CN107750272A - 用于繁殖细胞的系统 - Google Patents

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CN107750272A CN201680035257.8A CN201680035257A CN107750272A CN 107750272 A CN107750272 A CN 107750272A CN 201680035257 A CN201680035257 A CN 201680035257A CN 107750272 A CN107750272 A CN 107750272A
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Abstract

提供了用于繁殖细胞的系统和方法，所述系统包括多孔板和用于密封多孔板的至少一个孔的板密封装置，所述板密封装置包括至少一个实心凸起或至少一个包括实心基座的凸起，所述至少一个凸起由具有回弹性的弹性体组成以牢固地密封所述多孔板的至少一个孔。还公开了所述系统用于繁殖细胞的用途和相应的方法。

Description

用于繁殖细胞的系统
本发明一般涉及细胞培养技术领域。更具体地说，本发明涉及用于繁殖活细胞的系统，以及使用所述系统繁殖活细胞的方法。
本发明的背景
为了分析生物学机制和测试药物或化学化合物的毒性，细胞和微组织(microtissue)的使用越来越受到青睐。通常，哺乳动物细胞以粘附于用于培养所述细胞的容器的表面或内部的细胞的二维单层形式培养。然而，活哺乳动物有机体中细胞的自然原位环境具有三维结构(architecture)。因此，导致球状体或微组织的形成的在三维结构中培养的哺乳动物细胞提供一种测试系统，所述测试系统比单层细胞更接近自然环境的形态学和功能性的特征。
生成球状体或微组织是复杂的、资源要求苛刻的且精度高的。出于这个原因，通常在具有繁殖3D细胞培养物技术诀窍(know-how)的设备中产生球状体和微组织。为了使用，将球状体或微组织从其产生的地点运输到其使用的地点，例如在药物筛选测定中。通常，将培养物中的细胞冷却至约4℃，或甚至冷冻以便运输，而不管细胞是以二维还是以三维结构存在。用于运输和在运输过程中的冷却或冷冻细胞降低了它们的代谢并且提高了它们的存活率。然而，在其使用地点，细胞必须解冻和/或加热到进行后续测定的温度。例如，在37℃下繁殖的哺乳动物细胞将被冷冻、在液氮或干冰中运输并且在这样的程序中再次被加热到37℃。
无论进行冷却/冷冻和解冻/加热是如何温和，球状体/微组织中的细胞的生存力受到影响，后续测定的准确性和/或可靠性也受到影响。因此，需要能够繁殖和运输细胞(特别是以球状体或微组织的形式)而不损害细胞的生存力的方法和装置。
而且，期望在进行测定之前以及在测定过程中保持繁殖期间球状体和微组织的操作程度尽可能地小。从一个培养物容器到另一个培养物容器的球状体和微组织的任何转移都可能影响其完整性和/或功能性。另外，当培养物容器的盖子打开时(例如在更换培养基时)，操作细胞培养物总是使得细胞培养物易于被单细胞微生物(例如细菌或酵母菌)污染。
因此，需要培养细胞(特别是微组织或球状体的形式)的装置，其最大限度地防止污染。
哺乳动物细胞可在广泛用于分子生物学实验室的标准SBS/ANSI格式多孔板中培养。多孔板通常是包含孔阵列的矩形平板。如SBS(生物分子筛选协会，Society forBiomolecular Screening)所推荐的ANSI(美国国家标准协会，American NationalStandard Institute)的多孔板的精确尺寸(长×宽×高)为127.76mm×85.48mm×14.35mm。多孔板的所述基座区域内具有多种形式，但可具有不同的高度。典型的多孔板包括
6孔，2×3阵列，每个孔包含2ml至5ml的体积；
12孔，3×4阵列，每个孔包含2ml至4ml的体积；
24孔，4×6阵列，每个孔包含0.5ml至3ml的体积；
48孔，6×8阵列，每个孔包含0.5ml至1.5ml的体积；
96孔，8×12阵列，每个孔包含0.1ml至0.3ml的体积；或者
384孔，16×24阵列，每个孔包含0.03ml至0.1ml的体积。
多孔板可以不同的孔形式提供，具有平坦的底部(F-底部)、平坦底部具有壁的最小圆化边缘(C底部)、锥形壁(V底部)或U形底部(U-底部)。多孔板通常由聚苯乙烯或聚氯乙烯制成。对于细胞培养物，使用氧等离子体放电对这些产品的表面进行修饰，以使其表面更亲水，使得更容易地粘附细胞以在其表面生长，否则所述表面会是强疏水性的。
多孔板可包括具有圆形横截面的孔或者具有矩形横截面的孔，优选正方形横截面的孔。
多孔板可用于产生和繁殖球状体或微组织。例如，将可通过在等体积的肿瘤细胞悬液中产生多细胞肿瘤球(MCTS)移液到多孔板的琼脂糖包被的孔中。在每个琼脂糖包被的孔的最低区域仅形成一个球状体，并且多孔板内的所有球状体将具有大致相同的体积。在另一种方法中，微组织或球状体可在悬滴中产生并繁殖，其中使用特定的多孔板。
在多孔板中产生和/或繁殖球状体或微组织的过程中，用于储存和在储存含有球状体或微组织的多孔板时，以及用于运输和在运输含有球状体或微组织的多孔板时，必须覆盖多孔板。所述覆盖物防止每个孔中的细胞培养物被污染并确保细胞培养物的完整性。用于多孔板的常规聚苯乙烯盖不适于在环境温度运输含有球状体或微组织的多孔板，因为这些常规盖子不能防止孔的内容物溢出。为了避免任何溢出，携带细胞的多孔板的每个孔必须被牢固地密封。
为了密封用于分子生物学方法(例如聚合酶链式反应(PCR)实验)的多孔板，密封多孔板的许多方法是已知的。例如，可以在板的整个上表面施加箔或塑料膜。可热密封的铝箔提供有效的气体和液体密封，但是它们难以施加和移除。
由聚乙烯板制成的某些粘性塑料膜可提供用于密封多孔的替代方案，其允许氧气、二氧化碳和水蒸汽的交换。然而，这些膜难以被施加和移除。此外，这些膜既不可高压灭菌，也不可重复使用。除此之外，本发明人发现，当在20℃和37℃之间的温度储存携带微组织的多孔板时，与多孔板的常规盖子相比，用粘性聚合物膜密封携带球状体或微组织的多孔板不防止生存力的显著损失。
令人惊奇的是，本发明人发现，如果将携带微组织的多孔板用具有回弹性的弹性体(resilient elastomer)制成的特别构造的板密封装置密封，则在20℃和37℃之间的温度储存的微组织的细胞生存力的损失显著降低。而且，所述板密封装置改善了微组织培养物的处理。
发明内容
第一方面，本发明涉及用于繁殖细胞的系统，其中所述系统包括多孔板和用于密封所述多孔板的至少一个孔的相应的板密封装置。
第二方面，本发明涉及通过使用根据第一方面的系统来繁殖微组织的方法。
第三方面，本发明涉及根据第一方面的系统用于繁殖微组织的用途。
另一方面，本发明涉及所述系统在测定中的用途。
另一方面，本发明涉及研究分析物对活细胞的影响的方法。
另一方面，本发明涉及根据第一方面的系统的多孔板及其用途。
另一方面，本发明涉及根据第一方面的系统的板密封装置及其用途。
附图简要说明
图1示出了用于繁殖细胞的系统的实施方案的平面视图。
图2示出了沿着图1所示的实施方案的C-C线的横截面视图。
图3示出了图2所示的实施方案的横截面视图中的圆圈部分的放大视图。
图4示出了根据现有技术的板密封装置和相应的多孔板的孔的局部横截面视图。
图5示出了本发明的板密封装置和相应的多孔板的两个相邻的孔的实施方案的局部横截面视图。
图6示出了用于繁殖细胞的系统的实施方案的板密封装置的实施方案的透视视图。
图7示出了沿着图6所示的实施方案的A-A线的横截面视图。
图8示出了沿着图6所示的实施方案的B-B线的横截面视图。
图9示出了图8所示的实施方案的横截面视图中的圆圈部分的放大视图。
图10示出了所述系统的实施方案的一部分的横截面。
图11示出了所述系统的另一实施方案的一部分的横截面。
图12示出了所述系统的另一实施方案的一部分的横截面。
图13示出了所述系统的又一实施方案的一部分的横截面。
图14是用于繁殖细胞的系统的另一实施方案的横截面视图。
图15a-c以横截面视图示出了板密封装置的凸起的各种实施方案。
具体实施方案的详细描述
将参考特定实施方案并参考某些附图来描述本发明，但是本发明不限于此，而仅由权利要求限定。所描述的附图仅是示意性的而非限制性的。在附图中，为了说明的目的，一些元件的尺寸可被夸大，并且没有按照比例绘制。尺寸和相对尺寸并不对应于本发明的实际实践。
此外，说明书和权利要求书中的术语第一、第二等用于在相似的元件之间进行区分，而不一定用于描述在时间上、空间上、排序上或以任何其它方式的顺序。应该理解的是，如此使用的术语在适当情况下是可互换的，并且这里描述的本发明的实施方案能够以不同于在此中描述或示出的其他顺序操作。
应该注意的是，权利要求中使用的术语“包括”、“包含”不应该被解释为限于其后列出的手段；它并不排除其他元件或步骤。因此被解释为指定所涉及的所述特征、技术要素(integer)、步骤或组件(component)的存在，但是并不排除一个或多个其他特征、技术要素、步骤或组件或其组合的存在或增加。因此，表述“包括装置A和B的设备”的范围不应限于仅由组件A和B组成的设备。这意味着关于本发明，设备的重要组件(relevant component)仅为A和B。
贯穿本说明书对“一个实施方案”或“实施方案”的引用意味着结合该实施方案描述的特定特征、结构或特性被包括在本发明的至少一个实施方案中。因此，贯穿本说明书在各个位置出现的短语“在一个实施方案中”或“在实施方案中”不一定都指的是相同的实施方案，但可以是。此外，如本领域普通技术人员从本公开中所显见的，在一个或多个实施方案中，特定的特征、结构或特性可以以任何合适的方式进行组合。
类似地，应当理解的是，在本发明的示例性实施方案的描述中，为了简化本公开并帮助理解一个或多个不同创造性方面，本发明的各种特征有时被组合在单个实施方案、附图或其描述中。然而，这种公开方法不应被解释为反映所要求保护的发明需要比每个权利要求中明确记载的更多特征的意图。相反，如以下权利要求所反映的，创造性方面在于少于单个前述公开的实施方案的所有特征。因此，在详细描述之后的权利要求在此明确地并入本详细描述中，其中每个权利要求本身作为本发明的单独实施方案。
此外，尽管本文描述的一些实施方案包括其他实施方案中包括的一些特征但不包括其他特征，但是如本领域技术人员将理解的那样，不同实施方案的特征的组合意图在本发明的范围内并且形成不同的实施方案。例如，在下面的权利要求中，任何要求保护的实施方案可以以任何组合使用。
此外，本文将一些实施方案描述为可以由计算机系统的处理器实施或执行功能的其他装置实施的方法或方法的元件的组合。因此，处理器形成用于执行方法或者方法的元件的装置，所述处理器具有用于执行这样的方法或者方法的元件的必要指令。此外，本文描述的设备实施方案的元件是用于执行功能的装置的示例，所述功能由用于执行本发明的目的的元件执行。
本文提供的描述中阐述了许多具体细节。然而应该理解可以在没有这些具体细节的情况下实践本发明的实施方案。在其他情况下，公知的方法、结构和技术未被详细示出以避免模糊对本说明书的理解。
现在将通过本发明的几个实施方案的详细描述来描述本发明。清楚的是，根据本领域技术人员的知识且不背离本发明的真正精神或技术教导可以构造本发明的其他实施方案，本发明仅由所附权利要求的条款限制。
根据第一方面，本发明提供了用于繁殖细胞的系统，其中所述系统包括多孔板和用于密封所述多孔板的至少一个孔的板密封装置，使得当所述板密封装置施加于所述多孔板时，所述多孔板的至少一个孔内的细胞可在其中繁殖。
如本文所用，术语“细胞”是指一或多个活细胞，无论原核细胞还是真核细胞。真核细胞可以是真菌、植物或动物来源的。术语“细胞”包括人类细胞，即人类来源的细胞。术语“细胞”包括以单个细胞形式存在的细胞、以单层细胞形式存在的细胞以及以球状体或微组织形式存在的细胞。
术语“微组织”是指彼此连接的细胞集群(assembly)。所述细胞集群可以以单层细胞的形式存在或以三维结构的形式存在。因此，本文使用的术语“微组织”还包括球状体。
关于细胞和/或微组织的术语“繁殖”是指培养细胞的所有方面。如本文所用的术语“繁殖”包括细胞的培养，包括其增加、发育、增殖和成熟。因此，“繁殖”还包括微组织的形成。如本文所用的术语“繁殖”还包括培养中的细胞和/或微组织的维持、储存和/或运输。
在一个实施方案中，所述系统的多孔板是典型的标准SBS/ANSI格式多孔板，优选如上文所述的多孔板，更优选为包含8×12阵列96孔或16×24阵列384孔的多孔板。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述多孔板的至少一个孔的至少一部分(优选所述多孔板的所有孔的至少一部分)设置有超低附着表面。在具有超低附着表面的孔中繁殖细胞维持细胞处于悬浮的、未附着的状态。在具有超低附着表面的孔中繁殖球状体或微组织维持球状体或微组织的完整性，并防止球状体或微组织出现不希望的附着介导的成熟或分化，包括细胞分裂性质上的不希望的改变。
可以以各种不同的方式提供具有超低附着表面的多孔板的孔。提供具有超低附着表面的孔的一个实例是将水凝胶层共价结合到例如聚苯乙烯的基质上，所述水凝胶是亲水的并且是中性电荷的。包含这种超低附着表面的多孔板可从Corning Inc.商购获得。超低附着表面的另一实例是由2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱(MPC)组成的聚合物制成的表面。这样的表面可从NOF America Corporation以商品名Lipidure获得。
因此，在额外的和/或替代的实施方案中，所述多孔板的至少一个孔的至少一部分(优选所述多孔板的所有孔的至少一部分)包含由水凝胶(如琼脂糖)组成的涂层或由2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(MPC)组成的涂层。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述多孔板的至少两个相邻的孔流体连通。在一个优选的实施方案中，所述多孔板内一排孔的孔彼此流体连通。例如，在96孔多孔板中，多达8排孔的12孔或多达12排孔的8孔可彼此流体连通。在替代实施方案中，所述多孔板的所有孔彼此流体连通。优选地，一排孔的孔或多孔板的孔彼此流体连通，因为每个相邻的孔流体连通。
在优选的实施方案中，所述多孔板的至少两个孔之间的流体连通被建立，因为在所述至少两个孔之间提供至少一个通道。
优选地，所述多孔板的两个或更多个孔之间的流体连通借助于至少一个通道的装置来建立，所述通道设置在彼此直接流体连通的两个孔之间。在替代的实施方案中，可以在彼此直接流体连通的两个孔之间设置一个、两个、三个、四个甚至更多个通道。在彼此直接流体连通的两个孔之间包含两个或更多个通道的实施方案中，所述通道平行运行。
可通过选择两个孔之间至少一个通道的直径和/或通道的数量来控制流体从一个孔到另一个孔的流速。通常，通道的数量越少以及其直径越小，可能从一个孔向另一个孔迁移的培养基的流速越小。
在所述多孔板的至少两个孔之间提供流体连通允许所述系统用于分析，其中可确定一个孔中的细胞产生的代谢产物对另一个孔的细胞的影响而不需要打开孔的密封，并且也可避免从携带细胞的孔中吸出培养基的需求。
板密封装置包括至少一个由具有回弹性的弹性体组成的凸起，其中所述凸起被构造成牢固地(securely)装配到所述多孔板的孔中。术语“回弹性”是指材料在拉伸、伸展、压缩或弯曲后能够恢复到其原始形状而不会永久变形或破裂。因此，所述凸起装配于孔的开口，并且由于其弹性牢固地密封孔。术语“牢固地密封”是指当系统倒置时，所述凸起不会从孔中掉落，并且当系统倒置时，孔内没有流体从密封的孔内泄漏。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述至少一个凸起是实心凸起。所述至少一个凸起可被构造为圆锥体的截头锥(frustrum)或者倒转的圆锥体的截头锥。在额外的和/或替代的构造中，所述至少一个凸起包括凹形(concave)底部，用于当所述凸起适当地插入到所述孔中时在孔壁与凸起之间提供阻碍角。关于凸起的术语“底部”是指凸起的远端，即与凸起的基座相反方向的凸起的端部。在额外的和/或替代的构造中，所述至少一个凸起包括中空的凸起，用于改善所述至少一个凸起的柔性并将所述至少一个凸起装配到相应的孔中。所述中空的凸起提供了凸起的柔性边缘(edge)，其改善了将至少一个凸起装配入孔中以及所述孔的密封。在又一个额外的和/或替代的实施方案中，所述至少一个凸起包括至少一个翼片(flap)。优选地，所述至少一个凸起包括单个翼片或双翼片。所述至少一个翼片被周向地设置在所述至少一个凸起的远端部分的外边缘处。所述至少一个凸起的远端部分被理解为与所述凸起的基座相反方向的部分。尽管如此，包括凹形底部、中空和/或至少一个翼片的构造包括实心基座，所述实心基座在其整个横截面为实心的。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述具有回弹性的弹性体是硅橡胶。
根据DIN 53505测量，优选的硅橡胶的肖氏硬度A在55至65的范围内。
根据DIN 53479测量，优选的硅橡胶的比重在约1.13和1.17g/cm3之间。
根据DIN 53504S2测量，优选的硅橡胶具有约7MPa的拉伸强度。
根据DIN 53504S2测量，优选的硅橡胶具有约350％的伸长率。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述具有回弹性的弹性体选自由以下组成的组：硅橡胶(优选二甲基硅橡胶乙烯基甲基硅氧烷和苯基乙烯基甲基硅氧烷)、氟硅橡胶(fluorosilicone rubber)、以及丁腈橡胶和天然橡胶。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述具有回弹性的弹性体是透气的。这就是说，例如空气、氧气和二氧化碳的气体可透过所述硅橡胶。在额外的和/或替代的实施方案中，所述透气的具有回弹性的弹性体的透氧率大于1×109，cm3*cm/(s*cm2*cmHg)。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述板密封装置是抗静电的。这就是说，所述板密封装置的硅橡胶材料减少甚至消除了静电。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述板密封装置是可高压灭菌的。也就是说，如本文所述通过使所述板密封装置在121℃的高压饱和蒸汽中经受大约15至20分钟的时间，可对所述板密封装置进行消毒而不损坏或损害其功能。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述板密封装置是可重复使用的。这就是说，所述板密封装置可被多次使用以密封多孔板而不会损坏或损害其功能。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述板密封装置包括至少一个凸起，所述凸起包括可重新密封的隔膜。这就是说，所述板密封装置可通过18号针头刺穿，并且当18号针头从所述板密封装置中拉出时重新密封。
刺穿时气体渗透性等性质没有明显变化。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述板密封装置是非粘性的。即是所述板密封装置不具有粘着力(tack)。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述板密封装置的至少一个凸起在其基座处包括轮缘(rim)，所述基座即为所述凸起从第二面突出的位置。所述至少一个凸起的轮缘是周向的。所述至少一个凸起的轮缘被构造成不装配入相应多孔板的孔，而是位于紧邻孔口的孔的顶部。
所述轮缘防止板密封装置的第二面与多孔板的上表面接触。与没有这种轮缘的实施方案相比，这种构造允许更容易地将所述板密封装置从多孔板移除。
所述至少一个凸起可具有圆形横截面、正方形横截面的矩形横截面。所述凸起的侧面被构造为从凸起的基座到凸起的顶端的变窄的横截面。在一个实施方案中，凸起的相反侧包括30°的角度，所述角度对应于凸起的纵向轴线和凸缘(flange)之间的15°的角度。
凸起的侧面之间的大约30°的角度允许凸起容易地插入到相应的多孔板的孔中或者从相应的多孔板的孔中移除，但是确保将所述凸起牢固地紧凑地装配在孔内。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述板密封装置以弹性垫的形式存在，所述弹性垫由透气的、抗静电的硅橡胶制成。该实施方案的所述板密封装置包括第一面和第二面。当所述板密封装置在使用时，即其被施加到多孔板上，所述第一面构成所述板密封装置的上表面。因此，当所述板密封装置施加于多孔板时，所述板密封装置的第一面背离所述多孔板。所述板密封装置的第二面在所述板密封装置的第一面的相反侧，并构成下表面，即当所述板密封装置在使用(即施加于多孔板)时，所述板密封装置的第二面面向多孔板。
在一个实施方案中，所述第一面具有基本上没有凹痕的平坦(flat)表面或平整(even)表面。在额外的和/或替换的实施方案中，第一面具有标记装置，用于当将所述板密封装置应用于多孔板时更好地识别与多孔板的孔对齐的第一面的那些区域。所述标记装置可以是压花、印记或雕刻结构。所述标记装置可包括每个孔、轮缘或壁所特有的字母、数字或字母和数字的组合指示每个孔的位置，其中所述标记装置被设置在所述板密封装置的第一面上对应于多孔板的孔的位置，即与从所述板密封装置的第二面突出的凸起相反。
弹性垫形式的板密封装置包括从所述板密封装置的第二面突出的至少一个凸起。优选地，所述板密封装置包括从所述板密封装置的第二面突出的凸起的阵列，其中所述凸起的阵列与相应多孔板的孔的阵列(即所述板密封装置被构造为密封多孔板的阵列)匹配。所述至少一个凸起，优选地所述凸起阵列中的每个凸起的尺寸和形状被设置成牢固地处在相应的多孔板的孔中。
所述至少一个凸起或所述凸起或所述凸起阵列是从所述板密封装置的第二面突出的所述板密封装置的实心元件或包括实心基座部分的元件。也就是说，所述凸起是实心的或者包括一个实心的基座，并且它们由硅橡胶组成，所述板密封装置是这样制造的：使得至少一个凸起或多个凸起成为所述板密封装置的一体元件(integral element)，与两个凸起之间的区域相比，凸起区域的橡胶材料的厚度增加。凸起不构造成窝形(dimple)，所述窝形通常产生于橡胶膜变形以使得窝形区域与窝形以外区域中的橡胶材料的厚度基本上相同。
当将所述板密封装置施加于多孔板时，所述凸起提供相应多孔板的孔的牢固密封，因此防止任何液体从密封的孔中漏出或进入。据信，孔的紧凑密封是基于这样的事实：所述凸起是实心的或者包含实心基座而非窝形。当插入到多孔板的孔中时，弹性凸起的恢复力似乎高于具有相同形状和尺寸的窝形的恢复力。因此，认为与窝形相比凸起的更好的密封是细胞生存力提高的原因。
凸起的额外构造进一步改善了它们密封孔的效力，并且因此确保了细胞在孔内的繁殖。这种额外的构造例如是凸起的凹形底部、凸起的中空和/或所述凸起的远端部分的至少一个周向翼片。
包括实心基座的实心凸起或凸起的所述板密封装置由具有回弹性的弹性体制成。因此，提供了可容易地施加于多孔板的柔性垫，易于从所述多孔板移除并容易地重新施加到相同或另一多孔板，并且同时提供多孔板的孔的紧凑密封。
在一个实施方案中，所述板密封装置覆盖所述多孔板的整个表面。在替代实施方案中，所述板密封装置不覆盖所述多孔板的整个表面，而仅覆盖部分表面。
所述板密封装置包括基本上覆盖标准96孔板的整个上表面的弹性硅树脂垫，并且包括96个实心凸起，使得可使用所述板密封装置的该实施方案来密封标准96孔板的每个孔。
在一个实施方案中，所述板密封装置包括周向突边(brim)。所述边垂直于所述垫的平面并且在所述凸起的方向上延伸。因此，当安装到多孔板时，所述板密封装置的边包围多孔板的侧面。因此，所述板密封装置的实施方案具有用于多孔板的常规聚苯乙烯盖的形式，但是是弹性的。
所述凸起优选地具有圆形的横截面，以便牢固地装配到也具有圆形横截面的孔中。可以理解的是，所述板密封装置的凸起可如本文所述的对于所述凸起进行构造。
如本文所用的术语“多孔板”是指包含孔阵列的矩形平板，优选具有如上文所示的生物分子筛选学会(Society for Biomolecular Screening)推荐的尺寸。
本文所用的术语“相应的多孔板”是指与具有凸起的所述板密封装置具有相同数量的孔的多孔板，其中所述多孔板的孔与所述板密封装置的凸起以相同阵列存在，和/或其中所述孔与所述板密封装置的凸起具有相同的横截面，并且其中所述孔的直径与凸起的直径在其高度的大约一半处是相同的。术语“相应的多孔板”应表示所述板密封装置是构造用于密封特定多孔板的孔的板密封装置。
如本文所用的术语“培养”包括体外维持或繁殖细胞，其中术语“维持”包括在较低温度(例如约4℃或甚至冷冻，例如约-20℃、约-80℃或甚至约-180℃)储存细胞。术语“培养”包括体外细胞的增殖以及体外细胞的维持，即在细胞增加、以减慢的速率增加或不增加的条件下。
本文所用的术语“运输”是指货物运输，即运输日用品和商品以及包括活体器官、组织、微组织、球状体和细胞的货物的物理过程。术语“运输”包括海运、陆运或空运。
在一个实施方案中，所述板密封装置由具有回弹性的弹性体制成，所述弹性体优选选自由以下组成的组：硅橡胶(优选二甲基硅橡胶乙烯基甲基硅氧烷和苯基乙烯基甲基硅氧烷)、氟硅橡胶、以及丁腈橡胶和天然橡胶。
在一个实施方案中，所述板密封装置的具有回弹性的弹性体是透气的。也就是说，例如空气、氧气和二氧化碳的气体可透过所述弹性体。优选地，所述具有回弹性的弹性体具有大于1×109，cm3*cm/(s*cm2*cmHg)的透氧性。
根据DIN 53505测量，优选的硅橡胶的肖氏硬度A在55至65的范围内。
根据DIN 53479测量，优选的硅橡胶的比重在约1.13和1.17g/cm3之间。
根据DIN 53504S2测量，优选的硅橡胶具有约7MPa的拉伸强度。
根据DIN 53504S2测量，优选的硅橡胶具有约350％的伸长率。
所述板密封装置是抗静电的。这就是说，所述板密封装置的硅橡胶材料减少甚至消除了静电。
所述板密封装置是可高压灭菌的。也就是说，如本文所述通过使所述板密封装置在121℃的高压饱和蒸汽中经受大约15至20分钟的时间，可对所述板密封装置进行消毒而不损坏或损害其功能。
所述板密封装置是可重复使用的。也就是说，所述板密封装置可被多次使用以密封多孔板而不会损坏或损害其功能。
在额外的实施方案中，所述板密封装置包括至少一个包括可重新密封的隔膜的凸起。这就是说，所述板密封装置可通过18号针头刺穿，并且当18号针头从所述板密封装置中拉出时重新密封。刺穿时气体渗透性等性质没有明显变化。
所述板密封装置是非粘性的。即是板密封装置不具有粘着力。
在额外的实施方案中，所述板密封装置的至少一个凸起在其基座包括轮缘(rim)，所述基座即为所述凸起从第二面突出的位置。至少一个凸起的轮缘是周向的。所述至少一个凸起的轮缘被构造成不装配入相应多孔板的孔，而是位于紧邻孔口的孔的顶部。
所述轮缘防止所述板密封装置的第二面与多孔板的上表面接触。与没有这种轮缘的实施方案相比，这种构造允许更容易地将所述板密封装置从多孔板移除。
所述至少一个凸起可具有圆形横截面、正方形横截面的矩形横截面。凸起的侧面被构造为从凸起的底部到凸起的顶端的变窄的横截面。在一个实施方案中，凸起的相反侧包括30°的角度，该角度对应于所述凸起的纵向轴线和凸缘之间的15°的角度。
凸起的侧面之间的大约30°的角度允许所述凸起容易地插入到相应的多孔板的孔中或者从相应的多孔板的孔中移除，但是确保将所述凸起牢固地紧凑地装配在孔内。
在一个实施方案中，所述板密封装置包括周向的突边。所述边缘垂直于垫的平面并且在所述凸起的方向上延伸。因此，当安装到多孔板时，所述板密封装置的边缘包围所述多孔板的侧面。因此，所述板密封装置的实施方案具有用于多孔板的常规聚苯乙烯盖的形式，但是是弹性的。
所述板密封装置可额外包括柱或销，所述柱或销分别装配到除了多孔板内的孔之外的洞(hole)中。所述柱被成型为使得它们装配于洞并接触所述洞的壁。所述柱/洞是防止所述板密封装置相对于多孔板横向移动的进一步装置，并且防止所述板密封装置未对准，特别是当所述板密封装置仅部分地从多孔板移除时，例如当要求进入多孔板的各个孔时。
在一个实施方案中，所述板密封装置包括至少一个入口开口和至少一个出口开口。在一个优选实施方案中，所述板密封装置包括用于多孔板内每排孔的入口开口和出口开口。优选地，所述板密封装置的每个入口开口对应于该排孔的第一个孔，而出口孔对应于该排孔的最后一个孔。所述至少一个入口开口和所述至少一个出口开口是所述板密封装置中的洞或通孔(through bore)，使得当所述板密封装置安装到多孔板时，多孔板的相应的孔不被所述板密封装置密封。
所述入口开口允许向至少一个孔添加或补充培养基。所述出口开口允许从至少一个孔中移除或吸取培养基。结合包括至少两个流体连通的孔的多孔板的实施方案，包括至少一个入口开口和一个出口开口的所述板密封装置的安装允许与入口孔直接或间接流体连接的所有孔补充培养基。
在另一个实施方案中，所述板密封装置的至少一个入口开口和/或至少一个出口开口构造为漏斗或烟囱。“漏斗”是指这样的结构：其具有朝向与硅树脂垫的平面的连接点变窄的直径，至少沿其纵向方向的至少一部分。“烟囱”是指沿其纵向方向具有恒定直径的管或管状的结构。
在另一个实施方案中，所述板密封装置被构造为没有凸起的基本上平面的弹性垫的形式。在该实施方案中，所述板密封装置包括刚性框架，所述刚性框架优选地由例如聚苯乙烯的硬塑料制成，并被构造成用作相应多孔板的盖子。所述刚性框架包括具有穿孔(bore)的板，其中所述穿孔(bore)与对应的多孔板的孔对齐。所述板包括外表面和内表面。所述外表面背离多孔板，而所述内表面在将所述板密封装置安装到多孔板上时面向多孔板。基本平面的弹性垫提供在所述板的内表面上。
在额外的和/或替代的实施方案中，所述系统包括用于将所述刚性框架固定到多孔板的快速锁定系统。在一个实施方案中，所述快速锁定系统包括在框架的相对端处的至少两个锁定闩锁。所述闩锁与在相应的多孔板的外周的相应位置处的凹槽(groove)或狭槽(slot)或沟槽(trench)啮合。通过将所述框架压在多孔板上、闩锁啮合，从而不仅将所述框架固定到多孔板上，而且同时密封多孔板的孔。
在由后一实施方案的板密封装置密封的多孔板的一个优选实施方案中，每个孔在其出口开口处包括周向边缘(edge)。所述周向边缘(edge)从与多孔板的上表面垂直的方向上突出。当所述板密封装置安装到多孔板上时，所述周向边缘被压入平面弹性垫中，从而提供了孔的牢固地密封。
基本平面的弹性垫如之前关于实心凸起所述的由具有回弹性的弹性体制成。
参考图1至3，显示了用于繁殖微组织的系统(1)的实施方案。图1示出了系统(1)的顶部透视图。该实施方案包括96孔多孔板(10)，96孔多孔板(10)包括以12×8阵列排列的多个孔(11)。多孔板(10)由板密封装置(20，图1中未示出)的实施方案覆盖。
多孔板(10)的实施方案包括三个小孔(孔眼，aperture)形式的定位装置(12、13、14)。三个定位装置(12、13、14)排列成使得盖子或板密封装置(20)可仅以一个特定方向施加于多孔板(10)，盖子或板密封装置(20)包括构造成用于啮合所述定位装置(12、13、14)的相应的突起(22、23、24)。
板密封装置(20)包括从所述板密封装置的一个面突出的多个凸起(21)。多个凸起(21)与相应的多孔板的孔以相同阵列存在。图1至3所示的实施方案中，多个凸起(21)排列成12×8阵列。
定位装置(12、13、14)的存在防止了包括对称阵列的凸起(21)的板密封装置(20)以非所欲的方向施加到多孔板(10)。从而避免污染。
另外，图2所示的板密封装置(20)的实施方案包括在板密封装置(20)的外缘处的周向边缘(25)。当板密封装置(20)适当地安装到多孔板(10)上时，边缘(25)将板密封装置(20)的侧面延伸到多孔板(10)的上表面上。
图3示出了板密封装置(20)的凸起(21)如何紧凑地装配到相应的多孔板(10)的相应的孔(11)中，由于其尺寸和弹性为孔(11)提供了牢固的密封。凸起(21)构造成为孔(11)中的细胞、培养基和/或空气留下体积。
图4示出了市售的板密封装置(30)的一部分的横截面图。该视图代表多孔板的单个孔和市售的板密封装置(30)的对应部分。市售的板密封装置(30)由膜组成，所述膜已经经过压花处理从而产生窝形(31)。所述窝形(31)构造成装配入对应的多孔板(10)的孔(11)中。窝形区域中的膜厚度与紧邻窝形的区域相同。
参考图5示出了根据本发明的系统的实施方案的一部分的横截面视图。该部分代表多孔板(10)的两个相邻的孔(11)，以及相应的板密封装置(20)的相应部分。该图示出板密封装置(20)包括凸起(21)，凸起(21)作为板密封装置(20)的实心元件，板密封装置(20)的材料在该处比凸起(21)之间的区域更厚。
如图5所示，板密封装置(20)的实施方案的凸起(21)包括在凸起(21)的基座处的轮缘(26)，所述基座处即凸起(21)从板密封装置(20)的平面突出的位置处。在密封相应的多孔板(10)的孔(11)时，凸起(21)牢固地装配在孔(11)的开口端，使得轮缘(26)位于多孔板(10)的上表面(16)。每个凸起(21)的轮缘(26)是周向元件。在板密封装置(20)安装到多孔板(10)上之后，每个凸起(21)处的所述轮缘(26)的存在使得板密封装置(20)从相应的多孔板(10)的移除更加容易，从而防止可能影响多孔板(10)的孔内的微组织的形成和/或完整性的不期望的摇动和/或防止可能导致培养基从一个孔到另一个孔的不希望的溢出。
参照图6至9中显示了板密封装置(20)的一个实施方案。图6示出了板密封装置(20)的第二面(27)的顶部透视图。所示的板密封装置(20)的实施方案包括从第二面(27)突出的实心凸起(21)的阵列。多个实心凸起(21)排列成对应于典型96孔板的孔阵列的8×12阵列。
图7示出了沿着图6的板密封装置(20)的A-A线的纵向截面，而图8示出了沿着图6的板密封装置(20)的B-B线的纵向截面。
图9是图8中圈出的部分II的放大视图。图9强调板密封装置(20)的实心凸起(21)，实心凸起(21)从板密封装置(20)的第二面(27)突出。
从板密封装置(20)的第二面(27)突出的实心凸起(21)的高度优选为垫的厚度的约1.5倍，即距离是从垫的第一面(28)到第二面(27)测量的。凸起(21)包括基座和顶端，在所述基座处凸起(21)与板密封装置(20)的第二面(27)合并。每个凸起(21)的侧面(29)是锥形的，使得凸起(21)的顶端直径小于凸起(21)基座的直径。在实心凸起(21)的相对侧上的凸缘(29)包括大约30°的角度(α)，使得所述凸起可容易地插入相应的多孔板的孔中，紧贴地装配到孔中，并且提供孔的紧凑密封。这些侧面优选是锥形的，因为它们包括约30°的角度(7)。
图10示出了系统的另一实施方案的一部分，其中板密封装置(20)包括用于密封相应多孔板(10)的相应的孔(11)的至少一个实心凸起(21)。凸起(21)包括自密封隔膜，使得例如注射针(40)可以穿过凸起(21)的自密封隔膜。使用注射器或其他合适的装置，培养基可以从孔(11)通过注射针(40)吸出和/或添加到其中，而不需要从多孔板(10)移除整个板密封装置(20)。当移除注射针(40)时，隔膜自密封，使得板密封装置(20)仍然提供孔(11)的紧凑密封。
在图10中还示出了包括用于繁殖微组织(2)的特别设计的孔(11)的实施方案。所述孔(11)包括存在于孔(11)底部的微组织培养室(15)。所述微组织培养室(15)是在孔底部中间的小隔间，所述小隔间与孔流体连接并且因此构成孔的整合的一部分。
图11示出了另一实施方案的一部分，其中板密封装置(20)包括具有两个自密封隔片的凸起(21)。该实施方案允许通过板密封装置(20)将入口导管(41)和出口导管(42)插入孔(11)中。该构造允许通过孔(11)提供恒定的培养基流。
图12是用于繁殖微组织的系统(1)的另一个实施方案的示意图。多孔板(10)被构造成使得多孔板(10)的一排孔的相邻孔(11、11'、11”)通过至少一个连接孔的装置——通道(17)——彼此流体连接。
此外，该实施方案包括板密封装置(20)，其包括入口开口(210)和出口开口(220)。放置入口开口(210)而非一排凸起的第一凸起，放置出口开口(220)而非一排凸起的最后一个凸起。
入口开口(210)和/或出口开口(220)可被构造为硅胶垫中的通孔。在替代实施方案中，入口开口(210)和/或出口开口(220)可构造成漏斗或烟囱，其包括当安装到多孔板(10)上时，从板密封装置(20)的第一面(28)基本直立延伸的壁(211、221)。
入口开口(210)的开口端和出口开口的开口端可通过塞子(43、45)的装置密封。塞子可由例如硅橡胶的塑料材料制成。在一个实施方案中，塞子(43)可包括微孔部分(44)。或者，塞子(45)可由微孔材料组成。用由微孔材料组成的或包含微孔材料的塞子密封板密封装置的入口开口和/或出口开口改善系统(1)中气态流体的交换。
图13示出了包括多孔板(10)和板密封装置(20)的系统的一个实施方案的一部分的横截面。多孔板包括彼此流体连通的多个孔。通过从一个孔(11)延伸到一排孔中的下一个孔的一个或多个通道(17)使相邻的孔(11)流体连通。
在一个优选实施方案中，连接相邻孔的一个或多个通道不设置在孔的下端，而是设置在离孔的底部有一定距离的高度处。
图12和13所示的实施方案允许通过安装到相应的多孔板的板密封装置的入口开口供应培养基，而不需要从多孔板(10)移除板密封装置(20)。供应到第一孔(即，在入口开口(210)下方的孔)的培养基将流过使孔彼此连接的通道，使得彼此流体连通的所有孔被供应培养基。
如果提供通过入口开口(210)的培养基恒定供应和通过出口开口(220)的培养基恒定移除，则实施方案还进一步提供了通过流体连通的孔提供恒定培养基流的机会。培养基的恒定流可通过利用流体静力而获得，原因在于入口开口的漏斗中的培养基的水平保持高于出口开口处的培养基的水平。因此，高度差提供了流体静力，所述流体静力迫使培养基通过通道从一个孔流到下一个孔流向最后一个孔，所述最后一个孔是出口开口下方的孔。从一个孔到下一个孔的培养基流速也可由连接所述孔的通道的直径和/或数量确定。
参考图14，示出了该系统的另一个实施方案。该实施方案的系统(1)包括多孔板(310)和板密封装置(320)。多孔板(310)包括包含微组织培养室(315、315')的孔(311、311')。由于在所述孔(311、311')之间提供的通道(317)，孔(311、311')流体连通。另外，每个孔(311、311')包括从多孔板(310)的上表面突出的周向边缘(edge)(325、325')。多孔板还包括凹槽(312、312')。
该实施方案还包括构造成盖子的板密封装置(320)，该盖子包括板(326)和周向突边(brim)(322)。所述边(322)包括在盖子的相对侧处的闩(323、323')，用于在将板密封装置(320)正确地安装到多孔板(310)上时啮合在凹槽(312、312')中。板密封装置(320)还包括由具有回弹性的弹性体制成的平面垫(321)。所述平面垫(321)可连接到板(326)。所述板进一步包括通孔(324、324')，所述通孔在安装到所述多孔板时与所述多孔板的所述孔(315、315')对齐。
在第一方面的一个实施方案中，所述系统还包括用于控制多孔板的孔内温度的装置。
用于控制温度的装置被构造为控制温度，使得多孔板的孔内的温度是在25℃和37℃之间的温度。
在替代和/或额外的实施方案中，用于控制多孔板的孔内的温度的装置被构造为在用根据第一方面的板密封装置密封的多孔板的运输期间控制温度。
在第一方面的另一个和/或替代的实施方案中，所述系统还包括温度数据记录器。所述温度数据记录器也称为温度监测器，是一种便携式测量仪器，能够在规定的时间内自主记录温度。正在记录的数字数据可被提取、查看和评估。所述温度数据记录器用于监测正在繁殖的细胞的温度，在其中测量细胞培养物的环境温度。当运输细胞或微组织时使用温度数据记录器是有利的。所述温度数据记录器包含在携带待被运输的细胞培养物的容器中，所述待被运输的细胞培养物在至少一个密封的多孔板内。所述温度数据记录器优选放置在紧邻包括细胞或微组织的至少一个多孔板的位置。所述温度数据记录器监测容器内的温度和温度变化，并且因此监测所述细胞或微组织暴露的温度。这种温度监测只允许使用那些未曾暴露于不希望的温度或不足的温度的细胞或微组织进行测定。
参照图15a至图15c，横截面视图中示意性地示出了凸起的各种实施方案。图15a示出了实施方案(I至IV)被构造为圆锥体的截头锥，其中所述凸起包括凹形底部(101、102、103、104)。实施方案III和IV被构造为圆锥体的反向截头锥。图15b示出了实施方案(V至VIII)，其中所述凸起包括中空(111、112、113、114)。所述凸起包括在其基座处的实心部分(121、122、123、124)和在其远侧部分处的周向轮缘(131、132、133、134)。图15c示出了包括双翼片(实施方案XI)的单个翼片(实施方案IX和X)的凸起的实施方案。单个翼片(141、142)和由两个翼片(143和144)组成的双翼片被构造在所述凸起的外壁处，在那里所述翼片从凸起的周向轮缘向外并周向地延伸。在所示的实施方案中，翼片(141、142和144)被设置在所述凸起的远端处。所示的凸起包括实施方案IX所示的实心基座、中空和周向轮缘，其中实心基座(151)垂直于板密封装置(20)的第二面(27)延伸。该凸起包括一个中空(161)，其提供了一个从所述板密封装置进一步延伸的周向轮缘(171)。
在将包括凹形底部、中空和/或至少一个轮缘的凸起插入到相应的孔中时，所述凸起的远端部分可更好地贴靠在孔壁的内衬上，并且因此提供比实心凸起更好的孔密封。
可以理解的是，所述凸起的尺寸可根据待密封的孔的尺寸而变化，并且可提供不同高度的凸起。
根据第二方面，本发明提供了一种繁殖细胞的方法，其中在根据所述系统的多孔板的至少一个孔中提供并繁殖细胞，所述多孔板的至少一个孔用根据所述系统的板密封装置密封。
该方法包括以下步骤：
-提供如前所述的多孔板；
-将包含至少一个细胞的悬液引入多孔板的至少一个孔中；
-用如前所述的板密封装置至少密封携带悬液的多孔板的孔，所述孔含有至少一个细胞。
在所述方法的一个实施方案中，所述细胞是真核细胞。在另一个和/或额外的实施方案中，所述细胞是哺乳动物细胞。在又一个和/或替代的实施方案中，所述细胞是人类细胞。
在所述方法的一个实施方案中，使细胞繁殖，在4℃至37℃之间的温度，优选在18℃至37℃之间的温度，更优选在25℃至37℃之间的温度，最优选在29℃和37℃之间的温度繁殖细胞一段时间。或者在18℃至27℃之间的温度，优选在21℃至25℃之间的温度。
培养和/或运输细胞的温度优选通过利用适当的温度控制手段保持恒定。
在所述方法的一个实施方案中，繁殖包括提供培养基的交换。所述培养基的交换可连续进行或不连续进行。
在一个实施方案中，其中培养基在所述系统的各个孔中不连续地交换，注射针刺穿板密封装置(优选地通过密封所述孔的凸起的自密封隔膜)并且插入到孔中。如果已经存在，则通过针头将孔中的培养基吸出，并通过针头将新鲜的培养基供应到孔中。
在一个实施方案中，其中培养基在所述系统的各个孔中连续交换，入口导管和出口导管通过板密封装置(优选地通过密封所述孔的凸起的一个或多个自密封隔膜)插入到孔中。然后通过经由所述入口导管供应培养基并且通过所述出口导管移除培养基来提供通过孔的培养基连续流。
在一个实施方案中，其中包括一个或多个彼此流体连通的孔的系统，可提供培养基的连续交换，因为当板密封装置被安装到相应的多孔板，新鲜的培养基通过板密封装置的入口开口供应，并通过板密封装置的出口开口移除培养基。
在额外的和/或替代的实施方案中，通过利用流体静力来产生培养基流。例如，入口开口中/上方的培养基水平保持高于出口开口中/上方的培养基水平。在一个替代实施方案中，通过孔彼此流体连通的培养基流可通过将系统放置在摇动装置(rocker)上并且来回摇动系统来实现。
根据第三方面，本发明提供了如上所述的系统用于繁殖细胞、优选真核细胞、更优选哺乳动物细胞、并且特别优选人类细胞、最优选以微组织或球状体形式的用途。
在第三方面的一个实施方案中，用于繁殖细胞和/或微组织的系统的用途，其包括用于运输细胞和/或微组织的系统。用于繁殖细胞和/或微组织的系统对于运输细胞和/或微组织是特别有利的，这是由于多孔板的孔通过相应的板密封装置及其性质而紧凑密封。运输细胞和/或微组织的系统的使用提供了更好的存活率以及在细胞和/或微组织的目的地更好的生存力。特别有利的是所述细胞和/或微组织可在18℃和27℃之间的温度，优选在21℃和25℃之间的温度运输，并且不需要在冷冻或深度冷冻条件下运输细胞和/或微组织以使其存活率和生存力维持在期望的水平。
根据另外的方面，本发明提供如上文所述的多孔板作为根据第一方面的系统的一部分，以及如上文所述的板密封装置作为根据第一方面的系统的一部分。

Claims (20)

1.用于繁殖细胞的系统，所述系统包括多孔板和用于密封所述多孔板的至少一个孔的板密封装置，所述板密封装置包括至少一个实心凸起或至少一个包括实心基座的凸起，所述凸起由具有回弹性的弹性体组成，并构造成牢固地装配到所述多孔板的至少一个孔中。
2.根据权利要求1所述的系统，其中所述多孔板的至少一个孔的至少一部分设置有超低附着表面。
3.根据权利要求1或2所述的系统，其中所述多孔板的至少两个孔是流体连通的。
4.根据权利要求3所述的系统，其中在所述至少两个孔之间提供至少一个通道以建立所述流体连通。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的系统，其中所述至少一个凸起包括轮缘，所述轮缘被构造成位于孔的边缘上。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的系统，其中所述至少一个凸起包括至少一个可重新密封的隔膜。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的系统，其中所述板密封装置包括至少一个入口开口和至少一个出口开口，所述至少一个入口开口和所述至少一个出口开口被构造为贯穿硅胶垫的穿孔(bore)。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的系统，其中所述入口开口设置有漏斗或烟囱。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的系统，其中所述出口开口设置有漏斗或烟囱。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的系统，其中所述板密封装置以垫的形式或以盖子的形式存在，所述盖子包括硬塑料框架和平面部分，所述平面部分包括至少一个穿孔(bore)对准在所述多孔板的一个孔上，所述至少一个穿孔(bore)用所述凸起封闭。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的系统，其中所述具有回弹性的弹性体具有大于1*109,cm3*cm/(s*cm2*cmHg)的透氧性。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的系统，其中所述具有回弹性的弹性体选自由以下组成的组：硅橡胶、氟硅橡胶、以及丁腈橡胶和天然橡胶，所述硅橡胶优选二甲基硅橡胶乙烯基甲基硅氧烷和苯基乙烯基甲基硅氧烷。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的系统，还包括用于控制所述孔内的温度的装置。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的系统，还包括温度数据记录器。
15.一种繁殖细胞的方法，所述方法包括以下步骤：
-提供多孔板；
-将包含至少一个细胞的悬液引入多孔板的至少一个孔中；
-利用权利要求1至12中任一项所述的板密封装置至少密封携带所述悬液的多孔板的孔，所述孔含有至少一个细胞。
16.根据权利要求15所述的方法，所述方法还包括在4℃和37℃之间的温度，优选在18℃和27℃之间的温度，更优选在25℃和37℃之间的温度，并且最优选在29℃和37℃之间的温度繁殖所述细胞一段时间。
17.根据权利要求15或16所述的方法，还包括连续或不连续地更换培养基。
18.根据权利要求1至14中任一项所述的系统用于繁殖细胞的用途。
19.根据权利要求1至14中任一项所述的系统在药理学测试测定中的用途。
20.根据权利要求19所述的用途，其中所述多孔板包含至少两个流体连通的孔：第一孔和第二孔，所述第一孔含有第一微组织，并且所述第二孔含有第二微组织，将化学化合物提供给第一微组织，并分析所述第二微组织的反应。
CN201680035257.8A 2015-04-16 2016-04-15 用于繁殖细胞的系统 Pending CN107750272A (zh)

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