CN107674108A - 豆甾烷型甾体类化合物在制备糖尿病或肥胖症药物中的应用 - Google Patents
豆甾烷型甾体类化合物在制备糖尿病或肥胖症药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107674108A CN107674108A CN201710946167.0A CN201710946167A CN107674108A CN 107674108 A CN107674108 A CN 107674108A CN 201710946167 A CN201710946167 A CN 201710946167A CN 107674108 A CN107674108 A CN 107674108A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- extract
- wing algae
- methanol
- elution
- wing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 title claims abstract description 9
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 title claims abstract description 9
- -1 steroid compound Chemical class 0.000 title claims abstract description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title abstract description 6
- GKBHKNPLNHLYHT-UHFFFAOYSA-N 5beta-Stigmastan Natural products C1CC2CCCCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 GKBHKNPLNHLYHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 2
- GKBHKNPLNHLYHT-LWQAOISPSA-N stigmastane Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 GKBHKNPLNHLYHT-LWQAOISPSA-N 0.000 title description 2
- LAGFCVRVICMFFF-UHFFFAOYSA-N stigmastane Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2C3CCC4CC(=O)CC(C)C4C3CCC12C)C(C)C LAGFCVRVICMFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 claims abstract description 38
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 241000024430 Dictyopteris undulata Species 0.000 claims abstract description 7
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 36
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 24
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GJYVZUKSNFSLCL-UHFFFAOYSA-N dichloromethanol Chemical compound OC(Cl)Cl GJYVZUKSNFSLCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 claims description 5
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 claims description 4
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 2
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 5
- 239000003801 protein tyrosine phosphatase 1B inhibitor Substances 0.000 abstract description 4
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 2
- 101001087394 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 1 Proteins 0.000 abstract 2
- 102100033001 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 1 Human genes 0.000 abstract 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 abstract 1
- 102000002072 Non-Receptor Type 1 Protein Tyrosine Phosphatase Human genes 0.000 description 15
- 108010015847 Non-Receptor Type 1 Protein Tyrosine Phosphatase Proteins 0.000 description 15
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 5
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 5
- 102000002727 Protein Tyrosine Phosphatase Human genes 0.000 description 5
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 5
- 108020000494 protein-tyrosine phosphatase Proteins 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical compound ClC NEHMKBQYUWJMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GXWUEMSASMVWKO-GNLHUFSQSA-N (4as,6ar,6as,6br,10s,12ar,14br)-10-[(2s,3r,4s,5s)-4,5-dihydroxy-3-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)CO[C@H]1O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CCC2C1(C)C)C)(C)CC[C@]1(CCC(C[C@@H]14)(C)C)C(O)=O)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GXWUEMSASMVWKO-GNLHUFSQSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYKHWKNFKLTGNX-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1.OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 FYKHWKNFKLTGNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- WJZWPIYVXLSEHT-LURJTMIESA-N P(=O)(O)(O)OCC[C@H](NCCC)C(=O)O Chemical compound P(=O)(O)(O)OCC[C@H](NCCC)C(=O)O WJZWPIYVXLSEHT-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
- A23L33/11—Plant sterols or derivatives thereof, e.g. phytosterols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及医药技术领域，涉及从中国波状网翼藻Dictyopteris undulata Holmes中提取分离得到的、具有降血糖功能的新天然药物，该药物为甾体类化合物网翼藻素J(dictyopterisin J)。体外PTP1B抑制试验表明，该化合物对蛋白络氨酸酯酶1B(PTP1B)具有显著抑制活性，因此可制成药物制剂作为PTP1B抑制剂，用于治疗糖尿病、肥胖症及其并发症，也可以制造有益于糖尿病患者或肥胖患者的保健食品。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及从中国波状网翼藻Dictyopteris undulataHolmes中提取分离得到的、具有降血糖功能的新天然药物，该药物为新甾体类化合物网翼藻素J(Dictyopterisin J)。
背景技术
糖尿病(diabetes mellitus)是一组由遗传和环境因素相互作用而引起的临床综合症。目前，一般将糖尿病分为两类，I-型糖尿病(胰岛素依赖型糖尿病，insulin-dependent diabetes mellitus，IDDM)与II-型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病，non-insulin-dependent diabetes mellitus，NIDDM)。糖尿病中90％以上是II-型糖尿病。
II-型糖尿病的特点是胰岛素敏感组织如骨骼肌、肝、脂肪组织对胰岛素作用的抵抗。蛋白酪氨酸磷酸酯酶(PTPases)在平衡细胞内胰岛素作用通路中相关蛋白酪氨酸磷酸化水平中的作用越来越受到重视，成为治疗II-型糖尿病的新途径。PTPase包括一大族跨膜(受体型)和胞内(非受体型)酶，参与调控一系列重要生命过程。目前，对PTPase在胰岛素通路中受体或受体后环节影响正常胰岛素作用的研究，主要集中在LAR-PTPase、SHPTP-2、PTP1B。
PTP1B是第一个被鉴定的蛋白酪氨酸磷酸酯酶(protein tyrosinephosphatase),通过PTP1B剔除的老鼠实验表明,PTP1B通过对胰岛素受体的脱磷酰化，进而在调节胰岛素敏感性和脂肪代谢过程中起着非常重要的作用。因而，选择性的、高活性的PTP1B抑制剂在II-型糖尿病、肥胖症及其并发症的治疗中有重要的价值。
发明内容
本发明是从中国波状网翼藻(D.undulata)中提取分离得到的、具有降血糖作用的新甾体类化合物网翼藻素J(Dictyopterisin J)。经药理试验研究表明，该化合物对蛋白络氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)具有显著抑制活性。
本发明的目的之一是提供新的甾体类化合物网翼藻素J。
本发明的目的之二是提供所述网翼藻素J的制备方法。
本发明的目的之三是提供所述网翼藻素J的用途。具体地说，所述网翼藻素J在制备蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)抑制剂的药物中的应用，进一步在制备治疗糖尿病、肥胖症及其并发症的药物或保健食品中的应用。
根据本发明的第一个目的，本发明首次从波状网翼藻中发现了网翼藻素J，其化学结构如下所示：
根据本发明的第二个目的，本发明提供所述网翼藻素J的制备方法，它是从波状网翼藻中分离得到的，具体步骤如下：
1)制备提取物浸膏
将冷冻的波状网翼藻(D.undulata)用乙醇按常规渗漉提取，得提取液，将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏；
2)分离纯化
(1)将上述粗浸膏分散于水中成混悬液，将混悬液用乙醚萃取，所得萃取液浓缩得到乙醚提取浸膏；
(2)将乙醚浸膏进行硅胶柱层析，依次以石油醚/丙酮和二氯甲醇/甲醇梯度洗脱，根据TLC显色合并相似流份得到12个组分(A–L)；其中组分G即石油醚/丙酮体积比8:2洗脱部分经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以二氯甲烷/甲醇体积比1:1洗脱；根据TLC显色合并相似流份得到4个组分(G1-G4)，组分G2(即二氯甲烷/甲醇体积比1:1洗脱体积为75～90mL洗脱部分)再经硅胶柱层析，以石油醚/丙酮体积比8:2洗脱，最后经半制备型HPLC，以甲醇/水90:10体积比洗脱，得到本发明化合物网翼藻素J。
在上述制备方法中，在制备提取物浸膏步骤中，所述提取采用的乙醇为95％乙醇。
在上述制备方法中，在分离步骤中，石油醚/丙酮梯度洗脱的浓度依次为体积比100:0、90:10、80:20、70:30、50:50和40:60。二氯甲醇/甲醇梯度洗脱的浓度依次为体积比70:30、60:40和50:50。
在上述制备方法中，在分离步骤中，所述半制备型HPLC的色谱柱的填料为RP-18。
根据本发明的第三个目的，本发明提供了所述网翼藻素J在制备PTP1B抑制剂、糖尿病药物、肥胖症药物的用途。以及制备用于糖尿病患者或肥胖患者保健食品的用途。
为了达到应用目的，可以制成片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、纳米制剂或注射剂等形式。
本发明对所得网翼藻素J进行了体外PTP1B抑制试验，结果表明该化合物对PTP1B有明显的抑制活性。因此，可用来制备PTP1B抑制剂，用于治疗糖尿病、肥胖症及其并发症。
附图说明
图1为PTP1B抑制活性测试原理图。
具体实施方式
在如下的实施例中所指的网翼藻素J的化学结构式(结构式中的阿拉伯数字是化学结构中碳原子的标位)：
实施例1：所述网翼藻素J的制备
1.制备波状网翼藻提取物浸膏
(1)制备提取液
将冷冻的中国波状网翼藻(D.undulata)(采自广东湛江沿海)1.8kg(湿重)分别用5L 95％乙醇渗漉提取三次，每次渗漉2天，合并提取液；
(2)制备提取物浸膏
将上述提取液在温度≤45℃减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏174.5g；
2.分离纯化
1)将上述粗浸膏分散于2L水中成混悬液，将混悬液用乙醚(1.5L)萃取四次，所得萃取液减压浓缩得到乙醚提取浸膏(54.3g)；
2)将乙醚浸膏进行硅胶柱层析，依次以石油醚/丙酮和二氯甲醇/甲醇梯度洗脱；石油醚/丙酮梯度洗脱的浓度依次为体积比100:0、90:10、80:20、70:30、50:50和40:60，二氯甲醇/甲醇梯度洗脱的浓度依次为体积比70:30、60:40和50:50。根据TLC显色合并相似流份得到12个组分(A–L)；
3)组分G即石油醚/丙酮体积比8:2洗脱部分经Sephadex LH-20凝胶柱层析【层析柱规格：3.1(直径)×120(长度)cm；Sephadex LH-20凝胶干重：150g】，以二氯甲烷/甲醇体积比1:1洗脱，根据TLC显色合并相似流份得到4个组分(G1-G4)；
4)组份G2，即二氯甲烷/甲醇体积比1:1洗脱体积为75～90mL洗脱部分，再经硅胶柱层析，以石油醚/丙酮体积比8:2洗脱，最后经半制备型HPLC(色谱柱的填料为RP-18)，以甲醇/水体积比90:10洗脱，流速为3.5mL/min，保留时间为16.8min，得到本发明化合物网翼藻素J，经鉴定为新化合物。
3.结构鉴定
按常规经NMR、HRESIMS、UV及IR等多种现代光谱技术，确定了化合物网翼藻素J的化学结构，其理化性质如下：
白色粉末,分子式为C29H46O3；
比旋光度+4(c 0.17,CHCl3)；
紫外光谱UV(MeOH)λmax(logε):234(3.88)nm；
红外光谱IR(KBr)νmax:3550,1687,1598,1512,1345,1202,1030,988cm–1；
高分辨质谱HR-ESI-MS m/z 465.3346[M+Na]+(calcd for C29H46O3Na,465.3345)；
核磁共振氢谱1H NMR(600MHz)及核磁共振碳谱13C NMR(150MHz)数据见表1。
表1所述网翼藻素J的1H和13C NMR(ppm in CDCl3)
实施例2：PTP1B抑制活性的测试
测试原理：见图1。利用分子生物学手段在大肠杆菌系统表达人源蛋白络氨酸磷酸酯酶1B(hPTP1B)催化结构域，经纯化后的hPTP1B重组蛋白能水解底物对硝基苯磷酸(p-Nitrophenyl phosphate，pNPP)的磷脂键，得到黄色可溶产物对硝基苯酚(p-Nitrophenol)，该产物在410nm处有很强的光吸收，因此可以直接检测410nm处光吸收的变化及观察酶的活性变化以及化合物对酶活性的抑制情况。
标准的测活体系：10mM Tris.Cl三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐)，pH 7.6，10mMpNPP，2％DMSO，100nM hPTP1B。
观察指标：动态测定波长为410nm处的光吸收，时间为3分钟，其动力学曲线一级反应的斜率作为酶的活性指标。
试验方法：用于筛选的蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTP1B是从大肠杆菌中表达并纯化的GST融合蛋白。采用紫外适用底物对硝基苯磷酸(pNPP)，观察不同浓度对重组酶的活性的抑制作用，以初步评价化合物的药用效果。临用前将样品溶于DMSO配成适当浓度，3倍稀释，7个稀释度，设置三复孔，取2μL样品溶液加入96孔板，然后加入88μL assay mix(assaybuffer，pNPP，H2O)，再加入10μL PTP1B。将96孔板置于VERSAmax上动态检测波长为410nm处检测光吸收值，时间为3分钟。
实验结果的评判与解释：
筛选结果是化合物浓度为20μg/ml时对酶活性的百分抑制率，抑制率高于50％时，按常规筛选(将抑制率高于50％的被检测化合物稀释成不同的浓度，依上述测试方法进行反应，所有试验均设置复孔)得出IC50，阳性对照齐墩果酸的IC50为2.74±0.20μM。
实验结果：本发明化合物网翼藻素J对PTP1B酶抑制活性的IC50为16.03±2.36μM。
实验结论：通过分子生物学试验，可以看出化合物网翼藻素J对蛋白络氨酸酯酶1B(PTP1B)显著的抑制活性。因此，本发明的网翼藻素J可用于制备糖尿病、肥胖症及其并发症的药物中。
Claims (5)
1.一种具有降血糖作用的甾体类化合物网翼藻素J，其特征在于：具有如下化学结构：
2.根据权利要求1所述的网翼藻素J，其特征在于：所述的化合物是从网地藻科褐藻波状网翼藻中分离得到，波状网翼藻学名是Dictyopteris undulata Holmes。
3.根据权利要求1所述的网翼藻素J，其特征在于：制备方法包括步骤如下：
1)制备提取物浸膏
将冷冻的波状网翼藻(D.undulata)用乙醇按常规渗漉提取，得提取液，将提取液减压浓缩回收乙醇，得粗浸膏；
2)分离纯化
(1)将上述粗浸膏分散于水中成混悬液，将混悬液用乙醚萃取，所得萃取液浓缩得到乙醚提取浸膏；
(2)将乙醚浸膏进行硅胶柱层析，依次以石油醚/丙酮和二氯甲醇/甲醇梯度洗脱，根据TLC显色合并相似流份得到12个组分(A–L)；其中组分G即石油醚/丙酮体积比8:2洗脱部分经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以二氯甲烷/甲醇体积比1:1洗脱；根据TLC显色合并相似流份得到4个组分(G1-G4)，组分G2(即二氯甲烷/甲醇体积比1:1洗脱体积为75～90mL洗脱部分)再经硅胶柱层析，以石油醚/丙酮体积比8:2洗脱，最后经半制备型HPLC，以甲醇/水90:10体积比洗脱，得到本发明化合物网翼藻素J；
在上述制备方法中，在制备提取物浸膏步骤中，所述提取采用的乙醇为95％乙醇；
在上述制备方法中，在分离步骤中，石油醚/丙酮梯度洗脱的浓度依次为体积比100:0、90:10、80:20、70:30、50:50和40:60；二氯甲醇/甲醇梯度洗脱的浓度依次为体积比70:30、60:40和50:50；
在上述制备方法中，在分离步骤中，所述半制备型HPLC的色谱柱的填料为RP-18。
4.根据权利要求1所述的网翼藻素J，其特征在于：作为治疗糖尿病、肥胖症及其并发症药物的活性成分，可制成片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、纳米制剂或注射剂。
5.根据权利要求1所述的网翼藻素J，其特征在于：作为保健品的活性成分，用于制备糖尿病患者或肥胖患者保健食品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710946167.0A CN107674108B (zh) | 2017-10-11 | 2017-10-11 | 豆甾烷型甾体类化合物在制备糖尿病或肥胖症药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710946167.0A CN107674108B (zh) | 2017-10-11 | 2017-10-11 | 豆甾烷型甾体类化合物在制备糖尿病或肥胖症药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107674108A true CN107674108A (zh) | 2018-02-09 |
| CN107674108B CN107674108B (zh) | 2020-09-22 |
Family
ID=61140483
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710946167.0A Active CN107674108B (zh) | 2017-10-11 | 2017-10-11 | 豆甾烷型甾体类化合物在制备糖尿病或肥胖症药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107674108B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107722094A (zh) * | 2017-10-11 | 2018-02-23 | 南昌大学 | 一种甾体类天然药物及其在制备抗肿瘤药物中的用途 |
| CN113480503A (zh) * | 2021-07-05 | 2021-10-08 | 南昌大学 | 一种具有降血糖作用的黑桑素b及其制备方法和应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104163844A (zh) * | 2014-07-15 | 2014-11-26 | 南昌大学 | 甾体烯酮类化合物蕨藻烯酮及其制备和用途 |
-
2017
- 2017-10-11 CN CN201710946167.0A patent/CN107674108B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104163844A (zh) * | 2014-07-15 | 2014-11-26 | 南昌大学 | 甾体烯酮类化合物蕨藻烯酮及其制备和用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AYYAD, SEIF-ELDIN N. ET AL: "The structural determination of a new steroidal metabolite from the brown alga Sargassum asperfolium", 《ZEITSCHRIFT FUER NATURFORSCHUNG, C: JOURNAL OF BIOSCIENCES》 * |
| ITAJIMA, JUNICHI ET AL: "New sterols and triterpenoids of Ficus pumila fruit", 《CHEMICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107722094A (zh) * | 2017-10-11 | 2018-02-23 | 南昌大学 | 一种甾体类天然药物及其在制备抗肿瘤药物中的用途 |
| CN107722094B (zh) * | 2017-10-11 | 2020-06-05 | 南昌大学 | 一种甾体类天然药物及其在制备抗肿瘤药物中的用途 |
| CN113480503A (zh) * | 2021-07-05 | 2021-10-08 | 南昌大学 | 一种具有降血糖作用的黑桑素b及其制备方法和应用 |
| CN113480503B (zh) * | 2021-07-05 | 2023-01-03 | 南昌大学 | 一种具有降血糖作用的黑桑素b及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107674108B (zh) | 2020-09-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fernandez et al. | Isoquercitrin from Argemone platyceras inhibits carbachol and leukotriene D4-induced contraction in guinea-pig airways | |
| CN102286057B (zh) | 齐墩果烷型三萜类化合物及其制备方法和医疗用途 | |
| Selvaraj et al. | Effect of Glycosin alkaloid from Rhizophora apiculata in non-insulin dependent diabetic rats and its mechanism of action: In vivo and in silico studies | |
| CN106748666B (zh) | 一种降血糖天然药物及其制备糖尿病或肥胖症药物用途 | |
| WO2021204018A1 (zh) | 具有ptp1b抑制活性的化合物及其应用 | |
| CN107805269A (zh) | Dictyopterisinf及其制备糖尿病或肥胖症药物中的应用 | |
| CN107802626A (zh) | 降血糖组合物及其制备方法、用途 | |
| Jiménez-Ferrer et al. | Antihypertensive activity of Salvia elegans Vahl.(Lamiaceae): ACE inhibition and angiotensin II antagonism | |
| CN104163844B (zh) | 甾体烯酮类化合物蕨藻烯酮及其制备和用途 | |
| CN107674108A (zh) | 豆甾烷型甾体类化合物在制备糖尿病或肥胖症药物中的应用 | |
| CN104557658B (zh) | 一种血红素酸酯化的链状二萜类化合物及其制备和用途 | |
| CN107652347A (zh) | 化合物DictyopterisinI及其在制备糖尿病或肥胖症药物中的用途 | |
| CN101439083B (zh) | 一种具有清风热、通鼻窍的中药软胶囊剂的检测方法 | |
| CN105384717B (zh) | 甘松新酮类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN1989984B (zh) | 川芎有效组分、制备方法及其制剂与用途 | |
| CN106749147B (zh) | 降血糖化合物及其制备方法、用途 | |
| CN106748664A (zh) | 具有降血糖作用的新联苄类天然药物及其用途 | |
| CN106748778A (zh) | 具有降血糖作用的一种新联苄类天然药物及其制备方法和用途 | |
| CN107722098A (zh) | 化合物dictyopterisinc及其在制备糖尿病或肥胖症药物中的应用 | |
| CN103351420B (zh) | 从苦瓜中分离的化合物及其制备方法和应用 | |
| CN105646151B (zh) | 一种炔类化合物及其制备方法和该化合物的用途 | |
| CN106580933B (zh) | 3,5-二羟基-2-[3,7-二甲基-2(反式),6-辛二烯基]-联苄的用途 | |
| CN106265681B (zh) | 一种三萜化合物在制备糖苷酶抑制剂药物中的应用 | |
| CN113480503B (zh) | 一种具有降血糖作用的黑桑素b及其制备方法和应用 | |
| CN113461532B (zh) | 一种具有降血糖作用的黑桑素a及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Li Xiaoqing Inventor after: Li Yuzhu Inventor after: Mao Shuichun Inventor after: Feng Meitang Inventor after: Li Jia Inventor after: Guo Yuewei Inventor before: Mao Shuichun Inventor before: Feng Meitang Inventor before: Li Jia Inventor before: Guo Yuewei |
|
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210205 Address after: 201111 room e268, 2nd floor, building 3, 2118 Guanghua Road, Minhang District, Shanghai Patentee after: Shanghai Yaoda Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 999 No. 330031 Jiangxi province Nanchang Honggutan University Avenue Patentee before: Nanchang University |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20231229 Address after: Room 303-9, Building 10, No. 2168 Chenhang Road, Minhang District, Shanghai, 201114 Patentee after: Lingyao Biotechnology (Shanghai) Co.,Ltd. Address before: 201111 room e268, 2nd floor, building 3, 2118 Guanghua Road, Minhang District, Shanghai Patentee before: Shanghai Yaoda Biotechnology Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |