CN107686838A - 引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用 - Google Patents

引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107686838A
CN107686838A CN201711013144.0A CN201711013144A CN107686838A CN 107686838 A CN107686838 A CN 107686838A CN 201711013144 A CN201711013144 A CN 201711013144A CN 107686838 A CN107686838 A CN 107686838A
Authority
CN
China
Prior art keywords
primer
pcr
sequence
types
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711013144.0A
Other languages
English (en)
Inventor
唐自军
俞保彬
姚小飞
周天琼
张治国
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HANGZHOU HUAJIN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Original Assignee
HANGZHOU HUAJIN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HANGZHOU HUAJIN PHARMACEUTICAL CO Ltd filed Critical HANGZHOU HUAJIN PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority to CN201711013144.0A priority Critical patent/CN107686838A/zh
Publication of CN107686838A publication Critical patent/CN107686838A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6848—Nucleic acid amplification reactions characterised by the means for preventing contamination or increasing the specificity or sensitivity of an amplification reaction

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及生物技术领域，特别涉及引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用。该引物组包括外套引物和内套引物；所述外套引物的上游引物具有如SEQ ID No.1所示的序列；所述外套引物的下游引物具有如SEQ ID No.2所示的序列；所述内套引物的上游引物具有如SEQ ID No.3所示的序列；所述内套引物的下游引物具有如SEQ ID No.4所示的序列。本发明还提供一种扩增口蹄疫病毒的方法，该套式RT‑PCR(RT‑nPCR)方法速度快、灵敏度高、稳定性好、特异性强，能够同时扩增O型、A型及AsiaI型口蹄疫病毒。

Description

引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别涉及引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用。
背景技术
口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，其病原为口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，FMDV)。口蹄疫病毒属于微RNA病毒科口蹄疫病毒属，基因组为单股正链RNA，全长约有8500个核苷酸，病毒衣壳由4种蛋白即VP1、VP2、VP3和VP4各60个拷贝组成。该病传播途径多、传染性强、多种动物共患，严重危害家畜生产力和畜产品质量，给畜牧业和进出口贸易造成较大的经济损失。
口蹄疫病毒共有7种血清型：A、O、C、Asia I、SAT1、SAT2和SAT3，80多个亚型和众多差异明显的病毒株。1928年国际兽医局决定采用0、A、C三型为国际通用的命名。1948年命名了南非1型(SAT 1)、南非2型(SAT2)、南非3型(SAT 3)。1954年报道了亚洲I型(Asial I)的存在。根据血清型间的同源性将其分为两群，即O、A、C和AsialI型为一群，SAT1、SAT2、SAT3型为一群，两群之间血清同源性仅为25％-40％，群内同源性可达60％-70％，型间不能交叉免疫。同型内又分若干亚型，各亚型间仅有部分交叉免疫性。
口蹄疫主要危害牛、猪、羊等偶蹄动物，发病率极高，并能形成大范围流行，所以国际兽医局(OIE)和联合国粮农组织(FAO)将其排在A类传染病的首位。阿拉伯学者早在14、15世纪就己记载了类似口蹄疫的疾病。1514年，意大利学者比较详细记述了口蹄疫。口蹄疫在欧洲的流行晟为严重，危害极大。一般相隔10年左右就有一次大流行。在1967-1968年英国和前苏联的一次流行中，仅英国就捕杀牲畜42万头。该病1977年传入亚洲，波及马来西亚等13个国家和地区。1997年我国台湾的一次大暴发，殃及6000多个猪场。
控制FMD关键在于早发现、早隔离、早预防，因而建立一种快速、灵敏、特异、可靠的诊断方法非常重要。
目前，国内常规的病原学诊断方法主要有单重、多重RT-PCR、酶联免疫吸附试验、病毒的分离与鉴定、病毒抗原检测、琼脂扩散试验、补体结合试验、免疫扩散沉淀试验、病毒中和试验、间接血凝试验、乳胶凝集试验等，这些方法或需长时间才能获得检测结果，灵敏度低等。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种速度快、灵敏度高、稳定性好、特异性强，能够同时扩增O型、A型及AsiaI型口蹄疫病毒套式RT-PCR(RT-nPCR)方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了引物组，包括外套引物和内套引物；
所述外套引物的上游引物具有如SEQ ID No.1所示的序列；
所述外套引物的下游引物具有如SEQ ID No.2所示的序列；
所述内套引物的上游引物具有如SEQ ID No.3所示的序列；
所述内套引物的下游引物具有如SEQ ID No.4所示的序列。
本发明还提供了所述的引物组在扩增O型、A型和/或AsiaI型口蹄疫病毒中的应用。
在本发明的一些具体实施方案中，所述扩增为套式RT-PCR。
本发明还提供了一种试剂盒，包括本发明所述的引物组。
本发明还提供了所述的试剂盒在扩增O型、A型和/或AsiaI型口蹄疫病毒中的应用。
在本发明的一些具体实施方案中，所述扩增为套式RT-PCR。
本发明还提供了一种扩增口蹄疫病毒的方法，包括如下步骤：
步骤1：提取获得总RNA；
步骤2：以步骤1获得的总RNA为模板，通过如权利要求1所述的引物组中的外套引物经第一次扩增，获得第一次扩增产物；
步骤3：以步骤2获得的所述第一次扩增产物为模板，通过如权利要求1所述的引物组中内套引物经第二次扩增，获得扩增产物。
在本发明的一些具体实施方案中，所述第一次扩增的反应体系为：
所述第一次扩增的反应条件为：
在本发明的一些具体实施方案中，所述第二次扩增的反应体系为：
所述第二次扩增的反应条件为：
在本发明的一些具体实施方案中，所述口蹄疫病毒的血清型为O型、A型和/或AsiaI型。
此外，本发明还提供了口蹄疫病毒的检测方法，包括如下步骤：
步骤1：取待测样本提取获得总RNA；
步骤2：以步骤1获得的总RNA为模板，通过如权利要求1所述的引物组中的外套引物经第一次扩增，获得第一次扩增产物；
步骤3：以步骤2获得的所述第一次扩增产物为模板，通过如权利要求1所述的引物组中内套引物经第二次扩增，获得扩增产物；
步骤4：所述扩增产物中如果扩增出约1000bp的产物，则所述待测样本携带有口蹄疫病毒；反之，则则所述待测样本不携带口蹄疫病毒。
在本发明的一些具体实施方案中，所述第一次扩增的反应体系为：
所述第一次扩增的反应条件为：
在本发明的一些具体实施方案中，所述第二次扩增的反应体系为：
所述第二次扩增的反应条件为：
在本发明的一些具体实施方案中，所述口蹄疫病毒的血清型为O型、A型和/或AsiaI型。
本发明提供了引物组，包括外套引物和内套引物；
所述外套引物的上游引物具有如SEQ ID No.1所示的序列；
所述外套引物的下游引物具有如SEQ ID No.2所示的序列；
所述内套引物的上游引物具有如SEQ ID No.3所示的序列；
所述内套引物的下游引物具有如SEQ ID No.4所示的序列。
本发明提供了引物组以及含有该引物组的试剂盒及其应用，并提供一种扩增口蹄疫病毒的方法，该套式RT-PCR(RT-nPCR)方法速度快、灵敏度高、稳定性好、特异性强，能够同时扩增O型、A型及AsiaI型口蹄疫病毒。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示O型、A型和AsiaI型口蹄疫病毒RT-nPCR产物电泳图；
其中，M：100bp梯度DNAMarker；
Lane1：O型FMDVRT-PCR结果；
Lane2：A型FMDVRT-PCR结果；
Lane3：Asia I型FMDV RT-PCR结果；
Lane4：阴性对照；
Lane5：O型FMDV第2次PCR结果；
Lane6：A型FMDV第2次PCR结果；
Lane7：Asia I型FMDV第2次PCR结果；
Lane8：阴性对照；
图2示O型、A型和AsiaI型口蹄疫病毒RT-nPCR特异性和通用性试验电泳图；
其中，M：100bp梯度DNAMarker；
Lane1：O型FMDVRT-nPCR结果；
Lane2：A型FMDVRT-nPCR结果；
Lane3：Asia I型FMDV RT-nPCR结果；
Lane4：阴性对照；
Lane5：猪水泡病病毒(SVDV)；
Lane6：猪水疱性口炎病毒(VSV)；
Lane7：猪瘟弱毒(CSFV)；
Lane8：高致病性猪蓝耳病弱毒(HPRRSV)；
Lane9：猪蓝耳病经典弱毒(PRRSV)；
Lane10：猪伪狂犬病毒(PRV)；
图3示O型、A型和AsiaI型口蹄疫病毒RT-nPCR灵敏度试验电泳图；
其中，M：100bp梯度DNAMarker；
Lane1～Lane10：100～10-9系列梯度稀释的O型、A型和AsiaI型FMDV等量混合物；
图4示O型、A型和AsiaI型口蹄疫病毒多重RT-PCR灵敏度试验电泳图；
其中，M：100bp梯度DNAMarker
Lane1～Lane10：100～10-9系列梯度稀释的O型、A型和AsiaI型FMDV等量混合物。
具体实施方式
本发明公开了一种引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明通过以下步骤实现的：
1、引物设计与合成：登录NCBI，从GenBank获取FMDV各血清型和主要亚型的全基因序列，利用DNAStar软件的MegAlign模块进行同源性分析，设计上、下游引物。M1/M2为外套引物；N1/N2为内套引物，预期扩增片段分别为1 185bp和997bp。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
表1引物序列和位置
2、总RNA的提取：用Trizol法对口蹄疫病毒细胞毒株(O型、A型和AsiaI型)、正常细胞、待测样本等进行总RNA的提取。
3、RT-PCR扩增：
3.1 RT-PCR反应体系：用RT-PCR检测试剂盒，其中引物采用自行设计的M1/M2。
3.2 RT-PCR反应条件：
4、第二次PCR扩增：
4.1 PCR反应体系：以第一次RT-PCR产物为模板，N1/N2为引物进行第二次PCR扩增。
反应体系 组分
PCR buffer 12μL
N1 1μL
N2 1μL
RT-PCR产物 1μL
ddH2O 10μL
4.2 PCR反应条件：
最后PCR产物保存于4℃。
5、PCR产物鉴定：1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定。
6、特异性和通用性试验
通过提取猪水泡病病毒(SVDV)、猪水疱性口炎病毒(VSV)、猪瘟弱毒(CSFV)、高致病性猪蓝耳病弱毒(HPRRSV)、猪蓝耳病经典弱毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)RNA和O型、A型、Asia I型FMDV RNA，用RT-nPCR方法扩增，产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，评价其特异性和通用性。
7、灵敏度比较试验
购买的多重RT-PCR试剂盒含有3对引物，扩增长度分别为630bp、485bp和282bp，只要扩增出1条以上的目的带即可判为阳性。O型、A型、Asia I型FMDV样本1:1:1比例混合，提取RNA后，l0×系列稀释作为模板，稀释梯度为100～10-9°。分别用建立的RT-nPCR方法和FMDV多重RT-PCR试剂盒检测，产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，比较两种方法的敏感性。
本发明提供的套式RT-PCR(RT-nPCR)具有速度快、灵敏度高、稳定性好、特异性强的特点，能够同时扩增O型、A型及AsiaI型口蹄疫病毒。
本发明提供的引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用中所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1 RT-nPCR实验
引物设计：
外套引物：
M1(序列如SEQ ID No.1所示)：5’—GTCTCGCCCAGTACTACACACAGTAC—3’(26bp)
M2(序列如SEQ ID No.2所示)：5’—GCTGAAATTGGCCAACCACAGAC—3’(23bp)
内套引物：
N1(序列如SEQ ID No.3所示)：5’—TTCATGCGGAGTGGGACACAG—3’(21bp)
N2(序列如SEQ ID No.4所示)：5’—TGGTCTACGTCCTCCTGTACAG—3’(22bp)
总RNA的提取：
用Trizol法对经灭活的口蹄疫病毒细胞毒株(O型、A型和AsiaI型)、正常细胞(阴性对照)、待测样本进行总RNA的提取。具体操作如下：
细胞或组织约100mg，加入Trizol 1.5mL匀浆。(匀浆器用75％乙醇泡5分钟，每匀一管样用75％酒精、DEPC水洗涤匀浆器)。
10000rpm，4℃，离心l0分钟，取上清(注意别吸入上层脂肪)。将1000μL上清转移到tube。
加200μL氯仿，上下颠倒混匀8-10次，室温静置3min。
10000rpm，4℃，离心10分钟，样品会分为三层：黄色有机相(DNA+PRO)，中间(苯酚)，上层水相，RNA就在上层水相中，移取600μL到新tube里。
加入600μL异丙醇，上下颠倒混匀，4℃，放40分钟。
10000rpm，4℃，离心l0分钟，弃上清。
向沉淀中加入1mL的75％乙醇清洗沉淀，吹打若干次。
10000rpm，4℃，离心5分钟，倒出液体，注意不要倒出沉淀，剩余的液体用枪头吸出。
室温放置晾干，加入25μL的DEPC水，反复吹打混匀，充分溶解RNA。
RT-PCR扩增：
RT-PCR反应体系：采用RT-PCR检测试剂盒，其中引物用自行设计的M1/M2，对经灭活的口蹄疫病毒细胞毒株(O型、A型和AsiaI型)、正常细胞(阴性对照)、待测样本所提取的总RNA进行RT-PCR扩增。
反应体系 组分
RT-PCR buffer 12μL
M1 1μL
M2 1μL
模板RNA 2μL
DEPC水 9μL
RT-PCR反应条件：
第二次PCR扩增：
PCR反应体系：以第一次RT-PCR产物为模板，N1/N2为引物进行第二次PCR扩增。
反应体系 组分
PCR buffer 12μL
N1 1μL
N2 1μL
RT-PCR产物 1μL
ddH2O 10μL
PCR反应条件：
PCR产物鉴定：1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定，若不立即检测，请于4℃保存。
实验结果分析：O型、A型和AsiaI型口蹄疫病毒RNA用外套引物M1/M2进行RT-PCR扩增，在1200bp处有明显条带。用内套引物N1/N2对RT-PCR产物进行第2次PCR扩增，O型、A型和AsiaI型FMDFV都只扩增出约1000bp的产物，阴性对照没有条带，这与引物设计完美符合，实验结果成立。
实施例2特异性和通用性试验
用Trizol法对猪水泡病病毒(SVDV)、猪水疱性口炎病毒(VSV)、猪瘟弱毒(CSFV)、高致病性猪蓝耳病弱毒(HPRRSV)、猪蓝耳病经典弱毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、阴性对照、O型、A型、Asia I型FMDV按照实施例1的方法进行总RNA提取，进行RT-nPCR扩增，产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，验证该方法的特异性和通用性。
实验结果分析：对O型、A型、Asia I型FMDV总RNA用建立的RT-nPCR方法进行扩增，都只有一条约1000bp的目的条带，而猪水泡病病毒(SVDV)、猪水疱性口炎病毒(VSV)、猪瘟弱毒(CSFV)、高致病性猪蓝耳病弱毒(HPRRSV)、猪蓝耳病经典弱毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、阴性对照都没有扩增出任何条带，验证了所建立的RT-nPCR方法对O型、A型、Asia I型FMDV的通用性和特异性。
实施例3灵敏度比较试验
多重RT-PCR试剂盒含有3对引物，扩增长度分别为630bp、485bp和282bp。只要扩增出1条以上的目的带即可判为阳性。O型、A型、Asia I型FMDV样本1:1:1比例混合，按照实施例1的方法提取RNA后，l0×系列稀释作为模板，稀释梯度为100～10-9°。分别用按照实施例1的方法建立的RT-nPCR方法和FMDV多重RT-PCR试剂盒检测，产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，比较两种方法的敏感性。
实验结果分析：用所建立的RT-nPCR方法对O型、A型、Asia I型FMDV RNA进行10×系列稀释扩增，对产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定，可以检测到第7个稀释梯度(10-7)，而多重RT-PCR只能检测到第4个稀释梯度(10-4)，表明我们建立的RT-nPCR灵敏度比多重RT-PCR高出3个数量级。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 杭州华津药业股份有限公司
<120> 引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用
<130> MP1721503
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
gtctcgccca gtactacaca cagtac 26
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
gctgaaattg gccaaccaca gac 23
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 3
ttcatgcgga gtgggacaca g 21
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 4
tggtctacgt cctcctgtac ag 22

Claims (10)

1.引物组，其特征在于，包括外套引物和内套引物；
所述外套引物的上游引物具有如SEQ ID No.1所示的序列；
所述外套引物的下游引物具有如SEQ ID No.2所示的序列；
所述内套引物的上游引物具有如SEQ ID No.3所示的序列；
所述内套引物的下游引物具有如SEQ ID No.4所示的序列。
2.如权利要求1所述的引物组在扩增O型、A型和/或AsiaI型口蹄疫病毒中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述扩增为套式RT-PCR。
4.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物组。
5.如权利要求4所述的试剂盒在扩增O型、A型和/或AsiaI型口蹄疫病毒中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述扩增为套式RT-PCR。
7.一种扩增口蹄疫病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：提取获得总RNA；
步骤2：以步骤1获得的总RNA为模板，通过如权利要求1所述的引物组中的外套引物经第一次扩增，获得第一次扩增产物；
步骤3：以步骤2获得的所述第一次扩增产物为模板，通过如权利要求1所述的引物组中内套引物经第二次扩增，获得扩增产物。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述第一次扩增的反应体系为：
所述第一次扩增的反应条件为：
9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述第二次扩增的反应体系为：
所述第二次扩增的反应条件为：
10.如权利要求7至9任一项所述的方法，其特征在于，所述口蹄疫病毒的血清型为O型、A型和/或AsiaI型。
CN201711013144.0A 2017-10-26 2017-10-26 引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用 Pending CN107686838A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711013144.0A CN107686838A (zh) 2017-10-26 2017-10-26 引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711013144.0A CN107686838A (zh) 2017-10-26 2017-10-26 引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107686838A true CN107686838A (zh) 2018-02-13

Family

ID=61153988

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711013144.0A Pending CN107686838A (zh) 2017-10-26 2017-10-26 引物组、含有该引物组的试剂盒及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107686838A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108841999A (zh) * 2018-07-04 2018-11-20 天津瑞普生物技术股份有限公司 一种检测口蹄疫o、a型的巣式pcr引物对及其方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561369A (zh) * 2014-11-25 2015-04-29 周建芳 一种手足口病肠道病毒巢式pcr检测试剂盒及非诊断性分型方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561369A (zh) * 2014-11-25 2015-04-29 周建芳 一种手足口病肠道病毒巢式pcr检测试剂盒及非诊断性分型方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PEIHUA NIU等: "Development of a highly sensitive real-time nested RT-PCR assay in a single closed tube for detection of enterovirus 71 in hand, foot,and mouth disease", 《ARCHIVES OF VIROLOGY》 *
李金海等: "O型、A型及Asia1型3个型口蹄疫病毒通用套式RT-PCR检测方法的建立", 《中国预防兽医学报》 *
蒋正军等: "运用RT-PCR一步法和Nested-PCR法快速检测FMDV的研究", 《中国动物检疫》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108841999A (zh) * 2018-07-04 2018-11-20 天津瑞普生物技术股份有限公司 一种检测口蹄疫o、a型的巣式pcr引物对及其方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Leme et al. Senecavirus A: an emerging vesicular infection in Brazilian pig herds
Wu et al. The first identification and complete genome of Senecavirus A affecting pig with idiopathic vesicular disease in China
Huang et al. Detection by reverse transcription-PCR and genetic characterization of field isolates of swine hepatitis E virus from pigs in different geographic regions of the United States
Williams et al. Multiplex reverse transcriptase PCR assay for simultaneous detection of three fish viruses
Pantin-Jackwood et al. Molecular characterization and typing of chicken and turkey astroviruses circulating in the United States: implications for diagnostics
Fenaux et al. Extraintestinal spread and replication of a homologous EC rotavirus strain and a heterologous rhesus rotavirus in BALB/c mice
Nix et al. Detection of all known parechoviruses by real-time PCR
Blomqvist et al. Human rhinovirus 87 and enterovirus 68 represent a unique serotype with rhinovirus and enterovirus features
Amimo et al. Detection and genetic diversity of porcine group A rotaviruses in historic (2004) and recent (2011 and 2012) swine fecal samples in Ohio: predominance of the G9P [13] genotype in nursing piglets
CN104328218B (zh) 同步检测五种猪病毒的液相基因芯片的核酸及其检测方法
Park et al. Detection and characterization of bovine coronaviruses in fecal specimens of adult cattle with diarrhea during the warmer seasons
Kuo et al. Real-time quantitative PCR assay for monitoring of nervous necrosis virus infection in grouper aquaculture
Amimo et al. Molecular detection and genetic characterization of kobuviruses and astroviruses in asymptomatic local pigs in East Africa
Trovão et al. Evolution of rotavirus C in humans and several domestic animal species
Yang et al. Novel putative bluetongue virus serotype 29 isolated from inapparently infected goat in Xinjiang of China
Zhao et al. Detection of astrovirus infection in pigeons (Columbia livia) during an outbreak of diarrhoea
Silveira et al. HoBi‐like is the most prevalent ruminant pestivirus in Northeastern Brazil
Ribeiro et al. High frequency of Aichivirus C (porcine kobuvirus) infection in piglets from different geographic regions of Brazil
CN106399585A (zh) 检测ⅰ群禽腺病毒的通用pcr引物、方法及检测试剂盒
CN105506175A (zh) 一种prrsv、pcv2、prv和csfv的多重pcr检测试剂盒
Lv et al. High genetic diversity and recombination events of porcine astrovirus strains identified from ill and asymptomatic pigs in 2017, Hunan Province, China
Income et al. Molecular identification of enteroviruses from cattle and goat feces and environment in Thailand
Duan et al. The serologic investigation and viral isolation of bluetongue virus in Shangri‐La in Southwest China
Harima et al. Characterization of mammalian orthoreoviruses isolated from faeces of pigs in Zambia
Reddy et al. Isolation and evolutionary analysis of Australasian topotype of bluetongue virus serotype 4 from India

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180213