CN107779475B - 一种丝瓜皂苷的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种丝瓜皂苷的提取方法，包括以下步骤：将丝瓜清洗后切成小块，加入丝瓜重量1~2倍的水，加入双歧杆菌发酵；将发酵液离心分离，取清液备用；将清液经微孔滤膜过滤除菌；滤液经连续色谱选择分离得丝瓜皂苷。本发明的优点在于：采用发酵方法提取，消除了化学提取中加热过程，避免了丝瓜皂苷因加热被破坏，使提取率更高；减少化学药剂的使用，提高丝瓜皂苷的品质；采用规模化生产，产量大，成本低。

Description

一种丝瓜皂苷的提取方法
技术领域
本发明属于发酵工业领域，具体涉及一种丝瓜皂苷的提取方法。
背景技术
丝瓜又叫天丝瓜、蛮瓜、吊瓜、水瓜等，原产于印度，唐代传入我国。丝瓜在我国南北各地广泛栽培，为夏秋季节的主要蔬菜之一，而且丝瓜的根、藤、叶、子及丝瓜络均可入药。现代科技分析丝瓜中含蛋白质、脂肪、碳水化合物、钙、磷、铁及维生素B1、维生素C，植物粘液、木糖胶、丝瓜苦味质、瓜氨酸等物质，近些年的研究表明丝瓜中还含有丰富的皂苷。于是开发了许多提取丝瓜皂苷的技术，但这些技术多使用溶剂加热浸提丝瓜，浓缩溶液得到皂苷的提取方式，不仅产率低下，耗能高，而且加热过程中极易破坏皂苷的分子结构，使皂苷的提取率低下，不能满足市场的需求。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种通过发酵，采用生物技术提取丝瓜皂苷的方法。
为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的。
一种丝瓜皂苷的提取方法，包括以下步骤：
（1）将丝瓜清洗后切成小块，加入丝瓜重量1~2倍的水，加入双歧杆菌发酵；
（2）将步骤（1）所得发酵液离心分离，取清液备用；
（3）将步骤（2）所得清液经微孔滤膜过滤除菌；
（4）将步骤（3）所得滤液经连续色谱选择分离得丝瓜皂苷。
进一步地所述步骤（1）中双歧杆菌的用量为丝瓜重量的1~5%，发酵温度控制在36~41℃，密封发酵24~72小时。
进一步地所述步骤（1）中双歧杆菌为长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌中的一种。
进一步地所述步骤（1）中丝瓜先经过盐水浸泡1~5min，然后用水洗净，盐水的重量百分比浓度为0.5~1.5%，用量为丝瓜重量的2~5倍。
进一步地所述步骤（3）中采用孔径为0.5~1μm的微孔滤膜。
进一步地所述步骤（4）中连续色谱采用大孔树脂连续色谱柱，先用体积浓度为20%乙醇除去杂质，再用体积浓度为60~70%乙醇洗脱，收集洗脱液即得富含丝瓜皂苷的溶液。
进一步地将富含丝瓜皂苷的溶液减压浓缩，冷却结晶，再用乙醇重结晶，得丝瓜皂苷固体。
进一步地所述步骤（4）中，所述树脂为HPD101 型或 DA201 型中的一种。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：
1）采用发酵方法提取，消除了化学提取中加热过程，避免了丝瓜皂苷因加热被破坏，使提取率更高；
2）减少化学药剂的使用，提高丝瓜皂苷的品质；
3）采用规模化生产，产量大，成本低。
具体实施方式
下面结合实例对本发明作进一步的详细说明。本发明所用的原料均为市售产品。
实施例1
一种丝瓜皂苷的提取方法，包括以下步骤：
（1）将300kg丝瓜先经过盐水浸泡1min，然后用水洗净，盐水的重量百分比浓度为1.5%，用量为丝瓜重量的2倍，清洗后切成小块，投入1000L发酵罐中，加入600kg水，加入长双歧杆菌发酵，发酵温度控制在41℃，密封发酵72小时；将长双歧杆菌经MRS培养基培养18~24h，总菌落数达108cfu/ml以上，得发酵菌种液，发酵菌种液的用量为3kg；
（2）将步骤（1）所得发酵液高速离心分离，取上层清液备用；
（3）将步骤（2）所得清液经孔径为1μm的微孔滤膜过滤除菌；
（4）将步骤（3）所得滤液采用HPD101 型大孔树脂连续色谱柱，先用体积浓度为20%乙醇除去杂质，再用体积浓度为60%乙醇洗脱，收集洗脱液即得富含丝瓜皂苷的溶液，将富含丝瓜皂苷的溶液于-0.001~0.01MPa，30~40℃减压浓缩至溶液浑浊，常压下冷却结晶，再用乙醇重结晶，得丝瓜皂苷固体68.7g，提取率达到94%。
实施例2
一种丝瓜皂苷的提取方法，包括以下步骤：
（1）将500kg丝瓜先经过盐水浸泡5min，然后用水洗净，盐水的重量百分比浓度为0.5%，用量为丝瓜重量的5倍，清洗后切成小块，投入1000L发酵罐中，加入500kg水，加入短双歧杆菌发酵，发酵温度控制在36℃，密封发酵24小时；将短双歧杆菌经MRS培养基培养18~24h，总菌落数达108cfu/ml以上，得发酵菌种液，发酵菌种液的用量25kg；
（2）将步骤（1）所得发酵液高速离心分离，取上层清液备用；
（3）将步骤（2）所得清液经孔径为0.5μm的微孔滤膜过滤除菌；
（4）将步骤（3）所得滤液采用DA201 型大孔树脂连续色谱柱，先用体积浓度为20%乙醇除去杂质，再用体积浓度为70%乙醇洗脱，收集洗脱液即得富含丝瓜皂苷的溶液，将富含丝瓜皂苷的溶液于-0.001~0.01MPa，30~40℃减压浓缩至溶液浑浊，常压下冷却结晶，再用乙醇重结晶，得丝瓜皂苷固体115.5g，提取率达到95%。
实施例3
一种丝瓜皂苷的提取方法，包括以下步骤：
（1）将500kg丝瓜先经过盐水浸泡3min，然后用水洗净，盐水的重量百分比浓度为1.0%，用量为丝瓜重量的3倍，清洗后切成小块，投入1000L发酵罐中，加入500kg水，加入婴儿双歧杆菌发酵，发酵温度控制在37℃，密封发酵48小时；将婴儿双歧杆菌经MRS培养基培养18~24h，总菌落数达108cfu/ml以上，得发酵菌种液，发酵菌种液的用量为15kg；
（2）将步骤（1）所得发酵液高速离心分离，取上层清液备用；
（3）将步骤（2）所得清液经孔径为0.5μm的微孔滤膜过滤除菌；
（4）将步骤（3）所得滤液采用HPD101 型大孔树脂连续色谱柱，先用体积浓度为20%乙醇除去杂质，再用体积浓度为60%乙醇洗脱，收集洗脱液即得富含丝瓜皂苷的溶液，将富含丝瓜皂苷的溶液于-0.001~0.01MPa，30~40℃减压浓缩至溶液浑浊，常压下冷却结晶，再用乙醇重结晶，得丝瓜皂苷固体117g，提取率达到96%。
本发明按照上述实施例进行了说明，应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种丝瓜皂苷的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将丝瓜清洗后切成小块，加入丝瓜重量1~2倍的水，加入双歧杆菌发酵；双歧杆菌的用量为丝瓜重量的1~5%，发酵温度控制在36~41℃，密封发酵24~72小时；双歧杆菌为长双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌中的一种；丝瓜先经过盐水浸泡1~5min，然后用水洗净，盐水的重量百分比浓度为0.5~1.5%，用量为丝瓜重量的2~5倍；
（2）将步骤（1）所得发酵液离心分离，取清液备用；
（3）将步骤（2）所得清液经微孔滤膜过滤除菌；采用孔径为0.5~1μm的微孔滤膜；
（4）将步骤（3）所得滤液经连续色谱选择分离得丝瓜皂苷；连续色谱采用大孔树脂连续色谱柱，先用体积浓度为20%乙醇除去杂质，再用体积浓度为60~70%乙醇洗脱，收集洗脱液即得富含丝瓜皂苷的溶液；将富含丝瓜皂苷的溶液减压浓缩，冷却结晶，再用正丁醇重结晶，得丝瓜皂苷固体；所述树脂为HPD101 型或 DA201 型中的一种。
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