应答的情况下通过选择性激活具有C5a受体的APC(如，巨噬细胞、单核细胞和树突状细胞)来诱发有利免疫结果的新型的寡肽产物。换句话讲，所述肽选择性地结合具有C5a受体的APC，而不结合促炎粒细胞。本发明涉及用于治疗和预防感染性疾病和非感染性疾病的材料和方法。更具体地，本公开涉及这些新的C5a激动剂肽，以及其在治疗和预防感染性疾病和非感染性疾病中的用途。

这些激动剂肽能够以牺牲炎性应答为代价，选择性地诱导先天性宿主免疫应答，并因此可以用于治疗各种疾病，包括但不限于微生物感染(诸如病毒感染、细菌感染和真菌感染)；和非感染性疾病，包括但不限于癌症、免疫相关的疾患和炎性疾患。

本发明描述的C5a激动剂肽也可以用于在与免疫原剂相偶联(couple)时选择性地诱导获得性免疫应答，该免疫原剂可以继而通过肽的特异性结合而直接靶向APC。在一个或多个实施方案中，C5a激动剂肽(可选地，通过间隔部分)共价键合至免疫原剂，据此肽与APCC5a受体的结合来激活抗原呈递细胞，造成免疫原剂被递送至APC的抗原呈递通路。由此，这些激动剂可用作增强各种类型疫苗的效力和免疫刺激性质的分子疫苗佐剂。示例性的免疫原剂是这样的成分：其类似于致病微生物或者感染原(infectious agent)，和/或由弱化或灭活形式的致病微生物或感染原、其毒素、亚基、颗粒和/或其一种表面蛋白质制成，以便免疫原剂激发宿主对该微生物或感染原的特异性免疫应答。一些疫苗含有已被破坏的灭活(但在这之前具有致命性的)微生物。示例包括流感疫苗、霍乱疫苗、脊髓灰质炎疫苗、甲型肝炎疫苗和狂犬病疫苗。一些疫苗包括活的、减毒的微生物(被修饰的活病毒)。这些疫苗使用的是在使病毒失去其致命性质的条件下培育的活病毒，或者密切相关但较不危险的生物体，以产生广泛的免疫应答。一些在本质上也是细菌。活疫苗通常会激发更持久的免疫学应答(immunological response)，并且在人类中对健康成人是优选的类型。示例包括麻疹、腮腺炎、风疹、百日咳等。类毒素疫苗是由灭活的引起疾病的毒性化合物制成，而不是由微生物本身制成。基于类毒素的疫苗的示例包括破伤风和白喉。也可以使用蛋白质亚基。在这些疫苗中，微生物的片段用来产生免疫应答。示例包括针对HPV、乙型肝炎以及流感病毒的血球凝集素和神经氨酸酶亚基的亚基疫苗。也可以用病毒或细菌DNA来配制疫苗，以激发免疫应答。此外，虽然目前大多数疫苗是用来自微生物的灭活或减毒化合物来产生的，但也可以用使用具有合成的肽、合成的碳水化合物或合成的抗原的合成疫苗。本申请还考虑了使用肿瘤特异性抗原的癌症疫苗。合适的疫苗可以是单价的或多价的。

本发明描述的方法也可应用于其他肽或蛋白质分子，以增强或调节这些分子的效力。

所述肽是C5a的C端类似物；更具体地，所述肽是命名为EP67(YSFKDMP(MeL)aR(SEQID NO：2))的合成肽的构象稳定的类似物；其中大写字母是指氨基酸的L-立体异构形态，而小写字母是指氨基酸的D-立体异构形态；(MeL)对应于N-甲基亮氨酸)。于2012年11月30日递交的U.S.2012/0314839和于2011年6月29日递交的U.S.2015/0297668对EP67有详细的描述。

本发明的肽是EP67的“类似物”，其在本申请中意为该肽序列是EP67序列的变异体或者衍生物(即被修饰的变体)，但却保持了EP67的生物活性(如，选择性C5a受体结合活性)。更具体地，这种“变异体”或者“衍生物”是指EP67肽序列中一个或两个位置上的残基替换或修饰。甚至更优选地，这种替换或修饰发生在EP67序列中的位置7和/或位置8处：

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Pro-(MeLeu)-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：2)，其中可异构化的Pro和/或MeLeu残基被替换或修饰。这些残基的修饰/替换是违背直觉(counteriutuitive)的，因为Pro和N-MeLeu残基原先被认为是EP67序列中的必要残基。Pro和N-MeLeu残基原先位于EP67中来向紧接这些残基的N端侧施加伸展主链构象，因为这种伸展主链构象显现生物学上的重要性，且更具体而言是帮助限制了EP67仅与具有C5a受体的APC结合而不与具有C5a受体的粒细胞(诸如炎性中性粒细胞)结合。在一个或多个实施方案中，Pro残基被修饰或替换。示例性的替换残基包括但不限于丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸：

其中R是-H或-CH₃。

另外的替换包括那些假脯氨酸的衍生物、取代的假脯氨酸残基，以及人类和其他动物物种的天然C5a_65-74序列中非N-甲基化的残基。无论如何，与天然柔性的C5a结构不同，本发明的肽类似物被修饰以受限于一种刚性(特定)构象中，有助于肽类似物对具有C5aR的APC的特异性。而且，由于避免了顺/反异构化，本发明的肽在3维结合结构上比EP67甚至更加受限。

在本发明的每一实施方案的各方面中，类似物的长度优选地为10个或更少的氨基酸残基，并且优选地，长度为约5到约10个氨基酸残基。如此，在本申请所述的肽的序列中，肽的特征在于N端的Tyr残基和C端的Arg残基。

在一个或多个实施方案中，构象稳定的EP67类似物包括Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Xaa-(Xaa2)-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：1)、该EP67类似物主要由Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Xaa-(Xaa2)-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：1)组成或者该EP67类似物由Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Xaa-(Xaa2)-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：1)组成，其中在位置7处的原Pro残基(Xaa)包括在吡咯烷侧链的第2、3、4和/或5位上单取代的Pro类似物：

且Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸。在一个或多个实施方案中，EP67类似物包括在吡咯烷侧链的第2、3、4和/或5位上双取代的Pro类似物，该EP67类似物主要由吡咯烷侧链的第2、3、4和/或5位上双取代的Pro类似物组成，或者该EP67类似物由吡咯烷侧链的第2、3、4和/或5位上双取代的Pro类似物组成；且Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸。在一个或多个实施方案中，脯氨酸残基可以被替换为脯氨酸同系物。

在一个或多个实施方案中，EP67类似物包括SEQ ID NO：1、该EP67类似物主要由SEQ ID NO：1组成，或者该EP67类似物由SEQ ID NO：1组成；其中Xaa是三氟甲基化的假脯氨酸，并且Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸。在一个或多个实施方案中，EP67类似物包括SEQ IDNO：1，或者该EP67类似物主要由SEQ ID NO：1组成，或者该EP67类似物由SEQ ID NO：1组成；其中Xaa被替换为假脯氨酸残基，并且Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸；其中假脯氨酸Xaa(^ΨR1.R2pro)是通过醛或酮的环缩合反应获得，其中X＝Cys、Ser或者Thr。

其中：

当X＝S、R＝H时：半胱氨酸衍生的噻唑烷(THz)；

当X＝O且R＝H时：丝氨酸衍生的恶唑烷(Oxa)；以及

当X＝O且R＝CH₃时：苏氨酸衍生的恶唑烷(Oxa(5-Me))；并且

R¹、R²＝H、CH₃或芳香基。

在一个或多个实施方案中，EP67类似物包括SEQ ID NO：1、该EP67类似物主要由SEQ ID NO：1组成或者该EP67类似物由SEQ ID NO：1组成；其中Xaa是三氟甲基化的(Tfm)氮杂环丁2-羧酸和/或高丝氨酸：

并且Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸。

在一个或多个实施方案中，EP67类似物包括SEQ ID NO：1；主要由SEQ ID NO：1组成；或者由SEQ ID NO：1组成；其中Xaa是含氧杂环丁烷的肽：

AAx代表相邻的氨基酸侧链，并且Xaa是亮氨酸或N-甲基亮氨酸。

在一个或多个实施方案中，EP67类似物包括SEQ ID NO：1、该EP67类似物主要由SEQ ID NO：1组成，或者该EP67类似物由SEQ ID NO：1组成；其中Xaa是具有以下构象(描绘为较大的肽的一部分)之一的N-氨基咪唑啉2-酮(N-aminoimidazolidin-2-one)(Aid)模拟物。

Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸，Nai是N-氨基-咪唑啉酮，Agl是α-氨基-γ-内酰胺，Aza是氮杂肽(azapeptide)，且AAx代表相邻残基的氨基酸侧链(Doan等人，N-Aminoimidazolidin-2-one Peptidomimetics，Org.Lett.16，2232-2235，2014)。

在一个或多个实施方案中，EP67类似物包括SEQ ID NO：1，该EP67类似物主要由SEQ ID NO：1组成或者该EP67类似物由SEQ ID NO：1组成，其中Xaa是非手性的哌啶酸类似物：

且Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸。

不管怎样，这些合成的脯氨酸模拟物(proline mimetics)提供了对AAx-Pro酰亚胺构象的限制。这些脯氨酸类似物或同系物是基于以烷基和芳基进行环上取代、将杂原子并入环中，或者扩大或缩小脯氨酸环。下表示出了示例性的脯氨酸类似物和同系物。

表.脯氨酸类似物/同系物

来源：ChemFiles，Innovations in Peptide Synthesis and Conjugation，卷5，第12期

在一个或多个实施方案中，EP67类似物选自由以下组成的组：

Aib＝2-氨基异丁酸；3ib＝3-氨基异丁酸；dmP＝5，5’-二甲基脯氨酸；mβP＝2，4-桥亚甲基-β-脯氨酸；eβP＝2，5-桥亚乙基-β-脯氨酸；MeA＝N-甲基丙氨酸；MeL＝N-甲基亮氨酸；MeI＝N-甲基异亮氨酸；Pip＝哌啶酸(pipecolic acid)衍生物/类似物，该哌啶酸衍生物/类似物包括但不限于：

ΨP＝丝氨酸/苏氨酸/半胱氨酸衍生的假脯氨酸类似物，其包括但不限于：

其中R＝H或CH₃；R’＝CH₃(苏氨酸衍生的)或R’＝H(丝氨酸衍生的)。

特别优选的构象稳定的EP67类似物包括YSFKDM(Aib)LaR(SEQ ID NO：3)和YSFKDM(dmP)(MeL)aR(SEQ ID NO：4)。

构象稳定的EP67类似物被用于诱导先天性和获得性免疫应答同时避免炎症。有利地，本发明允许使用具有C5aR在APC上增加的结合亲和力和生物选择性的较低治疗剂量，从而防止了由非结合性类似物构象异构体造成的副作用。

本申请也描述了包括有构象稳定的肽类似物的组合物。在各种实施方案中，组合物包括药学上可接受的载体。本申请所用的术语载体指的是稀释剂、辅料(excipient)、赋形剂(vehicle)、包衣剂(coating)等，在载体中肽可以用该载体分散或包覆，用以施用。合适的载体将是药学上可接受的。如本申请所用的术语“药学上可接受的”意为：不是生物学上或别的方面不符合期望的，因为该载体可以被施用于受试者而不会产生过量的毒性、刺激性或过敏性应答，并且不会造成不可接受的生物效应，或者以有害方式与组合物所含有的任何其他成分相互作用。如本领域技术人员所公知，将自然地选择药学上可接受的载体来使化合物或其他试剂的任何降解最小化，并且使在受试者中不利的任何副作用最小化。药学上可接受的成分包括对于兽医用途及人类药物用途可接受的那些成分，并将取决于给药途径。可以使用任何与辅料和EP67类似物相容的载体。补充性活性化合物也可并入组合物中。

本公开的组合物被配制为与其预期给药途径相容。给药途径的示例包括口服给药(摄食)和肠胃外给药(例如，静脉给药、皮内给药、皮下给药、吸入给药、鼻腔给药、经皮(局部)给药、经粘膜给药、颊部给药、舌下给药、肺部给药和直肠给药)。

适合注射用的药物组合物包括无菌水溶液(在可溶于水的情形下)、无菌等渗水性缓冲液的溶液，或分散体，以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。对于静脉给药，适合的载体包括生理盐水、克列莫佛EL^TM(Cremophor EL^TM)(BASF，帕西帕尼，新泽西州)、抑菌剂/无菌水/蒸馏压热处理的水(DAW)或磷酸盐缓冲液(PBS)。在所有情形下，组合物都是无菌的，并且是流动的，以允许可注射性。载体可以是溶剂或分散介质，包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，及其合适的混合物。通过用诸如卵磷脂等的包衣，在分散体的情形下通过保持所需颗粒的大小，以及通过用表面活性剂，维持了流动性。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如，苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等，可以实现对微生物作用的预防。在许多情形下，在组合物中包括等渗剂(例如，糖、多元醇(诸如甘露醇、山梨醇)和氯化钠)将是优选的。通过在可注射组合物中包括延迟吸收的试剂，例如，单硬脂酸铝和明胶，可实现该组合物的持久吸收。可注射制剂可被封装在由玻璃或塑料制成的安瓿中、一次性注射器中或者多剂量小瓶中。

用于肠胃外应用(注射或输液)的溶液或悬液可以包括以下成分：无菌稀释剂诸如注射用水、盐水溶液、固定油(fixed oil，不挥发性油)、聚乙二醇、甘油、丙二醇、各种水包油乳液或油包水乳液，以及二甲基亚砜(DMSO)，或其他合成溶剂；抗细菌剂诸如苯甲醇或苯甲酸甲酯；抗氧化剂诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的试剂诸如氯化钠或右旋糖。pH可以用酸或碱诸如盐酸或氢氧化钠来调节。

口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用的载体。口服制剂一般采取以下形式：丸剂、片剂、胶囊(如，软凝胶胶囊、固体填充胶囊，或液体填充胶囊)、固体锭剂、液体填充锭剂、口腔和/或咽喉滴剂或喷雾剂、泡腾片、口崩片、悬液、乳液、糖浆、酏剂或酊剂。可以以肠溶形式来包含组合物，以便其在胃中能继续存在，或者通过已知方法将组合物进一步被包衣或混合以便在胃肠道的特定区域释放。固体口服剂量形式通常被立即吞服，或在嘴中慢慢融化。口服组合物也可以用流体载体来制备以用作漱口剂，其中流体载体中的化合物可以被口服施用、含漱并吐出或吞下。口服制剂可选地包含任意下列成分，或具有类似性质的化合物：结合剂(binder)诸如微晶纤维素、黄蓍胶(gum tragacanth)或明胶；淀粉或乳糖；崩解剂诸如褐藻酸、Primogel^TM或玉米淀粉；润滑剂诸如硬脂酸镁；助流剂如胶体二氧化硅；和/或甜味剂诸如蔗糖或糖精。

对于吸入给药，组合物可选地以喷雾剂形式递送。喷雾剂可以是来自压力容器或分配器的气溶胶喷雾剂，其包含合适的推进剂(propellant)(如，诸如二氧化碳等的气体)或雾化器(nebulizer)。组合物可选地被配制为通过干粉吸入器(DPI)、计量吸入器(pMDI)、鼻喷雾器或蒸发器递送。对于涉及藉由粘膜来吸收试剂和/或辅料的给药途径，该组合物还可选地包括渗透剂。

可选地，组合物被配制为“液体呼吸组合物(liquid respiratorycomposition)”，即，可经由口腔、嘴、咽喉、鼻道或其组合向哺乳动物递送的形式的组合物。这些组合物可通过选自下述的递送装置递送：滴管、泵、喷雾器、液体滴管、勺、杯、可挤压的小袋(sachet)、电力注入器(power shot)和其他包装与设备，及其组合。在一个实施方案中，液体呼吸组合物包括治疗剂和辅料、增稠聚合物(例如，黄原胶、纤维素聚合物(诸如羧甲基纤维素(CMC)、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素)、角叉菜胶、聚丙烯酸、交联聚丙烯酸(诸如卡波姆聚卡波非(polycarbophil)、藻酸盐、粘土及其组合)，以及可选地粘膜粘附聚合物(如，聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、顺丁烯二酸酐的甲基乙烯基醚共聚物瓜尔豆胶、黄蓍胶、聚葡萄糖、阳离子聚合物、聚(环氧乙烷)、聚(乙二醇)、聚(乙烯醇)、聚(丙烯酸)、交联聚丙烯酸诸如卡波姆聚卡波非、聚(甲基丙烯酸羟乙酯)、壳聚糖、纤维素聚合物(诸如羧甲基纤维素(CMC)、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素)及其组合)。组合物优选地为非牛顿液体，如根据剪切粘度法(the Shear Viscosity Method)所测量的，该非牛顿液体在温度大约37℃时，展现下述范围的零剪切黏度：从约100厘泊(cP)到约1,000,000cP、从约100cP到约500,000cP、从约100cP到约100,000cP、从约100cP到约50,000cP、从约200cP到约20,000cP、从约1,000到10,000cP。该制剂的pH范围一般在约1到约7、从约2到约6.5以及从约4到约6。

总的来说，组合物中所用的其他另外的药学上可接受的成分包括佐剂、抗原、缓冲剂、盐、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗生素、等渗剂、细胞培养基(如，MEM、FBS)、调味剂等。示例性等渗剂包括右旋糖、乳糖、糖醇(如，山梨糖醇、甘露醇)等。稳定剂包括糖(诸如蔗糖和乳糖)、氨基酸(诸如甘氨酸或谷氨酸单钠盐)以及蛋白质(诸如白蛋白或明胶)，及其混合物。示例性防腐剂包括甲醛、硫柳汞等。

在各种实施方案中，除了本申请所述的载体和肽类似物之外，喷鼻制剂可以包括苯扎氯铵、樟脑、葡萄糖酸洗必泰、柠檬酸、EDTA二钠、桉树脑、薄荷脑、纯净水、和/或泰洛沙泊(tyloxapol)。示例性口服组合物除了包括辅料和乙醯胺酚、琥珀酸多西拉敏和苯福林HCl(或右美沙芬)之外，还可以包括FD&CBlue No.1、明胶、甘油、聚乙二醇、聚维酮、丙二醇、纯净水、特制山梨糖醇(sorbitol special)和/或二氧化钛。

在各种实施方案中，考虑了将粉末、乳霜和凝胶用于局部给药的药物组合物。在一个实施方案中，局部给药是指将治疗组合物应用于身体的局部区域或者施加到身体部分的表面(如，皮肤上)——那些需要作用或需要症状缓解的地方。在一个实施方案中，根据本公开使用一种透皮贴剂。在再其他实施方案中，根据本公开的药物组合物被植嵌入例如伤口敷料、绷带(如，亲水胶体、水凝胶、藻酸盐、泡沫、纱布)，和/或手术缝线中，用以预防和/或治疗感染和提高伤口(如，擦伤、割伤和手术切口)的愈合。

在一个实施方案中，组合物的成分与载体一起被制备，该载体会保护该成分不被身体迅速排出，诸如控释制剂包括包衣、植入物和微囊递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容性的聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚正酯(polyorthoester)和聚乳酸。

为了给药的方便性和剂量的一致性(uniformity)，在各个方面中，制剂以单位剂量的形式提供。本申请所用的“单位剂量形式”是指适合作为用于待治疗的受试者的单一剂量的物理上独立的单位，每个单位包含已计算出的预定量的活性化合物，其与所需药物载体联合起来产生期望的治疗作用。单位剂量形式的规格由辅料和治疗剂的独特特性和待实现的特定生物作用决定并直接取决于该辅料和治疗剂的独特特性和待实现的特定生物作用。

本申请中描述的组合物的安全性和效力是用体外或体内技术、通过标准程序来确定的，诸如本申请中描述的材料和方法和/或本领域中已知的材料和方法。给药可以基于按照需要(as-needed)或按照期望(as-desired)进行，例如每月一次、每周一次或每天一次，包括每天多次，例如每天至少一次、每天一次到大约十次、每天大约两次到大约四次或者每天大约三次。组合物的剂量可选地包括大约从约0.001mg到约1000mg的活性剂，可替换地从约2.5mg到约750mg的活性剂，和可替换地从约5mg到约650mg的活性剂。在一个实施方案中，根据本公开的组合物的剂量包括约0.1mg到约0.25mg。在各种实施方案中，根据本公开的组合物的剂量包括25μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、125μg、150μg、175μg、200μg、225μg、250μg、275μg、300μg、325μg、350μg、375μg、400μg、425μg、450μg、475μg或500μg。在各种实施方案中，根据本公开的组合物的剂量包括25μg到500μg之间、50μg到400μg之间、100μg到300μg之间或200μg到250μg之间。

在各种实施方案中，构象稳定的EP67类似物或者包括该构象稳定EP67类似物的药物组合物与一种或多种用于治疗或预防感染或疾病的其他活性剂组合使用。该其他活性剂可以增强治疗剂的作用和/或发挥除治疗剂的作用之外的其他药物作用。可与治疗剂组合使用的活性剂的非限制性示例有，免疫抑制剂(如环孢素、硫唑嘌呤)、皮质激素、抗炎剂、化疗剂、抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂和抗寄生虫剂。如本申请所述，被考虑到的其他示例性活性剂包括疫苗(如，现有的针对特定病原体或疾病的疫苗)和包括有与特异性抗原缀合(conjugate)的C5aC端类似物的疫苗。

本申请所述的组合物可用作对多种疾病的治疗的一部分，该疾病包括但不限于微生物感染诸如病毒、细菌和真菌感染；这些组合物也可用于治疗非感染性疾病，包括但不限于癌症、免疫相关疾患和炎性疾患。本发明所述的组合物也可以用作增强各类疫苗的效力和免疫刺激特性的疫苗佐剂。

使用时，向受试者施用治疗有效量的构象稳定的EP67类似物。构象稳定EP67类似物的施用在受试者中诱发免疫应答，更具体地说，选择性地激活先天免疫应答，而不直接激活促炎中性粒细胞和其他粒细胞。免疫应答将表现在：没有可观察到的临床症状或受感染的受试者通常显现的临床症状减少、从感染中恢复的时间加快、感染的持续时间减少等等。在另一个实施方案中，提供一种在感染或疾病部位激活免疫细胞的方法，包括：向哺乳动物施用有效量的构象稳定的EP67类似物，所述类似物具有选择性C5a受体结合活性。将会意识到的是，虽然构象稳定的EP67类似物不直接结合或激活促炎性粒细胞，但由于APC一旦被肽类似物激活时所释放的趋化因子/细胞因子，可能会引发次级炎性应答。

在本公开每一实施方案的各个方面中，感染或疾病是由选自细菌、病毒、真菌、寄生虫、原生动物和朊病毒组成的组的感染原引起的。在每一实施方案的其他各个方面中，所述疾病是癌症。在方法的每一实施方案的各个方面中，所述感染包括生物膜。

涉及细菌感染的本公开的每一实施方案的各个方面中，细菌选自由以下组成的组：耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)、MRSA菌株USA300-FPR3757、耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(VRSA)、耐大环内酯的酿脓链球菌、耐青霉素的肺炎链球菌(penicillin-resistant Streptococcus pneumoniae)、广泛耐药的结核分枝杆菌(XDR TB)、耐多药的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、耐多药的屎肠球菌(Enterococcus faecium)、绿脓杆菌、耐克林霉素的艰难梭菌、耐氟喹诺酮的艰难梭菌、鲍曼不动杆菌、炭疽杆菌、百日咳杆菌、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、流产布鲁氏菌、犬布鲁氏菌、羊布鲁氏菌、猪布鲁氏菌、空肠弯曲杆菌、肺炎衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉披衣菌(Chlamydophila psittaci)、肉毒杆菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌、破伤风梭菌、白喉杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌、大肠杆菌、土拉热弗朗西丝氏菌、流感嗜血杆菌、幽门螺杆菌、嗜肺军团菌、肾脏钩端螺旋体、单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes)、麻风分枝杆菌、结核分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、肺炎支原体、淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌、绿脓杆菌、立克次氏立克次氏体、伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、宋内志贺菌、金黄色酿脓葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、无乳链球菌、变形链球菌、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、酿脓链球菌、梅毒螺旋体、霍乱弧菌和鼠疫杆菌。

涉及病毒感染的本公开的每一实施方案的各个方面中，病毒选自由以下组成的组：痘病毒、脊椎动物痘病毒、正痘病毒、牛痘病毒、猴痘病毒、牛痘苗病毒(Vacciniavirus)、天花病毒、副痘病毒、小牛侵蚀性口炎病毒、羊口疮病毒(Orf virus)、假牛痘病毒、软疣痘病毒、触染性软疣病毒、亚塔痘病毒属、特纳河痘病毒、雅巴猴肿瘤病毒、疱疹病毒、α疱疹病毒、单纯疱疹病毒、人类疱疹病毒1型(Human herpesvirus 1)、单纯性疱疹病毒1型(Herpes simplex virus 1)、人类疱疹病毒2型、单纯性疱疹病毒2型、水痘病毒、人类疱疹病毒3型、水痘-带状疱疹病毒、β疱疹病毒、巨细胞病毒、人类疱疹病毒5型、人类巨细胞病毒、玫瑰疹病毒、人类疱疹病毒6型、人类疱疹病毒7型、γ疱疹病毒、淋巴隐病毒、人类疱疹病毒4型、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus，EB病毒)、细长病毒(Rhadinovirus)、人类疱疹病毒8型、卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′s sarcoma-associated herpesvirus)、腺病毒、哺乳动物腺病毒、人类腺病毒A、人类腺病毒B、人类腺病毒C、人类腺病毒D、人类腺病毒E、人类腺病毒F、Polymaomaviridae、多瘤病毒(Polyomavirus)、BK多瘤病毒、人类多瘤病毒、JC多瘤病毒、乳头瘤病毒、α乳头瘤病毒、人类乳头瘤病毒2型、人类乳头瘤病毒10型、人类乳头瘤病毒6型、人类乳头瘤病毒7型、人类乳头瘤病毒16型、人类乳头瘤病毒18型、人类乳头瘤病毒26型、人类乳头瘤病毒32型、人类乳头瘤病毒34型、人类乳头瘤病毒53型、人类乳头瘤病毒54型、人类乳头瘤病毒61型、人类乳头瘤病毒71型、人类乳头瘤病毒cand90型、β乳头瘤病毒、人类乳头瘤病毒5型、人类乳头瘤病毒9型、人类乳头瘤病毒49型、人类乳头瘤病毒cand92型、人类乳头瘤病毒cand96型、γ乳头瘤病毒、人类乳头瘤病毒4型、人类乳头瘤病毒48型、人类乳头瘤病毒50型、人类乳头瘤病毒60型、人类乳头瘤病毒88型、丑型乳头瘤病毒(Mupapillomavirus)、人类乳头瘤病毒1型、人类乳头瘤病毒63型、细小病毒(Parvoviridae)、小病毒(Parvovirinae)、红病毒、B19病毒、肝病毒(Hepadnaviridae)、正肝病毒(Orthohepadnavirus)、乙型肝炎病毒、逆转录病毒、正反转录病毒(Orthoretrovirinae)、δ逆转录病毒、灵长动物嗜T-淋巴病毒1型(Primate T-lymphotropic virus 1)、灵长动物嗜T-淋巴病毒2型、慢病毒、人类免疫缺陷病毒1型、人类免疫缺陷病毒2型、呼肠孤病毒、正呼肠孤病毒、哺乳动物正呼肠孤病毒、环状病毒、非洲马疫病毒、昌吉诺拉病毒(Changuinola virus)、科里帕塔病毒(Corriparta virus)、奥轮谷病毒(Orungo virus)、轮状病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、单股反链病毒、丝状病毒(Filoviridae)、马尔堡病毒(Marburgvirus)、维多利亚湖马尔堡病毒(Lake Victoriamarburgvirus)、埃博拉病毒(Ebolvirus)、象牙海岸埃博拉病毒、雷斯顿埃博拉病毒、苏丹埃博拉病毒、扎伊尔埃博拉病毒、副粘病毒(Paramyxoviridae)、副粘病毒亚科(Paramyxovirinae)、呼吸道病毒、人类副流感病毒1型、人类副流感病毒3型、麻疹病毒属(Morbillivirus)、麻疹病毒(Measles virus)、埃德蒙斯顿病毒(Edmonston virus)、腮腺炎病毒属(Rubulavirus)、人类副流感病毒2型、人类副流感病毒4型、腮腺炎病毒(Mumpsvirus)、亨尼病毒属(Henipavirus)、亨德拉病毒(Hendravirus)、尼帕病毒(Nipahvirus)、肺病毒亚科(Pneumovirinae)，肺病毒属(Pneumovirus)、人类呼吸道合胞病毒、偏肺病毒(Metapneumovirus)、人类偏肺病毒、弹状病毒、水泡性病毒、钱迪普拉病毒(Chandipuravirus)、科卡尔病毒(Cocal virus)、伊斯法罕病毒(Isfahan virus)、皮理病毒(Piryvirus)、水泡性口炎阿拉戈斯病毒(Vesicular stomatitis Alagoas virus)、水泡性口炎印第安纳病毒(Vesicular stomatitis Indiana virus)、水泡性口炎新泽西病毒(Vesicular stomatitis New Jersey virus)、狂犬病病毒属(Lyssavirus)、澳大利亚蝙蝠狂犬病病毒、狂犬病病毒(Rabies virus)、正粘病毒科、流感病毒甲型(InfluenzavirusA)、甲型流感病毒(Influenza A virus)、流感病毒乙型(Influenzavirus B)、乙型流感病毒(Influenza B virus)、流感病毒丙型(Influenzavirus C)、丙型流感病毒(Influenza Cvirus)、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、布尼亚病毒(Bunyavirus)、布尼安维拉病毒(Bunyamwera virus)、布旺巴病毒(Bwamba virus)、加利福尼亚脑炎病毒、瓜马病毒(Guamavirus)、奥里博卡病毒(Oriboca virus)、奥罗普切病毒(Oropouche virus)、汉坦病毒属(Hantavirus)、安第斯病毒(Andes virus)、汉坦病毒(Hantaan virus)、普马拉病毒(Puumala virus)、首尔病毒(Seoul virus)、多布拉伐-贝尔格莱德病毒(Dobrava-Belgrade virus)、长沼病毒(Bayou virus)、黑港渠病毒(Black Creek Canal virus)、纽约病毒、辛诺柏病毒(Sin Nombre virus)、内罗病毒(Nairovirus)、克里米亚-刚果出血热病毒、内罗毕羊病病毒、白蛉病毒属(Phlebovirus)、裂谷热病毒、白蛉热那不勒斯病毒(Sandfly fever Naples virus)、砂粒病毒科(Arenaviridae)、砂粒病毒(Arenavirus)、拉沙病毒(Lassa virus)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、瓜纳瑞托病毒(Guanarito virus)、胡宁病毒(Junín virus)、马丘坡病毒(Machupo virus)、萨比亚病毒(Sabiávirus)、δ病毒属(Deltavirus)、丁型肝炎病毒(Hepatitis delta virus)、网巢病毒目(Nidovirales)、冠状毒科病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒(Coronavirus)、人类冠状病毒229E、人类冠状病毒OC43、人类肠道冠状病毒、严重急性呼吸综合症冠状病毒、环曲病毒属(Torovirus)、微小核糖核酸病毒科、肠病毒、人类肠病毒A型、人类肠病毒B型、人类肠病毒C型、人类肠病毒D型、脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)、鼻病毒、人类鼻病毒A型、人类鼻病毒B型、肝病毒属(Hepatovirus)、甲型肝炎病毒、副肠孤病毒(Parechovirus)、人类副肠孤病毒、杯状病毒科、诺罗病毒(Norovirus)、诺瓦克病毒、扎如病毒(Sapovirus)、札幌病毒(Sapporovirus)、肝炎病毒科(Hepevirus)、戊型肝炎病毒、星状病毒科、哺乳动物星状病毒属、人类星状病毒、披盖病毒科、α病毒、基孔肯亚病毒(Chikungunya virus)、欧尼恩病毒(O’nyong-nyong virus)、马亚罗病毒(Mayaro virus)、罗斯河病毒(Ross River virus)、巴尔马森林病毒(Barmah Forest virus)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus)、奥克尔布病毒(Ockelbovirus)、委内瑞拉马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、东方马脑炎病毒、风疹病毒属(Rubivirus)、风疹病毒(Rubella virus)、黄病毒科(Flaviviridae)、黄病毒属(Flavivirus)、科萨努尔森林病病毒(Kyasanur Forest disease virus)、鄂木斯克出血热病毒、波瓦桑病毒(Powassan virus)、羊跳跃病病毒、蜱传脑炎病毒(Tick-borneencephalitis virus)、登革病毒(Dengue virus)、日本脑炎病毒、墨莱溪谷脑炎病毒(Murray Valley encephalitis virus)、圣路易斯脑炎病毒、西尼罗河病毒、伊利乌斯病毒(Ilheus virus)、黄热病病毒(Yellow fever virus)、阿波伊病毒(Apoi virus)、丙型肝炎病毒属(Hepacivirus)、丙型肝炎病毒、GB病毒B型和GB病毒A型。

涉及真菌的本公开的每一实施方案的各个方面中，真菌选自由以下组成的组：白色念珠菌(C.albicans)、烟曲霉菌(A.fumigates)、黄曲霉菌(A.flavus)、棒曲菌(A.clavatus)、新生隐球菌(C.neoformans)、酵母拮抗菌(C.laurentii)、白色隐球菌(C.albidus)、格特隐球菌(C.gatti)、荚膜组织胞浆菌(H.capsulatum)、耶氏肺孢子菌(P.jirovecii)、纸葡萄穗霉菌(S.chartarum)、粗球孢子菌(C.immitis)和双相粗球孢子菌(C.posadasii)。

涉及寄生虫的本公开的每一实施方案的各个方面中，寄生虫选自由以下组成的组：原生动物、蠕虫、寄生蠕虫、片吸虫病综合征(Halzoun syndrome)、蝇蛆病、Chogoe蝇(Chogoe fly)、人类马蝇、寄生鲇(candiru)、臭虫(bedbug)、头虱、体虱、阴虱、蠕形螨、疥螨(scabies)和苍蝇幼虫(screwworm)。

涉及原生动物的本公开的每一实施方案的各个方面中，原生动物选自由以下组成的组：溶组织内阿米巴(Entamoeba Histolytica)、贾第鞭毛虫、阴道毛滴虫、布氏锥虫(Trypanosoma Brucei)、克氏锥虫(T.Cruzi)、杜氏利什曼虫(Leishmania Donovani)、结肠小袋绦虫(Balantidium Coli)、弓形虫(Toxoplasma Gondii)、疟原虫和果氏巴贝虫(Babesia Microti)。

本公开的每一实施方案的各个方面中，疾病选自由以下组成的组：羊搔痒症、牛海绵状脑病、传染性水貂脑病、慢性消耗病、猫海绵状脑病、外来偶蹄类脑病(exoticungulate encephalopathy)、克雅式病(Creutzfeldt-Jakob disease)、医源性克雅氏病、变异克雅氏病(variant Creutzfeldt-Jakob disease)、家族性克雅氏病、散发性克雅氏病、GSS综合征(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome)、致死性家族失眠症和库鲁病(Kuru)。

为了在组合治疗中实现期望的治疗结果，一般以对于产生期望的治疗结果(例如，减少或消除一个或多个症状)有效的组合量向受试者构象稳定的EP67类似物和其他活性剂。组合治疗可以涉及在差不多同一时间施用构象稳定的EP67类似物和其他活性剂。可通过施用包含有构象稳定EP67的类似物和其他活性剂二者的单一组合物来实现同时施用。可替换地，其他活性剂可以与包含有构象稳定EP67类似物的药物制剂在差不多同一时间分开摄取(即，先后摄取)。在二者中的任一情形下，活性剂和构象稳定的EP67类似物均被认为是“共施用的”。

在其他替代方案中，施用构象稳定的EP67类似物可以先于或迟于施用其他活性剂几分钟到几小时的间隔范围。当在不同时间施用构象稳定的EP67类似物和其他活性剂的实施方案中，可在彼此恰当的时间内施用构象稳定的EP67类似物和其他活性剂，以便构象稳定的EP67类似物和其他活性剂两者均可以对接受者(如，协同地或附加地)发挥有益作用。在一些实施方案中，在施用其他活性剂(之前或之后的)约0.5-12小时内，或在施用其他活性剂(之前或之后的)约0.5-6小时内向受试者施用构象稳定的EP67类似物。在某些实施方案中，在施用其他活性剂(之前或之后的)约0.5小时或者1小时内向受试者施用构象稳定的EP67类似物。

本公开也考虑到构象稳定EP67类似物的“加强”剂量(“booster”dose)或者包含(单独的或与上述另外的活性剂组合的)有构象稳定EP67类似物的药物组合物的“加强”剂量。可以在初次施用后约1周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月、约12个月、约2年、约3年、约4年、约5年、约6年、约7年、约8年、约9年、约10年、约15年和约20年后施用该加强剂量。

本申请也公开了包括构象稳定的EP67类似物的试剂盒。所述的试剂盒还包括向受试者施用构象稳定的EP67类似物的说明书。该构象稳定的EP67类似物可以被提供为单位剂量的一部分——已经分散在药学上可接受的载体中，或者该构象稳定的EP67类似物可以与载体分开提供。试剂盒还可以包括制备向受试者施用的构象稳定EP67类似物的说明书，包括，例如用于将类似物分散在合适的载体中的说明书。

将意识到，本申请所述的治疗和预防方法可应用于人类以及任何适合的动物，包括但不限于：狗、猫和其他宠物，以及啮齿类动物、灵长类动物、马、牛、猪等等。所述的方法也可以应用于临床调研和/或研究。

如本申请所述，用非抗原特异性方法诱导先天免疫的能力的优点在于，它能够对广泛病原体的免疫应答进行诱导，而不管这些病原体所表达的抗原的性质。由此，诱导保护性免疫应答的能力并不依赖于该对病原体所表达的特异性抗原的反应，而是依赖于对病原体本身的反应。

在阅读了本申请的公开内容和下述可行的实例之后，本发明的各种实施方案的另外的优点对本领域技术人员将会变得清晰可见。将意识到，除非本申请另有说明，本申请所述的各种实施方案不一定是相互排斥的。例如，在一个实施方案中描述或描绘的特征也可以被包括在其他实施方案中，但不是一定被包括在内。由此，本发明涵盖了本文所述的具体实施方案的各种组合和/或整合。

一般的定义

除非另有限定，本公开所用的科学术语和技术术语应当具有本领域普通技术人员通常理解和使用的意思。除非上下文另有要求，将理解单数的术语应当包括该术语的复数形式，并且复数的术语应当包括单数。具体地，如本申请和权利要求中所使用，除非上下文明确地另有说明，单数形式“一(a)”和“一(an)”包括复数引用。由此，例如，提及特定的C5aC端类似物即是提及一种这样的类似物或多种这样的类似物，包括其等同物。而且，术语“至少一个”和“一个或多个”的意思相同并包括一个、两个、三个或多个。除非另有说明，以下术语在用于本公开的上下文中时应当理解为具有以下意思。

本申请所提供的示例(包括那些接在“诸如”和“例如”之后的示例)被认为对于本公开及其实施方案的各个方面仅为说明性的，而不是对其具体限制。本领域技术人员知晓和/或可获取的任何合适的等同物、替代物以及其变体(包括材料、物质、构造、组合物、制剂、手段、方法、条件等等)都可以被使用或者实施以代替本申请所公开的那些或与本申请所公开的那些组合，并且被认为是落入本公开的范围内。

如本公开所用的，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指以阻止疾病或感染的发展或改变疾病或感染的病变(pathology)为目的而进行的干预。由此，“治疗”是指治疗性处置(therapeutic treatment)和预防性(prophylactic)或防备性(preventative)措施两者。治疗剂可以直接减少疾病或感染的病变，或者使疾病或感染对借助于其他治疗剂或例如宿主免疫系统的治疗敏感。对于那些饱受疾病或感染的临床症状、生化症状、放射学症状或主观症状之苦的的患者的治疗，可以包括减轻部分或全部这些症状，或者减少患病倾向性。治疗后的改善可能表现为减少或消除这样的症状。因此，通过预防可观察到的感染临床症状的发展，和/或通过降低感染的临床症状和/或效应的发生率或严重程度，和/或通过减少感染/症状/作用的持续时间，该组合物在治疗病况方面有用。

本申请所用的“感染”是指任何对生物体(宿主)有害的活体组织微生物入侵。微生物感染可能由微生物或“感染原”引起的，该微生物或“感染原”包括但不限于：细菌、病毒、真菌、寄生虫、原生动物、蠕虫或朊病毒。类似地，术语“疾病”是指任何病理状态，并且包括明显的症状表现(即，患病状态(illness))或异常临床指标(如，生化指标)的表现。可替换地，术语“疾病”指的是这种发展出这样的症状或异常临床指标的遗传或环境风险或倾向性。感染或疾病是能用根据本公开的分子进行治疗而从中获益的任何病况。这包括慢性和急性的疾患(disorder)或疾病(disease)，包括那些使哺乳动物倾向患上正在讨论的疾患的病理状况。

如本公开所用的，短语“有效量”或“治疗有效量”意指对本公开的实施方案合适的构象稳定的EP67类似物的治疗用量或预防用量；当按照所需的治疗方案施用时，该治疗用量或预防用量将会诱发期望的治疗性或预防性的作用或应答，包括缓解疾病或感染的部分或全部该症状，或者减少患上疾病或感染的倾向性。本领域技术人员会认识到，即使受试者的病况没有完全根除或预防，但该病况或其症状和/或效应得以部分地改善或缓解，则该量可以被认为是治疗“有效的”。治疗有效剂量的肽可以取决于受试者的体型和物种，并根据施用模式而变化。

本申请提及的肽的“构象”或“构象异构体”一般是指在给定时刻肽可以采取的几何取向/结构/分子排布特别是几何异构体的范围。“构象稳定”意为所述肽一般固定于单一的几何取向/构象/分子排布上，而不易转化/旋转到不同取向上。换句话讲，在构象稳定的类似物中，键的旋转(特别是在顺式构型和反式构型之间的旋转)被限制或消除。单独的残基也可以具有“受限构象”，这意味着它们不会经历顺/反异构化。

术语“寡肽”是指一种长度为至少约5个氨基酸且小于40个氨基酸的肽。在本公开的一个实施方案中，寡肽的长度从约5至约10个残基。在一个实施方案中，寡肽为十肽(即，长度为10个氨基酸)。

如本申请所用的，术语“羧基端”或“C端”是指C5a的羧基端。

如本申请所用的，含有“选择性C5a受体结合活性”的短语是指类似物结合CD88——以牺牲其他C5a介导的炎性应答为代价——来刺激抗原呈递细胞中免疫调节作用的能力。换句话讲，结合尤其导致APC的激活，而不直接结合或激活具有C5a受体的粒细胞。

如本申请所使用，“同时”施用两种治疗剂不要求在同一时间或通过同一途径施用试剂，只要与试剂发挥其治疗作用的时间段有重叠即可。可以考虑同时或先后施用(“共施用”)，如在不同日子或不同星期施用。“在先”施用是指在施用第二治疗活性剂之前的一段时间里施用构象稳定的EP67类似物，无论所述的两种治疗剂是否一起发挥治疗作用。此外，“在后”施用是指在施用第二治疗活性剂之后的一段时间里施用构象稳定的EP67类似物，无论所述的两种治疗剂是否一起发挥治疗作用。

如本申请所用的，短语“和/或”——当用在一列的两个或多个项目时——意为可以单独采用所列项目中的任何一个，或者可以采用两个或多个所列项目的任何组合。例如，如果一种组合物被描述为包含或排除成分A、B和/或C，该组合物可以包含或排除：单独的A；单独的B；单独的C；A和B的组合；A和C的组合；B和C的组合；或A、B和C的组合。

本说明也用数值范围来量化与本发明的各种实施方案相关的某些参数。应该理解的是，当提供数值范围时，这样的范围将被解释为对仅记载范围下限值的权利要求限定和仅记载了范围上限值的权利要求限定提供书面支持。例如，公开的“约10至约100”的数值范围对记载了“大于约10”(无上限边界)的权利要求和记载了“小于约100”(无下限边界)的权利要求提供书面支持。

实施例

以下实施例阐述了根据发明的方法。然而，将理解的是，这些实施例是以举例说明的方式来提供的，其中的任何内容都不应被当作为是对发明整体范围的限制。

实施例1

EP67的异构化

命名为EP67(YSFKDMP(MeL)aR(SEQ ID NO：2))的合成肽曾是从人类补体成分C5a的C端区域衍生而来的。EP67中必需的氨基酸是核心的脯氨酸残基。EP67已被证明作为选择性C5a激动剂是有效的：特异性结合具有C5aR的巨噬细胞(以及其他APC)，但不结合具有C5aR的中性粒细胞。EP67用于为具有C5aR的巨噬细胞(以及其他APC)提供激活信号，以对感染展开强烈的先天免疫应答。

所生成的EP67含有残基替换，该残基替换被设计用于限制天然产生的C5a_65-74中所固有的构象灵活性，其目的是使其具有偏好形貌特征(biasingtopographicalfeature)——当与C5aR结合(ligated，配位结合)时，该偏好形貌特征可区分C5a样(C5a-like)免疫刺激应答和C5a样炎性应答。与高度柔性的C5a_65-74相反，在EP67内进行的残基替换“锁定”了独特的构象姿态(profile)，该构象姿态可被表达于APC上C5aR很好地容纳，但不会被表达于炎性粒细胞上的C5aR所容纳。当EP67接合具有C5aR的APC时，EP67诱导1型T辅助细胞(Th1)细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12、TNFα、IFNγ)从人类和小鼠巨噬细胞的释放，而很少有2型T辅助细胞(Th2)细胞因子(IL-2、IL-4、IL-5、IL-10)。此外，EP67诱导人和猪的单核细胞向巨噬细胞和树突状细胞的分化，并(在巨噬细胞/树突状细胞生成后)减少巨噬细胞/树突状细胞的坏死和凋亡。总的来说，来自于EP67介导的与具有C5aR的APC的接合的这些结果，建立了强健的先天免疫环境，该先天免疫环境能够减少/消除局部和全身性细菌感染、病毒感染和真菌感染，并且以伴有极少或不伴有由具有C5aR的粒细胞的接合产生的炎性副作用的方式来实现这一点。

然而，已经确定，EP67在由Pro和MeLeu占据的第七位和第八位上表现出构象不稳定性。

其中AA和AA’是肽中相邻的氨基酸。这种不稳定性削弱了EP67的治疗潜力，并削弱了EP67接合具有C5aR的APC来产生针对耐药性(和正常)细菌感染以及针对耐药性/正常病毒和真菌感染的先天免疫环境的能力。克服这种不稳定性将允许应答选择性肽的治疗潜能的充分实现。

核磁共振波谱(NMR spectroscopy)是检测肽中脯氨酰基的顺反异构化的最佳方法。可通过在异构化的键附近的每个核自旋的核磁共振波谱中两个共振频率来检测AA_x-Pro的顺/反异构化(其中AA_x是任何相邻的氨基酸残基)。用旋转坐标NOE谱(ROESY)来分析DMSO-d6中的EP67(150毫秒的混合时间)。特征NOE图案(pattern)容易区别顺式和反式构象异构体所产生的共振，从而允许特异性归属各个构象异构体。而且，可通过分别的峰体积的积分来确定每个构象异构体的相对分布数目(relative population)。在AA_x的α质子和Pro的α质子之间的短¹H-¹H距离(NOE)是顺式AA_x-Pro肽键的特征。另一方面，所观察到的在AA_x的α质子和Pro的δ质子之间的NOE是反式AA_x-Pro肽键的特征。

其中AA和AA’是相邻的氨基酸。当用这些NMR的方法时，我们证明了，EP67(SEQ IDNO：2)中Met-Pro键存在于顺式和反式两种构象(图1)中，这导致溶液中存在比例为约～20％顺式和～80％反式的EP67构象异构体的两个群体。

后续的工作旨在生成在位置7上具有替换或修饰的EP67类似物。更具体地，已经合成了这样的类似物：其在确保合成修饰或残基替换保留了EP67原先引入的Pro残基在生物学上重要的构象特征的同时，消除了其中的Pro顺反异构化和与Pro相关的顺反异构化。对EP67的NMR研究表明，在C5a_65-74(ISHKDMQLGR，SEQ ID NO：5)的Met和Gln残基之间的肽键中，伸展的、聚脯氨酸II(P_II)样主链构象是生物学上重要的。在EP67中，将Pro残基替换Gln(Q)，因为环状Pro的空间位阻迫使产生紧接其N端的残基的伸展主链构象：

由此，可以生成具有替换Pro的残基的其他EP67类似物，该残基在紧接其N端的肽键上施加Pro样伸展构象，但不会经历顺反异构化。

实施例2

EP67的构象稳定类似物

在适当取代的王树脂(Wang resin)上通过标准固相Fmoc正交方法来合成EP67的构象稳定类似物。以0.25mmol的规模进行合成，并且该合成采用具有反复的残基连接的Fmoc法(9-fluorenylmethyloxycarbonyl method)。用分析制备型反相HPLC在C18键合硅胶柱上对肽进行纯化，其中0.1％TFA作为电泳缓冲液，且含有60％乙腈的0.1％TFA作为洗脱剂。将通过用于验证分子量的电喷雾质谱和MALDI(基质辅助激光解吸电离)质谱来表征肽。类似物列在下表1中。我们已生产了两种EP67类似物，其中Pro被替换为5，5’-二甲基脯氨酸(dmP)(命名为EP145)或者替换为2-氨基异丁酸(Aib)(命名为EP144)。在EP144中，EP67的MeL残基也被替换为Leu。

构象稳定的EP67类似物

命名	序列	SEQ ID NO：
			EP144	YSFKDM(Aib)LaR	3
EP145	YSFKDM(dmP)(MeL)aR	4

还合成了由EP67的错义序列(scrambled sequence)组成的无活性对照肽(命名为sEP67，M(MeL)RFPDaYKS(SEQ ID NO：6))用于比较。

可以通过NMR谱来分析类似物肽，以验证结构并确认Pro被替换的类似物的顺式/反式构象异构体的比例。应当特别注意，在接近于经替换的Pro残基N端的Met残基中，关于α碳原子(键和ψ键)所形成的角度和关于羰基碳原子(ψ键和ω键)所形成的角度。

生成了两种类似物，旨在使Pro(EP67)的顺反平衡移动(EP145)或消除Pro(EP67)的顺反平衡(EP144)，但又保留在近其N端的Met残基上的Pro样的伸展主链构象。的确，将EP67中的Pro替换为dmP(EP145)，使得顺式/反式构象异构体比例从20：80改变为50：50。与之相反并正如预测地，在EP67中Pro替换为Aib(EP144)导致了全反式构象。

实施例3

构象稳定类似物的生物活性

为了评估EP67类似物结合至APC以及在这些细胞上后续的生物活性，针对肽在体外诱发单核细胞激活的能力，以及驱动人类单核细胞分化为/成熟为巨噬细胞和后续的树突状细胞的能力，对肽进行分析评价。如图2所示，EP144和EP145二者都以与EP67相似的方式驱动人类单核细胞向巨噬细胞的分化，由此证实了我们在该三元区域(triad region)进行进一步的Pro替换的理论和方法。

简言之，从人类外周血单核细胞中获取单核绌胞。在存在PBS、100μg/mlEP67、100μg/mlEP144和100μg/mlEP145的培养基中，将人类单核细胞在37摄氏度孵育24小时。另外将细胞与sEP67一起孵育48小时作为对照。然后，在光学显微镜下以20X或40X放大对细胞拍照。图2示出来自在PBS(实验组(panel)A和实验组D)、EP67(实验组B和实验组E)、EP144(实验组C)、EP145(实验组F)和sEP67(实验组G)存在下生长的细胞的代表性的亮场。图片A-C和图片G是20X倍放大的，图片D-E是40X倍放大的。在补充有EP67、EP144或EP145的培养基中，单核细胞成熟为巨噬细胞——表现出与基质粘附并呈扁平状的特征性表现型。与错义肽(scrambled peptide)或与PBS一起生长的细胞不表现出这种表现型，而是保留了单核细胞特的特征——圆形形状且没有与基质的牢固粘附。

实施例4

另外的构象稳定类似物

基于EP67、EP144(Aib)和EP145(dmp)在单核细胞分化中的相似点，我们已设计了一小系列的结构多样的EP67类似物(命名为肽1-11)，其中的每一个都被预期具有独特的构象系综(conformational ensemble)和整体拓扑(overall topography)。肽将具有相同的基本序列：

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Xaa-(Xaa2)-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：1)

类似物1和2的特征是通过将Pro分别替换为哌啶酸(#1)或2-氮杂环丁烷-羧酸(#2)而产生的环扩张和环收缩。

类似物3-7的特征是各种构象受限的脯氨酸衍生物：2，4-桥亚甲基-脯氨酸(#3)、2，4-桥亚甲基-β-脯氨酸(#4)、7-氮杂双环[2.2.1]庚烷-1-羧酸(#5)、2-氮杂双环[3.1.1]-庚烷-1-羧酸(2，4-桥亚甲基-哌啶酸)(2-azabicyclo[3.1.1]-heptane-1-carboxylic(2，4-methano-pipecolic))(#6)，和顺式-八氢-1H-吲哚-2-羧酸(#7)。

值得注意地，用于3、5和6的氨基酸砌块是非手性的。

类似物8的特征是Pro的N-甲基丙氨酸的开环替换；而含有1-氨基环己烷-羧酸的类似物9是含有2-氨基异丁酸的类似物(EP144)的螺环版本。

最后，1，5-四唑(#10)类似物和N-叔丁基甘氨酸(#11)类似物均存在于被固定的顺式构象中——其非常接近EP67Pro的顺式构象异构体。

根据针对肽类似物1-11而获得的数据，可以考虑替换的Pro类似物，包括：2-氮杂双环-[2.2.1]庚烷-3-羧酸、7-氮杂双环[2.2.1]-庚烷-2-羧酸(2，5-桥亚乙基-β-脯氨酸)、非手性的2-氮杂双环[2.2.2]辛烷-1-羧基(2，5-亚乙基哌啶酸)和9-氮杂双环-[3.3.1]壬烷-1-羧基(2-azabicyclo[2.2.2]octane-1-carboxylic)(2，6-桥亚丙基哌啶酸)(21)、3，4-苯基脯氨酸、2-氨基-金刚烷-2-羧酸和N-甲基亮氨酸。

在C端(Arg)取代的王树脂上用Fmoc正交方法通过标准固相方法来合成肽。用于1、2和6-9的受N-(芴基-9-甲氧羰基)(Fmoc)保护的氨基酸前体是市售的，并可以直接用于替换Fmoc-Pro，以合成相应的目标十肽。用于3、4和5的氨基酸前体的Fmoc衍生物可以通过相应氨基酸与9-芴甲基二甲氧三嗪基碳酸酯(Fmoc-DMT)或与9-芴甲基苯并三唑的反应而获得。用于3、4和5的氨基酸砌块可以通过所指明的参考文献中所描述的方法来获得。目标十肽10的合成将需要合成Fmoc三肽前体C：

将N-MeLeu甲酯A用溴乙酰溴进行酰化，随后用叔丁胺进行N-烷基化以生成B。将B用FmocMet的酸性氯化物(或酸性溴化物)酰化，随后对甲酯进行水解以生成所需的前体C。

目标十肽11将需要合成Fmoc四唑前体E，前体E可以通过用三苯基膦、偶氮二羧酸二乙酯和叠氮三甲基硅烷依次处理Fmoc二肽甲酯D，并随后用碳酸钾水溶液处理而获得：

用C₁₈键合的硅胶分析制备柱通过标准的HPLC方法将肽纯化。将通过用于验证分子量的电喷雾质谱和MALDI(基质辅助激光解吸电离)质谱来表征肽。而且，将会通过NMR谱来分析类似物，以验证结构并确认Pro被替换的类似物的顺式/反式构象异构体的比例。应当特别注意，在接近于替换的Pro残基N端的Met残基中，关于α碳原子(键和ψ键)所形成的角度和关于羰基碳原子(ψ键和ω键)所形成的角度。

将会针对以下方面评估具有图4中替换Pro所生成的十一个全长(十肽)EP67类似物：1)类似物与人类和猪的巨噬细胞和中性粒细胞上的C5aR的结合亲和力，2)如通过巨噬细胞释放的细胞因子和中性粒细胞释放的髓过氧化物酶(MPO)所量度的类似物在这些细胞中的效能，和3)从这两个结合亲和力和效能测验中，类似物相对于Ep67和天然C5a的生物选择性。

1.C5aR结合亲和力：根据我们先前发表的方法(Taylor等人，Development ofresponse selective agonists of human C5a anaphylatoxin：conformational，biological，and therapeutic considerations.Curr.Med.Chem.8：675-684，2001；Vogen等人，Differential activities of decapeptide agonists of human C5a：theconformational effects of backbone N-methylation.Int.Immunopharmacol.1：2151-2162，2001)，在具有C5aR的巨噬细胞和中性粒细胞上通过与¹²⁵I标记的C5a的结合位点竞争来确定类似物对C5aR的结合亲和力。将通过半最大抑制剂浓度(IC50)(即，50％的¹²⁵I-C5a与C5aR结合被抑制时类似物的浓度)针对每个类似物来评估C5aR结合亲和力。EP67的IC₅₀将被用作对比对照。

2.效能：类似物的效能将通过半最大效应浓度(EC50)(即，诱导应答达到基线和最大效应之间的一半时类似物的浓度)来量度。在两个独立的测验中对每种类似物的EC50值进行测定：巨噬细胞的细胞因子释放和中性粒细胞的MPO释放。

在巨噬细胞中，根据我们曾经发表的方法(Morgan等人，Enhancement of In Vivoand In Vitro Immune Functions by a Conformationally Biased，Response-SelectiveAgonist of Human C5a：Implications for a Novel Adjuvant in VaccineDesign.Vaccine 28：463-469，20l0；Morgan等人，A novel adjuvant for vaccinedevelopment in the aged.Vaccine 28：8275-8279，2010)，我们将会测量TH1细胞因子IL-6、TNFα和INFγ的释放。这些细胞因子以容易测量的量从巨噬细胞中(以及单核细胞和树突状细胞)不断释放，并且，该细胞因子将代表我们用EP67所观察到的，且与上文呈现的支持数据的性质一致。简言之，将在标准细胞培养条件下并在各种浓度的类似物(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)的存在下，将巨噬细胞进行孵育6、12和24小时。上层清液将被收集并用标准ELISA法针对上述TH1细胞因子的存在和量进行测定。分隔的孔中的巨噬细胞将会在同样/相似的条件下与EP67和天然C5a一起孵育，作为对比对照。仅在培养基中孵育的巨噬细胞(无处理)作为阴性对照。

在中性粒细胞中，我们将测量蛋白水解酶MPO的释放。简言之，将在标准细胞培养条件下并在各种浓度的类似物(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)的存在下将中性粒细胞孵育6、12和24小时。上层清液将被收集并用标准ELISA方法针对MPO的存在和量进行测定。分隔的孔中的中性粒细胞将会在同样/相似的条件下与EP67和天然C5a一起孵育，作为对比对照。仅在培养基中孵育的中性粒细胞(无处理)作为阴性对照。

3.生物选择性：将通过以下等式来确定巨噬细胞的细胞因子释放对(vs.)中性粒细胞的MPO释放的类似物选择性：

选择性＝反对数[(-Δ巨噬细胞)-(-Δ中性粒细胞)]，其中：

Δ是log效能比(pD₂C5a-pD₂类似物)，且pD₂＝-logEC₅₀。在用等式时，天然C5a的“选择性”的值被设定为1，这是由于其在巨噬细胞细胞因子的释放和中性粒细胞MPO的释放二者中是等势(equipotent)的。因此，可以相对于C5a评估这两种具有C5aR的细胞之间的效能的差别，即，上述等式的值越大，相对于C5a的选择性约大。这是确定两种化合物间选择性的药物学上可接受的手段，并且该手段被我们用来确定相对于接合并激活具有C5aR的中性粒绌胞，EP67对于接合并激活具有C5aR的APC的选择性。例如，相较于C5a(在两种细胞中是等势)的选择因子为1，EP67的巨噬细胞活性对对中性粒细胞活性的选择因子是2951。

Claims (25)

1.一种EP67的构象稳定的肽类似物，具有式：

Tyr-Ser-Phe-Lys-Asp-Met-Xaa-(Xaa2)-(D-Ala)-Arg(SEQ ID NO：1)，

其中：

Xaa是：

被修饰的脯氨酸残基或具有受限构象的类似物；或者

除脯氨酸之外的氨基酸残基或类似物，并且

Xaa2是亮氨酸或N-甲基亮氨酸，所述肽具有选择性C5a受体结合活性。

2.根据权利要求1所述的构象稳定的肽类似物，其中，Xaa选自由以下组成的组：

a)丙氨酸；

b)N-甲基丙氨酸；

b)2-氨基异丁酸；

c)3-氨基异丁酸；

d)N-甲基异亮氨酸；

e)在吡咯烷侧链的2、3、4和/或5位上单取代的脯氨酸类似物；

f)在吡咯烷侧链的2、3、4和/或5位上双取代的脯氨酸类似物；

g)假脯氨酸类似物：半胱氨酸衍生的噻唑烷、丝氨酸衍生的恶唑烷或苏氨酸衍生的恶唑烷；

h)三氟甲基化的假脯氨酸；

i)具有受限构象的脯氨酸类似物或同系物；

j)三氟甲基化的氮杂环丁烷-2-羧酸；

k)三氟甲基化的高丝氨酸；

l)含有氧杂环丁烷基的拟肽；

m)N-氨基咪唑啉-2-酮类似物；和

n)非手性的哌啶酸类似物。

3.根据权利要求2所述的构象稳定的肽类似物，其中，所述单取代或双取代的取代脯氨酸类似物是5，5’-二甲基脯氨酸、2，4-桥亚甲基-β-脯氨酸，或者2，5-桥亚乙基-β-脯氨酸。

4.根据权利要求2所述的构象稳定的肽类似物，其中，所述丝氨酸/苏氨酸/半胱氨酸衍生的假脯氨酸类似物选自由以下组成的组：

其中，R和R’＝H或CH₃。

5.根据权利要求2所述的构象稳定的肽类似物，其中，所述非手性的哌啶酸类似物选自由以下组成的组：

6.根据权利要求1所述的构象稳定的肽类似物，所述N-氨基咪唑啉-2-酮类似物选自由以下组成的组：N-氨基咪唑啉酮、α-氨基-γ-内酰胺和氮杂肽。

7.根据权利要求1所述的构象稳定的肽类似物，其中，EP67类似物是YSFKDM(Aib)LaR(SEQ ID NO：3)或者YSFKDM(dmP)(MeL)aR(SEQ ID NO：4)。

8.一种组合物，包括分散在药学上可接受的载体中的根据权利要求1-7中任意一项所述的构象稳定的肽类似物。

9.根据权利要求8所述的组合物，还包括佐剂、其他活性剂、防腐剂、缓冲剂、盐及其混合物。

10.一种在受试者中诱导针对感染或癌症的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-7中任意一项所述的构象稳定的肽类似物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述感染或疾病由选自由以下组成的组的感染原引起：细菌、病毒、真菌、寄生虫、原生动物和朊病毒。

12.根据权利要求10所述的方法，其中，所述肽分散在药物学上可接受的载体中。

13.根据权利要求10所述的方法，还包括：在所述施用前，提供被分散在药物学上可接受的载体中的所述化合物的单位剂量形式。

14.根据权利要求10所述的方法，其中，所述肽通过以下形式被施用：肌内地、皮下地、皮内地、鼻内地，静脉内地、口服地或通过透皮贴剂。

15.根据权利要求10所述的方法，还包括向所述受试者施用活性剂，所述活性剂与所述肽不同。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述肽与所述活性剂被共施用。

17.根据权利要求15所述的方法，其中，所述活性剂选自由以下组成的组：灭活病毒、被修饰的活病毒、病毒蛋白质或细菌蛋白质、病毒DNA或细菌DNA、类毒素、蛋白质亚基和肿瘤抗原。

18.根据权利要求10所述的方法，其中，所述受试者是人类。

19.根据权利要求10所述的方法，其中，所述受试者是非人类的动物。

20.一种试剂盒，包括：

根据权利要求1-7中任意一项所述的构象稳定的肽类似物；和

向对其有需要的受试者施用所述肽的说明书。

21.根据权利要求20所述的试剂盒，其中，所述构象稳定的肽类似物以单位剂量形式提供。

22.根据权利要求20所述的试剂盒，其中，将所述肽提供于第一容器中，所述试剂盒还包括第二容器中的载体；以及用于制备向所述受试者施用的所述肽的说明书。

23.一种用于增强对免疫原剂的免疫应答的化合物，所述化合物包括与免疫原剂共价连接的根据权利要求1-7中任意一项所述的构象稳定的肽类似物。

24.根据权利要求23所述的化合物，所述免疫原剂选自由以下组成的组：灭活病毒、被修饰的活病毒、病毒蛋白质或细菌蛋白质、病毒DNA或细菌DNA、类毒素、蛋白质亚基和肿瘤抗原。

25.根据权利要求1-7中任意一项所述的构象稳定的肽类似物在制备用于在受试者中诱导对抗感染或癌症的免疫应答的治疗性或预防性药物上的用途。