CN107674830B - 一种nk细胞采集用套装 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种NK细胞采集用套装，该采集用套装包括内包装盒，所述内包装盒上开设有第一位置槽、第二位置槽、第三位置槽和第四位置槽，所述内包装盒侧壁上位于第一位置槽的底部位置处开设有卡槽，所述第一位置槽、第二位置槽、第三位置槽、第四位置槽和卡槽内分别放置有冰盒、采集用套装使用说明、采集卡、条形码和采血袋，该采集用套装使用方便，采血袋不必单独放到冰箱中，就可保持其温度；并且内盛装NK细胞的采血袋内的环境模拟了人体内环境，更适合NK细胞的培养和保存，并且能够显著提高NK细胞的活性。

Description

一种NK细胞采集用套装
技术领域
本发明属于采集用套装领域，特别涉及一种NK细胞采集用套装。
背景技术
NK细胞(Natural killer cell，自然杀伤细胞)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生。
目前，对于NK细胞的研究逐渐成为细胞工程研究的一个热点，但是基于现有技术公开的内容可知，对其研究过程中存在的一个最大问题就是NK细胞的保存和运输问题，其在存储过程中包括采集、运输、分离、培养等诸多步骤，实际操作中需要存较长的时间，一旦NK细胞采集后，脱离了原有的体内环境，其活性就受到诸多因素的影响，诸如时间、温度、渗透压等。因此对于采集后的NK细胞的保存是其存储或研究过程中必不可少的步骤。目前NK细胞采集后，多采用直接装采血袋或者补加基础培养基的方法来保存。并且采集袋在保存时，需要放到冰箱中进行存储，导致存储不方便。此外，直接装采血袋的保存时间一般少于12小时，给NK细胞的运输、交接和检测带来了不小的时间压力，也限制了其保存业务发展的范围；另外，通过加入基础培养基来保存NK细胞，因为基础培养基不能达到临床级别的要求，为它们的保存带来了风险，严重影响了NK细胞的活性。现有技术公开了一些采集用套装，例如CN102334996公开的脐带采集套装盒，但是没有公开过NK细胞采集用套装。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种NK细胞采集用套装，该采集用套装使用方便，采血袋不必单独放到冰箱中，就可保持其温度；并且内盛装NK细胞的采血袋内的环境模拟了人体内环境，更适合NK细胞的培养和保存，并且能够显著提高NK细胞的活性。
本发明具体技术方案如下：
本发明一方面提供一种NK细胞采集用套装，该采集用套装包括内包装盒，内包装盒上开设有第一位置槽、第二位置槽、第三位置槽和第四位置槽，内包装盒侧壁上位于第一位置槽的底部位置处开设有卡槽，第一位置槽、第二位置槽、第三位置槽、第四位置槽和卡槽内分别放置有冰盒、采集用套装使用说明、采集卡、条形码和采血袋。
本发明提供的采集用套装使用方便，其内放置有冰盒可保证采血袋需要的温度。
进一步的改进，采集用套装还包括外包装箱和与外包装箱铰接的箱盖，外包装箱内设有冷冻室和放置内包装盒的容置槽，冷冻室内设有冰盒；冷冻室的顶部设有冷冻室开口，冷冻室开口的相对两侧壁上设有凹槽，所述凹槽内卡接有可水平伸缩的电子冷冻室盖。本发明通过设置外包装箱便于内包装盒的保存，并且其内设置的冷冻室可进一步对溶化的冰盒进行冷冻。
进一步的改进，第一位置槽内还设有温度传感器，外包装箱上安装有与温度传感器相连的温度显示屏。本发明通过在第一位置槽内设置温度传感器，其可实时监测第一位置槽内的温度，便于为采血袋提供一个恒定的温度。
进一步的改进，外包装箱外设有与温度传感器相连的控制器和与控制器相连的报警器。控制器用于接收第一位置槽内的温度值，当其温度值过高时，就会向报警器发出报警指令。
进一步的改进，外包装箱内设有与控制器相连的旋转吸盘机构，所述旋转吸盘机构包括第一伺服电机和旋转体，所述旋转体包括壳体、设置在壳体顶角处的两个空心旋转轴和嵌装在空心旋转轴周面上的吸盘、设于壳体内且主轴与第一伺服电机连接的固定齿轮和与固定齿轮齿合的两个中介齿轮，两个空心旋转轴分别固定在两个中介齿轮的中心轴上；吸盘的位置分别与冷冻室和第一位置槽的位置相对应；所述采集用套装还包括电磁阀，外接的真空泵通过真空管为吸盘提供吸力，所述电磁阀设置在真空管上。
进一步的改进，控制器包括壳体及设于壳体内的温度采集模块、温度比对模块、旋转吸盘机构控制模块、电子冷冻室盖开闭控制模块和电磁阀控制模块；温度采集模块用于接收温度传感器采集的第一位置槽内的温度，并发送给温度比对模块；温度比对模块用于将接收的温度与预设的温度阈值进行比对，当接收的温度高于预设温度时，向电子冷冻室盖开闭控制模块发送开启电子冷冻室盖的指令，同时向旋转吸盘机构控制模块发送驱动旋转吸盘机构的指令；电子冷冻室盖开闭控制模块用于根据接收的开启电子冷冻室盖的指令，开启电子冷冻室盖；旋转吸盘机构控制模块根据接收的驱动旋转吸盘机构的指令，驱动第一伺服电机运动，当一个吸盘运动到第一位置槽的位置时，停止驱动第一伺服电机，同时向电磁阀控制模块发送开启电磁阀的指令；电磁阀控制模块根据接收的开启电磁阀的指令，开启电磁阀，以此控制两个吸盘分别对冷冻室和第一位置槽内的冰盒进行吸附，再向旋转吸盘机构控制模块发送驱动旋转吸盘机构的指令，旋转吸盘机构控制模块根据接收的驱动旋转吸盘机构的指令，再次驱动第一伺服电机运动，当吸附有冷冻室内冰盒的吸盘运动到第一位置槽的位置时，停止驱动第一伺服电机，同时向电磁阀控制模块发送关闭电磁阀的指令。
本发明通过在外包装箱内设置的旋转吸盘机构的目的时，当采集用套装需要长时间运输时，其第一位置槽上的冰盒可能溶化，不能保证采血袋所需要的温度，但是由于人工无法得知，并且更换不方便，所以本发明通过引入旋转吸盘机构后，当第一位置槽内的温度过高时，控制器接收温度并进行比对，并且控制电子冷冻室盖打开，驱动旋转吸盘机构，起到自动更换冰盒的作用，保证整个运输过程中采血袋的温度恒定。
进一步的改进，采集袋内装有抗凝剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠7.5-10
磷酸氢钾3.5-5
单硬脂酸钙1-3
维生素E 0.2-0.5。
通过在采血袋内加入由酪蛋白酸钠、磷酸氢钾、单硬脂酸钙和维生素E组成的抗凝剂，可以防止NK细胞内的血液凝固。
进一步的改进，采集袋内装有活性保持剂，活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠6.5-9
羟乙基-β-环糊精1.5-2
多聚谷氨酸1-3。
通过在采血袋内加入由抗坏血酸钠、羟乙基-β-环糊精和多聚谷氨酸组成的活性保持剂后，其能够深入到NK细胞内部结构中，能够与NK细胞内的活性肽形成包合物，具有降低冰点，减少冰晶形成、减轻细胞缩水程度、进而起到提高NK细胞活性的作用。
进一步的改进，采集袋内装有培养基，培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，悬浮溶质成分及其在DMEM培养液中的浓度为5-10μg/mL普鲁兰、6-10μg/mL谷胱甘肽、20-35μg/mL棕榈酰胺、30-50μg/mL生物素、1-3μg/mL谷氨酰胺、6-10μg/mL胆酸钠、3-5μg/mL月桂醇硫酸酯钠和15-20μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺。
通过在采血袋中加入以上物质，不但能够保持NK细胞的活率，同时起到扩增NK细胞数量的作用。
进一步的改进，采集袋内装有稳定剂，稳定剂由下列重量份数的成分组成
卡波姆1.5-2
磷酸淀粉钠5-10
二异丙醇胺3-6。
本发明通过在采血袋内加入由卡波姆、磷酸淀粉钠和二异丙醇胺组合的稳定剂，能够显著提高对NK细胞的保存时间，并且起到维持NK细胞内的渗透平衡，提高NK细胞的贴壁率。
本发明提供的DMEMDulbecco’s modified eagle medisum培养基为一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基。该DMEM培养基内各成分及含量如下：无水氯化钙265mg/L、九水硝酸铁0.1mg/L、氯化钾400mg/L、无水硫酸镁97.6mg/L 7、氯化钠6400mg/L、无水磷酸二氢钠109mg/L、丁二酸75mg/L、丁二酸钠100mg/L、L-盐酸精氨酸84mg/L、L-盐酸胱氨酸63mg/L、甘氨酸30mg/L、L-盐酸组氨酸42mg/L、L-异亮氨酸105mg/L、L-丝氨酸42mg/L、L-苏氨酸95mg/L、L-色氨酸16mg/L、L-酪氨酸72mg/L、L-缬氨酸94mg/L、D-泛酸钙4mg/L、酒石酸胆碱7.2mg/L、叶酸4mg/L、肌醇7.2mg/L、烟酰胺4mg/L、核黄素0.4mg/L、盐酸硫胺4mg/L、盐酸吡哆辛4mg/L。进一步的改进，DMEM培养基为低糖型DMEM培养基。
本发明的有益效果是：本发明提供的NK细胞采集用套装使用方便，便于NK细胞的存储和运输，并且采血袋内的环境充分模拟了体内环境，更适合NK细胞的生存，能够显著提高NK细胞的存活率；同时在保存NK细胞的同时，还可以进一步扩大NK细胞的数量。
附图说明
图1为实施例1NK细胞采集用套装的结构示意图；
图2为实施例2NK细胞采集用套装的结构示意图；
图3为实施例3NK细胞采集用套装的结构示意图；
图4为实施例4NK细胞采集用套装的结构示意图；
图5为实施例4旋转体的结构放大示意图；
图6为实施例4旋转体的放大剖视图；
图7为实施例4控制器内部结构工作原理图。
具体实施方式
实施例1
一种NK细胞采集用套装，如图1所示，该采集用套装包括内包装盒1，内包装盒1上开设有第一位置槽11、第二位置槽12、第三位置槽13和第四位置槽14，内包装盒1侧壁上位于第一位置槽11的底部位置处开设有卡槽15，第一位置槽11、第二位置槽12、第三位置槽13、第四位置槽14和卡槽15内分别放置有冰盒3、采集用套装使用说明、采集卡、条形码和采血袋4。本发明的内包装盒上开设的位置槽的位置不限，可以是从左侧开始，也可以是从右动作设置。
本发明提供的采集用套装使用方便，其内放置有冰盒可保证采血袋需要的温度。
实施例2
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1不同的是，如图2所示，采集用套装还包括外包装箱2和与外包装箱2铰接的箱盖21，外包装箱2内设有冷冻室22和放置内包装盒1的容置槽23，冷冻室22内设有冰盒3；冷冻室开口的相对两侧壁上设有凹槽5，所述凹槽5内卡接有可水平伸缩的电子冷冻室盖24。
本发明通过设置外包装箱便于内包装盒的保存，并且其内设置的冷冻室可进一步对溶化的冰盒进行冷冻。
实施例3
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例2不同的是，如图3所示，第一位置槽11内还设有温度传感器，外包装箱2上安装有与温度传感器相连的温度显示屏6。本发明通过在第一位置槽内设置温度传感器，其可实时监测第一位置槽内的温度，便于为采血袋提供一个恒定的温度。
如图3所示，外包装箱2上设有与温度传感器相连的控制器7和与控制器7相连的报警器8。控制器用于接收第一位置槽内的温度值，当其温度值过高时，就会向报警器发出报警指令。
实施例4
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例3不同的是，如图4所示，箱盖21朝向外包装箱2内侧设有一开槽，外包装箱2内设有与控制器7相连的旋转吸盘机构，旋转吸盘机构包括第一伺服电机91和旋转体92，如图5-6所示，所述旋转体92包括壳体921、设置在壳体921顶角处的两个空心旋转轴922和嵌装在空心旋转轴922周面上的吸盘923、设于壳体921内且主轴与第一伺服电机91连接的固定齿轮924和与固定齿轮924齿合的两个中介齿轮925，两个空心旋转轴922分别固定在两个中介齿轮925的中心轴上；吸盘923的位置分别与冷冻室22和第一位置槽11的位置相对应；所述采集用套装还包括电磁阀，外接的真空泵通过真空管为吸盘923提供吸力，所述电磁阀设置在真空管上。
如图7所示，控制器7包括壳体及设于壳体内的温度采集模块71、温度比对模块72、旋转吸盘机构控制模块73、电子冷冻室盖开闭控制模块74和电磁阀控制模块75；温度采集模块71用于接收温度传感器采集的第一位置槽11内的温度，并发送给温度比对模块72；温度比对模块72用于将接收的温度与预设的温度阈值进行比对，当接收的温度高于预设温度时，向电子冷冻室盖开闭控制模块74发送开启电子冷冻室盖24的指令，同时向旋转吸盘机构控制模块73发送驱动旋转吸盘机构9的指令；电子冷冻室盖开闭控制模块74用于根据接收的开启电子冷冻室盖24的指令，开启电子冷冻室盖24；旋转吸盘机构控制模块73根据接收的驱动旋转吸盘机构9的指令，驱动第一伺服电机91运动，当一个吸盘94运动到第一位置槽11的位置时，停止驱动第一伺服电机91，同时向电磁阀控制模块75发送开启电磁阀的指令；电磁阀控制模块75根据接收的开启电磁阀的指令，开启电磁阀，以此控制两个吸盘94分别对冷冻室22和第一位置槽11内的冰盒3进行吸附，再向旋转吸盘机构控制模块73发送驱动旋转吸盘机构9的指令，旋转吸盘机构控制模块73根据接收的驱动旋转吸盘机构9的指令，再次驱动第一伺服电机91运动，当吸附有冷冻室22内冰盒3的吸盘94运动到第一位置槽11的位置时，停止驱动第一伺服电机91，同时向电磁阀控制模块75发送关闭电磁阀的指令。
本发明通过在外包装箱内设置的旋转吸盘机构的目的时，当采集用套装需要长时间运输时，其第一位置槽上的冰盒可能溶化，不能保证采血袋所需要的温度，但是由于人工无法得知，并且更换不方便，所以本发明通过引入旋转吸盘机构后，当第一位置槽内的温度过高时，控制器接收温度并进行比对，并且控制电子冷冻室盖打开，驱动旋转吸盘机构，起到自动更换冰盒的作用，保证整个运输过程中采血袋的温度恒定。
实施例5
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠7.5 磷酸氢钾3.5 单硬脂酸钙1 维生素E 0.2。
实施例6
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠10 磷酸氢钾5 单硬脂酸钙3 维生素E 0.5。
实施例7
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有活性保持剂，活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠6.5 羟乙基-β-环糊精2 多聚谷氨酸3。
实施例8
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有活性保持剂，活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠9 羟乙基-β-环糊精1.5 多聚谷氨酸1。
实施例9
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂和活性保持剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠8 磷酸氢钾4 单硬脂酸钙2 维生素E 0.3；
活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠7 羟乙基-β-环糊精1.7 多聚谷氨酸2。
实施例10
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有培养基，培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，悬浮溶质及其在DMEM培养液中的浓度为5μg/mL普鲁兰、6μg/mL谷胱甘肽、20μg/mL棕榈酰胺、30μg/mL生物素、1μg/mL谷氨酰胺、6μg/mL胆酸钠、3μg/mL月桂醇硫酸酯钠和15μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺。
实施例11
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有培养基，培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，悬浮溶质及其在DMEM培养液中的浓度为10μg/mL普鲁兰、10μg/mL谷胱甘肽、35μg/mL棕榈酰胺、50μg/mL生物素、3μg/mL谷氨酰胺、10μg/mL胆酸钠、5μg/mL月桂醇硫酸酯钠和20μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺。
实施例12
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂和培养基，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠9 磷酸氢钾4.5 单硬脂酸钙2.5 维生素E 0.4
培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，悬浮溶质及其在DMEM培养液中的浓度为6.5μg/mL普鲁兰、7μg/mL谷胱甘肽、25μg/mL棕榈酰胺、40μg/mL生物素、2μg/mL谷氨酰胺、8μg/mL胆酸钠、4μg/mL月桂醇硫酸酯钠和17.5μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺。
实施例13
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有活性保持剂和培养基，活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠8羟乙基-β-环糊精1.8多聚谷氨酸2.5
培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，悬浮溶质及其在DMEM培养液中的浓度为7.5μg/mL普鲁兰、8μg/mL谷胱甘肽、30μg/mL棕榈酰胺、35μg/mL生物素、1.5μg/mL谷氨酰胺、9μg/mL胆酸钠、3.5μg/mL月桂醇硫酸酯钠和18μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺。
实施例14
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂、活性保持剂和培养基，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠8.5 磷酸氢钾3.75 单硬脂酸钙1.5 维生素E 0.35
活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠8.5羟乙基-β-环糊精1.9多聚谷氨酸1.2
培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，悬浮溶质及其在DMEM培养液中的浓度为9.5μg/mL普鲁兰、9μg/mL谷胱甘肽、22.5μg/mL棕榈酰胺、45μg/mL生物素、2.5μg/mL谷氨酰胺、6.5μg/mL胆酸钠、4.5μg/mL月桂醇硫酸酯钠和16μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺。
实施例15
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有稳定剂，稳定剂由下列重量份数的成分组成：
卡波姆1.5 磷酸淀粉钠5 二异丙醇胺6。
实施例16
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有稳定剂，稳定剂由下列重量份数的成分组成：
卡波姆2 磷酸淀粉钠10 二异丙醇胺3。
实施例17
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂和稳定剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠9 磷酸氢钾4.5 单硬脂酸钙2.5 维生素E 0.4
稳定剂由下列重量份数的成分组成：
卡波姆1.75 磷酸淀粉钠7.5 二异丙醇胺4。
实施例18
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂、活性保持剂和稳定剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠9 磷酸氢钾4.5 单硬脂酸钙2.5 维生素E 0.4
活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠8 羟乙基-β-环糊精1.8 多聚谷氨酸2.5
稳定剂由下列重量份数的成分组成：
卡波姆1.9 磷酸淀粉钠8 二异丙醇胺5。
实施例19
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂、活性保持剂、培养基和稳定剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠9 磷酸氢钾4.5 单硬脂酸钙2.5 维生素E 0.4
活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠8 羟乙基-β-环糊精1.8 多聚谷氨酸2.5
培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，悬浮溶质及其在DMEM培养液中的浓度为9.5μg/mL普鲁兰、9μg/mL谷胱甘肽、22.5μg/mL棕榈酰胺、45μg/mL生物素、2.5μg/mL谷氨酰胺、6.5μg/mL胆酸钠、4.5μg/mL月桂醇硫酸酯钠和16μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺
稳定剂由下列重量份数的成分组成：
卡波姆1.9 磷酸淀粉钠8 二异丙醇胺5。
对照例1
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠7.5 氯化钾3.5 单硬脂酸钙1 维生素C 0.2。
对照例2
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠7.5 磷酸氢钾3.5 单硬脂酸钙1。
对照例3
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有活性保持剂，活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠6.5 羟乙基-β-环糊精2 谷氨酰胺3。
对照例4
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有活性保持剂，活性保持剂由下列重量份数的成分组成：
抗坏血酸钠6.5 多聚谷氨酸3。
对照例5
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂和培养基，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠9 磷酸氢钾4.5 单硬脂酸钙2.5 维生素E 0.4
培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，悬浮溶质及其在DMEM培养液中的浓度为5μg/mL葡萄糖、6μg/mL谷胱甘肽、20μg/mL棕榈酰胺、30μg/mL人血清白蛋白、1μg/mL谷氨酰胺、6μg/mL胆酸钠、3μg/mL月桂醇硫酸酯钠和15μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺。
对照例6
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂和培养基，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠9 磷酸氢钾4.5 单硬脂酸钙2.5 维生素E 0.4
培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，悬浮溶质及其在DMEM培养液中的浓度为5μg/mL普鲁兰、6μg/mL谷胱甘肽、20μg/mL棕榈酰胺、30μg/mL生物素、6μg/mL胆酸钠、和15μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺。
对照例7
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂和稳定剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠9 磷酸氢钾4.5 单硬脂酸钙2.5 维生素E 0.4
稳定剂由下列重量份数的成分组成：
卡波姆1.75 磷酸淀粉钠7.5 十二烷基硫酸钠4。
对照例8
一种NK细胞采集用套装，该采集用套装与实施例1的区别在于，采集袋内装有抗凝剂和稳定剂，抗凝剂由下列重量份数的成分组成：
酪蛋白酸钠9 磷酸氢钾4.5 单硬脂酸钙2.5 维生素E 0.4
稳定剂由下列重量份数的成分组成：
磷酸淀粉钠5 二异丙醇胺6。
试验例1抗凝检测
以实施例5采集用套装内的抗凝剂为实验1组，以对照例1-2采集用套装内的抗凝剂和常规的抗凝剂枸橼酸钠为对照1-3组。观察各实验组和对照组采血袋内NK细胞血液出现蛋白析出时间和溶血时间。结果如表1所示。
表1实验组和对照组抗凝结果
从表中可以看出，本发明提供的酪蛋白酸钠、磷酸氢钾、单硬脂酸钙和维生素E组成的抗凝剂，可以防止NK细胞内的血液凝固，可将血液出现蛋白沉淀的时间和溶血时间分别延长到96h和87h，当蛋白酸钠、磷酸氢钾、单硬脂酸钙和维生素E发生变化或者减少，其抗凝效果显著下降。
试验例2活率检测
以实施例5、7、实施例17和实施例18的采集用套装保存的NK细胞为实验1-4组，以对照例1-4、对照例7-8的采集用套装和常规的采血袋保存的NK细胞为对照1-7组。各实验组和对照组的NK细胞分别在24h、48h、96h、240h和480小时进入试验程序，调整NK细胞的密度均为1×106cells/mL。按细胞悬液：0.4％台盼蓝＝3:1v:v充分混匀，取20μL细胞悬液加入细胞计数板中，用Countstar细胞计数器进行细胞活率检测。细胞活率结果如表2所示。
表2实验组和对照组细胞活率结果
注：“--”表示没有活性。
由表1可知，实验1组的采集用套装保存的NK细胞的细胞活率要比使用对照1-2、7组使用的采集用套装保存的NK细胞的细胞活率高；实验2组使用的采集用套装保存的NK细胞的细胞活率要比使用对照3-4、7组和实施例1使用的采集用套装保存的NK细胞的细胞活率高；并且实验3-4组使用的采集用套装保存的NK细胞的时间要比对照5-6组和实验1-2组的保存时间长，可达到480h，其活率仍达到50％以上。
由此得出，本发明提供的采集用套装中加入由酪蛋白酸钠、磷酸氢钾、单硬脂酸钙和维生素E组成的抗凝剂可将NK细胞的活性保持在96h内。当采集用套装内加入由抗坏血酸钠、羟乙基-β-环糊精和多聚谷氨酸组成的活性保持剂后，能够显著提高采集用套装保存的NK细胞的活率，当采血袋内加入由卡波姆、磷酸淀粉钠和二异丙醇胺组合的稳定剂后，可提高采集用套装NK细胞的保存时间，可将保存时间提高到480h；采血袋内加入的抗凝剂、活性保持剂和稳定剂的成分发生变化或减少，将显著影响NK细胞的活性及保存时间。
试验例3NK细胞扩增培养检测
以实施例5、实施例12的采集用套装保存的NK细胞为实验1-2组，以对照例5-6的采集用套装采集用套装保存的NK细胞和CN1935984公开的一种禽类精原NK细胞的体外培养方法培养的精原NK细胞为对照1-3组。各实验组和对照组的NK细胞保存2天后取样，进行细胞计数台盼蓝染色法，进行细胞总数、扩增倍数、细胞活率的测定，结果见表3。
表3实验组和对照组的扩增培养结果
从表中可以看出，本发明和实施例12提供的采集用套装可显著提高NK细胞的扩增倍数，其扩增倍数显著高于实施例5、对照1-3组，并且该采集用套装中加入的上述成分不影响NK细胞的活性，由此得出，在本发明提供的采集用套装内加入本发明提供的培养基后，可以显著提高NK细胞的扩增倍数，但当以上成分发生变化，或者省略某一成分后，该采集用套装对NK细胞的扩增倍数显著降低。
试验例4贴壁率检测
以实施例17采集用套装保存的NK细胞为实验1组，以对照例7-8的采集用套装保存的NK细胞为对照1-2组。各实验组和对照组的NK细胞分别在24h、48h和96h进入试验程序，调整NK细胞的密度均为5×105cells/mL，接种8mL至直径为9cm的平皿中，待其自然贴壁生长48小时后，去除未贴壁的细胞后，用0.25m/v％胰蛋白酶进行酶解，计算出贴壁细胞的数量，从得出贴壁率。结果如表4所示。
表4实验组和对照组细胞贴壁率结果
由表4可知，实验1组在保存96h后，细胞贴壁率仍保持在80％以上，贴壁效果明显好于对照1-2组，由此得出由卡波姆、磷酸淀粉钠和二异丙醇胺组合的稳定剂可提高NK细胞的贴壁率，当其中一个成分变化或省略后，NK细胞的贴壁率显著降低。
以上实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (5)

1.一种NK细胞采集用套装，其特征在于，所述采集用套装包括内包装盒（1），所述内包装盒（1）上开设有第一位置槽（11）、第二位置槽（12）、第三位置槽（13）和第四位置槽（14），所述内包装盒（1）侧壁上位于第一位置槽（11）的底部位置处开设有卡槽（15），所述第一位置槽（11）、第二位置槽（12）、第三位置槽（13）、第四位置槽（14）和卡槽（15）内分别放置有冰盒（3）、采集用套装使用说明、采集卡、条形码和采血袋（4）；
所述采集用套装还包括外包装箱（2）和与外包装箱（2）铰接的箱盖（21），所述外包装箱（2）内设有冷冻室（22）和放置内包装盒（1）的容置槽（23），所述冷冻室（22）内设有冰盒（3）；所述冷冻室（22）的顶部设有冷冻室开口，所述冷冻室开口的相对两侧壁上设有凹槽（5），所述凹槽（5）内卡接有可水平伸缩的电子冷冻室盖（24）；
所述第一位置槽（11）内还设有温度传感器；
所述外包装箱（2）内设有与控制器（7）相连的旋转吸盘机构；
所述控制器（7）包括箱体及设于箱体内的温度采集模块（71）、温度比对模块（72）、旋转吸盘机构控制模块（73）、电子冷冻室盖开闭控制模块（74）和电磁阀控制模块（75）；
所述温度采集模块（71）用于接收温度传感器采集的第一位置槽（11）内的温度，并发送给温度比对模块（72）；
所述温度比对模块（72）用于将接收的温度与预设的温度阈值进行比对；
所述电子冷冻室盖开闭控制模块（74）用于根据接收的开启电子冷冻室盖（24）的指令，开启电子冷冻室盖（24）；
所述旋转吸盘机构控制模块（73）根据接收的指令驱动旋转吸盘机构（9）；
所述电磁阀控制模块（75）根据接收的指令分别对冷冻室（22）和第一位置槽（11）内的冰盒（3）进行吸附；
所述采血袋（4）内装有抗凝剂和培养基，所述抗凝剂由下列重量份数的成分组成：酪蛋白酸钠7.5-10、磷酸氢钾3.5-5、单硬脂酸钙1-3、维生素E 0.2-0.5；所述培养基由DMEM培养液和悬浮溶质组成，所述悬浮溶质成分及其在DMEM培养液中的浓度为5-10μg/mL普鲁兰、6-10μg/mL谷胱甘肽、20-35μg/mL棕榈酰胺、30-50μg/mL生物素、1-3μg/mL谷氨酰胺、6-10μg/mL胆酸钠、3-5μg/mL月桂醇硫酸酯钠和15-20μg/mL椰子油酸单乙醇酰胺；
或者，
所述采血袋（4）内装有抗凝剂、活性保持剂和稳定剂，所述抗凝剂由下列重量份数的成分组成：酪蛋白酸钠7.5-10、磷酸氢钾3.5-5、单硬脂酸钙1-3、维生素E 0.2-0.5；所述活性保持剂由下列重量份数的成分组成：抗坏血酸钠6.5-9、羟乙基-β-环糊精1.5-2、多聚谷氨酸1-3；所述稳定剂由下列重量份数的成分组成：卡波姆1.5-2、磷酸淀粉钠5-10、二异丙醇胺3-6。
2.如权利要求1所述的NK细胞采集用套装，其特征在于，所述外包装箱（2）上安装有与温度传感器相连的温度显示屏（6）。
3.如权利要求2所述的NK细胞采集用套装，其特征在于，所述外包装箱（2）上设有与温度传感器相连的控制器（7）和与控制器（7）相连的报警器（8）。
4.如权利要求3所述的NK细胞采集用套装，其特征在于，所述旋转吸盘机构包括第一伺服电机（91）和旋转体（92），所述旋转体（92）包括壳体（921）、设置在壳体（921）顶角处的两个空心旋转轴（922）和嵌装在空心旋转轴（922）周面上的吸盘（923）、设于壳体（921）内且主轴与第一伺服电机（91）连接的固定齿轮（924）和与固定齿轮（924）齿合的两个中介齿轮（925），两个空心旋转轴（922）分别固定在两个中介齿轮（925）的中心轴上；吸盘（923）的位置分别与冷冻室（22）和第一位置槽（11）的位置相对应；所述采集用套装还包括电磁阀，外接的真空泵通过真空管为吸盘（923）提供吸力，所述电磁阀设置在真空管上。
5.如权利要求4所述的NK细胞采集用套装，其特征在于，所述温度采集模块（71）用于接收温度传感器采集的第一位置槽（11）内的温度，并发送给温度比对模块（72）；所述温度比对模块（72）用于将接收的温度与预设的温度阈值进行比对，当接收的温度高于预设温度阈值时，向电子冷冻室盖开闭控制模块（74）发送开启电子冷冻室盖（24）的指令，同时向旋转吸盘机构控制模块（73）发送驱动旋转吸盘机构（9）的指令；所述电子冷冻室盖开闭控制模块（74）用于根据接收的开启电子冷冻室盖（24）的指令，开启电子冷冻室盖（24）；所述旋转吸盘机构控制模块（73）根据接收的驱动旋转吸盘机构（9）的指令，驱动第一伺服电机（91）运动，当一个吸盘（923）运动到第一位置槽（11）的位置时，停止驱动第一伺服电机（91），同时向电磁阀控制模块（75）发送开启电磁阀的指令；所述电磁阀控制模块（75）根据接收的开启电磁阀的指令，开启电磁阀，以此控制两个吸盘（923）分别对冷冻室（22）和第一位置槽（11）内的冰盒（3）进行吸附，再向旋转吸盘机构控制模块（73）发送驱动旋转吸盘机构（9）的指令，所述旋转吸盘机构控制模块（73）根据接收的驱动旋转吸盘机构（9）的指令，再次驱动第一伺服电机（91）运动，当吸附有冷冻室（22）内冰盒（3）的吸盘（923）运动到第一位置槽（11）的位置时，停止驱动第一伺服电机（91），同时向电磁阀控制模块（75）发送关闭电磁阀的指令。
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