CN107817157B - 一种检测破壁机破壁率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种检测破壁机破壁率的方法，其通过对花粉样品进行粉碎检测，包括以下步骤：A)破壁花粉制备步骤：获取未破壁花粉，将其放入破壁料理机中进行粉碎，制备出定量的破壁花粉；B)花粉混合液制备步骤：再获取与步骤A中同批的未破壁花粉，所述未破壁花粉与制备出的破壁花粉质量相同，分别在未破壁花粉和破壁花粉中加入粘度为P的溶剂，配置成相同浓度的未破壁花粉混合液和破壁花粉混合液，摇匀后静置；C)花粉混合液细胞测定步骤：分别吸取相同体积的未破壁花粉混合液和破壁花粉混合液，通过观察并计算单位质量所含完整细胞数量，本发明能够使得花粉混合液具有最佳的分散度，从而使得提取到的花粉数量均匀，提高测量准确性和稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及破壁率的检测方法，具体是涉及一种利用花粉样品检测破壁机破壁率的方法。
背景技术
现有的食材破壁是通过破壁料理机对食材进行粉碎处理，所谓食材的破壁是指瞬间打破食材的细胞壁，让营养成分更好的释放，从而便于人体吸收。关于破壁率的研究，早期集中于应用花粉，而针对破壁率的测试，行业内开发了不少方法，其原理大致是将破壁前后的花粉或孢子粉加入某种合适的溶剂中制成相同浓度的均匀混合液，然后制片在显微镜下观察，记录完整花粉或孢子的数量并以此来计算细胞破壁率。实际操作时由于花粉的粒径较小，通常会漂浮在液体表面，分散效果不好，导致取样测量偏差很大，尤其是在破壁率不理想的情况下，数据波动大。
关于食材破壁效果，尤其是破壁料理机的破壁率，行业内外非常关心，但目前尚未建立科学合理的测试方法。因此，开发一种适用于破壁料理机破壁率的测试方法显得十分必要，对于引导消费，促进行业健康发展也有一定的现实意义。
发明内容
本发明发提出一种检测破壁机破壁率的方法，其通过对花粉样品进行粉碎检测，使得破壁后的花粉细胞分散性好、测试准确的优点。
本发明提供一种检测破壁机破壁率的方法，其通过对花粉样品进行粉碎检测，包括以下步骤：A)破壁花粉制备步骤：获取未破壁花粉，将其放入破壁料理机中进行粉碎，制备出定量的破壁花粉，所述破壁料理机的空载转速为20000-40000转/每分钟；
B)花粉混合液制备步骤：再获取与步骤A中同批的未破壁花粉，所述未破壁花粉与制备出的破壁花粉质量相同，分别在未破壁花粉和破壁花粉中加入粘度为P的溶剂，配置成相同浓度的未破壁花粉混合液和破壁花粉混合液，摇匀后静置，其中混合液的粘度2厘泊＜P＜15厘泊；
C)花粉混合液细胞测定步骤：分别吸取相同体积的未破壁花粉混合液和破壁花粉混合液，通过显微镜观察得到未破壁花粉混合液中完整细胞数量M以及破壁后花粉混合液中完整细胞数量N，按以下公式计算花粉破壁率。
优选地，步骤B)中的溶剂为醇类液体与水。
优选地，所述醇类液体为丙三醇，丙三醇和水的体积比为A，其中1/9＜A＜2。
优选地，步骤C)中，吸取所述混合液之前，先将胶管头伸入混合液中吸放4-5次。
优选地，步骤A)中，所述未破壁的花粉的直径D在20um-200um之间。
优选地，所述直径为D的花粉通过网筛筛选出，所述网筛的目数为80-800。
优选地，步骤B)中，配置完成后的混合液静置时间为0.5-2小时。
优选地，步骤C)中，所述混合液中完整的细胞数量是通过重复观察显微镜5个视野的完整细胞数量，将观察到的5个视野的完整细胞数量取平均值得出。
优选地，步骤B)中，所述混合液中还添加有表面活性剂。
优选地，步骤A)中，所述未破壁花粉的质量为50g～100g。
本发明的有益效果为：1、本发明公开一种检测破壁机破壁率的方法，通过将破壁后的花粉放入粘度在2厘泊＜P＜15厘泊范围的溶剂中，制成混合液，这样花粉会分布在混合液的不同高度，使得花粉具有最佳的分散度，从而使得提取到的花粉数量均匀，提高测量准确性和稳定性。当混合液的粘度小于等于2时，混合液粘度较小，花粉之间相互吸引，静置后导致花粉之间结团，这样提取到定量的混合液后，混合液中的花粉数量不均，导致测量不准确。当混合液的粘度大于等于15时，混合液的粘度较大，花粉的颗粒无法在混合液中分散，同样会导致提取到的混合液中的花粉数量过于集中，导致测量不准确。
2、获取得到的未破壁花粉的直径范围D在20um～200um之间，所述花粉直径D的花粉通过网筛筛选出，所述网筛的目数为80-800。该直径范围内的花粉颗粒适中，经过破壁并制成相应的花粉混合液后，利于在混合液内流动，不会始终悬浮在混合液的表面，也不会因为颗粒较大使得后期观察单次细胞数量较少，造成偏差较大。在实施例中，花粉的直径为60um。当花粉的直径D小于20um时，花粉经破壁后的直径较小，质量较轻，容易飞扬，导致破壁率比较低，体现不出区分性。另外。将破壁后的花粉制成混合液后，花粉会悬浮在混合液上表面，分散度较差，导致后期取样检测的准确性不高。当花粉的直径D大于200um时，花粉直径D较大，花粉在混合液中的相互摩擦增多，细胞形态较差，单次观察到的细胞数目较少，结果偏差较大。
3、通过在混合液中添加表面活性剂，由于松花粉细胞两端有气囊，会导致未破壁的花粉浮在溶液上层，添加表面活性剂，能够减小表面张力，提高检测准确性，同时也能使分散性更好。
4、通过在通过胶管吸取定量混合液之前，先将胶管头伸入混合液中吸放4-5次，以人为扰动混合液，使得相对集聚的花粉能够分离开来，增加花粉的分散度，提高测量的稳定性和准确性。
5、通过将提取到的混合液滴在载玻片上，调整显微镜的焦距选择合适的放大倍数进行观察，重复观察显微镜5个视野的完整细胞数量，将观察到的5个视野的完整细胞数量取平均值，作为提取到的混合液的完整细胞数量，从而能够获取到更精确的数据，避免单次取样存在误差，提高取样精度。
6、通过称取同批每份花粉的质量范围在50g～100g之间，这样花粉颗粒在后期混合液中的间距适中，不会因为花粉质量过少导致粉碎不均匀。当花粉的质量小于50g时，花粉颗粒质量较轻，质量过少会在气流的作用下上串，从而导致粉碎不均匀。另外，当花粉的质量大于100g时，花粉质量较大，颗粒之间会发生较多的摩擦，导致颗粒形态变形，进而导致后期读数发生偏差。
需要说明的是，完整花粉细胞是指花粉细胞的细胞壁未被破坏，整体结构完整。不完整花粉细胞是指花粉细胞的细胞壁被破坏，整体结构不完整。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明检测破壁机破壁率的方法采用的破壁料理机。
图2为本发明检测破壁机破壁率的方法步骤流程图。
图3为显微镜下采用无粘度混合液时的花粉细胞分布状态。
图4为显微镜下采用本发明方法花粉细胞分布状态。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1-图2所示，本发明公开一种检测破壁机破壁率的方法，包括以下步骤：
A)破壁花粉制备步骤：获取定量未破壁花粉，将其放入破壁料理机中进行粉碎，制备出破壁花粉。所述破壁料理机包括机座1、搅拌杯2，所述搅拌杯内设有粉碎刀3，电机驱动粉碎刀3转动以粉碎搅拌杯内的食材。所述粉碎刀的空载转速为20000-40000转/每分钟，在本实施例中，所述粉碎刀的空载转速为30000转/每分钟。在本实施例中，所述花粉为松花粉。所述未破壁花粉的质量范围在50g～100g之间，在本实施例中，所述松花粉的质量为80g，这样花粉颗粒在搅拌杯内被粉碎的质量适中，不会因为花粉质量过少导致粉碎不均匀。当花粉的质量小于50g时，花粉颗粒质量较轻，质量较轻会在气流的作用下上串，从而导致粉碎不均匀。另外，当花粉的质量大于100g时，花粉质量较大，颗粒之间会发生较多的摩擦，导致颗粒形态变形，进而导致后期读数发生偏差。
具体为：将上述未破壁花粉放入搅拌杯内，启动电机并带动粉碎刀3转动1分钟，待破壁料理机冷却至室温后，继续工作1分钟，这样反复运行，获取到破壁后的花粉，在本实施方式中，所述搅拌杯为干磨杯，所述粉碎刀的粉碎时长为6分钟。
B)花粉混合液制备步骤：再获取与步骤A中同批的未破壁花粉，所述未破壁花粉与制备出的破壁花粉质量相同，质量均为20mg，分别放入两个相同的容量瓶中，容量瓶的体积为10ml，在容量瓶中加入粘度为P的溶剂配置成相同浓度的混合液，待两份花粉混合液制备好后，将容量瓶倒转并振荡，再倒转过来，如此反复15～20次，完成混匀，然后静置0.5～2小时。花粉在混合液中浸泡一段时间，可以让花粉细胞内外液的浓度达到平衡，细胞的形态舒展，便于显微镜观察计数。在本实施例中，配置完成后的混合液静置时间为1小时，静置过程中的温度范围为15～35℃，湿度在45％RH～75％RH。
步骤A中，未破壁花粉的直径D在20um～200um之间，所述花粉直径D的花粉通过网筛筛选出，所述网筛的目数为80-800。该直径范围内的花粉颗粒适中，经过破壁并制成相应的花粉混合液后，利于在混合液内流动，不会始终悬浮在混合液的表面，也不会因为颗粒较大使得后期观察单次细胞数量较少，造成偏差较大。在实施例中，花粉的直径为60um。当花粉的直径D小于20um时，花粉经破壁后的直径较小，质量较轻，容易飞扬，导致破壁率比较低，体现不出区分性，另外，将破壁后的花粉制成混合液后，花粉会悬浮在混合液上表面，分散度较差，导致后期取样检测的准确性不高。当花粉的直径D大于200um时，花粉直径D较大，花粉在混合液中的相互摩擦增多，细胞形态较差，单次观察到的细胞数目较少，结果偏差较大，区分性较差。
请参见图4所示，所述溶剂为醇类液体与水，在本实施例中，所述醇类液体为丙三醇。所述丙三醇和水的体积比为A，其中1/9＜A＜2，以使得粘度P在2＜P＜15厘泊之间。在本实施例中，所述丙三醇和水的体积比为1/8，所述粘度值为1.8，这样花粉会分布在混合液的不同高度，使得花粉具有最佳的分散度，且测试相对标准偏差最低，从而使得提取到的花粉数量均匀，提高测量准确性和稳定性，具体测试的丙三醇与水的体积比见表1。
请参见图3所示，当混合液的粘度小于等于2时，混合液粘度较小，花粉之间相互吸引，静置后导致花粉之间结团，这样提取到定量的混合液后，混合液中的花粉数量不均，导致测量不准确。当混合液的粘度大于等于15时，混合液的粘度较大，花粉的颗粒无法在混合液中分散，同样会导致提取到的混合液中的花粉数量过于集中，导致测量不准确。
表1不同粘度混合液测试样本
可以理解地，所述醇类液体还可以是乙二醇或丙三醇。
所述混合液中还添加表面活性剂，由于松花粉细胞两端有气囊，会导致未破壁的花粉浮在溶液上层，增加表面活性剂，能够减小表面张力，使分散性更好。所述表面活性剂为洗洁精，含量在20mg-200mg之间。在本实施例中，所述表面活性剂的含量为20mg，这样可以使得花粉具有较好的分散性的同时，也不会因化学药剂的使用过多导致原本未破壁的花粉细胞破裂，提高检测的准确性。
C)花粉混合液细胞测定步骤：准备显微镜，用胶管分别吸取上述未破壁花粉混合液以及破壁花粉混合液，吸取的混合液体积为0.2ml。将提取到的混合液滴在载玻片上，调整显微镜的焦距选择合适的放大倍数进行观察，重复观察显微镜5个视野中的完整细胞数量，将观察到的5个视野的完整细胞数量取平均值，作为提取到的混合液的完整细胞数量，在本实施例中，放大倍数选为目镜×16，物镜×10，重复取样5次。将观察到的未破壁花粉混合液中完整细胞数量定义为M以及破壁花粉混合液完整细胞数量定义为N，按以下公式计算花粉破壁率。
在通过胶管吸取定量混合液之前，先将胶管头伸入混合液中吸放4-5次，以人为扰动混合液，使得相对集聚的花粉能够分离开来，增加花粉的分散度，提高测量的稳定性和准确性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种检测破壁机破壁率的方法，其通过对花粉样品进行粉碎检测，其特征在于，包括以下步骤：
A)破壁花粉制备步骤：获取未破壁花粉，所述未破壁花粉质量为50g～100g，所述未破壁花粉直径D在20um-200um之间，将其放入破壁机中进行粉碎，制备出定量的破壁花粉，所述破壁机的空载转速为20000-40000转/每分钟；
B)花粉混合液制备步骤：再获取与步骤A中同批的未破壁花粉，所述未破壁花粉与制备出的破壁花粉质量相同，分别在未破壁花粉和破壁花粉中加入粘度为P的溶剂，配置成相同浓度的未破壁花粉混合液和破壁花粉混合液，摇匀后静置，其中混合液的粘度2厘泊＜P＜15厘泊；
C)花粉混合液细胞测定步骤：分别吸取相同体积的未破壁花粉混合液和破壁花粉混合液，通过显微镜观察得到未破壁花粉混合液中完整细胞数量M以及破壁后花粉混合液中完整细胞数量N，按以下公式计算花粉破壁率：
2.根据权利要求1所述的检测破壁机破壁率的方法，其特征在于：步骤B)中的溶剂为醇类液体与水。
3.根据权利要求2所述的检测破壁机破壁率的方法，其特征在于：所述醇类液体为丙三醇，丙三醇和水的体积比为A，其中1/9＜A＜2。
4.根据权利要求1所述的检测破壁机破壁率的方法，其特征在于：步骤C)中，吸取所述混合液之前，先将胶管头伸入混合液中吸放4-5次。
5.根据权利要求1所述的检测破壁机破壁率的方法，其特征在于：所述直径为D的花粉通过网筛筛选出，所述网筛的目数为80-800。
6.根据权利要求1所述的检测破壁机破壁率的方法，其特征在于：步骤B)中，配置完成后的混合液静置时间为0.5-2小时。
7.根据权利要求1所述的检测破壁机破壁率的方法，其特征在于：步骤C)中，所述混合液中完整的细胞数量是通过重复观察显微镜5个视野的完整细胞数量，将观察到的5个视野的完整细胞数量取平均值得出。
8.根据权利要求1所述的检测破壁机破壁率的方法，其特征在于：步骤B)中，所述混合液中还添加有表面活性剂。
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