CN107691432A - 一种白花蛇舌草种子超低温保存方法 - Google Patents

一种白花蛇舌草种子超低温保存方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107691432A
CN107691432A CN201711177385.9A CN201711177385A CN107691432A CN 107691432 A CN107691432 A CN 107691432A CN 201711177385 A CN201711177385 A CN 201711177385A CN 107691432 A CN107691432 A CN 107691432A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cooling box
oldenlandia
grass seed
room temperature
liquid nitrogen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711177385.9A
Other languages
English (en)
Inventor
向华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201711177385.9A priority Critical patent/CN107691432A/zh
Publication of CN107691432A publication Critical patent/CN107691432A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N3/00—Preservation of plants or parts thereof, e.g. inhibiting evaporation, improvement of the appearance of leaves or protection against physical influences such as UV radiation using chemical compositions; Grafting wax
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01C—PLANTING; SOWING; FERTILISING
    • A01C1/00—Apparatus, or methods of use thereof, for testing or treating seed, roots, or the like, prior to sowing or planting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明提供了一种白花蛇舌草种子超低温保存方法，包括步骤以下：室温下将白花蛇舌草种子用水洗净，用营养液培育，放入冻存管中，再加入抗冻液进行室温温育，再将其放入梯度降温盒中；放入低温冰箱中，使其降温盒的温度在‐35℃～‐60℃，取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存备用；经低温保存6年后，再将降温盒从液氮中取，缓慢解冻，洗净后用于种子发芽。本发明进行白花蛇舌草超低温保存，工艺简单，稳定性可靠，保存后的白花蛇舌草种子的发芽率和鲜种的发芽率无显著性差异，发芽试验结果表明超低温保存后白花蛇舌草种子发芽率高达95％以上。

Description

一种白花蛇舌草种子超低温保存方法
技术领域
本发明涉及一种白花蛇舌草种子超低温保存方法，属于药材种子资源保存技术领域。
背景技术
白花蛇舌草又叫蛇舌草、蛇舌癀、蛇针草、蛇总管、二叶葎、白花十字草、尖刀草、甲猛草、龙舌草、蛇脷草、鹤舌草。为一年生披散草本，高15-50cm。根细长，分枝，白花。茎略带方形或扁圆柱形，光滑无毛，从基部发出多分枝。花期春季。种子棕黄色，细小，且3个棱角。花单生或成对生于叶腋，常具短而略粗的花梗，稀无梗；萼简球形，4裂，裂片长圆状披针形，长1.5-2mm，边缘具睫毛；花4数，单生或双生于叶腋；花梗略粗壮，长2-5毫米，罕无梗或偶有长达10毫米的花梗；花冠白色，漏斗形，长3.5-4mm，先端4深裂，裂片卵状长圆形，长约2mm，秃净；雄蕊4，着生于冠简喉部，与花冠裂片互生，花丝扁，花药卵形，背着，2室，纵裂；子房下位，2室。花柱长2-3毫米，柱头2裂，裂片广展，有乳头状凸点。蒴果扁球形，直径2-2.5mm，室背开裂，花萼宿存。萼管球形，长1.5毫米，萼檐裂片长圆状披针形，长1.5-2毫米，顶部渐尖，具缘毛；冠管长1.5-2毫米，喉部无毛，花冠裂片卵状长圆形，长约2毫米，顶端钝；种子每室约10粒，具棱，干后深褐色，有深而粗的窝孔。产于福建、广东、香港、广西、海南、安徽、云南等省区；国外分布于热带亚洲。全株入药，味苦、淡，性寒。主要功效是清热解毒、消痛散结、利尿除湿。尤善治疗各种类型炎症。在临床实践中，发现白花蛇舌草若配伍得当，可治疗多种疾病，造成市场对该药需求量大增，对白花蛇舌草种子需求也随之增加。
目前种质资源保存方式为常温、低温保存白花蛇舌草种子两种方式。常温保存中药材种子，需要每年重新繁种更新，因为植物种子经过常温保存，活力降低很快；低温保存植物种子，在中国，建立了国家中期库和国家种质库，国家中期库保存的温度为4℃左右，相对湿度小于65％，一般设计贮藏种子的寿命为5～10年，国家种质库为种质长期保存库，库中的温度为-18℃左右，相对湿度小于50％，设计贮藏寿命达20年以上，也就是说种质在长期库中保存，活力同样随着时间的推移降低，种质20年后一般需要更新繁种，不是永久的保存。
因此，为了安全保存白花蛇舌草种质资源，研究探索一种安全而长久保存白花蛇舌草种质资源的方法很有意义，它能够减少或者避免种子更新繁种，省时省力，阻断繁种更新的过程中种质间基因漂移等产生种质变异，保证种质的遗传稳定性。
发明内容
本发明的目的是提供一种适合于白花蛇舌草种子的超低温保存法，该方法能够补充现在白花蛇舌草种质资源保存技术的不足，可以长期安全的保存白花蛇舌草种质资源，为白花蛇舌草种质资源保存提供一条新的有效的技术途径。
本发明的目的是提供一种白花蛇舌草种子超低温保存方法，包括步骤以下：
(1)室温下将白花蛇舌草种子用水洗净，用营养液培育，培育20～50min后，取出培育过的白花蛇舌草种子；
(2)培育过的白花蛇舌草种子放入冻存管中，再加入抗冻液进行室温温育15～35min，再将其放入梯度降温盒中；
(3)将带有白花蛇舌草种子的梯度降温盒放入低温冰箱中，使其降温盒的温度在-35℃～-60℃，降温速度为-1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存备用；
(4)经低温保存6年后，再将降温盒从液氮中取，缓慢解冻，洗净后用于种子发芽。
所述白花蛇舌草种子为当年收获鲜种，自然晒干，种子含水量为6～15％。
在一个具体方案中，步骤(1)中所述营养液指MS液体培养液，还包含有1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亚砜。
所述营养液优选105～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。
在一个具体方案中，步骤(2)中所述梯度降温盒中含有100％甘油或异丙醇，可以重复使用。
在一个具体方案中，步骤(2)中所述抗冻液是指MS液体培养液，还包含有2.6～3.6mol/L甘油、1.6～2mol/L二甲基亚砜和0.45～0.75mol/L蔗糖。
所述抗冻液优选105～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。
在一个具体方案中，步骤(3)中所述低温冰箱的温度要求一般在-70℃以下。
白花蛇舌草上述所保存的白花蛇舌草种子进行解冻时，若室温超过20℃，将冻存管从液氮中取出，直接利用室温自然解冻；若室温低于20℃，将冻存管从液氮中取出，并置于20～24℃水浴箱中解冻。解冻完后，取出冻存管中白花蛇舌草种子，再用自来水或者蒸馏水洗涤3～5次，清洗后白花蛇舌草种子直接用于培养。
技术效果
1、本发明进行白花蛇舌草超低温保存，工艺简单，稳定性可靠，保存后的白花蛇舌草种子的发芽率和鲜种的发芽率无显著性差异，发芽试验结果表明超低温保存后白花蛇舌草种子发芽率高达95％以上。
2、本发明具有长期、有效、安全保存白花蛇舌草种子，是白花蛇舌草种质资源长期保存的最有效方法。
具体实施方式
下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任何一个或类似实例。
实施例1
取某地当年收获的白花蛇舌草，洗净后自然晒干，将含水量9.5％左右的白花蛇舌草种子用含有2.35mol/L甘油和1.25mol/L二甲基亚砜的MS液体培养液温育，温育20min后，取出温育过的白花蛇舌草种子，再放入冻存管中，再加入含有3.2mol/L甘油、1.65mol/L二甲基亚砜和0.65mol/L蔗糖的MS，室温温育30min，再将其放入梯度降温盒中；白花蛇舌草将梯度降温盒放进-70℃低温冰箱进行梯度降温，使其降温盒的温度在-50℃，降温速度为-1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存6年后，将冻存管从液氮中取出，放置室温在23℃，直接利用室温自然解冻，解冻完后，取出冻存管中白花蛇舌草种子从液氧取出室温解冻，再用自来水或者蒸馏水洗涤4次，清洗后白花蛇舌草种子直接用于发芽实验，经测试发芽率达到95.71％。
对照实施例1
取某地当年收获的白花蛇舌草，洗净后自然晒干，将含水量9.5％左右的白花蛇舌草种子用含有2.35mol/L甘油的MS液体培养液温育，温育20min后，取出温育过的白花蛇舌草种子，再放入冻存管中，再加入含有3.2mol/L甘油、1.65mol/L二甲基亚砜和0.65mol/L蔗糖的MS，再将其放入梯度降温盒中；将梯度降温盒放进-70℃低温冰箱进行梯度降温，使其降温盒的温度在-50℃，降温速度为-1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存6年后，将冻存管从液氮中取出，放置室温在23℃，直接利用室温自然解冻，解冻完后，取出冻存管中白花蛇舌草种子，再用自来水或者蒸馏水洗涤4次，清洗后白花蛇舌草种子直接用于发芽实验，经测试发芽率达到81.16％。
对照实施例2
取某地当年收获的白花蛇舌草，洗净后自然晒干，将含水量9.5％左右的白花蛇舌草种子用含有2.35mol/L甘油和1.25mol/L二甲基亚砜的MS液体培养液温育，温育20min后，取出温育过的白花蛇舌草种子，再放入冻存管中，再加入含有3.2mol/L甘油、1.65mol/L二甲基亚砜和0.65mol/L蔗糖的MS，室温温育30min，再将其放入在-5℃左右低温冰箱保存7年后，将冻存管从液氮中取出，放置室温在23℃左右，直接利用室温自然解冻，解冻完后，取出冻存管中白花蛇舌草种子，再用自来水或者蒸馏水洗涤4次，清洗后白花蛇舌草种子直接用于发芽实验，经测试发芽率达到27.42％。而取新鲜白花蛇舌草1～5℃下低温保存6年后，用于发芽实验，经测试白花蛇舌草未能发芽。
实施例2
取某地当年收获的白花蛇舌草，洗净后自然晒干，将含水量6.5％左右的白花蛇舌草种子用含有2.4mol/L甘油和1.45mol/L二甲基亚砜的MS液体培养液温育，温育30min后，取出温育过的白花蛇舌草种子，再放入冻存管中，再加入含有3.3mol/L甘油、1.75mol/L二甲基亚砜和0.55mol/L蔗糖的MS，室温温育20min，再将其放入梯度降温盒中；将梯度降温盒放进-80℃低温冰箱进行梯度降温，使其降温盒的温度在-55℃左右，降温速度为-1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存6年后，将冻存管从液氮中取出，放置室温在23℃左右，直接利用室温自然解冻，解冻完后，取出冻存管中白花蛇舌草种子，再用自来水或者蒸馏水洗涤4次，清洗后白花蛇舌草种子直接用于发芽实验，经测试发芽率达到95.88％。

Claims (7)

1.一种白花蛇舌草种子超低温保存方法，包括步骤以下：
(1)室温下将白花蛇舌草种子用水洗净，用营养液培育，培育20～50min后，取出培育过的白花蛇舌草种子；
(2)培育过的白花蛇舌草种子放入冻存管中，再加入抗冻液进行室温温育15～35min，再将其放入梯度降温盒中；
(3)将带有白花蛇舌草种子的梯度降温盒放入低温冰箱中，使其降温盒的温度在‐35℃～‐60℃，降温速度为‐1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存备用；
(4)经低温保存6年后，再将降温盒从液氮中取，缓慢解冻，洗净后用于种子发芽。
2.根据权利要求1的方法，其中步骤(1)中所述营养液指MS液体培养液，还包含有1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亚砜。
3.根据权利要求2的方法，其中所述营养液优选105～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。
4.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)中所述梯度降温盒中含有100％甘油或异丙醇，可以重复使用。
5.根据权利要求1的方法，其中步骤(2)中所述抗冻液是指MS液体培养液，还包含有2.6～3.6mol/L甘油、1.6～2mol/L二甲基亚砜和0.45～0.75mol/L蔗糖。
6.根据权利要求5的方法，其中所述抗冻液优选105～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。
7.根据权利要求1的方法，其中步骤(3)中所述低温冰箱的温度要求一般在‐70℃以下。
CN201711177385.9A 2017-11-23 2017-11-23 一种白花蛇舌草种子超低温保存方法 Pending CN107691432A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711177385.9A CN107691432A (zh) 2017-11-23 2017-11-23 一种白花蛇舌草种子超低温保存方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711177385.9A CN107691432A (zh) 2017-11-23 2017-11-23 一种白花蛇舌草种子超低温保存方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107691432A true CN107691432A (zh) 2018-02-16

Family

ID=61185406

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711177385.9A Pending CN107691432A (zh) 2017-11-23 2017-11-23 一种白花蛇舌草种子超低温保存方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107691432A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108684657A (zh) * 2018-03-27 2018-10-23 中国医学科学院药用植物研究所海南分所 一种降香种子超低温保存方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100697317B1 (ko) * 2004-09-07 2007-03-20 바이오컬쳐(주) 봉선화의 원형을 장기보존하기 위한 동결건조방법
CN104222072A (zh) * 2014-08-27 2014-12-24 中国农业科学院麻类研究所 一种亚麻种子玻璃化超低温保存方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100697317B1 (ko) * 2004-09-07 2007-03-20 바이오컬쳐(주) 봉선화의 원형을 장기보존하기 위한 동결건조방법
CN104222072A (zh) * 2014-08-27 2014-12-24 中国农业科学院麻类研究所 一种亚麻种子玻璃化超低温保存方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
卢魏魏: "白花蛇舌草种子质量标准及引发技术研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 *
陈效一 等: "《一万个世界之谜生物分册》", 31 May 1995, 湖北少年儿童出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108684657A (zh) * 2018-03-27 2018-10-23 中国医学科学院药用植物研究所海南分所 一种降香种子超低温保存方法
CN108684657B (zh) * 2018-03-27 2021-02-12 中国医学科学院药用植物研究所海南分所 一种降香种子超低温保存方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104160805B (zh) 一种百合种球催芽生根方法
CN104429636A (zh) 一种红运玉兰的嫁接方法
CN104839017A (zh) 褪黑素用于促进白背三七生根及根发育的应用
CN102487628A (zh) 一种三七种子长期保存及打破休眠的方法
CN105432407B (zh) 一种培育香梨树新型树体结构的方法
CN107691432A (zh) 一种白花蛇舌草种子超低温保存方法
CN103719176A (zh) 一种植物防冻液
CN104798788A (zh) 白菜型冬油菜幼苗的抗寒剂及其使用方法
CN105210884A (zh) 白及种子无菌萌发平衡培养基
CN105028156A (zh) 一种铁皮石斛组培苗炼苗方法
CN107810949A (zh) 一种桔梗种子超低温保存方法
Guo et al. Increasing lodging resistance performance of rice by alternating drought and flooding stress
CN102258010A (zh) 一种华重楼根茎的慢速冷冻保存方法
CN107396728A (zh) 一种提高银杏树抗冻性的扦插育苗方法
Zhang et al. Feasible strategies for efficient propagation system of Paeonia lactiflora ‘Hang Baishao’: in vitro culture of embryos
CN104221678A (zh) 一种提高花荵种子育苗成活率的方法
CN107897173A (zh) 一种鸡血藤种子超低温保存方法
CN105409486B (zh) 一种山豆根的种子繁育方法
CN103733921A (zh) 一种树木防冻剂
CN107864953A (zh) 一种天南星种子超低温保存方法
CN107926936A (zh) 一种白及种子超低温保存方法
CN105746496A (zh) 利用玻璃化超低温离体保存扁桃休眠芽的方法
CN108056096A (zh) 一种千金子超低温保存方法
CN106717975B (zh) 一种绣球茜的扦插繁殖方法
CN107996562A (zh) 一种羌活种子超低温保存方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180216

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication