CN107847443A - 脂质卷以及使用其增强药理学活性剂的组织穿透力的方法 - Google Patents

脂质卷以及使用其增强药理学活性剂的组织穿透力的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107847443A
CN107847443A CN201680026006.3A CN201680026006A CN107847443A CN 107847443 A CN107847443 A CN 107847443A CN 201680026006 A CN201680026006 A CN 201680026006A CN 107847443 A CN107847443 A CN 107847443A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lipid
tissue
volume
active agents
pharmacologically active
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201680026006.3A
Other languages
English (en)
Inventor
R.J.曼尼诺
R.卢
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Matinas Biopharma Nanotechnologies Inc
Original Assignee
Matinas Biopharma Nanotechnologies Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Matinas Biopharma Nanotechnologies Inc filed Critical Matinas Biopharma Nanotechnologies Inc
Publication of CN107847443A publication Critical patent/CN107847443A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1274—Non-vesicle bilayer structures, e.g. liquid crystals, tubules, cubic phases, cochleates; Sponge phases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/7036—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin having at least one amino group directly attached to the carbocyclic ring, e.g. streptomycin, gentamycin, amikacin, validamycin, fortimicins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/10—Anthelmintics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physiology (AREA)

Abstract

公开了一种脂质卷组合物。在口服施用该脂质卷组合物后，发现药理学活性剂相对于血浆在组织中处于更高浓度。与健康受试者中的组织相比，口服施用这些脂质卷组合物还优先靶向感染或发炎组织。该脂质卷组合物含有降低脂质卷粒度的尺寸调节剂，如脂质锚定多核苷酸、脂质锚定糖、脂质锚定多肽或胆汁盐(如氧胆酸盐或脱氧胆酸盐)。还公开了使用该脂质卷组合物的治疗方法，以及相对于健康受试者血浆或组织中药理学活性剂的浓度提高感染组织中该药理学活性剂浓度的方法。

Description

脂质卷以及使用其增强药理学活性剂的组织穿透力的方法
相关申请的交叉参考
本申请要求2015年3月3日提交的美国临时专利申请号62/127,799；2015年3月15日提交的美国临时专利申请号62/162,425；2015年5月18日提交的美国临时专利申请号62/163,212；2015年10月9日提交的美国临时专利申请号62/239,675；2015年10月28日提交的美国临时专利申请号62/247,641；和2015年12月7日提交的美国临时专利申请号62/264,164的权益并依靠其提交日期；其全部公开内容通过引用并入本文。
序列表
本申请包含以ASCII格式电子提交并通过引用以其全部由此并入的序列表。2016年3月3日创建的所述ASCII副本名为0200.0002-PCT_SL.txt，且大小为993字节。
领域
本申请通常涉及脂质卷(cochleate)和施用其以便将药理学活性剂快速递送至靶组织的方法。
背景
许多现代药理学基于在肠上部中吸收治疗剂，直接进入血流，导致首过肝脏代谢。此类首过代谢可以除去或改变施用的许多药理剂，由此通过减少可用剂量或通过产生可引起副作用的代谢物降低治疗效果。
吸收到血流中的许多药理剂最终靶向体内其它部位的组织。通常，吸收到血流中是一种使药理剂分散在体内并使其扩散到靶组织中的方法。这种方法对某些治疗应用可能非常有效，但是常常导致低效率和副作用。例如，许多抗感染剂必须达到显著的血液水平以便最终渗透靶器官(如肺、鼻腔或膀胱壁)。同时，摄入药理剂可能在非靶组织中引起显著的副作用，如抗生素杀死肠道菌群、恶心、呕吐、腹泻、肝脏毒性(来自首过代谢或随后的代谢)、肾脏毒性(来自在血液中循环的毒性药物或它们的代谢物)或非甾体抗炎药(NSAID)造成的胃肠溃疡。
结果，经由胃肠吸收进入血流或通过注射/输注的药理剂的分布通常导致更高的药物血液/血清/血浆水平vs.组织和器官水平。此外，药理剂通常花费相当长的时间来穿透组织和器官来达到药理学相关的水平。
概述
本公开提供了一种脂质卷组合物，该组合物包含多个脂质卷，所述脂质卷包含至少一种磷脂(优选至少一种带负电荷的磷脂)、多价阳离子(优选二价金属阳离子，如钙、锌、镁和钡)、药理学活性剂和选自脂质锚定多核苷酸、脂质锚定糖、脂质锚定多肽或胆汁盐(如氧胆酸盐(oxycholate)或脱氧胆酸盐)的尺寸调节剂。
在某些实施方案中，所述多个脂质卷的平均粒度小于10微米或者小于1微米。在某些实施方案中，所述多个脂质卷的平均粒度是不使用尺寸调节剂制备的脂质卷的平均粒度的1/2-1/10、或者1/2-1/3。
在另一方面，本公开提供了一种脂质卷组合物，该组合物包含多个包含至少一种磷脂(优选至少一种带负电荷的磷脂)、多价阳离子(优选二价金属阳离子，如钙、锌、镁和钡)和药理学活性剂的脂质卷，其中向具有感染或发炎组织的哺乳动物施用该脂质卷组合物(优选口服施用)导致相对于血浆中的药理学活性剂水平在感染或发炎组织中更高的药理学活性剂水平。
还提供的是一种脂质卷组合物，该组合物包含多个包含至少一种磷脂(优选至少一种带负电荷的磷脂)、多价阳离子(优选二价金属阳离子，如钙、锌、镁和钡)和药理学活性剂的脂质卷，其中在施用(优选口服施用)于受试者后在感染或发炎的组织中该药理学活性剂的组织水平是施用(优选口服施用)于健康受试者后24小时该药理学活性剂的组织水平的至少1.5倍。
另一方面涉及治疗需要其的受试者的方法，该方法包括向受试者施用本文中所述的脂质卷组合物。
再另一方面涉及相对于血浆中的药理学活性剂浓度提高感染组织中的该药理学活性剂浓度的方法，其中该方法包括向具有感染组织的受试者施用(优选口服施用)本文中所述的脂质卷组合物，其中该药理学活性剂的浓度比向受试者施用(优选口服施用)该脂质卷组合物后24小时(或者48或72小时)血浆中的药理学活性剂的浓度至少高25％(1.25x)、或者至少高50％(1.5x)、或者至少高100％(2x)、或者至少高150％、或者至少高200％、或者至少高250％、或者至少高300％、或者至少高350％、或者至少高400％、或者至少高500％、或者至少高600％、或者至少高700％、或者至少高800％、或者至少高1000％(11x)。
附图概述
并入本说明书并构成其一部分的附图例示了某些实施方案，并与书面描述一起用于解释本文中公开的组合物和方法的某些原理。
图1显示了具有两亲性部分和带负电荷部分的脂质锚定多核苷酸。其还显示了可用于制备脂质卷的磷脂酰丝氨酸分子。该磷脂酰丝氨酸分子也具有两亲性部分和带负电荷部分。
图2描绘了如何制备含有脂质锚定多核苷酸的脂质卷的示意图。
图3显示了制备并测试的各种脂质锚定多核苷酸。图3中描绘的多核苷酸是对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为特异性的双链siRNA。该siRNA的有义链具有序列ACCCUGAAGUUCAUCUGCACC(SEQ ID NO:1)，而反义链具有序列ACUGGGACUUCAAGUAGACGU(SEQID NO:2)。
图4显示了感染了白色念珠菌(Candida albicans)并用腹膜内施用的2毫克/千克护理标准两性霉素B脱氧胆酸盐(也称为Fungizone)或口服施用的10毫克/千克脂质卷包封的(encochleated)两性霉素B(CAMB)治疗的小鼠的肝脏组织中两性霉素B浓度的时间进程。
图5显示了感染了白色念珠菌并用腹膜内施用的2毫克/千克护理标准两性霉素B脱氧胆酸盐(也称为Fungizone)或口服施用的10毫克/千克脂质卷包封的两性霉素B(CAMB)治疗的小鼠的肺组织中两性霉素B浓度的时间进程。
图6显示了感染了白色念珠菌并用腹膜内施用的2毫克/千克护理标准两性霉素B脱氧胆酸盐(也称为Fungizone)或口服施用的10毫克/千克脂质卷包封的两性霉素B(CAMB)治疗的小鼠的肾脏组织中两性霉素B浓度的时间进程。
图7显示了口服施用0.5毫克/千克脂质卷包封的两性霉素B vs.静脉内施用2毫克/千克或1毫克/千克Fungizone(“现有AmB”)的功效。
图8显示了在服用两性霉素B脂质卷(15毫克/千克)的健康动物或用两性霉素B脂质卷(10毫克/千克)治疗的感染念珠菌的小鼠的血浆、尿、肝脏、肺和肾脏中检测到的两性霉素B的水平。在健康动物中在第28天和在感染动物中在第15天检测两性霉素B脂质卷的水平。BLD表示在检测水平以下。
图9显示了感染小鼠源肺孢子虫(P.murina)并用脂质卷包封的ATQ(eATQ)以100毫克/千克的剂量经由经口灌胃治疗的小鼠的血浆和肺中ATQ浓度的时间进程。
图10A-F显示了在感染小鼠源肺孢子虫并用1)不含ATQ的载体(脂质卷)对照物(C/S)、2)甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(T/S)、3)未脂质卷包封的ATQ(ATQ)、4)经由经口灌胃的100毫克/千克的脂质卷包封的ATQ(eATQ hi)、或5)经由经口灌胃的50毫克/千克的脂质卷包封的ATQ(eATQ lo)治疗的小鼠中在7天后(图10A-B)、14天后(图10C-D)和21天后(图10E-F)的平均核和子囊计数。
图11A-C显示了在感染小鼠源肺孢子虫并用1)不含ATQ的载体(脂质卷)对照物(C/S)、2)甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(T/S)、3)未经脂质卷包封的ATQ(ATQ)、4)经由经口灌胃的100毫克/千克的脂质卷包封的ATQ、或5)经由经口灌胃的50毫克/千克的脂质卷包封的ATQ治疗的小鼠中在7天后(图11A)、14天后(图11B)和21天后(图11C)的存活曲线。
详述
现在将详细参考各种示例性实施方案，其实例在附图中例示并在下面的详述中讨论。要理解的是，提供下面的详述以便令阅读者更充分地理解本发明各方面的某些实施方案、特征和细节，并且不应解释为限制本发明的范围。
在向磷脂(如磷脂酰丝氨酸)中添加多价阳离子(如钙)时通过电荷-电荷相互作用(非聚合)自发地形成脂质卷。这产生了稳定的结晶磷脂-钙沉淀物，所述沉淀物具有多层结构，所述多层结构具有卷成螺旋或作为堆叠片材的大的、连续的、固体的脂质双层片材，不具有内部水性空间。这种独特的结构对缔合的“脂质卷包封的”分子提供保护以防降解。因为整个脂质卷结构是一系列的固体层，所以在脂质卷结构内部的组分(例如药理学活性剂)保持完好，即使脂质卷的外层可能暴露于苛刻的环境条件或酶。血清和粘膜分泌物中的体内二价钙浓度使得保持该脂质卷结构。因此，大多数脂质卷缔合的分子存在于固体的、稳定的、不可透结构的内层中。在口服施用后，脂质卷幸免于在胃肠道中细胞外分解，进入循环系统、组织和活化/感染的细胞。
但是，一旦在细胞内部，低的细胞内钙浓度导致脂质卷打开并释放包埋的药理学活性剂(“特洛伊木马效应(Trojan-horse effect)”)。由此，配制成脂质卷导致细胞内靶向以增强向主要为单核细胞/巨噬细胞谱系的感染细胞的细胞内药物递送，并将可注射药物转化成具有游离药物循环水平并因此具有低毒性的有效口服制剂。
有可能使用尺寸调节剂控制脂质卷的尺寸。脂质卷的吸收速率(吸收效率)和它们穿透组织的能力通过晶体或晶洞(geode)脂质卷粒子的尺寸来缓解(mitigate)。脂质卷粒子的尺寸取决于单个脂质卷脂质晶体的尺寸以及它们的聚集速率和聚集体的稳定性。未改性的脂质卷粒子具有相对疏水的表面，并且在水性脂质卷制备环境中，脂质卷粒子通常粘在一起并聚集成直径超过几微米，通常大于10微米，且有时甚至大于50微米的粒子。较大的脂质卷粒子不如较小的粒子那样好地被吞噬细胞吸收和吞没。
令人惊讶地发现，单个脂质卷晶体的尺寸以及它们聚集成更大粒子的能力可以通过添加一种或更多种尺寸调节剂如脂质锚定多核苷酸、脂质锚定糖(糖脂)、或脂质锚定多肽或胆汁盐(如氧胆酸盐或脱氧胆酸盐)来调节。
药理学活性剂在脂质晶体或晶洞(也称为晶洞状物(geodate))脂质卷粒子中的纳米封装明显限制了该药理学活性剂(或其首过代谢物或其它代谢物)由胃肠道吸收进入血流，并由此降低或避免了由组织暴露(胃、肠、肝脏、肾脏等等)引起的副作用或来自游离药理学活性剂和/或其首过代谢物或其它代谢物的副作用。通过与非脂质卷包封形式的相同药物的施用相比，当以脂质卷制剂形式口服施用时该药理学活性剂或其代谢物的相对低的血浆浓度证实了缺乏血流吸收。
脂质卷晶洞或脂质晶体纳米粒子在胃肠道中是稳定的，但是进入血流的吸收不佳。不希望受任何理论的束缚，据信脂质卷大多数被吸收到淋巴系统中。由与脂肪(如ω-3脂肪酸)的Tmax一致的大多数小分子药物(或其代谢物)在大约8-12小时的一致的Tmax支持淋巴系统吸收。
这些非常小的脂质卷晶洞状物或脂质晶体纳米粒子吸收进入淋巴系统将这些粒子暴露于肠中的派尔集合淋巴结(Peyer’s patches)和其它位置中的巨噬细胞和其它吞噬细胞。脂质卷粒子的尺寸和表面特性影响脂质卷在肠和淋巴系统中被吸收的速率/效率，以及脂质卷被吞噬细胞吸收的速率/效率。
由于淋巴系统内的循环和趋化性，这些巨噬细胞和其它吞噬细胞携带含有其药用有效载荷(药理学活性剂)的脂质卷粒子经淋巴系统到达感染或发炎组织。许多病理症状(如感染或创伤)与相关的组织/器官中的局部炎症相关。
脂质卷在感染或发炎的靶组织中沉积后，药理学活性剂(或其代谢物)渗入血流中。令人吃惊的是，与药理学活性剂的非脂质卷包封的递送相反，发现与药理学活性剂(或其代谢物)的血液/血浆水平相比，脂质卷递送所导致的药理学活性剂(或其代谢物)的组织水平在施用后迅速提高。
1.尺寸调节剂
本文中所用的尺寸调节剂指的是降低脂质卷的粒度的试剂。本文中所用的术语“粒度”是指粒子直径，或在粒子不是球形的情况下是指在粒子的一个方向上的最大延伸。脂质卷的粒度可以使用常规方法如亚微米粒度分析仪测得。
在某些实施方案中，尺寸调节剂是脂质锚定多核苷酸、脂质锚定糖(糖脂)、或脂质锚定多肽。在其它实施方案中，尺寸调节剂是胆汁盐，如氧胆酸盐或脱氧胆酸盐。胆汁盐是与阳离子(通常为钠)化合的胆汁酸。胆汁酸是主要在哺乳动物胆汁中发现的类固醇酸，并且是市售的。在某些实施方案中，脂质锚定多核苷酸、脂质锚定糖或脂质锚定多肽也是药理学活性剂，包括例如当该多核苷酸是能够抑制靶基因的表达的双链RNA时。
脂质锚定多核苷酸是共价结合到脂肪酸、磷脂或具有足够疏水以便锚定在脂质卷的磷脂双层的疏水性尾部中的结构域的另一种化合物上的多核苷酸。脂质锚定糖是共价结合到脂肪酸、磷脂或具有足够疏水以便锚定在脂质卷的磷脂双层的疏水性尾部中的结构域的另一种化合物上的糖。脂质锚定多肽是共价结合到脂肪酸、磷脂或具有足够疏水以便锚定在脂质卷的磷脂双层的疏水性尾部中的结构域的另一种化合物上的多肽。在某些实施方案中，脂质锚选自具有12-38个碳原子的饱和或不饱和脂肪酸，如棕榈酸酯、甾醇，如胆固醇或羊毛甾醇，以及维生素，如维生素E或维生素K。在一些实施方案中，脂质锚通过共价键直接连接到多核苷酸、多肽或糖上。在其它实施方案中，脂质锚通过共价结合的间隔区间接连接到多核苷酸、多肽或糖上，所述间隔区包含直链分子，包括但不限于多碳(polycarbon)链或聚乙二醇链，例如六乙二醇。该间隔区可以通过酯、酰胺、醚或叠氮键连接到多核苷酸、多肽或糖上。
在一些实施方案中，通过控制结合到锚脂质上的多核苷酸的长度来优化脂质卷粒度。在某些实施方案中，多核苷酸的长度为15-20个核苷酸、或者15-30个核苷酸、或者20-25个核苷酸、或者30-50个核苷酸。在某些实施方案中，多核苷酸具有净负电荷。寡核苷酸可以是RNA或DNA，并且该RNA或DNA可以是单链或双链的(例如能够抑制靶基因的表达的双链RNA)。
在其它实施方案中，通过控制结合到锚脂质上的特定多糖或多肽的长度或选择来优化脂质卷粒度。例如，在某些实施方案中，多肽的长度为10-15、或者10-20、或者15-20、或者25-30、或者30-50、或者20-30个氨基酸。在某些实施方案中，多肽或糖具有净负电荷。还可以通过控制特定胆汁盐，如氧胆酸盐或脱氧胆酸盐的选择来优化脂质卷粒度。
在一个实施方案中，用尺寸调节剂形成的脂质卷的至少50％(脂质卷总体积的50％或含有药理学活性剂的脂质卷粒子的50％)具有尺寸小于1微米、或者小于2微米、或者小于5微米、或者小于10微米、或者小于20微米、或者小于25微米、或者小于50微米的粒度。在另一实施方案中，用尺寸调节剂形成的脂质卷粒子的至少50％具有介于200-400nm、200-600nm、200-800nm、300-500nm、300-700nm、300-900nm、400-500nm、400-600nm、400-700nm、400-800nm、400-900nm、500-600nm、500-700nm、500-800nm、500-900nm、600-700nm、600-800nm、600-900nm、700-800nm或700-900nm，并优选介于400-800nm的粒度。
在另一实施方案中，用尺寸调节剂形成的脂质卷的至少75％具有尺寸小于1微米、或者小于2微米、或者小于5微米、或者小于10微米、或者小于20微米、或者小于25微米、或者小于50微米的粒度。在另一实施方案中，用尺寸调节剂形成的脂质卷的至少75％具有介于200-400nm、200-600nm、200-800nm、300-500nm、300-700nm、300-900nm、400-500nm、400-600nm、400-700nm、400-800nm、400-900nm、500-600nm、500-700nm、500-800nm、500-900nm、600-700nm、600-800nm、600-900nm、700-800nm或700-900nm，并优选介于400-800nm的粒度。
在另一实施方案中，用尺寸调节剂形成的脂质卷的至少90％具有尺寸小于1微米、或者小于2微米、或者小于5微米、或者小于10微米、或者小于20微米、或者小于25微米、或者小于50微米的粒度。在另一实施方案中，用尺寸调节剂形成的脂质卷的至少90％具有介于200-400nm、200-600nm、200-800nm、300-500nm、300-700nm、300-900nm、400-500nm、400-600nm、400-700nm、400-800nm、400-900nm、500-600nm、500-700nm、500-800nm、500-900nm、600-700nm、600-800nm、600-900nm、700-800nm或700-900nm，并优选介于400-800nm的粒度。
在一个实施方案中，脂质卷的中值粒度为小于1微米、或者小于2微米、或者小于5微米、或者小于10微米、或者小于20微米、或者小于25微米、或者小于50微米的尺寸。在另一实施方案中，脂质卷的中值粒度为介于200-400nm、200-600nm、200-800nm、300-500nm、300-700nm、300-900nm、400-500nm、400-600nm、400-700nm、400-800nm、400-900nm、500-600nm、500-700nm、500-800nm、500-900nm、600-700nm、600-800nm、600-900nm、700-800nm或700-900nm，并优选介于400-800nm。
在另一实施方案中，脂质卷的平均粒度为小于1微米、或者小于2微米、或者小于5微米、或者小于10微米、或者小于20微米、或者小于25微米、或者小于50微米的尺寸。在另一实施方案中，脂质卷的平均粒度为介于200-400nm、200-600nm、200-800nm、300-500nm、300-700nm、300-900nm、400-500nm、400-600nm、400-700nm、400-800nm、400-900nm、500-600nm、500-700nm、500-800nm、500-900nm、600-700nm、600-800nm、600-900nm、700-800nm或700-900nm，并优选介于400-800nm。
在再一实施方案中，含有尺寸降低剂的脂质卷的平均粒度是不含有尺寸降低剂的相同脂质卷的平均粒度的1/1.5-1/2、或者1/2-1/3、或者1/3-1/5、或者1/2-1/10、或者1/5-1/10、或者低于1/10。在另一实施方案中，含有尺寸降低剂的脂质卷的平均粒度比不含有尺寸降低剂的相同脂质卷的平均粒度小至少140％、至少120％、至少100％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少25％、至少20％或至少10％。
在形成脂质体悬浮液之前添加到脂质中或在脂质卷包封之前添加到脂质体悬浮液中的尺寸调节剂的量可以影响脂质卷粒子的尺寸。在某些实施方案中，尺寸调节剂的量为脂质卷总重量的小于0.1重量％、或者0.1重量％和0.7重量％之间、或者0.7重量％和1.5重量％之间、或者1.5重量％和2.5重量％之间、或者2.5重量％和5重量％之间、或者5重量％和15重量％之间、或者15重量％和25重量％之间、或者25重量％和50重量％之间。在一个实施方案中，尺寸调节剂的量为脂质卷总重量的小于5重量％。
2.制备脂质卷的方法
可以使用已知方法制备脂质卷，所述方法包括但不限于美国专利号5,994,318和6,153,217中描述的那些，其全部公开内容通过引用并入本文。在一个实施方案中，所述方法通常包括在溶剂的存在下组合药理学活性剂与脂质(优选带负电荷的磷脂，如磷脂酰丝氨酸)，添加水溶液以形成脂质体，和用多价阳离子进行沉淀以形成脂质卷。在另一实施方案中，所述方法通常包括在溶剂的存在下组合药理学活性剂与脂质体，以使药理学活性剂与该脂质体缔合，并用多价阳离子进行沉淀以形成含有药理学活性剂的脂质卷。
在优选实施方案中，多价阳离子是二价金属阳离子，如钙、锌、镁和钡。在优选实施方案中，二价金属阳离子是钙。
在溶剂的存在下将药理学活性剂引入脂质体的步骤可以采取多种方式实现。在一个实施方案中，通过将溶剂与药理学活性剂的溶液引入脂质体来引入药理学活性剂。优选地，该脂质体是脂质体悬浮液，优选水性脂质体悬浮液。在优选实施方案中，通过逐滴添加该溶液将该溶液引入脂质体中。在其它实施方案中，该溶液可以通过连续流或以推注形式加入。此外，可以将该溶液引入干燥脂质中，并在该溶液之前、之后或同时加入水。
在另一实施方案中，在溶剂之前或之后将药理学活性剂引入脂质体。例如，可将药理学活性剂引入包含溶剂的脂质体悬浮液中。混合物随后可以经搅拌、混合、涡旋等等以促进药理学活性剂与脂质体的缔合。引入的药理学活性剂可以为粉末或液体形式。
抗氧化剂(例如维生素E)也可用于制备脂质卷。抗氧化剂可以与药理学活性剂或与脂质体一起引入。优选地，将其并入脂质体悬浮液或药理学活性剂与溶剂的溶液中。
脂质体可以通过制备脂质体的任何已知方法来制备。由此，例如通过溶剂注射、脂质水化、逆蒸发、通过反复冷冻和解冻进行的冷冻干燥来制备脂质体。脂质体可以是多层的(MLV)或单层的(ULV)，包括小单层脂质体(SUV)。这些脂质体溶液中脂质的浓度可以为大约0.1毫克/毫升至500毫克/毫升。优选地，脂质浓度为大约0.5毫克/毫升至大约50毫克/毫升、更优选大约1毫克/毫升至大约25毫克/毫升。
脂质体可以是例如通过使用透析、柱色谱法、生物珠粒SM-2除去洗涤剂、通过逆相蒸发(REV)、或通过由高压挤出形成中间尺寸的单层脂质体来制备的大单层脂质体(LUV)、稳定多层脂质体(SPLV)或寡层脂质体(oligolamellar vesicles,OLV)(Methods inBiochemical Analysis,33:337(1988))。
在这些方法中可以使用任何合适的溶剂。适于给定应用的溶剂可以由本领域技术人员容易地确定。优选地，溶剂是FDA可接受的溶剂。溶剂可以是有机溶剂或无机溶剂。在一个实施方案中，溶剂是水混溶性溶剂。在另一实施方案中，溶剂是水或水性缓冲液。其它合适的溶剂包括但不限于二甲亚砜(DMSO)、甲基吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙腈、醇类例如乙醇(EtOH)、二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)及其组合。通常，溶剂中的药理学活性剂浓度在大约0.01毫克/毫升和200毫克/毫升之间。优选地，药理学活性剂浓度在大约0.05毫克/毫升和大约100毫克/毫升之间，更优选在大约0.1毫克/毫升和20毫克/毫升之间。
例如，可以任选地在脂质体形成之前、在脂质体阶段和/或在形成脂质卷之后除去溶剂。可以采用任何已知的溶剂去除方法。例如，可以通过切向流和/或过滤和/或透析从脂质体悬浮液中除去溶剂，或通过洗涤、过滤、离心和/或透析从脂质卷中除去溶剂。脂质卷可以例如用最好具有钙或另一种阳离子的缓冲液或水来洗涤。
如上所述，可以在制备脂质卷的方法的过程中引入尺寸调节剂。在某些实施方案中，在形成沉淀的脂质卷之前，将尺寸调节剂添加到脂质或脂质体中。例如，在一个实施方案中，将尺寸调节剂引入脂质体悬浮液中，随后将由该脂质体悬浮液形成脂质卷(例如通过添加阳离子或透析)。或者，可以在添加药理学活性剂之前或之后将尺寸调节剂引入脂质溶液中。
可以使用任何合适的脂质来制备脂质卷。在一个实施方案中，脂质包括一种或更多种带负电荷的脂质。本文中所用的术语“带负电荷的脂质”包括在酸性、碱性或生理pH下的水溶液中具有携带形式负电荷的头基的脂质，并且还包括具有两性离子型头基的脂质。
脂质卷还可以包括不带负电荷的脂质(例如正性和/或中性脂质)。优选地，脂质卷包括显著量的带负电荷的脂质。在某些实施方案中，大部分脂质带负电荷。在一个实施方案中，脂质是脂质混合物，其包含至少50％带负电荷的脂质。在另一实施方案中，脂质包括至少75％带负电荷的脂质。在其它实施方案中，脂质包括至少85％、90％、95％或98％带负电荷的脂质。在还有其它实施方案中，脂质包括介于35％-70％、40％-70％、45％-65％、40％-60％、45％-55％或45％-50％带负电荷的脂质。
带负电荷的脂质可以包括基于大豆的脂质、基于其它豆类的脂质、基于蛋(egg-based)的脂质、基于牛的脂质或基于猪的脂质。优选地，脂质包括磷脂，如基于大豆的磷脂。带负电荷的脂质可以包括磷脂酰丝氨酸(PS)、二油酰基磷脂酰丝氨酸(DOPS)、磷脂酸(PA)、磷脂酰肌醇(PI)和/或磷脂酰甘油(PG)和/或这些脂质中的一种或更多种与其它脂质的混合物。此外或供选地，脂质可以包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、双磷脂酰甘油(DPG)、二油酰基磷脂酸(DOPA)、二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸(DSPS)、二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸(DMPS)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)等等。
3.药理学活性剂
脂质卷优选与药理学活性剂缔合或装载有药理学活性剂。例如，药理学活性剂可以选自以下类别之一：抗真菌药、抗菌药(包括但不限于β-内酰胺酶抑制剂)、抗病毒药、抗寄生虫药、抗原生动物药或驱蠕虫药、疫苗、抗炎剂、多核苷酸，包括但不限于siRNA、iRNA、反义疗法(RNA或DNA，单链或双链)、或基因疗法多核苷酸(整合DNA或DNA质粒)、免疫疗法、抗癌剂(包括抗肿瘤剂)、抗血脂异常剂、抗痴呆剂、营养补充剂、草药产品或维生素。
在某些实施方案中，脂质锚定多核苷酸、脂质锚定糖或脂质锚定多肽是药理学活性剂，包括例如当多核苷酸是能够抑制靶基因的表达的双链RNA时。
通过举例方式，抗真菌剂可以包括但不限于以下中的一种或更多种：多烯类抗真菌药(如制霉菌素、那他霉素、SPA-S-843、SPA-S-752、SPA-S-753或帕曲星A或帕曲星B)、棘球白素(如阿尼芬净、卡泊芬净、米卡芬净或biafungin)、唑类抗真菌药(如氟康唑、酮康唑、伏立康唑、泊沙康唑、艾沙康唑、联苯苄唑、布康唑、克霉唑、益康唑、芬替康唑、异康唑、卢立康唑、咪康唑、奥莫康唑、奥昔康唑、舍他康唑、硫康唑、噻康唑、阿巴康唑、艾氟康唑、氟环唑、伊曲康唑、丙环唑、雷夫康唑、特康唑或阿巴芬净)、萘醌(如阿托伐醌)、1,3D葡聚糖合成抑制剂(如安麻吩金(enfumafungin)或其衍生物(MK-3118或SCY-078))、14α-脱甲基酶抑制剂、或麦角甾醇生成抑制剂(如唑类抗真菌药或金属酶真菌CYP51抑制剂如VT-1161、VT-1129、VT-1598)。
通过举例方式，抗菌剂可以包括但不限于以下中的一种或更多种：蛋白合成抑制剂；30S起始抑制剂，如氨基糖苷类抗生素(包括链霉素、双氢链霉素、新霉素、新霉素B、巴龙霉素、核糖霉素、卡那霉素、阿米卡星、阿贝卡星、卡那霉素B、地贝卡星、妥布霉素、大观霉素、潮霉素B、巴龙霉素、庆大霉素、奈替米星、西索米星、异帕米星、威大霉素和阿司米星)；30S tRNA结合抗生素，如四环素类、甘氨酰环素类或氟环素类(fluorocyclines)(包括多西环素、金霉素、氯莫环素、地美环素、赖甲环素、甲氯环素、美他环素、米诺环素、土霉素、青哌环素、罗利环素、四环素、替加环素或eravacycline)；50S起始抑制剂，如噁唑烷酮类抗生素(包括依哌唑胺、利奈唑胺、泊西唑利德、雷得唑来、ranbezolid、sutezolid和特地唑胺)；肽基转移酶，如酰胺醇类或截短侧耳素类(包括氯霉素、叠氮氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、瑞他莫林、硫姆林和伐奈莫林)；转肽/易位抗生素，如大环内酯类、酮内酯类、氟酮内酯类、林可酰胺类或链阳性菌素类(包括阿奇毒素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、氟红霉素、交沙霉素、麦迪霉素、米欧卡霉素、竹桃霉素、罗他霉素(okitamycin)、罗红霉素、螺旋霉素、醋竹桃霉素、泰洛星、泰利霉素、塞红霉素、索利霉素、非达霉素、卡波霉素A、吉他霉素、克林霉素、林可霉素、吡利霉素、普那霉素、奎奴普丁、达福普汀和维吉霉素)；延伸因子抑制剂，如甾类抗菌药(包括夫西地酸)；肽聚糖合成/转肽酶抑制剂，如青霉素(包括天然青霉素，青霉素G和青霉素V；耐β-内酰胺酶青霉素，甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、氯唑西林和双氯西林；氨基青霉素，氨苄西林、阿莫西林、匹氨西林、海他西林、巴氨西林、美坦西林、酞氨西林和依匹西林；羧基青霉素，羧苄西林和替卡西林；脲基类青霉素，美洛西林和哌拉西林)或头孢菌素(包括头孢乙腈、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢来星、头孢洛宁、头孢噻啶、头孢噻吩、头孢匹林、头孢曲秦、头孢氮氟、头孢西酮、头孢唑林、头孢拉定、头孢沙定、头孢替唑、头孢克洛、头孢尼西、头孢丙烯、头孢呋辛、头孢唑南、头孢美唑、头孢替坦、头孢西丁、氯碳头孢、头孢拉宗、头孢美唑、头孢米诺、头孢替坦、头孢西丁、头孢替安、头孢卡品、头孢达肟、头孢地尼、头孢托仑、头孢他美、头孢克肟、头孢甲肟、头孢地秦、头孢噻肟、头孢维星、头孢咪唑、头孢泊肟、头孢特仑、ceftamere、头孢布烯、头孢噻呋、头孢噻林、头孢唑肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶、拉氧头孢、头孢克定、头孢吡肟、头孢瑞南、头孢噻利、头孢唑兰、头孢匹罗、头孢喹肟、氟氧头孢、头孢吡普、头孢洛林、头孢洛扎(ceftolozane)、头孢洛仑、头孢帕罗、头孢卡奈、头孢屈洛、头孢吡酮、头孢三唑、头孢维曲、头孢马替林、头孢氯铵(cefmepidium)、头孢噁唑、头孢罗替、头孢舒米、头孢噻氧、头孢呋汀和头孢硝噻吩)；青霉烯类或碳青霉烯(包括法罗培南、厄他培南、多利培南、亚胺培南、美罗培南、比阿培南和帕尼培南)；单环内酰胺(包括氨曲南、替吉莫南、卡芦莫南、诺卡杀菌素A)；糖肽抗生素(包括万古霉素、奥利万星、特拉万星、替考拉宁、达巴万星和雷莫拉宁)；β-内酰胺酶抑制剂(包括克拉维酸盐、舒巴坦、他唑巴坦和阿维巴坦)；其它抗生素(包括：磷霉素、环丝氨酸、杆菌肽、多粘菌素E、多粘菌素B、达托霉素、溶菌酶、短杆菌肽、异烟肼或泰斯巴汀)。
通过举例方式，抗病毒剂可以包括但不限于以下中的一种或更多种：DNA聚合酶抑制剂(如阿昔洛韦、泛昔洛韦、H2G、伐昔洛韦、更昔洛韦、西多福韦或brincidofovir)；脱壳抑制剂(如金刚烷胺和金刚乙胺)、病毒进入抑制剂(如恩夫韦地)、免疫反应调节剂(如咪喹莫特、瑞喹莫德或rardiquimod)、核苷类逆转录酶抑制剂(如齐多夫定或拉米夫定)或以下之一：索非布韦、雷迪帕韦、司美匹韦、奥比他韦、帕利瑞韦、利托那韦、阿巴卡韦、度鲁特韦、替诺福韦、恩曲他滨、埃替格韦、马拉韦罗、依法韦仑、利匹韦林、可比西他、福沙那韦、奈非那韦、地拉夫定、茚地那韦、雷特格韦、干扰素γ、利巴韦林、波普瑞韦、依法韦仑、恩替卡韦、达卡他韦、阿扎那韦。抗病毒剂还可以是任何HIV抗病毒剂。
通过举例方式，抗寄生虫剂、抗原生动物剂或驱蠕虫剂可以包括但不限于以下中的一种或更多种：苯并咪唑衍生物(如阿苯达唑、甲苯达唑、噻苯达唑、芬苯达唑、三氯苯达唑或氟苯达唑)、阿维菌素类似物或衍生物(如阿维菌素、阿巴克丁或伊维菌素)、乙胺嗪、苏拉明、双羟萘酸噻嘧啶、氯胍、左旋咪唑、水杨苯胺(如氯硝柳胺或羟氯柳苯胺)、吡喹酮、八缩肽(octadepsipeptide)(如emodepside)、萘醌(如阿托伐醌)、氨基乙腈衍生物(如莫奈太尔(monepantel))、螺环吲哚(spiroindole)(如得曲恩特)、或硫酸石榴皮碱。
通过举例方式，在一个实施方案中，抗炎剂可以包括但不限于以下中的一种或更多种：NSAID，包括属于以下类别中的一种或更多种的NSAID：水杨酸盐(酯)(如阿司匹林[乙酰水杨酸]、二氟尼柳、双水杨酯或水杨酸以及其它水杨酸盐(酯))、丙酸衍生物(如布洛芬、右布洛芬、萘普生、非诺洛芬、酮洛芬、右酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦或洛索洛芬)、乙酸衍生物(如吲哚美辛、托美丁、舒林酸、依托度酸、酮咯酸、双氯芬酸、醋氯芬酸或萘丁美酮)、烯醇酸(-昔康)衍生物(如吡罗昔康、美洛昔康、替诺昔康、屈噁昔康、氯诺昔康、伊索昔康或保泰松)、邻氨基苯甲酸衍生物(例如芬那酯(fenamate)，如甲芬那酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸或托芬那酸)、选择性COX-2抑制剂(如塞来考昔、罗非考昔、伐地考昔、帕瑞考昔、芦米考昔、依托考昔或非罗考昔)、磺酰苯胺(如尼美舒利)或其它(如氯尼辛、利克飞龙或H-哈帕苷)。
通过举例方式，在另一实施方案中，抗炎剂可以包括但不限于以下中的一种或更多种：皮质甾类(如氢化可的松、醋酸氢化可的松、醋酸可的松、替可的松新戊酸酯、泼尼松龙、甲泼尼龙、泼尼松、曲安奈德、曲安西龙醇(triamcinolone alcohol)、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、醋酸氟轻松、氟轻松、哈西奈德、倍他米松、倍他米松磷酸钠、地塞米松、地塞米松磷酸钠、氟可龙、氢化可的松-17-戊酸酯、卤米松、双丙酸阿氯米松、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、泼尼卡酯、氯倍他松-17-丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、己酸氟考龙、新戊酸氟考龙、醋酸氟甲叉龙、氢化可的松-17-丁酸酯、氢化可的松-17-醋丙酸酯、氢化可的松-17-丙丁酸酯、环索奈德、泼尼卡酯、氟尼缩松、糠酸氟替卡松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、二丙酸倍氯米松和布地奈德)、DMARD(如甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、环孢素、青霉胺、金诺芬、金硫丁二酸盐、米诺环素、羟氯喹、氯喹、柳氮磺吡啶、来氟米特、特立氟胺、美沙拉嗪或环磷酰胺)、对乙酰氨基酚、抗TNF剂(如阿达木单抗、英夫利昔、依那西普、培舍珠单抗)、大环内酯钙调磷酸酶抑制剂(如西罗莫司或他克莫司)、JAK-抑制剂(如托法替尼、鲁索替尼、巴瑞克替尼(LY3009104、INCB28050)、CYT387、Filgotinib(GLPG0634)、GSK2586184、来他替尼、Pacritinib(SB1518)、TG101348、JSI-124或CHZ868)、IL-6拮抗剂(如托珠单抗(tocilizumab或atlizumab))、抗CD20剂(如利妥昔单抗、奥妥珠单抗、替伊莫单抗、托西莫单抗、奥法木单抗、奥瑞珠单抗、TRU-015或IMMU-106[维妥珠单抗])、CD52-拮抗剂(如阿仑单抗)、α-4整合素拮抗剂(如那他珠单抗)、II型拓扑异构酶抑制剂(如米托蒽醌)、鞘氨醇-1-磷酸受体调节剂(如芬戈莫德、拉喹莫德、奥扎莫德或ponesimod)、β-干扰素，或下列试剂或它们的功能类似物之一：醋酸格拉替雷或富马酸二甲酯。
4.药物组合物
本文中描述的脂质卷可以制备为药物组合物。适于本文中公开的药物组合物的制剂形式包括例如片剂、胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、散剂、混悬剂、乳剂、微乳剂、纳米乳剂、单位剂型、环、膜、栓剂、溶液、霜剂、糖浆剂、透皮贴剂、软膏剂和凝胶剂。
药物组合物可以包括其它药学上可接受的赋形剂如各种pH和离子强度的缓冲剂(例如Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)；添加剂如白蛋白或明胶，以防止吸附到表面上；蛋白酶抑制剂；渗透促进剂；增溶剂(例如甘油、聚乙烯甘油(polyethylene glycerol))；抗氧化剂(例如抗坏血酸、焦亚硫酸钠、丁羟茴醚)；稳定剂(例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素)；增粘剂(例如卡波姆、胶态二氧化硅、乙基纤维素、瓜尔胶)；甜味剂(例如阿斯巴甜、柠檬酸)；防腐剂(例如硫柳汞、苄醇、对羟苯甲酸酯)；助流剂(例如胶态二氧化硅)；增塑剂(例如邻苯二甲酸二乙酯、柠檬酸三乙酯)；乳化剂(例如卡波姆、羟丙基纤维素、月桂基硫酸钠)；聚合物包衣(例如泊洛沙姆或泊洛沙胺、醋酸琥珀羟丙甲纤维素)；包衣和膜形成剂(例如乙基纤维素、丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、醋酸琥珀羟丙甲纤维素)；佐剂；用于液体制剂的药学上可接受的载体，如水溶液(水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质)或非水溶液(例如丙二醇、聚乙二醇和可注射的有机酯如油酸乙酯)、悬浮液、乳液或油；以及肠胃外载体(用于皮下、静脉内、动脉内或肌肉内注射)，包括但不限于氯化钠溶液、林格氏葡萄糖(Ringer’s dextrose)、葡萄糖氯化钠、乳酸林格氏液(lactatedRinger’s)和固定油。
这些赋形剂通过举例方式提供，并且本领域技术人员将知晓将存在可以提供与本文中所列举的那些相同的化学特征的其它或不同的赋形剂。
5.剂量和施用
将本文中公开的包含脂质卷的药物组合物配制成与其预期施用途径相容。实现该施用的方法是本领域普通技术人员已知的。这包括例如注射，通过肠胃外途径，如静脉内、血管内、动脉内、皮下、肌肉内、腹膜内、心室内、硬膜内(intraepidural)或其它以及经口、经鼻、经眼、经直肠或局部。
在一个实施方案中，口服施用脂质卷，例如通过施用混悬剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂或其它口服剂型。在其它实施方案中，通过输注或注射进入血流、眼睛、腹腔、进入肌肉或皮下在胃肠外施用脂质卷包封的药物。在还有其它实施方案中，局部施用脂质卷包封的药物，如滴在眼睛上、滴入耳朵、或以诸如贴剂(层型或储库型贴剂)、霜剂、软膏剂或混悬剂的各种形式施加到皮肤、脚趾甲/手指甲或生殖器部位，或作为肛门栓剂。
具有通过本文中所述脂质卷所提供的显著提高的组织穿透力，现在将可能提供较低的每日剂量的药理学活性剂并仍获得该药理学活性剂的药学上有效的水平。
与相同药物的非脂质卷包封形式的口服施用或甚至此类药物的可注射形式相比，脂质卷包封的药物的靶向递送显著限制了进入血流的吸收，并导致施加的脂质卷包封的药物向靶组织(通常是发炎、感染、创伤或快速生长/癌性组织)中令人惊讶的快速渗透。
在一些实施方案中，通过脂质卷递送的药理学活性剂(或其代谢物)的组织水平高于在相同受试者或受试者组中测定的该药理学活性剂(或其代谢物)的血液/血浆/血清水平。在实施方案中，口服施用脂质卷组合物后药理学活性剂的组织水平是血浆水平的至少50％、或者至少60％、或者至少70％、或者至少75％、或者至少80％、或者至少90％、或者至少100％、或者至少110％、或者至少120％、或者至少125％、或者至少130％、或者至少140％、或者至少150％、或者至少200％、或者至少500％、或者至少600％、或者至少750％、或者至少1000％。在一个实施方案中，口服施用脂质卷组合物后药理学活性剂的组织水平是该药理学活性剂的血浆水平的2倍。在另一实施方案中，药理学活性剂特别排除两性霉素B。
在一些实施方案中，通过脂质卷递送的药理学活性剂(或其代谢物)的组织水平高于由相同药理学活性剂(或其代谢物)的非脂质卷包封的递送所获得的组织水平。由此，在一些实施方案中，脂质卷包封的药物比相同药物的非脂质卷包封形式(version)更早消退医学病症。
然而非脂质卷包封的药物的散播通常主要是吸收、消散、迁移、代谢和排泄过程的结果，这些过程在健康受试者vs.患病受试者中通常相似，对于脂质卷包封的药物通常并非如此。结果，当用脂质卷包封的药物治疗时，与患病受试者(患有医学病症的受试者)相比在健康受试者中组织水平和清除过程不同地发展。
在一些实施方案中，通过脂质卷递送至患有医学病症的受试者的药理学活性剂(或其代谢物)的组织水平高于施用相同的脂质卷包封的药物后健康受试者的对比组织中该药理学活性剂(或其代谢物)的水平。在某些实施方案中，在经由脂质卷向患有医学病症的受试者施用后24小时处药理学活性剂(或其代谢物)的组织水平与通过脂质卷向健康受试者施用后24小时(或者48小时或72小时)处药理学活性剂(或其代谢物)的组织水平相比高至少25％、或者高至少50％、或者高至少100％、或者高至少150％、或者高至少200％、或者高至少250％、或者高至少300％、或者高至少350％、或者高至少400％、或者高至少500％、或者高至少600％、或者高至少700％、或者高至少800％、或者高至少1000％。在一个实施方案中，药理学活性剂特别排除两性霉素B。
在其它实施方案中，当用相同的脂质卷包封的药物治疗时，患有医学病症的一个或更多个受试者中该药物的血液/血浆/血清水平低于在健康受试者中该药物的血液/血浆/血清水平。在还有其它实施方案中，当用相同的脂质卷包封的药物治疗时，患有医学病症的一个或更多个受试者中该药物的尿水平低于在健康受试者中该药物的尿水平。
由此，脂质卷包封的药物在靶组织(例如感染或发炎组织)中的水平与血浆中的脂质卷包封的药物的水平或来自健康受试者的组织中的脂质卷包封的药物的水平或非脂质卷包封的药物的组织水平相比明显更高。
药理学活性剂的组织水平可以在一系列的组织、器官和体液中测定，包括但不限于：肾脏、肺、痰、肝脏、脑、脊柱、脊髓液、神经、脾脏、心脏、胸腺、淋巴结、动脉壁、胰腺、胆囊、前列腺、卵巢、子宫、女性乳腺、睾丸、甲状腺、肾上腺、下丘脑、脑下垂体、眼、耳、肠、膀胱、尿、肌肉、皮肤、白细胞、骨、软骨、关节组织、滑液、脂肪组织或肿瘤以及各种形式的癌/肿瘤组织。
在某些实施方案中，基于某些时间点的组织浓度、最大组织浓度(Cmax)和/或在规定时间内的累积组织浓度(AUC)来确定药理学活性剂(或其代谢物)的组织穿透力和组织水平。在某些实施方案中，在施用后第一天内观察到明显更高的组织水平，证明了施用的脂质卷包封的药物快速渗透到靶组织中。在其它实施方案中，在最初2天内、或者在施用后最初3天内、或者在施用后最初5天内、或者在施用后最初7天内、或者在施用后最初10天内、或者在施用后最初15天内、或者在施用后最初30天内观察到这些更高的组织水平。在还有其它实施方案中，在第1天、或者在第2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、15、20、25天、或在第30天观察到更高的组织水平。在一个实施方案中，药理学活性剂特别排除两性霉素B。
虽然脂质卷包封的药物在治疗周期早期更快速地渗透靶组织，并在药理学干预的早期阶段获得更高的组织水平，随着由此实现的受治疗的医学病症的较早消退，组织水平将比使用非脂质卷包封的药物的对比治疗更早下降。在一些实施方案中，在用脂质卷包封的药物治疗后期阶段更适度的组织水平导致更低的毒性和更好的敏感器官与组织的功能性，由此改善了治疗受试者的生存前景与健康。
在一些实施方案中，与使用该药物的非脂质卷包封形式的治疗相比，与开始消退医学病症相关的此类较低水平在用脂质卷包封的药物治疗开始后3天内变得显而易见。或者，在其它实施方案中，与使用该药物的非脂质卷包封形式的治疗相比，与开始消退医学病症相关的此类较低组织水平在用脂质卷包封的药物治疗开始后5天内、或者7天内、或者10天内、或者15天内、或者20天内、或者30天内、或者50天内变得显而易见。在一个实施方案中，药理学活性剂特别排除两性霉素B。
6.治疗方法
本文中所述的脂质卷可以在治疗存在可以用药理学活性剂治疗的疾病的风险(或对该疾病易感)或患有该疾病的受试者的方法中使用。将受益于药物活性剂的任何治疗适应证都可以使用本文中描述的脂质卷来治疗。治疗适应证包括但不限于细菌、真菌、病毒或寄生虫感染、与自身免疫或其它病症相关的炎症、创伤消退、或癌症和肿瘤病症缓解。
在某些实施方案中，该方法包括向受试者施用包含药理学活性剂和尺寸降低剂的脂质卷。本发明的脂质卷和脂质卷组合物可以经口、经鼻、局部、静脉内、透皮、口腔、舌下、直肠、阴道或肠胃外施用。在优选实施方案中，脂质卷口服施用。受试者是人或非人动物，如狗、猫和家畜。在优选实施方案中，受试者是人。
实施例
上面提供的实例仅用于说明目的。本领域技术人员将能够容易地确定适当的方法和装置以制造如本文中所述的合适的固体分散体形式。
实施例1：用脂质锚定多核苷酸调节脂质卷的粒度
将siRNA共价偶联到脂质锚上。该siRNA是具有21个核苷酸的双链RNA分子，在每个3’末端处具有2个核苷酸突出端。该siRNA对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是特异性的。有义链具有序列ACCCUGAAGUUCAUCUGCACC(SEQ ID NO:1)，而反义链具有序列ACUGGGACUUCAAGUAGACGU(SEQ ID NO:2)。将该siRNA共价结合到各种脂质锚上，包括含有或不含有S18的棕榈酸酯、含有或不含有S18的胆固醇、含有或不含有S18的维生素E(外消旋的)或含有或不含有S18的维生素EL(维生素E的L-异构体)。S18是具有下式的18个原子的六乙二醇间隔区：
脂质锚定siRNA还包括荧光Cy3染料。将在水溶液中的脂质锚定siRNA加入脂质体的悬浮液中，接着向siRNA-脂质体复合物中加入钙以形成脂质卷。脂质体由DOPS(二油酰基磷脂酰丝氨酸，99.9％纯度)或DOPS加10％(重量：重量)的胆固醇组成。使用相位对比和荧光显微镜来评估在脂质体、脂质卷和“打开的脂质卷”(EDTA加入后)阶段处的siRNA-脂质卷制剂的形态。
使用光子相关光谱(Photon Correlation Spectroscopy)亚微米粒度分析仪测量脂质卷的粒度。将样品在90°的角度下在22℃下以200秒的运行时间运行通过该分析仪。稀释剂是含有4mM钙的水溶液。
平滑的脂质卷因其疏水性表面而在水溶液中聚集。由此，不含siRNA的对照物脂质卷在添加钙后形成大的脂质卷聚集体(数据未显示)。不含脂质锚定多核苷酸的对照物脂质卷的平均粒度为大约85-115μm。用不同的脂质锚定多核苷酸形成的脂质卷的平均粒度大约是对照物脂质卷的1/100-1/200，如下表中所示。
脂质锚定多核苷酸 平均尺寸(nm) 平均SD(nm)
EGFP-VEL 714.8 465.6
EGFP-VEL+CH 759.8 331.3
EGFP-VEL+S18 449.7 327.6
EGFP-VEL+S18+CH 443.9 336.0
EGFP-VE 496.0 335.9
EGFP-VE+CH 667.7 389.2
EGFP-VE+S18 399.9 284.7
EGFP-VE+S18+CH 1453.1 1077.1
PMA1-1I+CH 3000.0 173.0
EGFP-1Pa1+CH 758.3 216.6
CH表示在脂质双层中用胆固醇制备脂质卷。
实施例2：降低用脱氧胆酸盐制备的两性霉素B脂质卷的粒度
制备含有两性霉素B和不同量的脱氧胆酸盐的脂质卷(CAmB)。为了制备在最终产物中含有0.45毫克/毫升脱氧胆酸盐的CAmB，将0.5毫升50mM NaOH溶液中的20毫克两性霉素B与10毫升50mM磷酸盐缓冲液中的100毫克50％大豆磷脂酰丝氨酸脂质体(该大豆PS脂质体经5、0.8和0.45微米过滤器过滤)混合以形成含有两性霉素B的脂质体。将1.2微升醇中的120微克维生素E添加到该AmB脂质体中。为了使两性霉素B脂质卷晶体的粒度更小，随后向该两性霉素B脂质体混合物中添加在83微升无菌水中的5.0毫克脱氧胆酸盐。随后在剧烈混合下向所得混合物中添加0.378毫升1M氯化钙溶液以形成两性霉素B脂质卷。该脂质卷中脂质与两性霉素B的比率为5:1，且它们在最终产物中含有0.45毫克/毫升脱氧胆酸盐。
为了制备在最终产物中含有0.9毫克/毫升脱氧胆酸盐的CAmB，将0.5毫升50mMNaOH溶液中的20毫克两性霉素B与10毫升50mM磷酸盐缓冲液中的100毫克50％大豆PS脂质体(该大豆PS脂质体经5、0.8和0.45微米过滤器过滤)混合以形成含有两性霉素B的脂质体。将1.2微升醇中的120微克维生素E添加到该AmB脂质体中。为了使两性霉素B脂质卷晶体的粒度更小，随后向该两性霉素B脂质体混合物中添加在167微升无菌水中的10毫克脱氧胆酸盐。随后在剧烈混合下向所得混合物中添加0.378毫升1M氯化钙溶液以形成两性霉素B脂质卷。该脂质卷中脂质与两性霉素B的比率为5:1，且它们在最终产物中含有0.9毫克/毫升脱氧胆酸盐。
为了制备在最终产物中含有1.79毫克/毫升脱氧胆酸盐的CAmB，将0.5毫升50mMNaOH溶液中的20毫克两性霉素B与10毫升50mM磷酸盐缓冲液中的100毫克50％大豆PS脂质体(该大豆PS脂质体经5、0.8和0.45微米过滤器过滤)混合以形成含有两性霉素B的脂质体。将1.2微升醇中的120微克维生素E添加到该AmB脂质体中。为了使两性霉素B脂质卷晶体的粒度更小，随后向该两性霉素B脂质体混合物中添加在0.33毫升无菌水中的20毫克脱氧胆酸盐。随后在剧烈混合下向所得混合物中添加0.378毫升1M氯化钙溶液以形成两性霉素B脂质卷。该脂质卷中脂质与两性霉素B的比率为5:1，且它们在最终产物中含有1.79毫克/毫升脱氧胆酸盐。
为了制备在最终产物中含有2.5毫克/毫升脱氧胆酸盐的CAmB，将0.5毫升50mMNaOH溶液中的20毫克两性霉素B与10毫升50mM磷酸盐缓冲液中的100毫克50％大豆PS脂质体(该大豆PS脂质体经5、0.8和0.45微米过滤器过滤)混合以形成含有两性霉素B的脂质体。将1.2微升醇中的120微克维生素E添加到该AmB脂质体中。为了使两性霉素B脂质卷晶体的粒度更小，随后向该两性霉素B脂质体混合物中添加在0.5毫升无菌水中的30毫克脱氧胆酸盐。随后在剧烈混合下向所得混合物中添加0.378毫升1M氯化钙溶液以形成两性霉素B脂质卷。该脂质卷中脂质与两性霉素B的比率为5:1，且它们在最终产物中含有2.5毫克/毫升脱氧胆酸盐。
为了制备在最终产物中含有3.4毫克/毫升脱氧胆酸盐的CAmB，将0.5毫升50mMNaOH溶液中的20毫克两性霉素B与10毫升50mM磷酸盐缓冲液中的100毫克50％大豆PS脂质体(该大豆PS脂质体经5、0.8和0.45微米过滤器过滤)混合以形成含有两性霉素B的脂质体。将1.2微升醇中的120微克维生素E添加到该AmB脂质体中。为了使两性霉素B脂质卷晶体的粒度更小，随后向该两性霉素B脂质体混合物中添加在0.67毫升无菌水中的40毫克脱氧胆酸盐。随后在剧烈混合下向所得混合物中添加0.378毫升1M氯化钙溶液以形成两性霉素B脂质卷。该脂质卷中脂质与两性霉素B的比率为5:1，且它们在最终产物中含有3.4毫克/毫升脱氧胆酸盐。
为了制备在最终产物中含有4.3毫克/毫升脱氧胆酸盐的CAmB，将0.5毫升50mMNaOH溶液中的20毫克两性霉素B与10毫升50mM磷酸盐缓冲液中的100毫克50％大豆PS脂质体(该大豆PS脂质体经5、0.8和0.45微米过滤器过滤)混合以形成含有两性霉素B的脂质体。将1.2微升醇中的120微克维生素E添加到该AmB脂质体中。为了使两性霉素B脂质卷晶体的粒度更小，随后向该两性霉素B脂质体混合物中添加在0.83毫升无菌水中的50毫克脱氧胆酸盐。随后在剧烈混合下向所得混合物中添加0.378毫升1M氯化钙溶液以形成两性霉素B脂质卷。该脂质卷中脂质与两性霉素B的比率为5:1，且它们在最终产物中含有4.3毫克/毫升脱氧胆酸盐。
为了制备在最终产物中含有5毫克/毫升脱氧胆酸盐的CAmB，将0.5毫升50mM NaOH溶液中的20毫克两性霉素B与10毫升50mM磷酸盐缓冲液中的100毫克50％大豆PS脂质体(该大豆PS脂质体经5、0.8和0.45微米过滤器过滤)混合以形成含有两性霉素B的脂质体。将1.2微升醇中的120微克维生素E添加到该AmB脂质体中。为了使两性霉素B脂质卷晶体的粒度更小，随后向该两性霉素B脂质体混合物中添加在1.0毫升无菌水中的60毫克脱氧胆酸盐。随后在剧烈混合下向所得混合物中添加0.378毫升1M氯化钙溶液以形成两性霉素B脂质卷。该脂质卷中脂质与两性霉素B的比率为5:1，且它们在最终产物中含有5毫克/毫升脱氧胆酸盐。
为了制备在最终产物中不含脱氧胆酸盐的CAmB，将0.5毫升50mM NaOH溶液中的20毫克两性霉素B与10毫升50mM磷酸盐缓冲液中的100毫克50％大豆PS脂质体(该大豆PS脂质体经5、0.8和0.45微米过滤器过滤)混合以形成含有两性霉素B的脂质体。将1.2微升醇中的120微克维生素E添加到该AmB脂质体中。随后在剧烈混合下向所得混合物中添加0.378毫升1M氯化钙溶液以形成两性霉素B脂质卷。该脂质卷中脂质与两性霉素B的比率为5:1。
使用亚微米粒度分析仪测量脂质卷的粒度。令人惊讶地，当脱氧胆酸盐用于制备含有两性霉素B的脂质卷时，有可能将粒度降低至8.7微米(平均)或7.8微米(中值)，是不使用脱氧胆酸盐制备的两性霉素B脂质卷的大约1/2-1/3。这也是使用脱氧胆酸盐制备的阿米卡星脂质卷的粒度的低于1/10(参见实施例3)。
实施例3：用脱氧胆酸盐制备的阿米卡星脂质卷的粒度分析
为了制备阿米卡星脂质卷，经0.22微米过滤器过滤0.2毫升无菌水中的2毫克阿米卡星并将其与2.0毫升无菌水中的20毫克50％大豆PS脂质体(该大豆PS脂质体悬浮液首先经5、0.8和0.45微米过滤器过滤)混合以形成含有阿米卡星的脂质体。在制备脂质卷的过程中在不同时刻添加脱氧胆酸盐：添加阿米卡星之前、添加钙之前、添加钙之后、或在各个步骤处，如下表中所示。随后在剧烈混合下向所得混合物中加入0.159毫升0.1M氯化钙以形成阿米卡星脂质卷。还制备了不含阿米卡星的对照物脂质卷(安慰剂)并在钙之前加入脱氧胆酸盐。制备了具有阿米卡星且不具有脱氧胆酸盐或不具有阿米卡星且不具有脱氧胆酸盐的其它对照物脂质卷。使用亚微米粒度分析仪测量脂质卷的粒度。
阿米卡星脂质卷形成大的聚集体，并且在不添加脱氧胆酸盐的情况下尺寸平均为大约50-80微米，这取决于脂质与阿米卡星的比率和最终pH。令人惊讶地，向大的阿米卡星脂质卷中添加脱氧胆酸盐不会降低它们的尺寸，而是实际上将它们的尺寸提高至平均大约85-117微米，这取决于何时加入脱氧胆酸盐。如上所述，用脱氧胆酸盐制备的两性霉素B脂质卷的粒度是用脱氧胆酸盐制备的阿米卡星脂质卷的粒度的大约至多1/10。
实施例4：在患有系统性念珠菌病的小鼠中在口服给药脂质卷包封的两性霉素B(CAmB)后的药代动力学(PK)和生物分布(BD)
两性霉素B脱氧胆酸盐(DAmB)因其广谱活性和有限的抗性而在抗真菌治疗中被视为“黄金标准”。但是，使用DAmb及其衍生物受到显著的毒性和静脉内施用的限制。CAmB是设计用于将两性霉素(AmB)靶向口服递送至感染组织而不具有相关毒性的脂质晶体纳米粒子制剂。
在第0天用5×105个白色念珠菌细胞感染65只BALB/c小鼠。感染后24小时，用对照物、DAmB 2毫克/千克(腹膜内)或CAmB 10毫克/千克(口服)治疗小鼠直至14天。未治疗和未感染的小鼠的组用作空白对照物。在第1、3、5、7、11和15天，处死来自各治疗组的5只小鼠。收集血浆和组织用于分析AmB浓度。
血浆中AmB的浓度在61％的CAmB样品和44％的DAmB样品中检测不到，各组之间血浆水平没有显著差异。但是，在组织(肝、肺、肾脏)中，在所有样品中看见可量化的AmB水平(图4-6)，其中CAmB在24小时内达到0.25μg/ml的最小抑菌浓度(MIC)，而DAmB花费3-5天达到MIC。在有效剂量下，CAmB的组织水平保持在MIC的2-3倍，而DAmB在治疗的第二周期间导致组织水平提高至MIC的4-40倍。
在感染念珠菌的小鼠中，口服施用的CAmB从胃肠道被迅速吸收，导致组织浓度在24小时之前在MIC水平以上。相比之下，护理标准，腹膜内施用的DAmB花费大约72小时达到MIC。此外，在腹膜内施用DAmB后AmB的组织浓度甚至在施用后2周仍持续升高至远在MIC以上的水平，引起毒性担忧。相比之下，口服CAmB在治疗的第一天期间迅速在组织中积累之后，在治疗的第二周期间持平而不升高至高水平，减轻了不需要的副作用和毒性。
还以较低剂量(0.5毫克/千克)用口服的脂质卷包封的两性霉素B治疗感染念珠菌的小鼠，并与以1毫克/千克和2毫克/千克腹膜内施用DAmB的感染小鼠进行比较。与1毫克/千克和2毫克/千克下的DAmB相比，脂质卷包封的两性霉素B在明显较低的剂量下显示出改善的功效(研究持续期内存活率100％)。
实施例5：比较健康动物vs.感染动物中的组织水平
在一系列的剂量(包括15毫克/千克)下进行28天的两性霉素B脂质卷在健康的SD大鼠和狗中的毒理学研究。在第28天测定这些大鼠和狗的组织水平(肺、肾脏、肝脏)、血浆水平和尿水平，并与实施例4中用两性霉素B脂质卷治疗14天的小鼠的那些数据进行比较。
感染小鼠的肺、肝脏和肾脏中两性霉素B的水平是健康大鼠和狗的这些相同组织中的两性霉素B水平(均远在白色念珠菌的MIC水平以下)的至少5-10倍(并在治疗白色念珠菌感染所需的MIC水平以上)(图8)。相比之下，感染小鼠中两性霉素B的尿和血浆水平在检测水平以下(BLD)，而血浆水平且特别是尿水平在健康的大鼠和狗中是可测量的并且要高得多(图8)。由此，感染受试者中脂质卷包封的药物(如两性霉素B)的药代动力学与健康受试者中脂质卷包封的药物(如两性霉素B)的药代动力学非常不同，其中脂质卷包封的药物在感染的组织中以高得多的水平集中(concentrating)，但在健康动物中并非如此。
实施例6：肺孢子虫小鼠模型中脂质卷包封的阿托伐醌(eATQ)的药代动力学和功效阿托伐醌(ATQ)是用于预防和治疗肺孢子虫性肺炎(PCP)和弓形体病的替代药剂。小分子阿托伐醌受困于患者耐受性差、可饱和吸收以及非线性药代动力学的临床限制。我们制备了ATQ脂质卷并研究了脂质卷包封的ATQ在感染小鼠源肺孢子虫(Pneumocystis murina)的免疫减弱小鼠中的生物分布、药代动力学(PK)和功效。
用地塞米松使小鼠免疫减弱，并用小鼠源肺孢子虫感染小鼠。在PK研究中，经由经口灌胃用eATQ 100毫克/千克治疗小鼠，接着在给药后第0(基线)、2、4、8、10、12、24、48、72和96小时(n＝30，每个时间点3只)处死并收集血液和肺组织。在治疗研究中，经由经口灌胃各自用以下之一持续7、14和21天每天治疗小鼠：eATQ 50毫克/千克、eATQ 100毫克/千克、阿托伐醌悬浮液100毫克/千克、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶3/100毫克/千克、或载体对照物(n＝138，8-10只/组)。处死小鼠，并将肺部加工用于肺孢子虫子囊和核的显微镜计数。
最大浓度(Cmax)和曲线下面积(AUC)的几何平均在肺中比在血浆中分别高18％和44％(图9)。在血浆中的半衰期为10-12小时，而在肺中为15-17小时，且两者的Tmax均为12小时(图9)。与载体对照物(C/S)相比，在所有三个时间点的100毫克/千克剂量和50毫克/千克剂量两者的核和子囊计数均显著降低，除了第7天50毫克/千克组中核计数vs.C/S之外(图10A-F)。在所有时间点处在两种剂量之间存在一致的剂量反应(图10A-F)。所有治疗组在第14天和第21天时间点处显示出相对于载体对照物(C/S)在存活率方面的显著改善(图11A-C)。在研究过程期间没有观察到明显毒性。
脂质卷包封的ATQ成功地治疗了小鼠中的PCP，并显示出比市售用于治疗PCP的阿托伐醌制剂明显表现更好。
虽然已经参照其优选实施方案特别显示和描述了本发明，但是本领域技术人员将理解在不偏离所附权利要求书涵盖的本发明的范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种改变。
序列表
<110> 马丁尼斯生物制药纳米技术公司
<120> 脂质卷以及使用其增强药理学活性剂的组织穿透力的方法
<130> 0200.0002-PCT
<140>
<141>
<150> 62/264,164
<151> 2015-12-07
<150> 62/247,641
<151> 2015-10-28
<150> 62/239,675
<151> 2015-10-09
<150> 62/163,212
<151> 2015-05-18
<150> 62/162,425
<151> 2015-05-15
<150> 62/127,799
<151> 2015-03-03
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成寡核苷酸
<400> 1
acccugaagu ucaucugcac c 21
<210> 2
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成寡核苷酸
<400> 2
acugggacuu caaguagacg u 21

Claims (15)

1.一种脂质卷组合物，所述组合物包含多个脂质卷，所述脂质卷包含至少一种带负电荷的磷脂、多价阳离子、药理学活性剂、以及选自脂质锚定多核苷酸、脂质锚定糖、脂质锚定多肽和胆汁盐如氧胆酸盐或脱氧胆酸盐的尺寸调节剂。
2.权利要求1所述的脂质卷组合物，其中所述多个脂质卷的平均粒度为小于10微米。
3.权利要求2所述的脂质卷组合物，其中所述多个脂质卷的平均粒度为小于1微米。
4.权利要求3所述的脂质卷组合物，其中所述多个脂质卷的平均粒度介于400-800纳米。
5.前述权利要求中任一项所述的脂质卷，其中所述多个脂质卷的平均粒度是不使用所述尺寸调节剂制备的脂质卷的平均粒度的1/2-1/3。
6.一种脂质卷组合物，所述组合物包含多个包含至少一种带负电荷的磷脂、多价阳离子和药理学活性剂的脂质卷，其中向具有感染或发炎组织的哺乳动物口服施用所述脂质卷组合物导致相对于血浆中的所述药理学活性剂水平在所述感染或发炎组织中更高的所述药理学活性剂水平。
7.前述权利要求中任一项所述的脂质卷组合物，其中在口服施用所述脂质卷组合物后所述药理学活性剂的所述组织水平是所述药理学活性剂的所述血浆水平的至少2倍。
8.前述权利要求中任一项所述的脂质卷组合物，其中向受试者口服施用所述脂质卷组合物后24小时在感染或发炎组织中所述药理学活性剂的所述组织水平是向健康受试者口服施用后24小时的所述药理学活性剂的所述组织水平的至少1.5倍。
9.前述权利要求中任一项所述的脂质卷组合物，其中所述组织选自肾脏、肺、痰、肝脏、脑、脊柱、脊髓液、神经、脾脏、心脏、胸腺、淋巴结、动脉壁、胰腺、胆囊、前列腺、卵巢、子宫、睾丸、甲状腺、肾上腺、下丘脑、脑下垂体、眼、耳、肠、膀胱、肌肉、皮肤、白细胞、骨、软骨、关节组织、滑液和脂肪组织。
10.前述权利要求中任一项所述的脂质卷组合物，其中所述药理学活性剂选自抗真菌药、抗菌药，包括但不限于β-内酰胺酶抑制剂、抗病毒药、抗寄生虫药、抗原生动物药或驱蠕虫药、疫苗、抗炎剂、多核苷酸，包括但不限于siRNA、iRNA、反义疗法或基因疗法多核苷酸、免疫疗法、抗癌剂、抗血脂异常剂、抗痴呆剂、营养补充剂、草药产品和维生素。
11.前述权利要求中任一项所述的脂质卷组合物，其中所述多价阳离子是二价金属阳离子，如钙、锌、镁或钡。
12.权利要求11所述的脂质卷组合物，其中所述二价金属阳离子是钙。
13.前述权利要求中任一项所述的脂质卷组合物，其中所述至少一种带负电荷的磷脂以所述脂质卷组合物的磷脂总含量的大约20%-80%、或者30%-70%、或者40%-60%、或者45%-55%的量存在。
14.一种治疗需要其的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用前述权利要求中任一项所述的脂质卷组合物。
15.一种相对于血浆中的药理学活性剂浓度提高感染组织中的所述药理学活性剂浓度的方法，其中所述方法包括向具有所述感染组织的受试者口服施用权利要求1-13中任一项所述的脂质卷组合物，其中所述药理学活性剂的浓度比向所述受试者口服施用所述脂质卷组合物后24小时所述血浆中的所述药理学活性剂浓度至少高25%(1.25x)、或者至少高50%(1.5x)、或者至少高100%(2x)、或者至少高150%、或者至少高200%、或者至少高250%、或者至少高300%、或者至少高350%、或者至少高400%、或者至少高500%、或者至少高600%、或者至少高700%、或者至少高800%、或者至少高1000%(11x)。
CN201680026006.3A 2015-03-03 2016-03-03 脂质卷以及使用其增强药理学活性剂的组织穿透力的方法 Pending CN107847443A (zh)

Applications Claiming Priority (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562127799P 2015-03-03 2015-03-03
US62/127799 2015-03-03
US201562162425P 2015-05-15 2015-05-15
US62/162425 2015-05-15
US201562163212P 2015-05-18 2015-05-18
US62/163212 2015-05-18
US201562239675P 2015-10-09 2015-10-09
US62/239675 2015-10-09
US201562247641P 2015-10-28 2015-10-28
US62/247641 2015-10-28
US201562264164P 2015-12-07 2015-12-07
US62/264164 2015-12-07
PCT/US2016/020722 WO2016141203A1 (en) 2015-03-03 2016-03-03 Cochleates and methods of using the same to enhance tissue penetration of pharmacologically active agent

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107847443A true CN107847443A (zh) 2018-03-27

Family

ID=56848705

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680026006.3A Pending CN107847443A (zh) 2015-03-03 2016-03-03 脂质卷以及使用其增强药理学活性剂的组织穿透力的方法

Country Status (8)

Country Link
US (1) US11389407B2 (zh)
EP (1) EP3265060B1 (zh)
JP (1) JP6770524B2 (zh)
KR (1) KR20180004104A (zh)
CN (1) CN107847443A (zh)
AU (1) AU2016226151B2 (zh)
CA (1) CA2978308C (zh)
WO (1) WO2016141203A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019199238A1 (en) * 2018-04-09 2019-10-17 Vet Products Research And Innovation Center Company Limited Inorganic mineral entrapped in nanoparticle production method thereof

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3076336A1 (en) * 2017-09-20 2019-03-28 Atopic Medical, LLC Compositions and methods for treating and ameliorating respiratory conditions and inflammation of mucosa
CN107621514B (zh) * 2017-11-10 2020-09-29 成都美域高制药有限公司 高效液相色谱法测定磷酸特地唑胺对映异构体含量的方法
KR101989789B1 (ko) * 2017-11-30 2019-06-18 (주) 에이치엔에이파마켐 포스파티딜세린/음이온계면활성제/염화칼슘을 이용한 코킬레이트
MX2022001871A (es) * 2019-08-13 2022-03-11 Matinas Biopharma Nanotechnologies Inc Metodos de tratamiento de las infecciones por criptococo.
WO2024039733A1 (en) * 2022-08-16 2024-02-22 Matinas Biopharma Nanotechnologies, Inc. Methods of controlling lipid nanocrystal particle size and lipid nanocrystals produced by such methods

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4871488A (en) * 1985-04-22 1989-10-03 Albany Medical College Of Union University Reconstituting viral glycoproteins into large phospholipid vesicles
US20030219473A1 (en) * 2002-03-26 2003-11-27 Leila Zarif Cochleates made with purified soy phosphatidylserine
CN101291653B (zh) * 2003-07-16 2012-06-27 普洛体维生物治疗公司 脂质包封的干扰rna
US20120178793A1 (en) * 2004-04-09 2012-07-12 Biodelivery Sciences International, Inc. Nucleotide-cochleate compositions and methods of use
WO2014022414A1 (en) * 2012-07-30 2014-02-06 Coordinated Program Development, Llc Cochleates made with soy phosphatidylserine

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5994318A (en) 1993-10-04 1999-11-30 Albany Medical College Cochleate delivery vehicles
US5643574A (en) 1993-10-04 1997-07-01 Albany Medical College Protein- or peptide-cochleate vaccines and methods of immunizing using the same
US6153217A (en) 1999-01-22 2000-11-28 Biodelivery Sciences, Inc. Nanocochleate formulations, process of preparation and method of delivery of pharmaceutical agents
WO2004012709A1 (en) 2002-08-06 2004-02-12 Tuo Jin Cochleates without metal cations as the bridging agents
US20050008686A1 (en) 2003-01-15 2005-01-13 Mannino Raphael J. Cochleate preparations of fragile nutrients
EP1631669A2 (en) 2003-04-09 2006-03-08 Biodelivery Sciences International, Inc. Cochleate compositions directed against expression of proteins
US20050013854A1 (en) * 2003-04-09 2005-01-20 Mannino Raphael J. Novel encochleation methods, cochleates and methods of use
WO2012151517A1 (en) 2011-05-05 2012-11-08 Coordinated Program Development, Llc Cochleate compositions and methods of making and using same
WO2013085152A1 (en) * 2011-12-07 2013-06-13 Union Korea Pharm Co., Ltd. Combined antibiotics comprising cephalosporins and beta-lactamase inhibitors
US20180153807A1 (en) 2015-04-22 2018-06-07 Matinas Biopharma Nanotechnologies, Inc. Compositions and methods for treating mycobacteria infections and lung disease
KR20180014790A (ko) 2015-06-18 2018-02-09 마티나스 바이오파마 나노테크놀로지스, 인코포레이티드 염증성 질환 또는 병태를 치료하기 위한 조성물 및 방법

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4871488A (en) * 1985-04-22 1989-10-03 Albany Medical College Of Union University Reconstituting viral glycoproteins into large phospholipid vesicles
US20030219473A1 (en) * 2002-03-26 2003-11-27 Leila Zarif Cochleates made with purified soy phosphatidylserine
CN101291653B (zh) * 2003-07-16 2012-06-27 普洛体维生物治疗公司 脂质包封的干扰rna
US20120178793A1 (en) * 2004-04-09 2012-07-12 Biodelivery Sciences International, Inc. Nucleotide-cochleate compositions and methods of use
WO2014022414A1 (en) * 2012-07-30 2014-02-06 Coordinated Program Development, Llc Cochleates made with soy phosphatidylserine

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴诚等: "小鼠口服两性霉素Ｂ脂质卷和胶束溶液后的组织分布", 《第二军医大学学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019199238A1 (en) * 2018-04-09 2019-10-17 Vet Products Research And Innovation Center Company Limited Inorganic mineral entrapped in nanoparticle production method thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CA2978308A1 (en) 2016-09-09
EP3265060A4 (en) 2018-08-22
US20180042849A1 (en) 2018-02-15
AU2016226151B2 (en) 2021-02-25
AU2016226151A1 (en) 2017-09-21
US11389407B2 (en) 2022-07-19
JP2018508523A (ja) 2018-03-29
KR20180004104A (ko) 2018-01-10
CA2978308C (en) 2024-02-13
JP6770524B2 (ja) 2020-10-14
WO2016141203A1 (en) 2016-09-09
EP3265060A1 (en) 2018-01-10
EP3265060B1 (en) 2020-10-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107847443A (zh) 脂质卷以及使用其增强药理学活性剂的组织穿透力的方法
US9655848B2 (en) Liposomes for in-vivo delivery
US7901707B2 (en) Biodegradable biocompatible implant and method of manufacturing same
TWI732773B (zh) 用於奈米顆粒冷凍乾燥形式的組成物及方法
RU2660585C2 (ru) Фармацевтическая композиция для уменьшения осложнений применения стероидных препаратов при лечении офтальмологических заболеваний
WO2017031060A1 (en) Substrate delivery of embedded liposomes
US20220096372A1 (en) Trans-Tympanic Membrane Delivery Platform and Uses Thereof
JP2018500298A (ja) 医薬組成物、その調製及び使用
CN102711454B (zh) 用于提高rna干扰剂的递送、表达或活性的方法和组合物
US20140155813A1 (en) Therapeutic muscular dystrophy drug having bubble liposome loaded with morpholino as active ingredient
KR101846089B1 (ko) 독소루비신 함유 페길화된 리포좀 제제
EP3753549A1 (en) Liposomal doxorubicin formulation, method for producing a liposomal doxorubicin formulation and use of a liposomal doxorubicin formulation as a medicament
WO2018207841A1 (ja) 複合体、複合体を含むｐＨ感受性組成物、および複合体の製造方法
Haghiralsadat et al. New Approach for the Synthesis, Entrapment of Hydrophilic Drugs and Evaluation of Physico-Chemical Characteristics of PH-sensitive Nano-Liposome: Improving Therapeutic Efficacy of Doxorubicin in Order to Treatment Bone Tumor and Reducing the Side Effects of Doxorubicin
US20220387588A1 (en) Lipid coated iron oxide nanoparticles for otitis media
US20230129331A1 (en) Liposomal formulations comprising at1 receptor blockers and uses thereof
TW202320803A (zh) 製備脂質體調配物之方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180327

RJ01 Rejection of invention patent application after publication