CN107765011A - 早期癌症筛查方法及试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种早期癌症筛查方法及试剂盒，该方法包括：采用角质素酶蛋白(YKL‑40)进行早期癌症的筛查。通过上述方式，本发明能够用于体检时癌症的早期筛查。

Description

早期癌症筛查方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及肿瘤筛查技术领域，特别是涉及一种早期癌症筛查方法及试剂盒。
背景技术
肿瘤一直是威胁人类健康的头号杀手，因此对于肿瘤的发生，一般采取的措施都是及早检查，及早发现，及时治疗。实际上，在肿瘤发展的前4个阶段，如果早期发现、早期治疗，都是可以完全治愈的，在前三个阶段发现并治疗，治愈率可达100％。癌症的可怕之处，就在于前三个阶段，影像学根本无法检测出来，即便到了肿瘤中期，也只有非常专业的医生用较先进的设备才能测出。世界卫生组织的研究认为：1/3的癌症是可以预防的；1/3的癌症可以通过积极治疗而延长患者生命；1/3的癌症是可以通过早期发现、早期诊断、早期治疗而痊愈的。这意味着肿瘤的早期发现成为可能。
由于癌症的早期发现十分困难，其致死率很高，多数癌症发现时已是中晚期。世界卫生组织肿瘤研究中心公布的数字表明：到2020年，肿瘤患者将增加43％。根据国际癌症研究机构的公布的研究数据显示2012年全球癌症发病总人数1千406多万人，其中中国306万多人。据中国卫生部的一份调查统计报告显示，癌症已经超过心脑血管疾病成为导致中国目前城乡居民死亡的最重要病症。近20年来，中国每4-5个死亡者中就有一个死于癌症，居死亡原因之首。所以癌症已经成为常见病和多发病。
肿瘤筛查的项目非常多，但是，并不是检查的项目越多就越好。要选择合适自己身体情况的项目进行检查。据了解，目前推广使用的各种癌症检测试验，多数针对某一类型癌症，要全面检查需花费不少费用，而且费时，甚至会漏检。为此，寻找广谱的癌症标志物用于体检时癌症的早期筛查，尽早发现癌症，提高生存率，是科学家和医生们追求的目标。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种早期癌症筛查方法及试剂盒，能够用于体检时癌症的早期筛查。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种角质素酶蛋白(YKL-40)在早期癌症筛查中的用途。
为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是：提供一种筛查早期癌症的方法，所述方法包括：检测样品中YKL-40的含量；根据YKL-40的含量与正常人、炎症病人以及癌症病人中YKL-40的含量范围，初步判断所述样品中YKL-40的含量是否在所述癌症病人中YKL-40的含量范围内；若是，则初步判断提供所述样品的病人存在较大的癌症风险。
其中，所述样品为血液样品。
其中，所述样品为尿液样品。
其中，所述检测样品中YKL-40的含量的步骤之前，包括：确定正常人、炎症病人以及癌症病人中YKL-40的含量范围。
为解决上述技术问题，本发明采用的又一个技术方案是：提供一种角质素酶蛋白(YKL-40)体外诊断试剂盒，所述体外诊断试剂盒包括：包被在第一层析材料上的标记的抗YKL-40第一抗体；包被在第二层析材料上的未标记的抗YKL-40第二抗体。
其中，所述标记的抗YKL-40第一抗体是采用量子点或荧光微球进行标记的。
其中，所述体外诊断试剂盒用于早期癌症的筛查。
本发明的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明采用角质素酶蛋白(YKL-40)进行早期癌症的筛查。由于角质素酶蛋白(YKL-40)从炎症到癌变的过程中，它的含量会随着病情的程度而增加，灵敏度高，通过这种方式，能够有助于早期癌症的筛查，从而有效地帮助临床预警癌症。
附图说明
图1是临床样品中YKL-40含量的实验数据一分析示意图；
图2是临床样品中YKL-40含量的实验数据另一分析示意图；
图3是临床样品中YKL-40含量的实验数据又一分析示意图；
图4a至4e是临床样品中YKL-40含量的具体实验数据。
具体实施方式
在详细介绍本发明之前，先介绍一下目前癌症的筛查项目以及医院及体检单位推荐的肿瘤筛查模式的选择指导原则。
肿瘤筛查的项目非常多，但是，并不是检查的项目越多就越好。要选择合适自己身体情况的项目进行检查。放射性的检查不可以一次性多做。肿瘤筛查一般有这些项目：
1、血液检查：血液检查是体检中查出早期癌症的重要手段，检测血液中各种肿瘤标志物指标是否升高，则可发现、鉴别各种恶性肿瘤。如：甲胎蛋白AFP可查原发性肝细胞癌、生殖腺胚胎性肿瘤。癌胚抗原CEA明显升高时，常见有结肠癌、胃癌、肺癌、胆管癌，存在肝癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌时也有升高。
2、妇科体检中巴氏涂片：采用巴氏染色的方法，可检测早期宫颈癌，检出率约60％～70％。
3、B超：利用彩色多普勒成像技术，可清晰地发现全身大多数器官是否有肿块及病变。
4、X线胸片：X线穿过人体后，因器官、组织密度不同呈现影像，由此可直接显示肺部肿瘤，也可通过肺气肿、阻塞性肺炎、胸水等间接性改变寻找胸部肿瘤。
5、肛门直肠指检：大致可以确定距肛缘7厘米～10厘米的肛门、直肠有无病变和病变的性质。
6、胃镜和肠镜：直接用肉眼观察胃、肠黏膜的色泽、血管纹理、腺体开口形态，来识别有无病变，对可疑病灶可做活检确诊。
目前医院及体检单位推荐的肿瘤筛查模式的选择指导原则，包括这些方面：
1、长期吸烟或接触有毒有害气体史，定期胸x线检查和肿瘤标志物(CEA、SCC，NSE、TPA)联合检查。
2、中年妇女定期作红外线乳腺扫描检查和肿瘤标志物(CEA、CAl5-3、TPA)联合检查。肿块明显则作乳腺穿刺查癌细胞。
3、35岁以上妇女及人乳头瘤病毒感染(HPV)是宫颈癌的高风险人群，应定期作阴道脱落细胞学检查，或薄层细胞制片技术检查(TCT)和肿瘤标志物(SCC、CAl25、TPA)联合检查。在阴道镜下作病理活检进行确诊。
4、如果处于肝癌高发区，或有慢性病毒性肝炎(特别是乙肝和丙肝)，建议做B超、乙肝五项标志物和肿瘤标志物(AFP，AFU)联合检查。
5、处在鼻咽癌的高发区，应定期作病毒检查，必要时作穿刺细胞学检查及病理活检来确诊。
据了解，目前推广使用的各种癌症检测试验，多数针对某一类型癌症，要全面检查需花费不少费用，而且费时，甚至会漏检。为此，寻找广谱的癌症标志物用于体检时癌症的早期筛查，尽早发现癌症，提高生存率，是科学家和医生们追求的目标。
本发明采用角质素酶蛋白(YKL-40)进行早期癌症的筛查。由于角质素酶蛋白(YKL-40)从炎症到癌变的过程中，它的含量会随着病情的程度而增加，灵敏度高，通过这种方式，能够有助于早期癌症的筛查，从而有效地帮助临床预警癌症。
下面结合附图和实施方式对本发明进行详细说明。
本发明提供一种角质素酶蛋白(YKL-40)在早期癌症筛查中的用途。
研究结果表明，角质素酶YKL-40是一个炎症因子，同时又是肿瘤标记物，从炎症到癌变的过程中，它在血液中的含量会随着病情的程度而增加。它在多种恶性肿瘤细胞中高度表达和分泌，在细胞的增殖、分化、肿瘤周围组织血管发生等起重要作用，是肿瘤细胞生存和抗凋亡因子。它在多种恶性肿瘤患者血清中的水平显著高于良性肿瘤患者和健康人，且高水平YKL-40的恶性肿瘤患者病情恶化期和总体生存期短、预后差。的确，仅仅使用YKL-40作为标记物，它是不足以准确定位的。虽然心血管疾病和糖尿病等疾病也会导致血液中角质素酶升高，但是如果YKL-40浓度有飙升，那就必须引起临床医生足够的重视，以便更有效地帮助临床预警癌症，此时需进行进一步的排查，确定癌症发生的准确部位，并及早介入治疗，这在临床上有非常重要的意义。
要早期辅助诊断癌症，需要有高灵敏度及特异度的诊断指标。本申请的发明人收集了正常人群样本(120例)，哮喘和肺纤维化炎症病人样本(72例)、卵巢癌病人样本(156例)、子宫内膜癌病人样本(62例)、非小细胞肺癌病人样本(114例)、小细胞肺癌病人样本(67例)、前列腺癌病人样本(65例)、肝癌病人样本(101例)、乳腺癌病人样本(111例)、肠癌病人样本(103例)、肾癌病人样本(61例)、宫颈癌病人样本(62例)、胃癌病人样本(37例)、食道癌病人样本(38例)和鼻咽癌病人样本(37例)等患者血清中YKL-40的表达情况，即血清中YKL-40的水平，从而确定了YKL-40是广谱性的癌症标记物。
其中，正常人群指没有心血管病和糖尿病，以及其它的炎症等疾病的人群。哮喘和肺纤维化炎症病人指有哮喘和肺纤维化炎症病，但没有癌症的病人。卵巢癌病人是经过腹腔镜、B超等仪器辅助诊断定位，并经病理细胞学检验确诊的病人，检测时将各期的百人样本一起检测。子宫内膜癌是经阴道B超检查，宫腔镜检查或MRI、CT、淋巴造影等影像辅助检查定位后，并经细胞学涂片，即阴道细胞学涂片和、或宫腔细胞学涂片检验确诊的病人。非小细胞肺癌病人与小细胞肺癌病人是根据这两种肺癌病人临床表现，再经X光，CT扫描，MRI或气管镜等仪器影像辅助诊断、并采用病理与细胞学方法对痰液或胸积液进行确诊。前列腺癌病人，由于肿瘤局限，大多数前列腺癌病人无明显症状，常在体检时偶然发现，也可在良性前列腺增生手术标本中发现。随着肿瘤不断发展，前列腺癌将会出现多种不同症状，主要有3方面的表现：A、阻塞症状：可以有排尿困难、尿潴留、疼痛、血尿或尿失禁；B、.局部浸润性症状：膀胱直肠间隙常被最先累及，这个间隙内包括前列腺、精囊、输精管、输尿管下端等脏器结构，如肿瘤侵犯并压迫输精管会引起患者腰痛以及患者侧睾丸疼痛，部分患者还诉说射精疼；C、其他转移症状：前列腺癌容易发生骨转移，开始可无病状，也有因骨转移引起神经压迫或病理骨折就医时始发现前列腺癌。前列腺癌中，98％为腺癌，2％左右为鳞癌；75％起源于外周带，20％起源于移行带，5％起源于中央带。.临床上需要检查前列腺特异性抗原(PSA)血清测定患者血清PSA水平是否增高，游离PSA与总PSA的比值降低；有转移时血清酸性磷酸酶可能增高。二者合并检查诊断符合率较高。还用B超检查前列腺内低回声结节以及核素骨扫描较X线拍片常能早期显示转移病灶。前列腺癌根据T(肿瘤大小)N(淋巴结转移情况)M远处器官转移方法进行分期。
其中，对于肝癌病人，肝癌的诊断方法主要有一下几种：(A)根据病理检查结果诊断(B)根据临床表现诊断(C)亚临床肝癌的诊断要结合影响和生化检查结果及临床表现才能确诊；医学诊断1、CT：根据肝癌的症状体征变化，在加上精密的仪器检查，堪称是肝癌的有效诊断方法，CT是诊断和检测肝癌常用的方法之一，CT检查分辨率高，可清楚的显示肝内血管分布，及时发现早期肝癌。2、X射线：腹部透视可以观察到患者肝脏部位出现阴影，怀疑有肝癌者可进行X射线确诊。如果影像学检查不能确诊可使用X射线检查。
其中，乳腺癌病人多以乳房内无痛性肿块而就诊，少数病人因胸前区或乳房疼痛，乳头溢液或其他异常而就诊。乳腺癌病人早期多无自觉症状，极少数病人可有乳头溢液，多为浆液血性、血性或水性，部分可伴有乳头刺痒。中期病人可有局部疼痛，表现为隐痛、钝痛、牵拉痛或刺痛，同侧上肢无力、酸痛。乳头可有暗红色血性溢液。到晚期病人食欲不振，全身无力，发热，局部可有不同程度疼痛。出现血源性转移至肺、肝、骨等部位时可有相应的症状，如咳嗽、咯血、呼吸困难、肝肿大、黄疽、四肢或脊柱疼痛等。早期乳房内可触及蚕豆大小的肿块，较硬，可活动，压痛不明显。到中期两侧乳房不对称，患侧抬高，乳腺皮肤可有橘皮样改变，乳头可内陷。乳房可触及境界较清的肿块，质硬，不规则，可有一定的活动度。压痛一般不明显。同侧腋窝可触及肿大、质硬淋巴结，或淋巴结融合成团样肿块。同侧锁骨上或下可触及肿大淋巴结，活动度差。少数病人可有患侧上肢水肿。晚期病人多呈贫血貌、消瘦，患侧乳房可出现水肿、破溃，乳头内陷。肿块触之质硬如石，无活动性，腋窝或锁骨上下可触及融合成团的肿大淋巴结，少数病人可出现胸水、腹水等体征。目前仪器影像辅助检查包括：(1)X线检查，(2)超声显象检查，(3)热图象检查，(4)近红外线扫描，(5)CT检查，(6)磁共振检查。生化肿瘤标志物检查如癌胚抗原(CEA)检查。其它的生化指标检查有降钙素测定，血清铁蛋白测定，雌激素受体(ER)检查，孕激素受体(PR)检查。病理与细胞学检查主要包括脱落细胞学检查，细针吸取细胞学检查以及活组织检查进行确诊。
其中，大肠癌(又称结直肠癌)在我国恶性肿瘤发病排名中位列第三位，约六成患者被确诊时已为中晚期。大便潜血试验是测定消化道出血的一种方法，主要用于检验肉眼不可见的少量出血。也叫邻甲联苯胺法(OB)。大便潜血试验仍是当今直肠癌普查中使用最广泛而且评估最多的一项试验。此项试验快速简单，而且无痛，因直肠镜或乙状结肠镜操作简单，无需肠道准备，多用于门诊常规检查。由于直肠癌有5％-10％为多发癌，故要明确诊断需手术治疗时应行纤维结肠镜检查，内镜检查不仅可以在直视下肉眼做出诊断，而且可取材行病理检查。纤维结肠镜检查前需行肠道准备，检查时有不同程度的不舒适感，现在有无痛的纤维结肠镜检查。为了确诊肠癌,这些影像学辅助检查也被采用：①钡剂灌肠检查：诊断意义不大，多用于排除结直肠多发癌和息肉病。②经直肠B超：检测肿瘤浸润肠壁的深度及有无侵犯周围脏器，术前对肿瘤局部浸润深度进行评价。③CT检查：了解直肠癌盆腔内扩散情况，有无侵犯膀胱、子宫及盆壁，同时CT可扫描有无肝转移。④腹部超声检查：检查有无实质脏器的转移。
其中，肾癌又称肾细胞癌，高发年龄为40—65岁，男性多于女性。起源于肾小管上皮细胞，可发生于肾实质的任何部位，但以上、下极为多见，少数侵及全肾；左、右肾发病机会均等，双侧病变占1％一2％。肾癌的临床表现变化多端，有时无任何症状，但肿瘤在体内已有广泛进展，甚至出现肺、骨等转移征象。血尿、腰痛和肿块在临床上常称为肾癌的三大典型症状。(1)血尿，为最常见的症状，常表现为间歇性、无痛性肉眼和/或镜下血尿。(2)腰痛，常表现为持续性钝痛。当肿瘤已侵入神经或腰椎可造成严重疼痛。血尿在输尿管内凝固成索条状血块，随尿排出，可引起腰部疼痛。(3)肿块，肾癌患者腰部或上腹部可触及肿块者约为10％。肾癌的诊断采用：(1)尿常规检查，(2)尿路平片，(3)肾动脉及肾盂造影，(4)B超检查，(5)CT检查，(6)核磁共振检查，(7)放射性核素检查等方法进行确诊。
其中，宫颈癌是子宫颈的常见的恶性肿瘤，原位癌高发年龄为30～35岁，浸润癌为45～55岁，近年来其发病有年轻化的趋势。用于宫颈癌诊断的方法包括：(1)阴道脱落细胞检查(宫颈细胞刮片检查)，(2)阴道镜检查：阴道镜可放大6～40倍，用以观察宫颈血管及组织的变化，可提高原位癌诊断7～10倍，与病理诊断符合率为78％。阴道镜可选择活体组织检查部位，协助对于阴道细胞学涂片可疑者找到早期病变的部位、范围、性质和程度，但不能发现鳞柱交界或延伸宫颈管内的病变，不能代替宫颈刮片或活检。(3)宫颈摄影：用10mm显微镜附加35mm相机及50mm延伸圈组成摄影仪，将所获图像投射在宽3.3m屏幕上，1m远处观察；鳞柱交界处全部显示，无异常为阴性，发现异常为可疑，未见鳞柱交界为不满意。有人观察其诊断准确率为93.1％，故为一种准确性高，成本低，便于应用的新方法。(4)碘试验：将浓度为2％的碘溶液直接涂在子宫颈和阴道粘膜上，不着色处为阳性，帮助提供活体组织检查部位。(5)活体组织检查：宫颈在临床所进行的各项检查都是诊断的重要环节，但是活检是诊断宫颈癌最可靠的依据。在碘试验或阴道镜检查可疑部位取材作病理检查。如果宫颈表面未见肿瘤，需要刮取颈管内组织送病理检查。(6)宫颈锥形切除术：当宫颈细胞刮片检查多次为阳性，而多点活检及颈管刮术阴性，或已证明为原位癌，不能排除浸润癌者，可行宫颈锥切术并送病理。(7)荧光检查法：利用癌组织与正常组织吸收荧光素多少不同而显示不同颜色的机理诊断有无癌变。(8)肿瘤生化诊断：通过学者临床研究发现，在宫颈癌病人体内，乳酸脱氢酶、已糖激酶明显增高，尤其有浸润者更明显，有助于临床诊断。其他检查还可以用膀胱镜、直肠镜、肾图、肾盂造影、胸片、骨盆相应检查，必要时可进行CT扫描或MRI检查。
其中，胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在胃的恶性肿瘤中，腺癌占95％这也是最常见的消化道恶性肿瘤。胃癌的诊断方法包括：(1)上消化道造影、B超、CT等。上消化道造影为首选的基本胃癌的诊断方法，主要观察：胃黏膜是否紊乱，胃壁是否僵硬，胃黏膜充盈缺损范围及高度，胃部龛影是否外形规整、环堤是否均匀、边界是否清楚，胃腔是否变小等等。B超主要观察胃周围及腹腔淋巴结是否肿大，肝、胰等脏器是否有转移。CT检查，既可了解区域淋巴结情况，又可观察腔外是否受侵及远处转移情况。(2)病理细胞学检查，胃癌的诊断方法以胃镜检查为主。包括纤维胃镜和电子胃镜，目前多用电子胃镜，操作简便，患者痛苦小。胃镜在直视胃黏膜病变范围下取活检。此外如患者有锁骨上淋巴结转移或腹水，也可通过锁骨上淋巴结活检明确病理，或通过腹水细胞学检查明确诊断。(3)肿瘤标记物，胃癌常用的肿瘤标记物有CEA、CA19-9、CA72-4。CEA特异性不强，多种癌肿均可升高，胃癌的阳性率20～30％；CA19-9多种消化系肿瘤均可升高，胃癌时阳性率30％～40％；CA72-4对胃癌特异性可达95％，目前认为是诊断的首选指标。
其中，食道是连接胃与咽的管道，长约25－30厘米。食道所发生的癌症称为食道癌，是最常见的恶性肿瘤之一。主要的临床表现有：食管内异物感：平时总感觉有某种东西贴附在食管壁上，吞咽不下；食管内梗噎感：进食时，特别是进干食时，觉得食物在食管某处有短暂停留，有时好象食管内有吞咽不完的食物，所以病人多爱作吞咽动作；胸骨后不适或疼痛：患者在吞水或咽食时总感觉胸骨后有定位疼痛，吞咽后这种感觉逐渐消失；咽部干燥和紧缩感：可伴有轻微疼痛，常与情绪波动有关；进食后呕吐：呕吐常因进食引起，呕吐物为大量粘液及食物；晚期症状：可出现营养不良、体重减轻、呼吸困难等。诊断方法采用影像辅助检查和细胞学检查：1、食管镜检查：是诊断食管癌的比较可靠的方法之一，可了解病变部位、性质及范围；2、X线食管钡餐造影检查：是诊断食管癌的主要方法，可发现粘膜中断、管腔充盈缺损和狭窄及软组织块影；细胞学检查：此检查是目前诊断早期食管癌的可取方法之一。发现率可达80％。
鼻咽癌是一种发生于鼻咽腔或上咽喉部的癌症，在初期和中期阶段，很少能够注意到任何症状。因为鼻咽位于鼻子后部很深的位置(在颅骨中心)，家庭医生不能轻易地使用常规方式来检查。鼻咽部位需要特殊的技术来检查。医生需要使用间接鼻咽镜或直接鼻咽镜来检查。通过这些工具，医生可以看到里面鼻咽部的异常增生，不对称，出血或其他疾病的迹象。目前用于检测出鼻咽癌医的疗技术包括:1、间接口腔镜检查，耳鼻喉科用来进行鼻咽部常规检查的传统方法。由于患者经常出现咽反射，这种方法难以操作且准确度低。间接鼻咽镜检查容易出现误诊和漏诊；2、EB病毒血清测试，此方法是一种血液化验，还具有假阳性率很高。超过90％的总人口已经曾经暴露于EB病毒感染因此易有假阳结果。此外当患者的血清学显示阳性，肿瘤可能已经在晚期或扩散，血清学检测没能早期发现鼻咽癌的可能；3、循环血浆中的EB病毒DNA，在血液循环EB病毒基因检验是测试循环血液中EB病毒基因数量的方法。血液中的病毒基因主要来自肿瘤细胞快速增长并将基因释放到血液中。一部份血液中的病毒基因来自死亡的肿瘤细胞。循环基因只有很短的半衰期(10至15分钟)，它主要由肝脏排出。这种方法已被证明为比血清学测验方法具有更高的鼻咽癌测试灵敏度和更强的特异性检测。到目前为止，血液EB病毒基因测试的价值对早期鼻咽癌诊断是未知的；4、鼻咽内窥镜检查，这是目前检测鼻咽癌的黄金标准。是由耳，鼻，喉(ENT)专科/耳鼻喉科专科医生在鼻腔通道局部麻醉，适用于光纤鼻咽镜。但是，很大一部分鼻咽癌病患有在粘膜下不易察觉的肿瘤。假阴性有时高达30到40％。并且有因内窥镜没有得到良好的消毒导致交叉感染的风险；5、活体组织切片，由外科医生将内窥镜插入患者的鼻，通过对鼻咽查看局部，然后使用切割工具来取出组织切片由病理学家用显微镜观察是否有异样；6.NPScreenTM–临床医生从口入用笔刷采样，获得鼻咽部位细胞。从细胞中存在的EB病毒基因进行分析。这种筛查方法有几项优点，包括筛查人群的舒适度，发现微小的早期肿瘤和复发肿瘤，极度特异性并且能够发现被活检和内窥镜错过的粘膜表层下的肿瘤。
发明人检测了上述样本血清中YKL-40的表达情况，即血清中YKL-40的水平，从而确定了YKL-40是广谱性的癌症标记物。YKL-40的检测试剂由深圳海格德生物科技公司提供。在YKL-40的检测中，正常人群的临界值(Cutoff)定为100。在哮喘和肺纤维化病人的血清样本中，YKL-40都普遍升高。这是因为YKL-40是一个炎症因子，分泌到血液的量会随炎症程度而增加，因此当YKL-40水平增加，而增加幅度不大于300，可以判定病人有其它炎症，需进一步确诊。如果将正常人群和炎症病人作为对照组，将cutoff水平定为200，这样可以将YKL-40的假阳性排除，这样假阳性率低于3％。具体请参见图1至图3临床数据的图形分析示意图以及图4a至4e的具体临床数据。
从图1至图3可以看出，根据检测到的YKL-40的含量，可以明显区分正常人群、炎症病人以及癌症病人，这些癌症包括：卵巢癌、子宫内膜癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、前列腺癌、肝癌、乳腺癌、肠癌、肾癌、宫颈癌、胃癌、食道癌、鼻咽癌等。因此，可以初步确定YKL-40为广谱性的癌症标记物。
本发明还提供一种筛查早期癌症的方法，该方法包括：
A、检测样品中YKL-40的含量；
B、根据YKL-40的含量与正常人、炎症病人以及癌症病人中YKL-40的含量范围，初步判断所述样品中YKL-40的含量是否在所述癌症病人中YKL-40的含量范围内；
C、若是，则初步判断提供所述样品的病人存在较大的癌症风险。
其中，该样品为血液样品，例如：血清、血浆、全血等。
其中，该样品为尿液样品。
其中，检测样品中YKL-40的含量的步骤之前，包括：确定正常人、炎症病人以及癌症病人中YKL-40的含量范围。
本发明还提供一种角质素酶蛋白(YKL-40)体外诊断试剂盒，该体外诊断试剂盒包括：
包被在第一层析材料上的标记的抗YKL-40第一抗体；
包被在第二层析材料上的未标记的抗YKL-40第二抗体。
很显然，上述体外诊断试剂是采用层析法原理的。通过上述体外诊断试剂，可以检测样本中的YKL-40。
其中，该标记的抗YKL-40第一抗体是采用量子点或荧光微球进行标记的。当然，也可以采用胶体金进行标记。
其中，该体外诊断试剂盒用于早期癌症的筛查。
量子点(Quantum Dots)是由半导体材料，如硒化镉CdSe，组成的纳米颗粒，当量子点被一种普通光激发之后，可以释放出比普通荧光素强达数十倍的荧光，且有激发光谱宽、发射光谱窄的特点。发射光谱还可根据半导体材料的不同与纳米颗粒大小的不同而进行变动调节，且发射光的稳定性高，不会被淬灭。正是由于量子点荧光的这些优点，用量子点纳米颗粒标记的抗体，可比普通荧光素标记的抗体发光强度提升数百倍，从而使试剂的信号敏感度达到与化学发光的水平相当。
该试剂盒的开发技术路线大致分为以下几步：
筛选或自行研发检测肿瘤标志物的单克隆抗体；
抗体和量子点纳米颗粒或荧光微球偶联条件的确定和优化；
免疫层析法检测肿瘤标志物的条件确定和优化；
检测肿瘤标志物试剂盒的性能技术参数的确定和优化；
检测试剂盒的中试和大量生产条件和工艺的确定和优化；
试剂盒配套的荧光检测仪器的研发生产。
试剂盒开发的工艺流程采用以下几个步骤：配制包被和标记用的工作液体、抗体和量子点纳米颗粒或荧光微球偶联、制备荧光垫、制备样品垫、包被抗体到NC膜、干燥、试剂条的组装等。
总结来说，本申请的方法以及产品具有以下明显的优点：
(1)通过检测角质素酶YKL-40在血液中的量，可以明确划分正常人、炎症病人、癌症病人，在癌症情况下，它的水平随着病情发展而递增。
(2)早期辅助诊断癌症的价值远高于目前临床上常用的检测方法，具有广阔的应用前景，填此领域的空白。
以上所述仅为本发明的实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (8)

1.一种角质素酶蛋白(YKL-40)在早期癌症筛查中的用途。
2.一种筛查早期癌症的方法，其特征在于，所述方法包括：
检测样品中YKL-40的含量；
根据YKL-40的含量与正常人、炎症病人以及癌症病人中YKL-40的含量范围，初步判断所述样品中YKL-40的含量是否在所述癌症病人中YKL-40的含量范围内；
若是，则初步判断提供所述样品的病人存在较大的癌症风险。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述样品为血液样品。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述样品为尿液样品。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述检测样品中YKL-40的含量的步骤之前，包括：确定正常人、炎症病人以及癌症病人中YKL-40的含量范围。
6.一种角质素酶蛋白(YKL-40)体外诊断试剂盒，其特征在于，所述体外诊断试剂盒包括：
包被在第一层析材料上的标记的抗YKL-40第一抗体；
包被在第二层析材料上的未标记的抗YKL-40第二抗体。
7.根据权利要求6所述的体外诊断试剂盒，其特征在于，所述标记的抗YKL-40第一抗体是采用量子点或荧光微球进行标记的。
8.根据权利要求6所述的体外诊断试剂盒，其特征在于，所述体外诊断试剂盒用于早期癌症的筛查。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110244059A (zh) * 2019-06-29 2019-09-17 华北理工大学 一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用
CN110488006A (zh) * 2019-09-26 2019-11-22 天津华科泰生物技术有限公司 一种快速检测壳多糖酶3样蛋白1的免疫层析检测卡及其制备方法
CN112614128A (zh) * 2020-12-31 2021-04-06 山东大学齐鲁医院 一种基于机器学习的内镜下辅助活检的系统及方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010028656A1 (en) * 2008-09-15 2010-03-18 Herlev Hospital, Region Hovedstaden Methods for classifying the severity of diseases or disorders
CN102317783A (zh) * 2008-09-15 2012-01-11 海莱乌医院 作为胃肠癌的标记的ykl-40
CN102918164A (zh) * 2010-05-28 2013-02-06 生物梅里埃公司 区分乳腺癌与良性乳腺疾病的方法和试剂盒
CN103582815A (zh) * 2011-02-24 2014-02-12 佛米利昂公司 用于卵巢癌的生物标志物组、诊断方法和测试试剂盒
CN104321439A (zh) * 2012-03-15 2015-01-28 凯杰科技有限公司 甲状腺癌生物标志物
CN105408751A (zh) * 2013-10-31 2016-03-16 Sk电信有限公社 用于诊断胰腺癌的组合物以及使用该组合物诊断胰腺癌的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010028656A1 (en) * 2008-09-15 2010-03-18 Herlev Hospital, Region Hovedstaden Methods for classifying the severity of diseases or disorders
CN102317783A (zh) * 2008-09-15 2012-01-11 海莱乌医院 作为胃肠癌的标记的ykl-40
CN102918164A (zh) * 2010-05-28 2013-02-06 生物梅里埃公司 区分乳腺癌与良性乳腺疾病的方法和试剂盒
CN103582815A (zh) * 2011-02-24 2014-02-12 佛米利昂公司 用于卵巢癌的生物标志物组、诊断方法和测试试剂盒
CN104321439A (zh) * 2012-03-15 2015-01-28 凯杰科技有限公司 甲状腺癌生物标志物
CN105408751A (zh) * 2013-10-31 2016-03-16 Sk电信有限公社 用于诊断胰腺癌的组合物以及使用该组合物诊断胰腺癌的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
倪文娟 等: "分析血清YKL-40水平与2型糖尿病患者冠状动脉病变程度的关系", 《糖尿病新世界》 *
邹耀东 等: "冠心病合并糖尿病患者冠脉病变与血清YKL-40水平的关系", 《糖尿病新世界》 *
雷素珍: "痤疮患者血浆 YKL-40 浓度的变化", 《放射免疫学杂志》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110244059A (zh) * 2019-06-29 2019-09-17 华北理工大学 一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用
CN110488006A (zh) * 2019-09-26 2019-11-22 天津华科泰生物技术有限公司 一种快速检测壳多糖酶3样蛋白1的免疫层析检测卡及其制备方法
CN112614128A (zh) * 2020-12-31 2021-04-06 山东大学齐鲁医院 一种基于机器学习的内镜下辅助活检的系统及方法

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