CN110244059A - 一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用 - Google Patents
一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，包括一组血清蛋白和由该一组血清蛋白标志物组制备的检测试剂盒，所述检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：采集血清样本保存在‑80℃的冰箱中、将采集的血清样本进行稀释，分为三个试管、将四种抗体各滴加1μL至ELISA96孔板中进行包被、通过显色计算OD值、判断抗体是否呈阳性；本发明可以证明CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor‑B蛋白和VRK1蛋白任意一种或一种以上组合可作为尘肺病检测标志物，且具有客观性、特异性和准确性的特点，同时本发明提供的检测试剂盒对于尘肺病的早期筛查具有重大意义。
Description
技术领域
本发明涉及医药医学技术领域，尤其涉及一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用。
背景技术
尘肺病是我国最常见的对劳动者健康危害最严重的一类职业病，近三年新发病例每年超过2万例，占职业病报告总例数的近90％，死亡率为20％以上，目前，尘肺的发病机理仍然不完全清楚，无早期诊断的特异性指标，也无特异性的治疗药物。现有的尘肺病的诊断主要依靠职业史结合影像学检查等方法，实际在发现尘肺和可疑尘肺患者时，其肺组织纤维化病变已无法逆转，因此，寻找尘肺早期诊断的生物标志物，能够简便的在庞大的粉尘接触人群)高危人群)中筛查，对于早期发现疑似病人，早治疗及时脱离粉尘环境，降低尘肺的发病率，具有重大的经济和社会效益。
应用蛋白质组学研究多种疾病，尤其是肿瘤的早期标志蛋白分子的筛选已经成为研究的热点，在对多种恶性肿瘤如肺癌、肝癌、胃癌早期肿瘤标记物的研究中已经建立起对肿瘤进行检测及筛选的多蛋白标志物树状诊断模型，为恶性肿瘤相关研究及早期诊断提供了丰富资源，但应用蛋白质组学对于尘肺病生物标记物的研究极少，目前，血液由于采样方便且能较好反映机体病理生理过程而成为疾病标志物的最好来源，但是要寻找特异性和准确性高，能用于临床检测的血液蛋白标志物有一定难度，导致对尘肺病生物标记物的研究产生了较大的限制，因此，本发明提出一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，以解决现有技术中的不足之处。
发明内容
针对上述问题，本发明提出一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，本发明可以证明CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白任意一种或一种以上组合可作为尘肺病检测标志物，且具有客观性、特异性和准确性的特点，同时本发明提供的检测试剂盒对于尘肺病的早期筛查具有重大意义。
本发明提出一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，包括一组血清蛋白和由该一组血清蛋白标志物组制备的检测试剂盒，其特征在于，所述一组血清蛋白包括CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白，所述检测试剂盒由能检测CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白中任意一种血清差异蛋白的多克隆抗体、磷酸盐缓冲液和ELISA96孔板组成；
所述检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
步骤一：采集一组新鲜的血清样本，并将采集到的血清样本保存在-80℃的冰箱中；
步骤二：将采集的血清样本按照血清原液、5倍稀释血清液和10倍稀释血清液分为三个试管；
步骤三：将四种能检测CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白中任意一种血清差异蛋白的多克隆抗体各滴加1μL至ELISA96孔板中进行包被；
步骤四：按照ELISA方法，将步骤二中三个试管内的血清样本加入ELISA96孔板，并通过显色计算OD值，按照OD值＝|(样本OD-空白对照OD)/阴性对照OD|＞2.1为阳性的标准进行尘肺病筛查，其中，CHIA蛋白含量标准临界值为467pg/mL、PTPN2蛋白含量标准临界值为1835pg/mL、Factor-B蛋白含量标准临界值为853pg/mL、VRK1蛋白含量标准临界值为284pg/mL；
步骤五：当检测的血清样本中任意一个抗体呈阳性，尘肺病筛查判定为该病例为尘肺病疑似患者；
步骤六：当检测的血清样本中四个抗体均呈阳性，尘肺病筛查判定该病例为极高危尘肺病患者。
进一步改进在于：所述CHIA蛋白的蛋白序列号为Q9BZP6，所述PTPN2蛋白的蛋白序列号为P17706，所述Factor-B蛋白的蛋白序列号为P00751，所述VRK1蛋白的蛋白序列号为Q99986。
进一步改进在于：所述步骤一中采集一组新鲜的CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白的来源还可以为来自于血浆样本。
进一步改进在于：所述步骤一中一组新鲜的血清样本采集步骤为：
S1：按照临床采血方法抽取患者的血液5mL于离心管中，在4℃环境下静置3h；
S2：将离心管在4℃环境下，采用2000rpm～3000rpm的离心转速进行离心分离10min；
S3：用移液器吸取上层淡黄色的血清，得到血清样本。
进一步改进在于：所述步骤五中尘肺病筛查判定为该病例为尘肺病疑似患者后，还需要定期再做检测复查。
进一步改进在于：所述步骤六中尘肺病筛查判定该病例为极高危尘肺病患者后，该病例患者需要立即进行脱尘治疗，并进行进一步检查。
本发明的有益效果为：本发明可以证明CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白任意一种或一种以上组合可作为尘肺病检测标志物，且具有客观性、特异性和准确性的特点，同时本发明提供的检测试剂盒对于尘肺病的早期筛查具有重大意义，且检测试剂盒具有较高的灵敏度，对于尘肺病的早期筛查准确性高，具有极大的经济和社会价值。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明做进一步详述，本实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
本实施例提出一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，包括一组血清蛋白和由该一组血清蛋白标志物组制备的检测试剂盒，所述一组血清蛋白包括CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白，所述CHIA蛋白的蛋白序列号为Q9BZP6，所述PTPN2蛋白的蛋白序列号为P17706，所述Factor-B蛋白的蛋白序列号为P00751，所述VRK1蛋白的蛋白序列号为Q99986，所述检测试剂盒由能检测CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白中任意一种血清差异蛋白的多克隆抗体、磷酸盐缓冲液和ELISA96孔板组成；
所述检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
步骤一：采集一组新鲜的血清样本，血清样本采集步骤为：
S1：按照临床采血方法抽取患者的血液5mL于离心管中，在4℃环境下静置3h；
S2：将离心管在4℃环境下，采用2500rpm的离心转速进行离心分离10min；
S3：用移液器吸取上层淡黄色的血清，得到血清样本，并将采集到的血清样本保存在-80℃的冰箱中；
步骤二：将采集的血清样本按照血清原液、5倍稀释血清液和10倍稀释血清液分为三个试管；
步骤三：将四种能检测CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白中任意一种血清差异蛋白的多克隆抗体各滴加1μL至ELISA96孔板中进行包被；
步骤四：按照ELISA方法，将步骤二中三个试管内的血清样本加入ELISA96孔板，并通过显色计算OD值，按照OD值＝|(样本OD-空白对照OD)/阴性对照OD|＞2.1为阳性的标准进行尘肺病筛查，其中，CHIA蛋白含量标准临界值为467pg/mL、PTPN2蛋白含量标准临界值为1835pg/mL、Factor-B蛋白含量标准临界值为853pg/mL、VRK1蛋白含量标准临界值为284pg/mL；
步骤五：当检测的血清样本中任意一个抗体呈阳性，尘肺病筛查判定为该病例为尘肺病疑似患者，然后需要定期再做检测复查；
步骤六：当检测的血清样本中四个抗体均呈阳性，尘肺病筛查判定该病例为极高危尘肺病患者，需要立即进行脱尘治疗，并进行进一步检查。
将CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白因子用于检测尘肺病，得出如表1所示的检测结果：
表1
本发明可以证明CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白任意一种或一种以上组合可作为尘肺病检测标志物，且具有客观性、特异性和准确性的特点，同时本发明提供的检测试剂盒对于尘肺病的早期筛查具有重大意义，且检测试剂盒具有较高的灵敏度，对于尘肺病的早期筛查准确性高，具有极大的经济和社会价值。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (6)
1.一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，包括一组血清蛋白和由该一组血清蛋白标志物组制备的检测试剂盒，其特征在于，所述一组血清蛋白包括CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白，所述检测试剂盒由能检测CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白中任意一种血清差异蛋白的多克隆抗体、磷酸盐缓冲液和ELISA96孔板组成；
所述检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
步骤一：采集一组新鲜的血清样本，并将采集到的血清样本保存在-80℃的冰箱中；
步骤二：将采集的血清样本按照血清原液、5倍稀释血清液和10倍稀释血清液分为三个试管；
步骤三：将四种能检测CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白中任意一种血清差异蛋白的多克隆抗体各滴加1μL至ELISA96孔板中进行包被；
步骤四：按照ELISA方法，将步骤二中三个试管内的血清样本加入ELISA96孔板，并通过显色计算OD值，按照OD值＝|(样本OD-空白对照OD)/阴性对照OD|＞2.1为阳性的标准进行尘肺病筛查，其中，CHIA蛋白含量标准临界值为467pg/mL、PTPN2蛋白含量标准临界值为1835pg/mL、Factor-B蛋白含量标准临界值为853pg/mL、VRK1蛋白含量标准临界值为284pg/mL；
步骤五：当检测的血清样本中任意一个抗体呈阳性，尘肺病筛查判定为该病例为尘肺病疑似患者；
步骤六：当检测的血清样本中四个抗体均呈阳性，尘肺病筛查判定该病例为极高危尘肺病患者。
2.根据权利要求1所述的一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，其特征在于：所述CHIA蛋白的蛋白序列号为Q9BZP6，所述PTPN2蛋白的蛋白序列号为P17706，所述Factor-B蛋白的蛋白序列号为P00751，所述VRK1蛋白的蛋白序列号为Q99986。
3.根据权利要求1所述的一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，其特征在于：所述步骤一中采集一组新鲜的CHIA蛋白、PTPN2蛋白、Factor-B蛋白和VRK1蛋白的来源还可以为来自于血浆样本。
4.根据权利要求1所述的一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，其特征在于：所述步骤一中一组新鲜的血清样本采集步骤为：
S1：按照临床采血方法抽取患者的血液5mL于离心管中，在4℃环境下静置3h；
S2：将离心管在4℃环境下，采用2000rpm～3000rpm的离心转速进行离心分离10min；
S3：用移液器吸取上层淡黄色的血清，得到血清样本。
5.根据权利要求1所述的一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，其特征在于：所述步骤五中尘肺病筛查判定为该病例为尘肺病疑似患者后，还需要定期再做检测复查。
6.根据权利要求1所述的一组血清蛋白在制备检测人尘肺病早期筛查试剂中的应用，其特征在于：所述步骤六中尘肺病筛查判定该病例为极高危尘肺病患者后，该病例患者需要立即进行脱尘治疗，并进行进一步检查。
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