CN107669707A

CN107669707A - 埃可病毒作为溶瘤病毒在抗肿瘤中的应用

Info

Publication number: CN107669707A
Application number: CN201711138642.8A
Authority: CN
Inventors: 邹罡
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-11-16
Filing date: 2017-11-16
Publication date: 2018-02-09

Abstract

本发明公开了埃可病毒作为溶瘤病毒在抗肿瘤中的应用，具体的涉及埃可病毒ECHO1、ECHO3、ECHO4、ECHO5、ECHO6、ECHO7、ECHO9、ECHO11、ECHO25在肺癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、横纹肌瘤中的应用，本发明证实了不同的埃可病毒对不同类型的肿瘤细胞具有不同的溶瘤活性，提示埃可病毒可用于肿瘤的特异性治疗。

Description

埃可病毒作为溶瘤病毒在抗肿瘤中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及埃可病毒作为溶瘤病毒在抗肿瘤中的应用。

背景技术

溶瘤病毒(Oncolytic viruses)是一类倾向于感染肿瘤细胞，同时在肿瘤细胞里面能够大量繁殖，最终让肿瘤细胞裂解，破碎，死亡的一类病毒。从1991年第一个基因工程的溶瘤病毒被报道以后，在后续的20多年间多种溶瘤病毒进入临床试验。第一个溶瘤病毒药物安柯瑞(重组人5型腺病毒H101)于2005年被中国药监局批准上市，与化疗联合，用于晚期难治性鼻咽癌。Amgen(安进)公司的溶瘤病毒产品T-Vec，于2015年10月取得美国FDA批准，同年12月取得欧盟CHMP的许可，用于治疗晚期不能手术的黑色素瘤。T-Vec的上市进一步证实了溶瘤病毒作为抗癌疗法的可行性。目前有四个溶瘤病毒产品进入了三期临床，分别为：治疗头颈部癌症的Reolysin、治疗膀胱癌的CG0070、治疗前列腺癌的ProstAtak^TM和治疗肝癌的PexaVec。另外美国杜克大学的Dr.Matthias Gromeier开发的利用基因工程改造的脊髓灰质炎病毒治疗恶性胶质瘤的疗法获得了FDA的突破性疗法认证。截至目前，腺病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒-1(HSV-1)、柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、新城疫病毒(NDV)、呼肠孤病毒等病毒为基础的溶瘤病毒药物已经进入了早期阶段的临床试验。进入临床试验的溶瘤病毒药物治疗的癌症种类主要有：黑色素瘤、神经胶质瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠癌、膀胱癌、头颈部癌、前列腺癌、卵巢癌和乳腺癌等。

越来越多的研究表明，溶瘤病毒的抗肿瘤活性主要通过两个机制来完成：一是在肿瘤细胞内选择性复制，导致肿瘤细胞直接裂解，另一个是诱导全身的抗肿瘤免疫反应，因此，人们也将其视为一种肿瘤免疫疗法。目前的研究结果显示，溶瘤病毒与一种热门的免疫疗法—检查点抑制剂(Checkpoint inhibitor，如PD-1/L1抗体、CTLA-4抗体等)联合时，它的效力能够获得较大的提高。

埃可病毒(Echovirus)即肠道致细胞病变人孤儿病毒(Enteric CytopathicHuman Orphan virus)，属于小RNA病毒科，肠道病毒属，共有28种血清型。天然的埃可病毒大多只引起人隐性感染，致病力较弱，因此用做溶瘤病毒安全性较高。目前不同血清型的埃可病毒对肿瘤细胞的溶瘤活性的敏感性尚无报道，本发明试图通过研究发现不同血清型的埃可病毒治疗肿瘤的特异性，从而为抗肿瘤用药方案提供更为安全有效的解决方案。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一是提供用于治疗肿瘤的的溶瘤病毒，所述溶瘤病毒为埃可病毒。

本发明的目的之二是提供一种药物组合物，通过裂解特定的肿瘤细胞实现肿瘤的治疗。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了埃可病毒在制备治疗肿瘤药物组合物中的应用，其特征在于，所述埃可病毒选自ECHO1、ECHO3、ECHO4、ECHO5、ECHO6、ECHO7、ECHO9、ECHO11、ECHO25。

进一步，所述肿瘤选自肺癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、横纹肌瘤。

进一步，包括如下任一应用：

a)ECHO1在制备治疗肺癌、肝癌的药物组合物中的应用；

b)ECHO3在制备治疗肺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌的药物组合物中的应用；

c)ECHO4在制备治疗肝癌的药物组合物中的应用；

d)ECHO5在制备治疗肺癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、肝癌的药物组合物中的应用；

e)ECHO6在制备治疗肺癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌的药物组合物中的应用；

f)ECHO7在制备治疗肝癌的药物组合物中的应用；

g)ECHO9在制备治疗肺癌、肝癌、横纹肌瘤的药物组合物中的应用；

h)ECHO11在制备治疗肺癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、肝癌的药物组合物中的应用；

i)ECHO25在制备治疗肺癌、胃癌、肝癌的药物组合物中的应用。

进一步，所述埃可病毒还包括分离的病毒的核酸分子。

进一步，所述核酸分子包括：

来源于所述病毒的单链RNA或互补的DNA；或

给予细胞时能够诱发细胞溶解的埃可病毒基因组或者其一部分；或

合成的埃可病毒的RNA。

进一步，药物组合物还包括免疫刺激物质。

本发明提供了一种治疗肿瘤的药物组合物，所述药物组合物包括有效量的埃可病毒或其核酸分子，所述埃可病毒选自ECHO1、ECHO3、ECHO4、ECHO5、ECHO6、ECHO7、ECHO9、ECHO11、ECHO25。

进一步，所述核酸分子包括：

来源于埃可病毒的单链RNA或互补的DNA；或

当给予细胞时能诱发细胞溶解的埃可病毒基因组或者其一部分；或

合成的埃可病毒的RNA。

本发明所述的病毒不限于常见的埃可病毒，还包括改造的能够感染和杀死肿瘤细胞的重组病毒，或例如已经被修饰以增强其感染和杀死细胞能力的病毒。

进一步，所述药物组合物还包括与埃可病毒或其核酸分子联合应用的免疫刺激物质。

进一步，所述组合物还包括药学上可接受的赋形剂、稀释剂或者载体。

药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体是本领域技术人员所公知的，包括但不限于能够被用作治疗药物给药载体的任何无活性物质。

本发明中的溶瘤病毒以任何合适的方式给予受试者。例如病毒可经静脉内、瘤内、腹膜内、肌肉内、眼内、皮下、口服、局部给药，或在自体干细胞移植之前，先体外后体内净化自体移植物内的恶性细胞。

附图说明

图1是ECHO1对不同类型的肿瘤细胞的溶瘤活性图；

图2是ECHO3对不同类型的肿瘤细胞的溶瘤活性图；

图3是ECHO4对不同类型的肿瘤细胞的溶瘤活性图；

图4是ECHO5对不同类型的肿瘤细胞的溶瘤活性图；

图5是ECHO6对不同类型的肿瘤细胞的溶瘤活性图；

图6是ECHO7对不同类型的肿瘤细胞的溶瘤活性图；

图7是ECHO9对不同类型的肿瘤细胞的溶瘤活性图；

图8是ECHO11对不同类型的肿瘤细胞的溶瘤活性图；

图9是ECHO25对不同类型的肿瘤细胞的溶瘤活性图。

具体的实施方式

虽然已知的一些病毒可以用作治疗一些癌症，但是不同的病毒对不同类型的肿瘤具有不同的溶瘤活性，因此需要进一步研究可用于不同溶瘤病毒治疗的特定肿瘤类型，从而为抗肿瘤提供更为安全有效的解决方案。

为了筛选指定的病毒以明确它是否能够感染和引起恶性细胞的死亡，可使用恶性细胞系而不是从活检中分离的原代恶性细胞。

已选择的病毒将优选直接注射至恶性肿瘤的多个部位上，以便将该病毒可能感染肿瘤的区域最大化。除了完整的病毒，掺入了核酸可产生病毒的病毒，或其他质粒，或表达载体可被注射进肿瘤中，以被肿瘤细胞摄取，在细胞内产生完整的病毒，使治疗发挥作用。合适的表达载体包括能够表达编码产生病毒所需的病毒蛋白的DNA插入物的质粒。表达载体通常包括与被插入的核酸可操作连接的转录调控序列。“可操作连接”的含义是核酸插入物与转录调控序列连接，使被插入序列转录，而不需要进入插入物的可读框内。这种转录调控序列包括促进RNA聚合酶的结合以起始转录的启动作用，以及使核糖体与已转录的mRNA结合的表达控制元件。

在本文使用的术语“调控序列”包含参与驱动转录和控制(即，调节)指定DNA序列转录水平的任何DNA。例如，5′调控序列是位于编码序列上游的DNA序列，其包含启动子和5’未翻译的引导序列。3′调控序列是位于编码序列下游的DNA序列，包含合适的转录终止(和/或)调节信号，包括一个或多个聚腺苷酸化信号。如本文所使用，术语“启动子”包括在转录起始过程中被DNA依赖性ENA聚合酶识别并结合(直接或间接)的任何DNA序列。启动子包括转录起始位点，和转录起始因子和RNA聚合酶的结合位点，并能够包含其他的多种位点或序列(例如，增强子)，基因表达调控蛋白可与其结合。

可药用载体本领域中是已知的，可包括但不限于：病毒、脂质体、纳米颗粒或聚合物及其任意组合。相关的递送载剂可包括但不限于：脂质体、生物相容性聚合物(包括天然聚合物和合成聚合物)、脂蛋白、多肽、多糖、脂多糖、人工病毒包膜、无机(包括金属)颗粒、以及细菌或病毒(例如杆状病毒、腺病毒和逆转录病毒)、噬菌体、黏粒或质粒载体。

通过逆转录病毒RNA基因组或其片段制备编码产生病毒所必需的病毒蛋白的cDNA，使用本领域中熟知的重组技术掺入进合适的载体中。

除了cDNA，可用从纯化的病毒体中提取的病毒RNA转染细胞，或例如在体外使用噬菌体T7RNA聚合酶从xDNA模板中产生RNA转录物。同样，单个质粒或RNA分子可用来表达病毒蛋白和产生病毒，或多个质粒或编码不同病毒蛋白的RNA分子被用来转染细胞和产生病毒。

在缺少促进细胞转染的载体运载体的情况下，或与这种运载体联合应用，质粒或RNA可直接用于肿瘤或其局部，或通过注射被肿瘤细胞摄取。合适的载体运载体包括脂质体，其一般是以本领域中通常已知的水包油乳剂形式提供。脂质体通常包含脂类的组合，特别是磷脂，如高相变温度的磷脂，其通常具有一个或多个类固醇或类固醇前体如胆固醇，可为脂质体提供膜稳定性。可用于提供脂质体的脂类例子包括磷脂酰化合物如磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、鞘脂、磷脂酰乙醇胺、脑苷脂和神经节苷脂。二酰基磷脂酰甘油酯特别合适，其脂类部分含有14至18个碳原子，更优选16至18个碳原子，并是饱和的。

脂质体与靶细胞的相互作用是被动或主动的。主动的靶向作用涉及脂质体的修饰作用，其通过将该配体可结合的特异的配体掺入进脂质体膜，或与靶细胞表达的相应配体相互作用。这种配体包括，例如单克隆抗体或其结合片段(例如，Fab或F(ab′)2，糖或糖脂部分，或病毒蛋白。

正常情况下，只要组织中有恶性细胞存在的可能性，肿瘤周围的组织就也可被注射或用该病毒处理。如果该肿瘤直至相对晚期才被发现，在手术切除肿瘤后，周围组织可用该病毒注射。

除了被直接注射进恶性肿瘤中，该接种物可被全身给药，在肿瘤部位邻近的位置通过静脉注射至接受者的血流中以输送至肿瘤。同样，该接种物可被皮下或腹膜内给药，或例如，如果认为合适可肌肉内给药。但一般当使用完整的病毒时，只要有存在病毒特异抗体的可能，就优选直接将病毒注射进肿瘤中，该抗体有可能降低各种可交替使用的病毒输送方式的效率。

接种物也可单独或与将接种物直接注射入肿瘤联合使用局部应用于肿瘤。局部治疗可通过逐滴应用药物组合物来完成，该组合物含有接种物和合适的药学可接受载体，以保持接种物的完整性以便感染恶性细胞，或使用一种充满了这种组合物的涂药器涂抹肿瘤。该涂药器可含有一团或一块浸过组合物的合适材料的填充物。一般可给予哺乳动物完整的病毒以发挥治疗效应。

通常可在恶性肿瘤上和/或周围组织上作一个或多个小的切口，为病毒进入其中提供入口。

在靶细胞内使用病毒和/或核酸或含有能产生病毒的病毒核酸的质粒来接种受者所使用的药学可接受载体可以是液体，如生理盐水，或被认为适合的任何其他传统已知的生理可接受的介质，如市售的适合作为药物应用，并可将接种物施于治疗部位的各种凝胶。该载体一般可被缓冲至生理pH，并可含有合适的防腐剂和/或抗生素。

在本发明中，埃可病毒可给予单个受试者，可使用不同血清型的埃可病毒，如果需要，在施予肿瘤之前，埃可病毒可以被化学或生物化学预处理(例如，用蛋白酶处理，如糜蛋白酶或胰蛋白酶)。这些预处理可产生更好的病毒感染性。

在本发明中，埃可病毒可与其他的治疗肿瘤的药物联合给药或使用。例如，埃可病毒可与一种或多种不同的病毒株的病毒一起给药。

作为进一步的实例，埃可病毒或其组合，可与一种或多种免疫刺激物质联合给药。以此方式，个体对病毒感染的天然免疫反应可被改变，从而优选地获得更有效的病毒感染和/或溶瘤和/或治疗结果。能够改变免疫反应的药物典型地是能够抑制免疫反应的药物。

“免疫刺激物质”可以选自任何合适的药剂。在本发明中，当被施用至个体时，免疫刺激物质将被理解为能够刺激对肿瘤细胞的免疫应答的任何药剂。免疫刺激物质可以是与免疫关卡分子相互作用以阻断、减少或抵消所述免疫关卡分子或包含所述免疫关卡分子的复合物在降低个体的基于先天免疫的抗肿瘤应答方面的能力的任何药剂。因而，免疫刺激物质降低了免疫关卡分子对抗肿瘤应答具有的“手刹”效应。例如，免疫刺激物质可以是靶向选自以下的免疫关卡分子的任何药剂：PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、CD134、CD134L、CD137、CD137L、CD80、CD86、B7-H3、B7-H4、B7RP1、ICOS、TIM3、GAL9、CD28或OX-40。通常，免疫刺激物质可以是抗体，所述抗体以最广义使用，优选的是单克隆抗体。

埃可病毒或其组合，可与一种或多种化疗药物联合使用。例如，埃可病毒可与化疗药物一起给药，所述化疗药物如：阿霉素、紫杉醇、氟尿嘧啶、美法仑、顺铂、α干扰素、COMP、依托泊甙、mBACOD、PROMACE/MOPP、长春新碱、长春碱、血管抑制素、TNP-470、多硫酸戊聚糖、血小板因子4、血管生成抑素(angiostatin)、LM-609、SU-101、CM-101、Techgalan、沙立度胺、SP-PG和类似物；其他的化疗药物包括烷基化剂，如氮芥类，包括双氯乙基甲胺、美法兰(melphan)、苯丁酸氮芥、环磷酰胺和异环磷酰胺；亚硝基脲类，包括卡氮芥、环己亚硝脲、甲基环己亚硝脲和链脲霉素；烷基磺酸盐类，包括白消安；三嗪类，包括氮烯唑胺；乙撑亚胺类(ethyenimines)，包括噻替派和六甲密胺；叶酸类似物，包括甲氨蝶呤；嘧啶类似物，包括5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷；嘌呤类似物，包括6-巯基嘌呤和6-硫鸟嘌呤；抗肿瘤抗生素，包括放线菌素D；蒽环类抗生素，包括阿霉素、博来霉素、丝裂霉素C和光辉霉素(methramycin)；激素类和激素拮抗剂，包括它莫西芬和皮质类固醇，和杂类药物，包括顺铂和布喹那。

要理解的是埃可病毒与一种或多种附加的药物，如一种或多种其他的RNA病毒、一种或多种免疫刺激物质、或一种或多种化疗药物的“联合”使用或给药，是指任何方式的使用或给药，其中微小RNA病毒和附加的药物具有治疗作用，如暂时的重叠效应。联合给药的成员可同时给药或以任何达到所需疗效的顺序单独给药。当考虑进行联合治疗时，埃可病毒病毒和附加的药物可以是其物理混合物或单独提供，如以试剂盒的形式，有或没有给药说明书。根据本发明的试剂盒也可包括必需或实施本发明的方法所需的其他组分，如缓冲液和/或稀释剂。

要理解的是本发明的药学组合物包括埃可病毒与一种或多种其他治疗药物的物理混合物形式的组合物，以及包括埃可病毒作为唯一治疗活性剂的组合物。

术语“有效量”包括在本发明中使用的溶瘤病毒或溶瘤病毒的RNA和抗肿瘤的药物的无毒但足以提供期望治疗效果的量。所需的精确量将因对象而不同，其取决于诸如以下的因子：被治疗的物种，对象的年龄和一般病况，被治疗病况的严重性，施用的特定药剂以及施用模式等等。因此，不可能指定精确的“有效量”。然而，对于给定的情况，可以通过本领域普通技术人员根据症状的严重程度、复发的频率和治疗方案的生理应答，调整本发明药物组合物的剂量。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例

一、材料

细胞系及细胞培养

LLC-MK2(恒河猴肾细胞)、A549(人非小细胞肺癌细胞)、MCF7(人乳腺癌细胞)、SW620(人结肠癌细胞)、DU 145(人前列腺癌细胞)、NCI-N87(人胃癌细胞)、HuH-7(人肝癌细胞)、HeLa 229(人宫颈癌细胞)、A-375(人恶性黑色素瘤细胞)、MIA PaCa-2(人胰腺癌细胞)、RD(人恶性胚胎横纹肌瘤细胞)、SK-OV-3(人卵巢癌细胞)、U-87MG(人脑星形胶质母细胞瘤细胞)，上述细胞系均购自中国科学院细胞库，在含有1mM丙酮酸钠和10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的DMEM培养基中，于37℃，5％CO₂的培养箱中培养。

病毒

埃可病毒ECHO1Farouk株(ATCC VR-31)、ECHO3Morrisey株(ATCC VR-33)、ECHO4Pesascek株(ATCC VR-34)、ECHO5Noyce株(ATCC VR-35)、ECHO6D'Amori株(ATCC VR-36)、ECHO7Wallace株(ATCC VR-37)、ECHO9Hill株(ATCC VR-39)、ECHO11Gregory株(ATCCVR-41)、ECHO25JV-4株(ATCC VR-72)购自美国模式培养物保藏所(American Type CultureCollection)，用于评估对不同类型的肿瘤细胞溶瘤活性。

二、方法

1、病毒传代、测序

埃可病毒在LLC-MK2细胞上传代，在T-25flask(Corning，货号：CLS430639)中加入5ml含2×10⁵个细胞/ml的培养基，在37℃，5％CO₂的培养箱中培养24h。第二天，吸去培养基，加入5ml新鲜的含2％FBS的DMEM培养基，并加入50μl病毒液，培养6天或在显微镜下观察到明显细胞病变时收集并分装上清中的病毒，将50μl病毒上清液接种到新培养的LLC-MK2细胞中，继续培养，如此传5代后，获得生长力高的病毒适应株。

2、埃可病毒效价的测定

在96孔透明板(Corning，货号：CLS3599)的每孔中加入100μl含1×10⁴个LLC-MK2细胞的DMEM培养基，在37℃，5％CO₂的培养箱中培养24h。吸出96孔板中的培养基，向每孔加入100μl的10倍倍比稀释病毒液(从10^-1到10^-8)，每个稀释度做10个孔的重复平行，放置在37℃，5％CO₂的培养箱中培养4天后置于3.7％的福尔马林中固定1h，然后用1％的结晶紫染色。用Karber法计算病毒滴度并表示为TCID₅₀/ml。

3、埃可病毒溶瘤活性测定

向96孔白板(Corning，货号：CLS3917)的每孔中分别加入50μl含有1×10⁴个A549(人非小细胞肺癌细胞)、MCF7(人乳腺癌细胞)、SW620(人结肠癌细胞)、DU 145(人前列腺癌细胞)、NCI-N87(人胃癌细胞)、HuH-7(人肝癌细胞)、HeLa 229(人宫颈癌细胞)、A-375(人恶性黑色素瘤细胞)、MIA PaCa-2(人胰腺癌细胞)、RD(人恶性胚胎横纹肌瘤细胞)、SK-OV-3(人卵巢癌细胞)、U-87MG(人脑星形胶质母细胞瘤细胞)细胞的培养基，在37℃，5％CO₂的培养箱中培养24h后，每孔分别加入50μl含有1000TCID₅₀(MOI＝0.1)的各种埃可病毒，对照组中加入50μl含有2％FBS的DMEM。培养48或72h后，取出板子，于室温下平衡30min。而后每孔加入50μl CellTiter-Glo(Promega)试剂，在室温下放置10到30min，使用VeritasMicroplate Luminometer(Turner BioSystem)酶标仪检测细胞存活率。埃可病毒对肿瘤细胞的溶瘤活性＝(1-μ_v/μ_c)×100％，μ_v表示病毒组信号的平均值，μ_c表示细胞对照组信号的平均值。在此实验中μ_v/μc<50％的表示病毒对该类型肿瘤细胞具有溶瘤活性。

三、结果

1、埃可病毒在LLC-MK2细胞中传代获得细胞适应株

埃可病毒在LLC-MK2细胞进行适应性传代，获得生长效力较高的细胞适应株。

2、不同的埃可病毒对不同的肿瘤细胞具有不同的溶瘤活性

使用不同的埃可病毒感染不同类型的肿瘤细胞，检测感染48和72h后的细胞存活率，以评价埃可病毒对肿瘤细胞的溶瘤活性。经检测发现，ECHO1对肺癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞具有较好的溶瘤活性(图1)，ECHO3对肺癌细胞、前列腺癌细胞、胃癌细胞、肝癌细胞具有较好的溶瘤活性(图2)，ECHO4对肝癌细胞具有较好的溶瘤活性(图3)，ECHO5对肺癌细胞、结肠癌细胞、前列腺癌细胞、胃癌细胞、以及肝癌细胞具有较好的溶瘤活性(图4)，ECHO6对肺癌细胞、结肠癌细胞、前列腺癌细胞、胃癌细胞、肝癌细胞、胰腺癌细胞具有较好的溶瘤活性(图5)，ECHO7对肺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞具有较好的溶瘤活性(图6)，ECHO9对肺癌细胞、肝癌细胞、恶性胚胎横纹肌瘤细胞有较好的溶瘤活性(图7)，ECHO11对肺癌细胞、结肠癌细胞、前列腺癌细胞、胃癌细胞、肝癌细胞具有较好的溶瘤活性(图8)，ECHO25对肺癌细胞、胃癌细胞、肝癌细胞具有较好的溶瘤活性(图9)。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims

1.埃可病毒在制备治疗肿瘤药物组合物中的应用，其特征在于，所述埃可病毒选自ECHO1、ECHO3、ECHO4、ECHO5、ECHO6、ECHO7、ECHO9、ECHO11、ECHO25。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤选自肺癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、横纹肌瘤。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括如下任一应用：

a)ECHO1在制备治疗肺癌、肝癌的药物组合物中的应用；

c)ECHO4在制备治疗肝癌的药物组合物中的应用；

f)ECHO7在制备治疗肝癌的药物组合物中的应用；

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述埃可病毒还包括分离的病毒的核酸分子。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述核酸分子包括：

来源于所述病毒的单链RNA或互补的DNA；或

合成的埃可病毒的RNA。

6.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，药物组合物还包括免疫刺激物质。

7.一种治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括有效量的埃可病毒或其核酸分子，所述埃可病毒选自ECHO1、ECHO3、ECHO4、ECHO5、ECHO6、ECHO7、ECHO9、ECHO11、ECHO25。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述核酸分子包括：

来源于埃可病毒的单链RNA或互补的DNA；或

合成的埃可病毒的RNA。

9.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括与埃可病毒或其核酸分子联合应用的免疫刺激物质。

10.根据权利7-9任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物还包括药学上可接受的赋形剂、稀释剂或者载体。