CN107759659A - 注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置及其应用 - Google Patents

注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107759659A
CN107759659A CN201610696117.7A CN201610696117A CN107759659A CN 107759659 A CN107759659 A CN 107759659A CN 201610696117 A CN201610696117 A CN 201610696117A CN 107759659 A CN107759659 A CN 107759659A
Authority
CN
China
Prior art keywords
renaturation
tank
dilution
albuminate
dispersal device
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610696117.7A
Other languages
English (en)
Inventor
解福生
周祥山
秦绪才
庞甲佩
逄建勇
马晓英
刘立岗
许士豹
王树仁
周东红
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Angde Biopharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Angde Biopharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Angde Biopharmaceutical Co Ltd filed Critical Angde Biopharmaceutical Co Ltd
Priority to CN201610696117.7A priority Critical patent/CN107759659A/zh
Publication of CN107759659A publication Critical patent/CN107759659A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明公开了注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置及其应用，所述装置包括复性罐罐体、罐体盖、搅拌器以及加液和稀释装置；在罐体的顶端设有罐体盖，在罐体的轴心装有搅拌器，搅拌器的转轴向上转动穿出罐体盖并与动力装置传动连接；所述加液和稀释装置由进液管和盘旋于复性罐罐体内壁的螺旋管连接组成；在螺旋管面对罐体轴心的一侧均匀设有多个出液孔，出液孔外装有与其同轴线的喷嘴。本发明复性稀释分散装置可使变性蛋白溶液快速、均匀、高效的分散到罐内的复性液中，有效减少蛋白聚集、抑制蛋白复性时中间体和多聚体的产生，和常规复性装置相比，变性蛋白复性率提高了20％。

Description

注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释 分散装置及其应用
技术领域
本发明涉及变性蛋白的复性装置，尤其涉及一种注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置，属于变性蛋白的复性装置领域。
背景技术
大肠杆菌作为应用最为广泛的外源基因表达系统，存在的主要瓶颈问题是高表达的外源蛋白主要以无活性的包涵体形式存在，需要通过复性才能获得生物活性。但是常规复性的活性回收率不高，一般仅为5％～10％，尤其是大规模工业化复性的复性率更低，这无疑增加了许多生物蛋白药的生产成本。
蛋白质复性的最大问题是在复性过程中形成中间体和多聚体，而他们可以阻碍蛋白质的复性过程。降低蛋白浓度可以减少中间体和多聚体的形成从而提高复性率。稀释复性法因操作简单，对设备要求不高，目前仍是工业生产中最常用和有效的复性方法。在常规的稀释复性中，为了减少中间体和聚体的产生，通常需要在很低的蛋白浓度下(10～50μg/ml)进行复性。
为减少中间体的形成，可选用添加小分子物质(又叫分子伴侣)，如精氨酸、甘油、PEG等，小分子物质可帮助蛋白质正确折叠；此外，避免多聚体的形成还可以加入氧化还原剂(DTT、还原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽等)，帮助蛋白质复性中二硫键的正确配对，减少错配率。除上述方法外，还可以通过改进变性蛋白稀释加液的方式，使变性蛋白溶液快速、均匀地混合到大量复性液中，通过这种稀释方式能够有效减少蛋白聚集，降低中间体和多聚体的产生，从而提高目的蛋白复性率。
目前已报道的稀释复性方法中，加液稀释一般都是把一垂直加液管深入到复性液液面下直接加变性蛋白液，这种加液方式不利于变形蛋白液快速的分散均匀，容易导致局部蛋白浓度过高，使变性蛋白大量聚集，最终导致复性率较低，有待改进。
发明内容
本发明提供了一种注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置，以解决上述现有的稀释复性装置时在应用时容易导致局部蛋白浓度过大，产生大量中间体和聚体，导致蛋白复性率较低的问题。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
一种注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置，包括复性罐罐体、罐体盖、搅拌器以及加液和稀释装置；其中，在罐体的顶端设有罐体盖，在复性罐体的轴心装有搅拌器，搅拌器的转轴向上转动穿出罐体盖并与动力装置传动连接；所述的加液和稀释装置由进液管和自上至下盘旋于复性罐罐体内壁的螺旋管连接组成；在螺旋管面对罐体轴心的一侧均匀设有多个出液孔，出液孔外装有与其同轴线的喷嘴。
优选的，所述出液孔或喷嘴的开口方向水平垂直于搅拌器的转轴，喷嘴为射线状设计，加样时蛋白溶液以射线状喷出，配合罐内复性液的搅拌，可使蛋白溶液快速、均匀分散于复性液的各个部位。
本发明复性稀释分散装置的一种优选的结构，所述进液管位于复性罐罐体内内壁的上部并引出到罐体外，引出端的端口能够方便的通过管道与变性蛋白溶液相通(引出端的端口也能够直接与变性蛋白溶液相通)；所述螺旋管位于进液管的下方(位于复性罐罐体内内壁的中部和下部)，其自上至下盘旋于复性罐罐体内壁的中部和下部，其中，螺旋管的最末端(位于复性罐罐体内壁的最下部)封闭。
本发明复性稀释分散装置的另一种优选的结构，所述螺旋管上的出液孔或喷嘴的直径自上至下应一致，喷嘴的直径大小的选择应依据罐体的直径和蛋白溶液的加样速度共同决定，在罐空载时其近直线射程应不低于罐体半径，能确保蛋白溶液快速、均匀分散到复性液中。
本发明复性稀释分散装置的再一种优选的结构，所述的搅拌器由径向连接在转轴上的一层以上的叶片组成，每一层由至少两个叶片沿圆周均布；进一步优选的，所述的搅拌器由径向连接在转轴上的二层或三层的叶片组成，所述的叶片位于转轴的中部或下部。
本发明进一步提供了该复性稀释分散装置在变性蛋白复性中的应用，包括：
(1)向复性罐罐体内加入蛋白复性缓冲液，使蛋白复性缓冲液没过螺旋管的所有出液孔或喷嘴；(2)将进液管的引出端的端口通过管道与变性蛋白溶液相连接，通过蠕动泵提供加液动力将变性蛋白溶液经过进液管到螺旋管中，蠕动泵提供的动力使变性蛋白溶液通过出液孔和喷嘴喷射到罐体内的蛋白复性缓冲液中；(3)启动搅拌器对罐体内的混合液体进行搅拌，完成变性蛋白的稀释复性。
本发明变性蛋白的稀释复性可以使加入的变性蛋白溶液快速、均匀、高效的分散到复性液中，通过这种稀释方式能够有效减少蛋白聚集，抑制蛋白复性时中间体和多聚体的产生，和常规复性装置相比，采用本装置的变性蛋白的复性率提高了20％以上。另外，本装置易于操作，利于变性蛋白大规模复性，有效提高生物制药工程的工作效率，对生物制药的工业化生产具有重要意义。
附图说明
图1是本发明变性蛋白的稀释复性装置的总体的轴向剖视结构示意图；
图2是图1中的A-A剖视图(结构之一)；
图3是图1中的A-A剖视图(结构之二)；
图4是图3中B处的放大图。
附图标记说明：1-复性罐罐体，11-罐体盖，2-螺旋管，21-出液孔，22-喷嘴，3-搅拌器，31-搅拌器的转轴，32-搅拌器的螺旋叶片，4-进液管，5-转轴支座，6-罐体盖。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
如图1-图4所示，本发明的一种注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置，包括罐体1、罐体盖6、螺旋管2和搅拌器3，在罐体1的顶端设有罐体盖6，在该罐体1的内壁设有螺旋管2，在该螺旋管2面对罐体轴心的一侧均匀间隔设有多个出液孔21(图1和图2)；
该螺旋管2的下端封闭，螺旋管2的上端与进液管4连接，进液管4的上端从罐体内引出到罐外，其引出部分的进口端可通过管道与变性蛋白溶液相通；在该罐体1的轴心装有搅拌器3，该搅拌器3的转轴31向上转动穿出所述的罐体盖6，并与动力装置(未图示)传动连接。
在所述的螺旋管2的出液孔21外装有(焊接或螺纹连接)与其同轴线的喷嘴22(参见图3和图4)。
所述的螺旋管2的出液孔21或与其对应的喷嘴22的直径自上至下一致。
所述的螺旋管2自上至下盘旋于罐体1的内壁的中部和下部之处。
所述的搅拌器3由径向连接在转轴31上的一层以上的叶片32组成，每一层由至少两个叶片32沿圆周均布。
应用本发明变性蛋白的复性稀释分散装置进行变性蛋白复性时，可参考以下步骤：
首先向复性罐罐体1内加入蛋白复性缓冲液，使蛋白复性缓冲液没过螺旋管2的所有的出液孔21或喷嘴22；将进液管4的引出端的端口通过管道与变性蛋白溶液相连接，通过蠕动泵提供加液动力将变性蛋白溶液经过进液管4进入到螺旋管2中，蠕动泵提供的动力使变性蛋白溶液通过出液孔21和喷嘴22喷射到罐体内的复性缓冲液中；启动搅拌器3对罐体内的混合液体进行搅拌，完成变性的稀释复性。
试验例1 应用本发明复性稀释分散装置复性变性蛋白的试验
一、供试材料
变性蛋白为Trx-rPA。Trx-rPA为融合蛋白，其中Trx为硫氧还原蛋白，rPA为注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物。
二、试验方法及试验结果
首先向复性罐罐体1内加入蛋白复性缓冲液，使蛋白复性缓冲液没过螺旋管2的所有的出液孔21或喷嘴22；启动搅拌器3对罐体内的混合液体进行搅拌，使溶液处于最大旋转状态，便于蛋白溶液分散；将进液管4的引出端的端口通过管道与变性蛋白溶液相连接，通过蠕动泵提供加液动力将变性蛋白溶液经过进液管4进入到螺旋管2中，蠕动泵提供的动力使变性蛋白溶液通过出液孔21和喷嘴22喷射到罐体内的复性缓冲液中；加样完毕，停止搅拌器3，静置复性。
经过检测，采用本发明稀释复性装置的变性蛋白的复性率见表1。
表1采用本发明稀释复性装置对变性蛋白的复性率
复性次数 加样蛋白 复性后收集目的蛋白 复性率
1 885.6g 151.43g 17.1％
2 871.2g 149.77g 17.2％
3 873g 150.5g 17.2％
根据表1的试验结果可见，采用本发明的稀释复性装置，Trx-rPA的复性率约为17％。
对比试验例1
一、供试材料
变性蛋白为Trx-rPA；Trx-rPA为融合蛋白，其中Trx为硫氧还原蛋白，rPA为注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物。
二、试验方法及结果
1#和5#罐的复性液采用常规装置复性(将一垂直加液管深入到复性罐内的复性液液面下直接加变性蛋白液进行复性)，7#罐采用本发明稀释复性装置进行复性(复性方法见试验例1)，复性率结果见表2。
表2本发明稀释复性装置与常规复性装置的复性率对比
复性罐 加样蛋白 复性后收集目的蛋白 复性率
1# 290.2g 39.18g 13.5％
5# 290.2g 39.49g 13.6％
7# 290.2g 49.33g 17.0％
从表2的试验结果可见，采用本发明稀释复性装置对变性蛋白的复性率可维持在17％，而采用常规复性装置对变性蛋白的复性率大约在13.5％，可见，采用本发明稀释复性装置的复性率比现有的复性装置提高了25.9％，达到20％以上。

Claims (10)

1.注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置，包括复性罐罐体、罐体盖、搅拌器以及加液和稀释装置；其中，在罐体的顶端设有罐体盖，在复性罐体的轴心装有搅拌器，搅拌器的转轴向上转动穿出罐体盖并与动力装置传动连接；其特征在于：所述的加液和稀释装置由进液管和盘旋于复性罐罐体内壁的螺旋管连接组成；在螺旋管面对罐体轴心的一侧均匀设有多个出液孔，出液孔外装有与其同轴线的喷嘴。
2.按照权利要求1所述的复性稀释分散装置，其特征在于：所述出液孔或喷嘴的开口方向水平垂直于搅拌器的转轴。
3.按照权利要求1所述的复性稀释分散装置，其特征在于：所述进液管位于复性罐罐体内壁的上部并引出到罐体外，引出端的端口通过管道与变性蛋白溶液相通；所述螺旋管位于复性罐罐体内壁的中部和下部。
4.按照权利要求3所述的复性稀释分散装置，其特征在于：所述螺旋管自上至下盘旋于复性罐罐体内壁的中部和下部。
5.按照权利要求4所述的复性稀释分散装置，其特征在于：所述螺旋管的最末端封闭。
6.按照权利要求1所述的复性稀释分散装置，其特征在于：所述螺旋管上的出液孔或与其对应的喷嘴的直径自上至下一致；优选的，所述喷嘴的直径大小的设定依据是确保在复性罐空载时其近直线射程不低于罐体半径。
7.按照权利要求1所述的复性稀释分散装置，其特征在于：所述的搅拌器由径向连接在转轴上的一层以上的叶片组成，每一层由至少两个叶片沿圆周均布。
8.按照权利要求7所述的复性稀释分散装置，其特征在于：所述叶片位于转轴的中部或下部。
9.权利要求1-8所述的复性稀释分散装置在复性变性蛋白中的应用。
10.按照权利要求9所述的应用，其特征在于包括：
(1)向复性罐罐体内加入蛋白复性缓冲液，使蛋白复性缓冲液没过螺旋管的所有出液孔或喷嘴；(2)将进液管引出端的端口通过管道与变性蛋白溶液相连接，通过蠕动泵提供加液动力将变性蛋白溶液经过进液管输送到螺旋管中，蠕动泵提供的动力使变性蛋白溶液通过螺旋管中间隔分布的喷嘴喷射到罐体内的蛋白复性缓冲液中；(3)启动搅拌器对罐体内的混合液体进行搅拌，完成变性蛋白的稀释复性。
CN201610696117.7A 2016-08-19 2016-08-19 注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置及其应用 Pending CN107759659A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610696117.7A CN107759659A (zh) 2016-08-19 2016-08-19 注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610696117.7A CN107759659A (zh) 2016-08-19 2016-08-19 注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107759659A true CN107759659A (zh) 2018-03-06

Family

ID=61262078

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610696117.7A Pending CN107759659A (zh) 2016-08-19 2016-08-19 注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107759659A (zh)

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0356399U (zh) * 1989-10-09 1991-05-30
CN101831379A (zh) * 2010-05-13 2010-09-15 山东东阿阿胶股份有限公司 有利于rPA大规模复性的高效混合复性装置
CN103194378A (zh) * 2013-04-10 2013-07-10 黑龙江八一农垦大学 三维液相发酵螺旋搅拌装置
CN203700349U (zh) * 2014-01-17 2014-07-09 浙江诚信医化设备有限公司 一种生物发酵设备
KR101535562B1 (ko) * 2014-12-09 2015-07-09 이텍산업 주식회사 염수 제조시간을 단축한 염수 제조장치
RU2567649C1 (ru) * 2014-12-30 2015-11-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления" Биогазовая установка
CN205223259U (zh) * 2015-12-21 2016-05-11 天津亿海生物科技有限公司 灭菌均匀的细胞培养基发酵罐
KR101618018B1 (ko) * 2015-11-12 2016-05-18 이영환 미생물 복합 배양장치
CN205347410U (zh) * 2015-12-30 2016-06-29 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 多孔盘管及含该多孔盘管的反应器
WO2016116947A1 (en) * 2015-01-21 2016-07-28 Indian Institute Of Technology A coiled flow inverter reactor for continuous refolding of denatured recombinant proteins and other mixing operations
CN205473774U (zh) * 2015-12-31 2016-08-17 尹氏（天津）生物科技有限公司 大曝气量好氧生物发酵罐
CN206051898U (zh) * 2016-08-19 2017-03-29 昂德生物药业有限公司 注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0356399U (zh) * 1989-10-09 1991-05-30
CN101831379A (zh) * 2010-05-13 2010-09-15 山东东阿阿胶股份有限公司 有利于rPA大规模复性的高效混合复性装置
CN103194378A (zh) * 2013-04-10 2013-07-10 黑龙江八一农垦大学 三维液相发酵螺旋搅拌装置
CN203700349U (zh) * 2014-01-17 2014-07-09 浙江诚信医化设备有限公司 一种生物发酵设备
KR101535562B1 (ko) * 2014-12-09 2015-07-09 이텍산업 주식회사 염수 제조시간을 단축한 염수 제조장치
RU2567649C1 (ru) * 2014-12-30 2015-11-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления" Биогазовая установка
WO2016116947A1 (en) * 2015-01-21 2016-07-28 Indian Institute Of Technology A coiled flow inverter reactor for continuous refolding of denatured recombinant proteins and other mixing operations
KR101618018B1 (ko) * 2015-11-12 2016-05-18 이영환 미생물 복합 배양장치
CN205223259U (zh) * 2015-12-21 2016-05-11 天津亿海生物科技有限公司 灭菌均匀的细胞培养基发酵罐
CN205347410U (zh) * 2015-12-30 2016-06-29 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 多孔盘管及含该多孔盘管的反应器
CN205473774U (zh) * 2015-12-31 2016-08-17 尹氏（天津）生物科技有限公司 大曝气量好氧生物发酵罐
CN206051898U (zh) * 2016-08-19 2017-03-29 昂德生物药业有限公司 注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN205115475U (zh) 通气发酵罐
CN206051898U (zh) 注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置
CN208567590U (zh) 一种具有高效冷却效果的冷却塔
CN111758703A (zh) 一种农业大棚农药喷洒混合装置
CN207025173U (zh) 一种脂肪乳注射液的生产制备装置
CN107759659A (zh) 注射用重组人组织型纤溶酶原激酶衍生物制备用的复性稀释分散装置及其应用
CN106139977A (zh) 一种着色剂生产用的搅拌釜
CN208346148U (zh) 一种发酵罐搅拌装置及发酵罐
CN103272405A (zh) 一种用于醋酸萃取装置中的搅拌填料塔
CN113141845A (zh) 一种农作物水肥一体机
CN211069936U (zh) 一种悬浮剂类农药生产用搅拌装置
CN107839912A (zh) 多种工业用液体混合灌装机器人
CN105275445B (zh) 同心管式泡沫发生器
CN205361124U (zh) 消毒液生产用搅拌装置
CN108384702A (zh) 一种具有对向混合功能的生物制药用发酵设备
CN206381996U (zh) 一种氢化反应釜
CN206082428U (zh) 一种红酒勾兑搅拌机
CN205024208U (zh) 生物酶搅拌设备
CN103240019A (zh) 循环药液颗粒分散器
CN206853482U (zh) 一种农业用农药快速搅拌稀释装置
CN211497005U (zh) 一种在水溶液中将聚丙烯酰胺快速堆球反应装置
CN211436032U (zh) 一种化学气液混合装置
CN206879435U (zh) 一种水溶肥料喷洒装置
CN211216252U (zh) 一种润滑油调和装置
CN220696431U (zh) 水溶蜂胶制备装置

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 252201 No. 78 Ajiao Street, Donga County, Liaocheng City, Shandong Province

Applicant after: Huarun Onde Biopharmaceutical Co., Ltd.

Address before: 252201 No. 78 Ajiao Street, Donga County, Liaocheng City, Shandong Province

Applicant before: Angde Biopharmaceutical Co., Ltd.