CN107723334A - 一种产ESBLs细菌检测试剂和检测产ESBLs细菌的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种产ESBLs细菌检测试剂，其中包括胰酪胨、酵母浸粉、牛肉浸粉、NaCl、3‑吗啉丙磺酸、丙酮酸钠、硝酸钾、海藻糖、酚红、亚甲基蓝、制霉菌素、牛胆盐、万古霉素等成分。为方便检测，本发明将该检测试剂应用于检测产ESBLs细菌试剂盒中。本发明通过科学配制的检测试剂，可对样本中的产ESBLs细菌进行直接检测，且试剂成本低；通过在检测板上包被特殊底物、生长因子、抑制剂，使产ESBLs细菌特异性生长，从而对产ESBLs细菌进行及时检测，给临床提供了科学有效的指导，对预防控制院内感染的流行具有重要价值，而检测结果只需要目测，无需借助其他专用设备，满足了不同客户群的需求；同时由于其检测周期短，24小时内即能出结果，有利于患者的早期诊断和治疗。

Description

一种产ESBLs细菌检测试剂和检测产ESBLs细菌的试剂盒

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其是涉及一种产ESBLs细菌检测试剂，本发明还涉及检测产ESBLs细菌的试剂盒。

背景技术

超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum β-lactamase,ESBLs）是肠杆菌科细菌对β-内酰胺类抗菌药物产生耐药的主要机制之一，自1982年在英格兰首先发现产超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum β-lactamase,ESBLs）克雷伯菌后，产ESBLs细菌的流行在世界各地广泛报道，其预防与治疗已成为临床医生需要面对的重要问题。ESBLs主要存在于临床分离的革兰阴性杆菌，其中又多见于肠杆菌科细菌。在肠杆菌科细菌中以大肠埃希菌和克雷伯菌最为常见，克雷伯菌包括肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌。其他常见产ESBLs细菌有产气肠杆菌、变形杆菌、沙门属菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌属等。

各个国家和地区产ESBLs细菌的发生率明显不同。日本、荷兰等国家产ESBLs细菌的发生率很低，而法国、印度等国家产ESBLs细菌的发生率很高，可有高达50％以上的克雷伯菌属的细菌产生ESBLs，而且具有较严重的耐药性。我国大陆不同研究者报告的产ESBLs细菌发生率各有不同，大肠埃希菌发生率大约在40％，肺炎克雷伯菌发生率更低一些。

产ESBLs细菌主要在医院内引起感染和流行，其中60％发生在大型医院，特别是教学医院。产ESBLs细菌不仅能引起院内暴发流行，还可以向院外传播，使流行范围扩大。研究显示，重症监护病房、住院日延长（≥7ｄ）、机械通气、导尿管和动脉导管的留置、严重疾病状态（如器官移植）、不适当联合使用抗菌药物或三代头孢菌素、年龄≥60岁等都是导致产ESBLs细菌感染的危险因素。

临床产ESBLs细菌的检测方法主要包括有：纸片扩散法(K-B法)，肉汤稀释(MIC)法，琼脂稀释(MIC)法，浓度梯度(E试验)法，自动化药敏检测，琼脂显色筛选法及分子生物学技术。其中纸片扩散法(K-B法)，肉汤稀释(MIC)法，琼脂稀释(MIC)法，浓度梯度(E试验)法，自动化药敏检测这几种方法是传统的耐药菌检测主要方法和手段，是公认的敏感性检测方法，也是当前临床耐药菌检测的主要方法，但是这些检测方法面对的均是临床分离活化后的菌株，针对临床样本是无法直接使用的，存在操作麻烦、检测周期长的问题。琼脂显色筛选法和分子生物学法是近几年新型的耐药菌检测技术，可以直接进行耐药菌的检测，有效缩短了检测周期，但由于检测成本高，在使用中受到一定的限制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种产ESBLs细菌检测试剂，本发明还提供操作方便、检测周期短且成本低的产ESBLs细菌检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的产ESBLs细菌检测试剂，其检测试剂溶液中包括有以下成分（按质量浓度计）：0.1~3%的胰酪胨，0.1~2%的酵母浸粉，0.05~1%的牛肉浸粉，0.1~2%的NaCl，0.05~2%的3-吗啉丙磺酸，0.05~2%的丙酮酸钠，0.05~2%的硝酸钾，0.05~2%的海藻糖，0.006%的酚红，0.0001-0.01%的亚甲基蓝，0.001%的制霉菌素，0.015%的牛胆盐，0.001%的万古霉素。

本发明所述的一种产ESBLs细菌检测试剂盒，包括带有培养液、矿物油和检测板的盒体，所述检测板上间隔设置有阳性孔和产ESBLs细菌检测孔；所述阳性孔和产ESBLs细菌检测孔内分别包被有上述检测试剂，其中每孔的包被量为100ul；所述培养液为含有0.5-1%的氯化钠溶液，所述矿物油为液体石蜡油。

所述产ESBLs细菌检测孔至少包含检测头孢噻肟、头孢他啶和氨曲南三种抗生素中一种以上的产ESBLs细菌的检测孔。

所述头孢噻肟检测孔中包被有1-8ug/mL的头孢噻肟，所述头孢他啶检测孔中包被有1-8ug/mL的头孢他啶；所述氨曲南检测孔中包被有1-8ug/mL的氨曲南，每孔的包被量均为100ul。

本发明试剂盒使用时，首先将待检样本加入培养液中搅拌混匀，然后将其分别接种进阳性孔和产ESBLs细菌检测孔中，每孔100 ul；再分别滴加一滴矿物油，盖上检测板盖后置于36~38℃培养，24h后通过颜色变化直接观察结果。

本发明的优点在于通过科学配制的检测试剂，可对样本中的产ESBLs细菌进行直接检测，且试剂成本低；将其制作成试剂盒后，由于在检测板的检测孔内包被了包含胰酪胨、酵母浸粉、牛肉浸粉等具有丰富营养成分和生长因子的物质，并选择制霉菌素、牛胆盐、万古霉素等作为抑制剂，因此能使产ESBLs细菌特异性生长，从而对产ESBLs细菌进行及时检测，给临床提供了科学有效的指导，对预防控制院内感染的流行具有重要价值，而检测结果只需要目测，无需借助其他专用设备，满足了不同客户群的需求；同时由于其检测周期短，24小时内即能出结果，有利于患者的早期诊断和治疗。

附图说明

图1是本发明试剂盒的结构示意图。

图2是图1中检测板的放大图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明做更加详细的说明。

本发明配制的产ESBLs细菌检测试剂溶液中包含有以下成分：0.1~3%的胰酪胨（优选2%），0.1~2%的酵母浸粉（优选1%），0.05~1%的牛肉浸粉（优选0.2%），0.1~2%的NaCl（优选2%），0.05~2%的3-吗啉丙磺酸（优选1%），0.05~2%的丙酮酸钠（优选0.05%），0.05~2%的硝酸钾（优选0.5%），0.05~2%的海藻糖（优选0.5%），0.006%的酚红，0.0001-0.01%的亚甲基蓝（优选0.002%），0.001%的制霉菌素，0.015%的牛胆盐，0.001%的万古霉素。

为方便检测，本发明将上述检测试剂应用于检测产ESBLs细菌的试剂盒中，如图1所示，该试剂盒包括带有培养液1、矿物油2和检测板3的盒体4，在检测板3上间隔设置有阳性孔3.1和产ESBLs细菌检测孔，将上述配制的检测试剂按每孔100 ul的包被量对阳性孔3.1和检测孔进行包被。实际制作时，产ESBLs细菌检测孔可以设计为一个（仅测量一种产ESBLs细菌），也可以同时设计两个或更多。

本发明的产ESBLs细菌检测孔设计有三个，如图2所示，一次性可以同时对三种不同的产ESBLs细菌进行检测：包被有1-8ug/mL（优选5ug/mL）头孢噻肟的检测孔3.2，包被有1-8ug/mL（优选5ug/mL）头孢他啶的检测孔3.3，包被有1-8ug/mL（优选5ug/mL）氨曲南的检测孔3.4；每孔的包被量同样都为100ul。

本发明试剂盒所用的培养液1为含有0.5-1%的氯化钠溶液，所用矿物油2为液体石蜡油。

使用时，将待检样本加入培养液1中搅拌混匀；然后将其接种入检测板3的阳性孔3.1和三个检测孔3.2、3.3、3.4中，每孔100 ul，然后分别滴加矿物油2一滴，盖上检测板盖后置于36~38℃培养，24h观察结果，如果孔内有菌生长，则颜色从蓝紫色变为黄色或其他颜色，具体判断方法如下：

若阳性孔3.1不变色，无论检测孔是否变色，待检样本均判断为阴性；

若阳性孔3.1变色，但头孢噻肟检测孔3.2，头孢他啶检测孔3.3，氨曲南检测孔3.4均不变色，则待检样本为阴性；

若阳性孔3.1变色，且头孢噻肟检测孔3.2，头孢他啶检测孔3.3，氨曲南检测孔3.4三个检测孔中有一个或多个变色，则待检样本为阳性。

Claims (4)

1.一种产ESBLs细菌检测试剂，其特征在于：所述检测试剂溶液中包括有以下成分：0.1~3%的胰酪胨，0.1~2%的酵母浸粉，0.05~1%的牛肉浸粉，0.1~2%的NaCl，0.05~2%的3-吗啉丙磺酸，0.05~2%的丙酮酸钠，0.05~2%的硝酸钾，0.05~2%的海藻糖，0.006%的酚红，0.0001-0.01%的亚甲基蓝，0.001%的制霉菌素，0.015%的牛胆盐，0.001%的万古霉素。

2.一种产ESBLs细菌检测试剂盒，包括带有培养液、矿物油和检测板的盒体，其特征在于：所述检测板上间隔设置有阳性孔和产ESBLs细菌检测孔；所述阳性孔和产ESBLs细菌检测孔内分别包被有权利要求1所述的检测试剂；所述培养液为含有0.5-1%的氯化钠溶液，所述矿物油为液体石蜡油。

3.根据权利要求2所述的产ESBLs细菌检测试剂盒，其特征在于：所述产ESBLs细菌检测孔至少包含检测头孢噻肟、头孢他啶和氨曲南三种抗生素中一种以上的产ESBLs细菌的检测孔。

4.根据权利要求3所述的产ESBLs细菌检测试剂盒，其特征在于：所述头孢噻肟检测孔中包被有1-8ug/mL的头孢噻肟，所述头孢他啶检测孔中包被有1-8ug/mL的头孢他啶；所述氨曲南检测孔中包被有1-8ug/mL的氨曲南，每孔的包被量均为100ul。