CN107668474A - 一种乳酸链球菌素肽纳米颗粒及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种乳酸链球菌素肽纳米颗粒及其制备方法和应用，属于纳米颗粒制备技术领域。所述制备方法包括以下步骤：将乳酸链球菌素肽与酸溶液混合，得到乳酸链球菌素肽溶液；酸溶液的pH值为1～4；向所述乳酸链球菌素肽溶液中滴加纯水，在20～30℃条件下以100～300rpm的速度进行搅拌，得到纳米颗粒溶液。本发明提供的方法避免使用污染性高的有机溶剂，而是采用无污染、价格低廉的纯水制备纳米颗粒，不仅大大降低制备成本，而且能得到抑菌活性高且稳定性好的纳米颗粒。
Description
技术领域
本发明属于纳米颗粒制备技术领域，具体涉及一种乳酸链球菌素肽纳米颗粒及其制备方法和应用。
背景技术
近年来，尽管合成抗菌剂对人类具有潜在的毒性，它们仍被广泛应用于食品领域，尤其在发展中国家。天然的抗菌剂，如天然活性成分、精油和抗菌肽等，由于其生物相容性和无毒性等特点，越来越受到大家的关注。抗菌肽也展示出很多优势，如低分子量，水溶性好和对人类无毒副作用等，因此被广泛应用于食品行业。然而在食品行业只有很少的抗菌肽能被用作食品抗菌剂。而乳酸链球菌素肽(nisin)是少数抗菌肽中唯一被允许应用在食品领域的抗菌剂。它来源于食品级的乳酸链球菌，展现出较广的抗菌范围。然而nisin应用时所需的条件是低pH值，在不同的pH值和温度下，nisin是不稳定的。此外高温条件下nisin会失去大部分生物活性，尤其在高温结合各种pH值的条件下，nisin更容易部分或全部丧失生物活性。
现有技术已经通过各种方法来提高nisin的活性，如通过制备脂质体运输体系来包埋nisin提高其抗菌活性，然后这种技术存在缺陷，在制备过程中使用有机试剂，采用高成本的磷脂和粒径不可控。此外现有技术还公开了生物聚合物纳米颗粒，用于装载、保护和运输nisin，主要基于海藻酸钠，壳聚糖和壳聚糖-g-PGA等原材料制备纳米体系来运输nisin。但是这些方法比较复杂，产品的生物活性也不尽人意。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种乳酸链球菌素肽纳米颗粒及其制备方法和应用，使所述乳酸链球菌素肽纳米颗粒具有高效的生物活性的同时还具有长效稳定性。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种乳酸链球菌素肽纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
1)将乳酸链球菌素肽与酸溶液混合，得到乳酸链球菌素肽溶液；所述酸溶液的pH值为1～4；
2)向所述步骤1)得到的乳酸链球菌素肽溶液中滴加纯水，在20～30℃条件下以100～300rpm的速度进行搅拌，得到乳酸链球菌素肽纳米颗粒。
优选的，所述步骤1)中酸溶液溶液的溶质为盐酸溶液、醋酸溶液和磷酸溶液；
所述酸溶液的体积浓度为0.1％～0.5％。
优选的，所述步骤1)中乳酸链球菌素肽的质量与酸溶液的体积比为1～5mg：1～25ml。
优选的，所述步骤2)中酸溶液溶液与纯水的体积比是0.5～2：1。
优选的，所述步骤2)中搅拌的时间为5～10h。
优选的，所述搅拌后还包括冷冻干燥；所述冷冻干燥的真空度5～10Pa。
优选的，所述冷冻干燥的温度-80～-60℃。
优选的，所述冷冻干燥的时间48～72h。
本发明还提供了所述方法制备得到的乳酸链球菌素肽纳米颗粒，乳酸链球菌素肽纳米颗粒，具有球形结构，由乳酸链球菌素肽内芯和包裹所述乳酸链球菌素肽内芯的水外膜组成；球形结构的直径为5～15nm。
本发明提供了所述方法制备得到的乳酸链球菌素肽纳米颗粒和所述的乳酸链球菌素肽纳米颗粒在抗菌中的应用。
本发明提供了一种乳酸链球菌素肽纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：1)将乳酸链球菌素肽与酸溶液混合，得到乳酸链球菌素肽溶液；酸溶液的pH值为1～4；2)向所述步骤1)得到的乳酸链球菌素肽溶液中滴加纯水，在20～30℃条件下以100～300rpm的速度进行搅拌，得到乳酸链球菌素肽纳米颗粒溶液。本发明提供的方法采用酸溶液溶解乳酸链球菌素肽，向溶解液中滴加纯水并在20～30℃温度条件下控制搅拌速度，使乳酸链球菌素肽溶液形成纳米颗粒。本发明所述方法避免使用污染性高的有机溶剂，而是采用无污染、价格低廉的纯水制备纳米颗粒，所述制备方法不影响乳酸链球菌素肽的结构，因此不仅能维持高度的乳酸链球菌素肽的抑菌活性，而且大大降低制备成本。
本发明提供了上述方法制备得到的乳酸链球菌素肽纳米颗粒，所述纳米颗粒不仅对待不同的温度和pH环境具有良好的稳定性，而且还具有较高的抑菌活性。结合说明书实施例记载，环境的pH值为0.9、3和5时，nisin纳米颗粒的直径分别为285.2，441.1和197.6，颗粒稳定性较高；nisin纳米颗粒在25、50、100℃条件下分别为199.5，342.5，478.2nm，PDI低于0.5说明具有大小均匀的粒径分布，且结构稳定。经过高温处理的nisin纳米颗粒的抗菌活性比未经高温处理的nisin纳米颗粒仅仅降低了15％～25％，而高温处理的纯nisin的抗菌活性比经高温处理nisin纳米颗粒的降低了40％～50％。
附图说明
图1为实施例5中不同浓度nisin制备纳米颗粒的PDI和粒径分布图；
图2为实施例5中不同浓度nisin制备纳米颗粒的透射图；
图3为实施例6中nisin纳米颗粒的pH稳定性研究；
图4为实施例7中nisin纳米颗粒的温度稳定性研究；
图5为实施例8中高温处理后nisin和nisin纳米颗粒抗菌性效果的测定。
具体实施方式
本发明提供了一种乳酸链球菌素肽纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将乳酸链球菌素肽与酸溶液混合，得到乳酸链球菌素肽溶液；所述酸溶液的pH值为1～4；
2)向所述步骤1)得到的乳酸链球菌素肽溶液中滴加纯水，在20～30℃条件下以100～300rpm的速度进行搅拌，得到乳酸链球菌素肽纳米颗粒。
本发明将乳酸链球菌素肽与酸溶液混合，得到乳酸链球菌素肽溶液；酸溶液的pH值为1～4。
本发明中，所述酸溶液的溶质优选为盐酸溶液、醋酸溶液和磷酸溶液；所述酸溶液的体积浓度优选为0.1％～0.5％，更优选为0.2％～0.4％，最优选为0.3％。所述酸溶液的pH值优选为2～3。
本发明中，所述混合的方法的没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的混合方案即可。所述乳酸链球菌素肽的质量与酸溶液的体积比优选为1～5mg：1～25ml，更优选为1～2mg：1～4ml，最优选为1mg：1ml。所述酸溶液能够溶解乳酸链球菌素肽，使乳酸链球菌素肽形成溶液状态。
得到乳酸链球菌素肽溶液后，本发明向所述乳酸链球菌素肽溶液中滴加纯水，在20～30℃条件下以100～300rpm的速度进行搅拌，得到乳酸链球菌素肽纳米颗粒溶液。
本发明中，所述滴加的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的滴加方法即可。所述滴加的速率优选为2～4滴/min，每滴的体积优选为0.04～0.05mL。所述酸溶液与纯水的体积比优选为0.5～2：1，更优选为1:1。
本发明中，所述搅拌的方法没有特殊限制，采用本领域技术人员所熟知的搅拌方法即可。搅拌过程的温度优选为25～28℃，更优选为27℃。所述搅拌速度优选为200rpm。搅拌的时间优选为5～10h，更优选为6～8h，最优选为7h。
所述搅拌后，本发明优选将得到的纳米颗粒溶液冷冻干燥，得到乳酸链球菌素肽纳米颗粒；所述冷冻干燥的真空度优选为5～10Pa，更优选为8Pa。所述冷冻干燥的温度优选为-80～-60℃，更优选为-70℃。所述冷冻干燥的时间优选为48～72h，更优选为56h。
本发明还提供了所述方法制备得到的乳酸链球菌素肽纳米颗粒，乳酸链球菌素肽纳米颗粒由乳酸链球菌素肽内芯和包裹乳酸链球菌素肽内芯的水外膜组成的球形结构；球形结构的直径为5～15nm。
本发明提供了所述方法制备得到的乳酸链球菌素肽纳米颗粒和所述的乳酸链球菌素肽纳米颗粒在抗菌中的应用。
Nisin纳米颗粒在方便食品中的应用，建议用量0.05g/Kg，在肉质品中建议添加2g/100kg～8g/100kg。混匀添加即可。
下面结合实施例对本发明提供的一种乳酸链球菌素肽纳米颗粒及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
按照如下步骤制备nisin纳米颗粒：
纳米颗粒的制备：首先将纯的nisin加到体积浓度0.5％的醋酸溶液中，充分溶解，然后将纯水逐滴加到nisin水溶液中(醋酸溶液与纯水的体积比是0.5：2)，25℃下不断搅拌5h，其中搅拌转速为100转/min，得到纳米颗粒悬浮液(pH＝1.7)，最后在8Pa、-70℃下冻干48小时得到冷冻干燥得到纳米颗粒。
实施例2
按照如下步骤制备nisin纳米颗粒：
纳米颗粒的制备：首先将纯的nisin加到体积浓度0.2％的磷酸溶液中，充分溶解，然后将纯水逐滴加到nisin溶液中(磷酸溶液与纯水的体积比是0.5：1)，20℃下不断搅拌7h，其中搅拌转速为200转/min，得到纳米颗粒悬浮液(pH＝5)，最后在5Pa、-60℃下冻干60小时得到冷冻干燥得到nisin纳米颗粒。
实施例3
按照如下步骤制备nisin纳米颗粒：
纳米颗粒的制备：首先将纯的nisin加到体积浓度0.2％的盐酸溶液中，充分溶解，然后将纯水逐滴加到nisin水溶液中(盐酸溶液与纯水的体积比是1:1)，25℃下不断搅拌8h，其中搅拌转速为150转/min，得到纳米颗粒悬浮液(pH＝3)，最后在5Pa、-70℃下冻干72小时得到冷冻干燥得到纳米颗粒。
实施例4
按照如下步骤制备nisin纳米颗粒：
纳米颗粒的制备：首先将纯的nisin加到体积浓度0.1％的盐酸酸溶液中，充分溶解，然后将纯水逐滴加到nisin酸溶液溶液中(盐酸溶液与纯水的体积比是1:1)，30℃下不断搅拌10h，其中转速为300转/min，得到纳米颗粒悬浮液(pH＝1.7)，最后在8Pa、-70℃下冻干72小时得到冷冻干燥得到纳米颗粒。
实施例5
nisin纳米颗粒的大小及形态
将实施例1,3,4制得的nisin纳米颗粒分散在超纯水中测定激光动态光散射(DLS)，测定结果如图1和图2所示。
其中，图1为不同浓度nisin(0.1％，0.3％，0.5％)制备纳米颗粒的PDI和粒径分布图；如图1可见，A部分为nisin纳米颗粒粒径的分布图，nisin纳米颗粒粒径大小为166.0～195.1nm。B部分为不同浓度的nisin纳米颗粒的粒径和PDI变化情况，粒径PDI低于0.5，说明纳米颗粒具有比较窄的粒径分布，粒径大小较为均一。
将实施例1制得的nisin纳米颗粒悬浮液，滴于带有碳支持膜的铜网上，再将铜网冷冻干燥测定。结果如图2所示。
图2为不同浓度(0.1％，0.3％，0.5％)nisin制备纳米颗粒的透射图；如图2可见，图2中A部分中纳米颗粒的粒径大约为15nm，存在小部分聚集体纳米颗粒，图2中B部分纳米颗粒的粒径大约为10nm，而图2中C部分纳米颗粒的粒径大约为5nm。从以上结果看到形成超小的纳米颗粒，形貌为球型结构。
实施例6
实施例1～4和对比例1制备的nisin纳米颗粒pH稳定性的测定
将实施例1～4制备纳米颗粒分散在超纯水中测定激光动态光散射(DLS)，图3为nisin纳米颗粒pH稳定性研究，如图3可见，nisin纳米颗粒在不同pH(0.9,3,5,7)下分别为285.2，441.1，197.6，910.0nm。其中在pH＝5时，粒径最小，较稳定。继续增加pH，粒径会超过1000nm，达到微米级。这说明制备的所述nisin纳米颗粒在3～5pH范围内，具有较高的稳定性。而对比例1制备的nisin纳米颗粒在1～2pH值范围内，具有稳定性。本发明制备的nisin纳米颗粒比常规方法制备的nisin纳米颗粒在更广泛的pH值范围内具有稳定性，从而保证了所述nisin纳米颗粒的广泛应用。
实施例7
实施例1～4和对比例1纳米颗粒温度稳定性的测定
将实施例1～4制备纳米颗粒分散在超纯水中测定激光动态光散射(DLS)，结果如图4所示。纳米颗粒制备好后，经不同温度(25,50,100)处理纳米颗粒测定DLS。
图4为nisin纳米颗粒温度稳定性研究，如图4可见，nisin纳米颗粒在不同温度(25,50,100℃)下分别为199.5，342.5，478.2nm。PDI低于0.5说明具有窄的粒径分布。经温度处理后，粒径和PDI基本没有太大变化，可以说明纳米颗粒比较稳定。
实施例8
实施例1～4纳米颗粒高温处理后抗菌性的测定
将实施例1～4制备纳米颗粒配置成0.25，0.5，1.0，mg/ml不同浓度的悬浮液，通过高温灭菌锅处理20min，121℃，进行对金黄色葡萄球菌抗菌性的测定。测定结果如图5所示。OD值代表金黄色葡萄球菌的浊度，也就是随着菌数量的增加，浊度会增大。OD值越小表示菌越不易生长，而nisin纳米颗粒抑菌效果则越强。当nisin和nisin纳米颗粒的浓度为0.25mg/ml时，高温处理的nisin的抗菌活性比未经高温处理的nisin降低了46.5％，而nisin纳米颗粒的抗菌活性比未经高温处理的nisin纳米颗粒只降低了26.5％。当浓度低于2mg/ml时，高温处理后的nisin纳米颗粒相对比未经高温处理的nisin纳米颗粒降低的相对较少。结论：一方面浓度的变化趋势能够影响抗菌性的变化趋势，纳米颗粒的浓度增加抗菌性会随着增加另一方面，本发明制备的nisin纳米颗粒具有较高的耐受性，经高温处理后仍然能够保持较高的抑菌性。
高温处理的nisin纳米颗粒的浓度分别是0.25，0.5，1.0mg/ml时，其抗菌活性比未经高温处理的纯nisin分别降低了25.6％，24.3％和23.4％。而经过高温处理的纯nisin抑菌活性相对未高温处理的纯nisin降低了46.5％。这说明nisin纳米颗粒与纯nisin相比，在高温环境中抑菌性提高了50～70％。所以，当浓度在2mg/ml以下时，Nisin纳米颗粒仍具有相对高的抑菌活性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种乳酸链球菌素肽纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将乳酸链球菌素肽与酸溶液混合，得到乳酸链球菌素肽溶液；所述酸溶液的pH值为1～4；
2)向所述步骤1)得到的乳酸链球菌素肽溶液中滴加纯水，在20～30℃条件下以100～300rpm的速度进行搅拌，得到乳酸链球菌素肽纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中酸溶液为盐酸溶液、醋酸溶液或磷酸溶液；
所述酸溶液的体积浓度为0.1％～0.5％。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中乳酸链球菌素肽的质量与酸溶液的体积比为1～5mg：1～25ml。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中酸溶液与纯水的体积比是0.5～2：1。
5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中搅拌的时间为5～10h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述搅拌后还包括：将得到的混合溶液冷冻干燥；所述冷冻干燥的真空度5～10Pa。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥的温度-80～-60℃。
8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥的时间48～72h。
9.权利要求1～8任意一项所述方法制备得到的乳酸链球菌素肽纳米颗粒，具有球形结构，包括乳酸链球菌素肽内芯和包裹所述乳酸链球菌素肽内芯的水外膜，所述球形结构的直径为5～15nm。
10.权利要求1～8任意一项所述方法制备得到的乳酸链球菌素肽纳米颗粒和权利要求9所述的乳酸链球菌素肽纳米颗粒作为抗菌剂的应用。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110506741A (zh) * | 2019-09-20 | 2019-11-29 | 天津科技大学 | 一种新型纳米复合抑菌材料及其制备方法与用途 |
| CN112042852A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-12-08 | 扬州大学 | 一种蛋清蛋白-Nisin纳米粒子抗菌剂制备方法 |
| CN114271425A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-05 | 青岛农业大学 | 一种乳酸链球菌素改性物的制备方法及应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20120183585A1 (en) * | 2012-02-25 | 2012-07-19 | Rassoul Dinarvand | Gel based wound dressing and a method of synthesizing the same |
| CN103110585A (zh) * | 2012-08-31 | 2013-05-22 | 华南理工大学 | 螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法 |
| CN103397476A (zh) * | 2013-07-29 | 2013-11-20 | 山东省蓝源生物工程有限公司 | 静电纺丝乳酸链球菌素制备纳米纤维抑菌包装材料的方法 |
| CN105012940A (zh) * | 2015-07-13 | 2015-11-04 | 国家海洋局第三海洋研究所 | 一种纳米胶原肽螯合锌的制备方法 |
-
2017
- 2017-09-07 CN CN201710800782.0A patent/CN107668474B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20120183585A1 (en) * | 2012-02-25 | 2012-07-19 | Rassoul Dinarvand | Gel based wound dressing and a method of synthesizing the same |
| CN103110585A (zh) * | 2012-08-31 | 2013-05-22 | 华南理工大学 | 螺旋藻多肽-壳聚糖纳米粒的制备方法 |
| CN103397476A (zh) * | 2013-07-29 | 2013-11-20 | 山东省蓝源生物工程有限公司 | 静电纺丝乳酸链球菌素制备纳米纤维抑菌包装材料的方法 |
| CN105012940A (zh) * | 2015-07-13 | 2015-11-04 | 国家海洋局第三海洋研究所 | 一种纳米胶原肽螯合锌的制备方法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110506741A (zh) * | 2019-09-20 | 2019-11-29 | 天津科技大学 | 一种新型纳米复合抑菌材料及其制备方法与用途 |
| CN110506741B (zh) * | 2019-09-20 | 2021-09-21 | 天津科技大学 | 一种新型纳米复合抑菌材料及其制备方法与用途 |
| US11547130B2 (en) * | 2019-09-20 | 2023-01-10 | Tianjin University Of Science And Technology | Nanocomposite bacteriostatic material and a preparation method and an application thereof |
| CN112042852A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-12-08 | 扬州大学 | 一种蛋清蛋白-Nisin纳米粒子抗菌剂制备方法 |
| CN114271425A (zh) * | 2021-12-31 | 2022-04-05 | 青岛农业大学 | 一种乳酸链球菌素改性物的制备方法及应用 |
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