CN107569514A

CN107569514A - 一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物

Info

Publication number: CN107569514A
Application number: CN201710914788.0A
Authority: CN
Inventors: 乌林奇
Original assignee: Shenzhen Targeted Gene Technology Co Ltd
Current assignee: Shenzhen Targeted Gene Technology Co Ltd
Priority date: 2017-09-30
Filing date: 2017-09-30
Publication date: 2018-01-12

Abstract

本发明涉及一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物，所述活性复合物由包括以下组分的原料螯合获得：花青苷和金属离子；所述金属离子包括Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Se²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、K⁺、Rb⁺和Li⁺。从花青苷对有害自由基消除、参与酶催化反应的多种矿物元素离子及维生素辅助因子(Cofacter(s))、P53作用靶标基质金属蛋白酶MMP、缺氧诱导因子HIF、MDM2锌指蛋白(结构易被重金属离子篡改)、miRNA切割酶Dicer的调控入手，对P53基因进行“围靶”(Encircle Target)调节，达到控制癌细胞发展，诱导癌细胞衰老和死亡。

Description

一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物

技术领域

本发明涉及靶向抑癌药物技术领域，具体涉及一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物。

背景技术

癌症是一种基因病，是在外环境因素作用下，人体细胞内在多种前癌基因被激活和抑癌基因失活的多阶段长期演变的过程。在精准医疗技术成熟之前，癌症的主要治疗手段是放疗、化疗和手术，尽管医学家们不断完善这三大治疗手段，但许多癌症患者仍然难以得到治愈。其中一个重要原因是基因突变的微环境没有得到根本干预。随着基因测序技术的成熟，特别是酶活性控制、DNA生化机制的清晰化，基因靶向干预成为精准医疗的重要发展方向。

据《科学》杂志2017年8月发表的一份研究表明，有17种癌症的基因表达有很大的重叠。这意味着对于一些患者来说，他们的基因表达有可能会更加贴近于其他类型的癌症，而不是本身所患的癌症。

p53是一种肿瘤抑制基因(Tumor suppressorgene)，由这种基因编码的蛋白质(protein)是一种转录因子(transcriptional factor)，其控制着细胞周期的启动。p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，引起肿瘤形成或细胞转化的p53蛋白是p53基因突变的产物，是一种肿瘤促进因子，它可以消除正常p53的功能。在50％以上的恶性肿瘤患者(包括肝癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、软组织肉瘤、卵巢癌、脑瘤、淋巴细胞肿瘤、食道癌、肺癌、成骨肉瘤等)体内会出现p53基因的突变。对P53这个在各癌种中相关性、重叠率最高的基因表达进行有效调节，对于靶向治疗具有一定的指导意义。

目前对于p53靶向治疗的药物研究较少，针对p53基因尚没有一种有效、多位点靶向干预的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物。

本发明提供了一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物，所述活性复合物由包括以下组分的原料螯合获得：花青苷和金属离子；所述金属离子包括Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Se²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、K⁺、Rb⁺和Li⁺中的一种或几种。

本发明还提供了一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物溶液，所述活性复合物溶液的溶剂为水，溶质包括花青苷和金属离子；所述金属离子包括Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Se²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、K⁺、Rb⁺和Li⁺中的一种或几种。

优选的，所述花青苷在活性复合物溶液中的浓度为1～100mg/ml。

优选的，所述花青苷为植物提取花青苷，所述植物包括紫甘薯、葡萄、血橙、红球甘蓝、蓝莓、茄子、樱桃、红莓、草莓、桑葚、山楂和牵牛花中的一种或几种。

优选的，所述植物提取花青苷中花青苷的质量含量为3～50％。

优选的，所述金属离子在活性复合物溶液中的浓度如下：Fe²⁺的浓度为0.1～0.4mg/ml，Ca²⁺的浓度为0.2～20mg/ml，Zn²⁺的浓度为0.04～0.38mg/ml，Se²⁺的浓度为0.0001～0.004mg/ml，Mg²⁺的浓度为0.4～7mg/ml，Mn²⁺的浓度为0.0004～0.06mg/ml，Mo²⁺的浓度为0.0002～0.007mg/ml，K⁺的浓度为0.4～112.5mg/ml，Rb⁺的浓度为0.0004～0.0952mg/ml，Li⁺的浓度为0.0004～0.012mg/ml。

优选的，所述金属离子在活性复合物溶液中的浓度如下：Fe²⁺的浓度为0.2～0.3mg/ml，Ca²⁺的浓度为0.5～15mg/ml，Zn²⁺的浓度为0.15～0.28mg/ml，Se²⁺的浓度为0.0002～0.003mg/ml，Mg²⁺的浓度为1.5～6mg/ml，Mn²⁺的浓度为0.01～0.05mg/ml，Mo²⁺的浓度为0.0008～0.006mg/ml，K⁺的浓度为5～100mg/ml，Rb⁺的浓度为0.002～0.08mg/ml，Li⁺的浓度为0.001～0.012mg/ml。

优选的，所述金属离子来源于以矿物质提纯的活性离子水。

优选的，所述金属离子来源于富含金属离子的植物提取物，包括Fe²⁺提取物、Ca²⁺提取物、Zn²⁺提取物、Se²⁺提取物、Mg²⁺提取物、Mn²⁺提取物、Mo²⁺提取物、K⁺提取物、Rb⁺提取物和Li⁺提取物。

优选的，所述Fe²⁺提取物为樱桃提取物，所述Ca²⁺提取物包括质量比为(0.9～1.1)：(0.9～1.1)海带提取物和芹菜提取物；所述Zn²⁺提取物包括质量比(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)的黄秋葵提取物、蓝莓提取物和雄蚕蛾提取物；所述Se²⁺提取物、Rb⁺提取物为海藻提取物；所述Mg²⁺提取物包括质量比(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)的榛子提取物、绿豆提取物和百里香提取物；所述Mn²⁺提取物包括质量比(0.9～1.1)：(0.9～1.1)的紫锥菊提取物和绿茶提取物；所述Mo²⁺提取物为大豆提取物；所述K⁺提取物包括质量比(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)的海带提取物、香蕉提取物、薄荷叶提取物和冬瓜提取物；所述Li⁺提取物为罗布麻木茶提取物。

本发明的有益效果：所述活性复合物由由包括以下组分的原料螯合获得：花青苷和金属离子，所述螯合物的存在形式使所述活性复合物中的金属离子能够顺利完成包括穿越血脑屏障在内的体内微循环运输。本发明从以下几个方面的调控入手，包括：1)花青苷对有害自由基消除；2)参与酶催化反应的多种金属离子及维生素辅助因子(Cofacter(s))；3)P53作用靶标基质金属蛋白酶MMP；4)缺氧诱导因子HIF；5)MDM2锌指蛋白(结构易被重金属离子篡改)；6)miRNA切割酶Dicer，对P53基因进行“围靶”(Encircle Target)调节，逆转DNA甲基化激活肿瘤细胞中被抑制的p53活性，随着花青苷与金属离子浓度的增加和服用时间的增加，p53蛋白表达均显著增加，p53基因甲基化情况显著降低。根据实施例记载，通过三甲医院的临床干预效果检验对照，超过65位患者服用本发明所述的活性复合物后，血液关键免疫指标、肿瘤标志物指标得到明显控制或完全恢复正常。

具体实施方式

在本发明中，所述花青苷优选来源于植物提取物，所述植物包括紫甘薯、葡萄、血橙、红球甘蓝、蓝莓、茄子、樱桃、红莓、草莓、桑葚、山楂和牵牛花中的一种或几种。本发明对所述花青苷的提取方法没有特殊限定，采用本领域常规的提取花青苷的技术方案即可。在本发明具体实施过程中所述花青苷委托大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司制备获得。在本发明中所述植物提取花青苷中花青苷的质量含量优选的为3～50％，更优选的为10～30％。

在本发明中，所述活性复合物溶液中花青苷的浓度优选的为1～100mg/ml，更优选的为2～60mg/ml，最优选的为3～10mg/ml。在本发明中，所述花青苷的作用为：作为羟基供体，其酚类结构使其具有抗氧化功能，通过清除活性氧族(ROS)，如氧自由基(O^2-)、单线态氧(O₂)、过氧化物(ROO-)、过氧化氢(H₂O₂)和羟自由基(OH^-)等氧化反应的活跃中介物质，诱导P53表达。

在本发明中，花青苷优选的作为载体与金属离子相结合，形成螯合物，所述螯合物的存在形式使所述金属离子能够顺利快速完成包括穿越血脑屏障在内的体内微循环运输。所述螯合物的状态并不影响所述花青苷作用的发挥，所述螯合状态以花青苷为载体有利于促进金属离子在体内的快速运输和吸收；所述金属离子以螯合物状态进入体内后，根据需要进行相应的解离或重新结合到花青苷上。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子Fe²⁺，优选的所述的Fe²⁺来源于以含铁的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含Fe²⁺的植物提取物，所述含铁的矿物质提纯的活性离子水优选的委托青岛伸东矿液有限公司制备；所述Fe²⁺提取物为樱桃提取物。本发明中所述活性复合物溶液中，Fe²⁺浓度优选的为0.1～0.4mg/ml，更优选的为0.2～0.3mg/ml。本发明中所述Fe²⁺作用为：补充血红蛋白亚铁离子，增加血红蛋白合成，激活加氧酶的活性，增强血氧浓度；近而辅助性增强p53对缺氧诱导因子HIF的抑制；氧离子的增强，也有助于泛素蛋白酶体保持活力，使HIF-lα亚基保持较低水平。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子Ca²⁺，优选的所述的Ca²⁺来源于以含钙的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含Ca²⁺的植物提取物，所述Ca²⁺提取物为海带提取物和芹菜提取物。所述Ca²⁺提取物中海带提取物和芹菜提取物的质量比优选的为(0.9～1.1)：(0.9～1.1)，更优选的为1:1；本发明中所述活性复合物溶液中，Ca²⁺浓度优选的为0.2～20mg/ml，更优选的为0.5～15mg/ml。本发明中所述Ca²⁺作用为：激活纤溶酶与激肽释放酶,消解提高纤溶活性，降低血浆中纤维蛋白含量，减少癌栓生成和组织纤维化风险。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子Zn²⁺，优选的所述的Zn²⁺来源于以含锌的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含Zn²⁺的植物提取物，所述Zn²⁺提取物包括黄秋葵提取物、蓝莓提取物和雄蚕蛾提取物；所述黄秋葵提取物、蓝莓提取物和雄蚕蛾提取物的质量比(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)，更优选的为1:1:1。本发明中所述活性复合物溶液中，Zn²⁺浓度优选的为0.04～0.38mg/ml，更优选的为0.15～0.28mg/ml。本发明中所述Zn²⁺作用为：置换篡改锌指蛋白结构中Cd²⁺、Hg²⁺、Co²⁺、Cu²⁺，同时抑制金属离子Cd²⁺、Hg² ⁺、Co²⁺、Cu²⁺的吸收与酶促反应活性。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子Se²⁺，优选的所述的Se²⁺来源于以含硒的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含Se²⁺的植物提取物，所述Se²⁺提取物为海藻提取物。本发明中所述活性复合物溶液中，Se²⁺浓度优选的为0.0001～0.004mg/ml，更优选的为0.0002～0.003mg/ml。本发明中所述Se²⁺作为：置换篡改锌指蛋白结构中Cd²⁺、Hg²⁺、Co²⁺、Cu²⁺，同时抑制金属离子Cd²⁺、Hg²⁺、Co²⁺、Cu²⁺的吸收与酶促反应活性。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子Mg²⁺，优选的所述的Mg²⁺来源于以含镁的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含Mg²⁺的植物提取物，所述Mg²⁺提取物包括榛子提取物、绿豆提取物和百里香提取物，所述榛子提取物、绿豆提取物和百里香提取物的质量比优选的为(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)，更优选的为1:1:1。本发明中所述活性复合物溶液中，Mg²⁺浓度优选的为0.4～7mg/ml，更优选的为1.5～6mg/ml。本发明中所述Mg²⁺作用包括结合Dicer酶催化中心的保守氨基酸残基位点，使Dicer结合到dsRNA，引发大量的切割mRNA反应，得到miRNA前体；p53直接作用靶标miRNA，诱导凋亡、衰老和细胞周期停滞。所述Mg²⁺作用还包括与Mn²⁺，K⁺和Rb⁺共同作用激活丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)，在糖酵解系统里，它是催化形成第二个ATP反应的酶。在ATP与Mg²⁺参与下，6-磷酸果糖激酶1(6-phosphofructokinase1，PFK1)在糖酵解途径中，催化6-磷酸果糖生成1，6-二磷酸果糖(Fructosel，6bisphosphate，F-1，6-BP)，加速糖酵解途径的第二次磷酸化反应，提高活性氧含量，使癌细胞发生凋亡的机制。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子Mn²⁺，优选的所述的Mn²⁺来源于以含锰的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含Mn²⁺的植物提取物，所述Mn²⁺提取物包括紫锥菊提取物和绿茶提取物，所述紫锥菊提取物和绿茶提取物的质量比优选的为(0.9～1.1)：(0.9～1.1)，更优选的为1:1。本发明中所述活性复合物溶液中，Mn²⁺浓度优选的为0.0004～0.06mg/ml，更优选的为0.01～0.05mg/ml。本发明中所述Mn²⁺作用包括结合Dicer酶催化中心的保守氨基酸残基位点，使Dicer结合到dsRNA，引发大量的切割mRNA反应，得到miRNA前体；p53直接作用靶标miRNA，诱导凋亡、衰老和细胞周期停滞。所述Mn²⁺作用还包括与Mg²⁺，K⁺和Rb⁺共同作用激活丙酮酸激酶(pyruvate kinase，PK)，在糖酵解系统里，它是催化形成第二个ATP反应的酶。提高活性氧含量，使癌细胞发生凋亡的机制。所述Mn²⁺作用还包括通过补充Mn²⁺摄入，补充线粒体内的锰，增加血红蛋白合成，激活加氧酶的活性，增强血氧浓度；近而辅助性增强p53对缺氧诱导因子HIF的抑制；氧离子的增强，也有助于泛素蛋白酶体保持活力，使HIF-lα亚基保持较低水平。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子Mo²⁺，优选的所述的Mo²⁺来源于以含钼的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含Mo²⁺的植物提取物，所述Mo²⁺提取物为大豆提取物。本发明中所述活性复合物溶液中，Mo²⁺浓度优选的为0.0002～0.007mg/ml，更优选的为0.0008～0.006mg/ml。本发明中所述Mo²⁺作用包括通过Mo²⁺平衡和抑制Cu²⁺的活性和吸收，抑制LOX对p53的羟基化，所述Mo²⁺作用还包括置换篡改锌指蛋白结构中Cd²⁺、Hg²⁺、Co² ⁺、Cu²⁺，同时抑制金属离子Cd²⁺、Hg²⁺、Co²⁺、Cu²⁺的吸收与酶促反应活性。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子K⁺，优选的所述的K⁺来源于以含钾的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含K⁺的植物提取物，所述K⁺提取物包括海带提取物、香蕉提取物、薄荷叶提取物和冬瓜提取物，所述海带提取物、香蕉提取物、薄荷叶提取物和冬瓜提取物的质量比优选的为(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)，更优选的为1:1：1:1。本发明中所述活性复合物溶液中K⁺浓度优选的为0.4～112.5mg/ml，更优选的为5～100mg/ml。本发明中所述K⁺作用为通过补充K⁺、Li⁺和Ca²⁺激活纤溶酶与激肽释放酶，消解提高纤溶活性，降低血浆中纤维蛋白含量，减少癌栓生成和组织纤维化风险。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子Rb⁺，优选的所述的Rb⁺来源于以含铷的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含Rb⁺的植物提取物，所述Rb⁺提取物为海藻提取物。本发明中所述活性复合物溶液中，Rb⁺浓度优选的为0.0004～0.0952mg/ml，更优选的为0.002～0.08mg/ml。本发明中所述Rb⁺作用为与Mg²⁺，Mn²⁺和K⁺共同作用激活丙酮酸激酶(pyruvate kinase，PK)，在糖酵解系统里，它是催化形成第二个ATP反应的酶。在ATP与Mg²⁺参与下，6-磷酸果糖激酶1(6-phosphofructokinase1，PFK1)在糖酵解途径中，催化6-磷酸果糖生成1，6-二磷酸果糖(Fructosel，6bisphosphate，F-1，6-BP)，加速糖酵解途径的第二次磷酸化反应，提高活性氧含量，使癌细胞发生凋亡的机制。

在本发明中，所述活性复合物溶液包括金属离子Li⁺，优选的所述的Li⁺来源于以含锂的矿物质提纯的活性离子水或者来源于富含Li⁺的植物提取物，所述Li⁺提取物为罗布麻木茶提取物。本发明中所述活性复合物溶液中，Li⁺浓度优选的为0.0004～0.012mg/ml，更优选的为0.001～0.012mg/ml。本发明中所述Li⁺作用为通过补充Li⁺激活纤溶酶与激肽释放酶，消解提高纤溶活性，降低血浆中纤维蛋白含量，减少癌栓生成和组织纤维化风险。

在本发明中，上述金属离子优选的来源于同时含有Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Se²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、K⁺、Rb⁺、Li⁺的矿物质提纯活性离子水，所述包含上述金属离子的矿物质提纯活性离子水优选的委托矿业公司加工生产，在本发明具体实施过程中委托青岛伸东矿液有限公司。

本发明对上述植物源提取得到金属离子的方法没有特殊限定，采用本领域常规提取方法即可，具体的在本发明实施过程中，委托大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司加工。

在本发明中所述活性复合物的制备方法为将花青苷提取物与金属离子混合溶于水中形成螯合物。本发明所述活性复合物制备过程中花青苷的浓度和金属离子的浓度参见上述活性复合物溶液中花青苷和金属离子的浓度，在此不再赘述。

在本发明中，针对p53基因表达的蛋白主要分布于细胞核浆，能与DNA特异结合，其活性受磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等翻译后修饰调控等特性，从花青苷对有害自由基消除、参与酶催化反应的多种矿物元素离子及维生素辅助因子Cofacter(s)、P53作用靶标基质金属蛋白酶MMP、缺氧诱导因子HIF、MDM2锌指蛋白(结构易被重金属离子篡改)、miRNA切割酶Dicer的调控入手，提出“围靶”(Encircle Target)理论与P53表达干预方案。本发明所述活性复合物的主要生化作用机制包括为：

miRNA是生物体内源性的非编码RNA，miRNA具有抑制肿瘤形成的功能。miR-34家族成员(包括miR-34a和miR-34b/c)是p53的直接作用靶标，这种作用可诱导衰老、凋亡和细胞周期停滞。miRNA前体经Dicer酶切割得到。Dicer结合到dsRNA，可引发大量的切割mRNA反应。Dicer酶每一个催化中心里都有一组保守的氨基酸残基位点，它们都能够结合一个镁离子。在Dicer蛋白里，每一个RNaseIII结构域活性位点中的四个保守的氨基酸位点都会与两个金属离子(Mg²⁺或Mn²⁺)相结合，Dicer蛋白会利用“双金属离子”机制(two-metal-ionmechanism)来催化RNA降解反应。

p53通过对TIGAR(TP53诱导糖酵解和凋亡调节因子)的表达负性调节，使细胞中糖酵解过多，胞内活性氧水平上升而使癌细胞发生凋亡的机制，通过补充二价金属离子(Mg²⁺和Mn²⁺)和一价金属离子(K⁺，Rb⁺)，激活丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)，在糖酵解系统里，它是催化形成第二个ATP反应的酶。在ATP与Mg²⁺参与下，6-磷酸果糖激酶1(6-phosphofructokinase1，PFK1)在糖酵解途径中，催化6-磷酸果糖生成1，6-二磷酸果糖(Fructosel，6bisphosphate，F-1，6-BP)，加速糖酵解途径的第二次磷酸化反应。

p53蛋白一个重要作用机制是通过抑制缺氧诱导因子(hypoxia induciblefactor，HIF)和血管内皮生长因子、成纤维生长因子的形成，阻止肿瘤血管生成的作用机制。在含氧量正常的情况下，HIF-lα亚基由于受泛素蛋白酶体的降解作用而保持较低的水平，而在缺氧的情况下，泛素蛋白酶体的作用受到抑制，HIF-lα亚基保持较高的水平，并进入细胞核与HIF-1β亚基结合，形成有活性的HIF，激活其下游靶基因(如VEGF、bFGF)，介导形成一系列适应缺氧的生理反应，促进血管生成；当原癌基因激活时，p53蛋白可以直接与HIF-1α亚基结合，导致HIF-1α蛋白被降解，从而抑制了血管再生。

通过长期观察，实体肿瘤多发于组织缺氧区，很多肿瘤患者均不同程度表现血红蛋白下降的症状，细胞携氧不足，会加剧HIF活性，促进肿瘤血管生长速度。因此本发明组合物补充Fe²⁺、Mn²⁺摄入，主要是通过补充血红蛋白亚铁离子和线粒体内的锰，增加血红蛋白合成，激活加氧酶的活性，增强血氧浓度。近而辅助性增强p53对缺氧诱导因子HIF的抑制。氧离子的增强，也有助于泛素蛋白酶体保持活力，使HIF-lα亚基保持较低水平。

p53可以激活胶原蛋白的脯氨酰羟化酶(prolyl hydroxylase，PHDs)，该酶有抗血管生成特性，抑制血管再生。脯氨酰羟化酶的催化反应需要Fe²⁺和ascorbate(维生素C)的参与。

赖氨酸羟化酶可使p53羟基化并阻止其乙酰化作用，抑制其转录活性。赖氨酸羟化酶(LOX)是铜依赖单胺氧化酶，促进弹性蛋白及胶原纤维中共价交联的形成，使肿瘤细胞外基质僵化变硬，阻止肿瘤细胞向周围组织的侵袭和远处转移。也有研究表明，LOX的高表达是乳腺癌早期肿瘤间质反应，分泌的LOX作用于胶原，刺激肿瘤细胞伸展伪足突起增加肌动蛋白聚合、粘连，提高肌球-肌动蛋白交联，促进肌丝收缩，从而作为肿瘤细胞迁移的“高速公路”。本发明的解决方案是通过Mo²⁺平衡和抑制Cu²⁺的活性和吸收，抑制LOX对p53的羟基化。通过补充K⁺、Li⁺和Ca²⁺激活纤溶酶与激肽释放酶,消解提高纤溶活性，降低血浆中纤维蛋白含量，减少癌栓生成和组织纤维化风险。

MDM2癌基因与p53结合，会降低P53的表达。mdm2参与p53负反馈环调节。增加mdm2的表达导致p53从核内输出和泛醌蛋白裂解途径的降解增加。在某些p53阳性癌症可以发现有mdm2扩增和过表达。

MDM2癌基因指状结构——锌指蛋白，Zn²⁺被Cd²⁺、Hg²⁺、Co²⁺、Cu²⁺所替代，篡改锌指结构,形成如Cd5Zn2-MT混合金属蛋白,近而调高MDM2的扩增和过表达,这也解释重金属离子可以导致基因突变致癌的原理，也可以解释恶性肿瘤中心位点Cd²⁺、Hg²⁺浓度增加，Cu/Zn比值较正常组织显著增加的原因。在活性组合物加入Zn²⁺、Se²⁺、Mo²⁺，主要是置换篡改锌指蛋白结构中Cd²⁺、Hg²⁺、Co²⁺、Cu²⁺，同时抑制金属离子Cd²⁺、Hg²⁺、Co²⁺、Cu²⁺的吸收与酶促反应活性。

下面结合具体实施例对本发明所述的一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。

实施例1

一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物溶液，所述活性复合物的成分和含量见表1.

表1靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物的组成

成分	元素符号	每100ml	离子浓度(mg/ml)
				蓝莓花青苷		300mg	3
铁	Fe	5mg	0.05
				钙	Ca	3mg	0.03
锌	Zn	2mg	0.02
				硒	Se	10ug	0.0001
镁	Mg	12mg	0.12
				锰	Mn	45ug	0.00045
钼	Mo	10ug	0.0001
				钾	K	20mg	0.2
铷	Rb	20ug	0.0002
				锂	Li	20ug	0.0002

其中蓝莓花青苷委托大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司加工，所述蓝莓花青苷为粉末状，其中花青苷的质量含量为45％。其中金属离子来源于同时含有Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Se²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、K⁺、Rb⁺、Li⁺的矿物质提纯活性离子水，委托青岛伸东矿液有限公司制备。

本实施例在使用过程中，将蓝莓花青苷粉末溶解于矿物质提纯活性离子水中，花青苷与金属离子螯合形成活性复合物。

实施例2

一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物溶液，所述活性复合物的成分和含量见表2.

表2靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物的组成

成分	元素符号	每100ml	离子浓度(mg/ml)
				蓝莓花青苷		1g	10
铁	Fe	10mg	0.1
				钙	Ca	30mg	0.3
锌	Zn	4mg	0.04
				硒	Se	100ug	0.001
镁	Mg	25mg	0.25
				锰	Mn	50ug	0.0005
钼	Mo	20ug	0.0002
				钾	K	40mg	0.4
铷	Rb	20ug	0.0002
				锂	Li	20ug	0.0002

其中蓝莓花青苷委托大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司加工，所述蓝莓花青苷为粉末状，其中花青苷的质量含量为30％。其中金属离子来源于同时含有Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Se²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、K⁺、Rb⁺、Li⁺的矿物质提纯活性离子水，委托青岛伸东矿液有限公司制备。

实施例3

一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物溶液，所述活性复合物的成分和含量见表3。

表3靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物的组成

成分	元素符号	每100ml	离子浓度(mg/ml)
				蓝莓花青苷		1g	10
铁	Fe	20mg	0.2
				钙	Ca	500mg	5
锌	Zn	10mg	0.1
				硒	Se	200ug	0.002
镁	Mg	100mg	1
				锰	Mn	1mg	0.01
钼	Mo	200ug	0.002
				钾	K	100mg	1
铷	Rb	500ug	0.005
				锂	Li	100ug	0.001

其中蓝莓花青苷委托大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司加工，所述蓝莓花青苷为粉末状，其中花青苷的质量含量为5％。其中金属离子来源于同时含有Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Se²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、K⁺、Rb⁺、Li⁺的矿物质提纯活性离子水，委托青岛伸东矿液有限公司制备。

实施例4

实施例1中的活性复合物干预康复病例。

傅先生，74岁，安徽人，2016年8月在安徽省市医院确诊为前列腺癌，PET-CT显示全身多发骨转移。疼痛异常，行走不便，靠轮椅移动。2016年8月，经血液检查，总前列腺特异性抗原已经大于10028.229ng/ml，游离前列腺特异性抗原28.229ng/ml。由于病人年势以高，无更好的治疗方案，建议放弃治疗，做临终关怀。在深圳工作的儿子经朋友介绍，同意接受让父亲尝试性服用本发明实施例1中的活性复合物进行干预。每天服用一次，每次50ml。经过15天试用，再次到阜阳市人民医院检验，惊喜地发现总前列腺特异性抗原恢复阴性，为0.181。于是，持服用本发明实施例1中的活性复合物2个月，至2017年1月25日，在太和县进行全身PEC-CT显像检测，发现脑部、眼眶、鼻咽部、颈部、胸部均未明显糖代谢异常增高灶或明显肿大淋巴结等。前列腺无明显增大，骨转移位点减少。最明显的生活变化是，患者不再依赖轮椅，不再依赖止痛药，能够自由行走，饮食明显好转，气色好转，面色红润，体重有增。

实施例5

实施例2中的活性复合物干预康复病例。

宫颈癌患者梁女士，40岁，广东人，高危型HPV病毒引起DNA突变，2016年在深圳市南山医院确诊为的宫颈癌，并做子宫切除手术。2017年4月感觉身体反应异常，赴中山大学附属肿瘤医院确诊为宫颈癌复发，经临床检测淋巴细胞百分比0.591，淋巴细胞绝对值4.1。后又做肿瘤标志物检测，鳞状细胞癌相关抗原(SCC)1.8ng/mL，癌胚抗原(CEA)259.28ng/mL，糖类抗原CA125为75.8U/mL。经患者及家属同意，患者本人及家属同意接受服用本发明实施例2活性复合物进行干预，每天服用一次，每次50ml。一周后，患者明显感觉行动有力，10天后，赴深圳市人民医院进行检测，鳞状细胞癌相关抗原(SCC)恢复为阴性，恢复到0.82ng/mL，淋巴细胞百分比27.4，淋巴细胞绝对值2.36，均恢复为正常范围。癌胚抗原(CEA)下降到202.9ng/mL，糖类抗原CA125下降到73.56U/mL。

实施例6

实施例3中的活性复合物干预康复病例。

肺癌患者雷先生，58岁，湖南人，2017年4月17日被湖南彬洲市第一人民医院被确诊为右肺中央型肺癌，伴多双侧肋骨骨质破坏，考虑转移，部分胸腰椎高密度结节，转移待排。右肾上腺区低密度影，转移待排。后赴香港养和医院并做化疗，PET-CT影像显示，肺癌病变及骨转移癌变共15处位点异常。经香港接受化疗后，患者又在深圳市罗湖医院集团接受医学检验，其中白细胞计数仅为1.74，血小板计数120，中性粒细胞比值为39.6，单核细胞比值10.3，中性粒细胞绝对值0.69，淋巴细胞绝对数0.85。患者本人及家属同意接受服用本发明实施例3中的活性复合物，每天服用一次，每次50ml。3天左右时间，患者明显感觉精神状态好转。30天后，又到罗湖医院集团进行血液检测和CT诊断，以上免疫异常指标全部恢复为正常范围，白细胞计数为5.43，血小板计数211，中性粒细胞比值为69.1，单核细胞比值8.8，中性粒细胞绝对值3.75，淋巴细胞绝对数1.18。CT影像显示，右侧肾上腺区低密度影已消失。

本发明所述活性复合物经过来自广东、广西、香港、安徽、湖南、内蒙古、福建共69位肿瘤患者的临床试用干预，从花青苷对有害自由基消除、参与酶催化反应的多种矿物元素离子及维生素辅助因子(Cofacter(s))、P53作用靶标基质金属蛋白酶MMP、缺氧诱导因子HIF、MDM2锌指蛋白(结构易被重金属离子篡改)、miRNA切割酶Dicer的调控入手，对P53基因进行“围靶”(Encircle Target)调节，逆转DNA甲基化激活肿瘤细胞中被抑制的p53活性，随着花青苷与组合物中矿物元素浓度的增加和服用时间的增加，p53蛋白表达均显著增加，p53基因甲基化情况显著降低。通过三甲医院的临床干预效果检验对照，超过65位患者血液关键免疫指标、肿瘤标志物指标得到明显控制或完全恢复正常，有4位大龄肿瘤晚期患者，没有取得对比检验指标。

综上所述，本发明所述的活性复合物通过靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物，能够多靶向调高抑癌基因p53的表达和作用，达到控制癌细胞发展，诱导癌细胞衰老和死亡，从而实现对癌症的治疗。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物，其特征在于，所述活性复合物由包括以下组分的原料螯合获得：花青苷和金属离子；所述金属离子包括Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Se²⁺、Mg² ⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、K⁺、Rb⁺和Li⁺中的一种或几种。

2.一种靶向提高p53抑癌基因表达的活性复合物溶液，其特征在于，所述活性复合物溶液的溶剂为水，溶质包括花青苷和金属离子；所述金属离子包括Fe²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Se²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、K⁺、Rb⁺和Li⁺中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的活性复合物溶液，其特征在于，所述花青苷在活性复合物溶液中的浓度为1～100mg/ml。

4.根据权利要求2或3所述的活性复合物溶液，其特征在于，所述花青苷为植物提取花青苷，所述植物包括紫甘薯、葡萄、血橙、红球甘蓝、蓝莓、茄子、樱桃、红莓、草莓、桑葚、山楂和牵牛花中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的活性复合物溶液，其特征在于，所述植物提取花青苷中花青苷的质量含量为3～50％。

6.根据权利要求2所述的活性复合物溶液，其特征在于，所述金属离子在活性复合物溶液中的浓度如下：Fe²⁺的浓度为0.1～0.4mg/ml，Ca²⁺的浓度为0.2～20mg/ml，Zn²⁺的浓度为0.04～0.38mg/ml，Se²⁺的浓度为0.0001～0.004mg/ml，Mg²⁺的浓度为0.4～7mg/ml，Mn²⁺的浓度为0.0004～0.06mg/ml，Mo²⁺的浓度为0.0002～0.007mg/ml，K⁺的浓度为0.4～112.5mg/ml，Rb⁺的浓度为0.0004～0.0952mg/ml，Li⁺的浓度为0.0004～0.012mg/ml。

7.根据权利要求6所述的活性复合物溶液，其特征在于，所述金属离子在活性复合物溶液中的浓度如下：Fe²⁺的浓度为0.2～0.3mg/ml，Ca²⁺的浓度为0.5～15mg/ml，Zn²⁺的浓度为0.15～0.28mg/ml，Se²⁺的浓度为0.0002～0.003mg/ml，Mg²⁺的浓度为1.5～6mg/ml，Mn²⁺的浓度为0.01～0.05mg/ml，Mo²⁺的浓度为0.0008～0.006mg/ml，K⁺的浓度为5～100mg/ml，Rb⁺的浓度为0.002～0.08mg/ml，Li⁺的浓度为0.001～0.012mg/ml。

8.根据权利要求2所述的活性复合物溶液，其特征在于，所述金属离子来源于以矿物质提纯的活性离子水。

9.根据权利要求2所述的活性复合物溶液，其特征在于，所述金属离子来源于富含金属离子的植物提取物，包括Fe²⁺提取物、Ca²⁺提取物、Zn²⁺提取物、Se²⁺提取物、Mg²⁺提取物、Mn²⁺提取物、Mo²⁺提取物、K⁺提取物、Rb⁺提取物和Li⁺提取物。

10.根据权利要求9所述的活性复合物溶液，其特征在于，所述Fe²⁺提取物为樱桃提取物，所述Ca²⁺提取物包括质量比为(0.9～1.1)：(0.9～1.1)海带提取物和芹菜提取物；所述Zn²⁺提取物包括质量比(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)的黄秋葵提取物、蓝莓提取物和雄蚕蛾提取物；所述Se²⁺提取物、Rb⁺提取物为海藻提取物；所述Mg²⁺提取物包括质量比(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)的榛子提取物、绿豆提取物和百里香提取物；所述Mn²⁺提取物包括质量比(0.9～1.1)：(0.9～1.1)的紫锥菊提取物和绿茶提取物；所述Mo²⁺提取物为大豆提取物；所述K⁺提取物包括质量比(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)：(0.9～1.1)的海带提取物、香蕉提取物、薄荷叶提取物和冬瓜提取物；所述Li⁺提取物为罗布麻木茶提取物。