CN107568064A - 一种瓜蒌组织培养育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种瓜蒌组织培养育苗方法，涉及瓜蒌育苗技术领域，包括以下步骤：外植体选择、组织苗培养、苗圃选择、组培苗移栽育苗。本发明中采用组织培养进行育苗，育苗效率大大提高，降低育苗成本，且能够很好的保持瓜蒌品种特性，相较于传统分根繁育方法，其繁殖系数能提高4‑5倍，育苗周期缩短10％，有利于建立瓜蒌的快速繁殖技术体系，提高育苗产量。
Description
技术领域
本发明涉及瓜蒌育苗技术领域，尤其涉及一种瓜蒌组织培养育苗方法。
背景技术
瓜篓别名栝楼，葫芦科多年生草质藤本植物，生长于向阳山坡、山脚、石缝、田野草丛中，主产于中国安徽、山东、河南、四川、江苏，陕西等地。瓜篓是一种常用的中药材，其果实入药称全栝楼，种子入药称栝楼仁，块根入药称天花粉。
瓜蒌种植常采用种子和分根这两种繁殖方式。采用种子繁殖，由于瓜蒌为雌雄异株植物，幼苗难以辨别雌雄，到开花期才能辨别，影响瓜蒌的生产，且种子繁殖易产生变异，繁殖效果差。目前生产上一般采用分根繁殖为主，但存在繁殖系数低、出苗参差不齐等问题。组织培养是一项在人工培养基上离体培养植物的器官、细胞或原生质体并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术，可在短期内大量繁育优良品种，因此在充分的试验研究的基础上，开发瓜蒌组织培养育苗方法是及其有必要的。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种瓜蒌组织培养育苗方法，繁殖系数高，且育苗周期短，育苗成活率高。
本发明提出的一种瓜蒌组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：取雌性瓜蒌当年抽生的枝条，取枝条中部切成茎段，每个茎段上含有一个腋芽，将茎段用洗衣粉水溶液清洗，然后在流水下冲洗干净，消毒灭菌；
S2、组培苗培养：将瓜蒌茎段置于培养室中，依次采用愈伤诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中进行培养，得组培苗；
1)愈伤诱导培养：将瓜蒌茎段接种到愈伤诱导培养基进行培养，得到愈伤组织，所述愈伤诱导培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L SA+0.5mg/L 2,4-D+4.0g/L蔗糖+1.5g/L琼脂，调节pH至5.6-6.0；
2)增殖培养：将愈伤组织转移到增殖培养基进行继代培养，得到继代苗，所述增殖培养基为MS+0.3mg/L 6-BA+0.2mg/L SA+0.2mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.6-6.0；
3)生根培养：将继代苗转移到生根培养基进行生根培养，得组培苗，所述生根培养基为1/2MS+0.4mg/L IBA+0.1mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.6-6.0；
S3、苗圃选择：选择排灌良好、土层深厚、疏松肥沃的砂质壤的向阳地块，整地，移栽前一个月，每亩施生石灰200-250kg，深耕翻土，移栽前一周，每亩施基肥腐熟农家肥2500-3000kg、三元复合肥50-100kg、硼砂1-1.5kg、过磷酸钙45-50kg、硫酸锌1.5-2kg，中耕翻土，搭建遮阳网；
S4、组培苗移栽育苗：将组培苗从培养室中取出，用水冲洗干净表面的培养基，晾干，将其移栽到苗圃上，株距20-25cm，行距30-35cm，当幼苗高度达10cm以上时移栽到大田中。
优选地，所述步骤S1中，茎段的长度为1-2cm。
优选地，所述步骤S1中，消毒灭菌是将瓜蒌茎段用70％的乙醇浸泡50-60s，无菌水清洗2-3遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡5-10min，用无菌水冲洗3-4次，用无菌纸吸干表面水分。
优选地，所述步骤S2中，愈伤诱导培养是先在10-20℃下暗培养3-5d，然后在15-20℃下光照培养10-15d，光照时间12h/d，光照强度1500-1800Lx，得愈伤组织。
优选地，所述步骤S2中，增殖培养是在18-22℃下光照培养10-15d，光照时间12h/d，光照强度2000-2300Lx，得继代苗。
优选地，所述步骤S2中，生根培养是在20-25℃下光照培养10-15d，光照时间12h/d，光照强度2000-2300Lx，得组培苗。
有益效果：本发明以瓜蒌当年抽生的枝条作为外植体，相较于老化枝条，其细胞更易分裂增殖，且选取枝条中部位置的含有腋芽的茎段，由于生长素含量较高，分生能力强，更容易形成愈伤组织，将外植体置于含6-苄氨基嘌呤、水杨酸和2,4-二氯苯氧乙酸的愈伤诱导培养基中进行培养，诱导率高，愈伤组织形成率达72％以上，且经愈伤诱导培养基、增殖培养基和生根培养基培养的组培苗的育苗成活率可达78％以上；本发明中采用组织培养进行育苗，育苗效率大大提高，降低育苗成本，且能够很好的保持瓜蒌品种特性，相较于传统分根繁育方法，其繁殖系数能提高4-5倍，育苗周期缩短10％，有利于建立瓜蒌的快速繁殖技术体系，提高育苗产量。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
本发明提出的一种瓜蒌组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：取雌性瓜蒌当年抽生的枝条，取枝条中部切成茎段，每个茎段上含有一个腋芽，将茎段用洗衣粉水溶液清洗，然后在流水下冲洗干净，消毒灭菌；
S2、组培苗培养：将瓜蒌茎段置于培养室中，依次采用愈伤诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中进行培养，得组培苗；
1)愈伤诱导培养：将瓜蒌茎段接种到愈伤诱导培养基进行培养，得到愈伤组织，所述愈伤诱导培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L SA+0.5mg/L 2,4-D+4.0g/L蔗糖+1.5g/L琼脂，调节pH至5.6；
2)增殖培养：将愈伤组织转移到增殖培养基进行继代培养，得到继代苗，所述增殖培养基为MS+0.3mg/L 6-BA+0.2mg/L SA+0.2mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.6；
3)生根培养：将继代苗转移到生根培养基进行生根培养，得组培苗，所述生根培养基为1/2MS+0.4mg/L IBA+0.1mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.6；
S3、苗圃选择：选择排灌良好、土层深厚、疏松肥沃的砂质壤的向阳地块，整地，移栽前一个月，每亩施生石灰200kg，深耕翻土，移栽前一周，每亩施基肥腐熟农家肥2500kg、三元复合肥50kg、硼砂1kg、过磷酸钙45kg、硫酸锌1.5kg，中耕翻土，搭建遮阳网；
S4、组培苗移栽育苗：将组培苗从培养室中取出，用水冲洗干净表面的培养基，晾干，将其移栽到苗圃上，株距20cm，行距30cm，当幼苗高度达10cm以上时移栽到大田中。
实施例2
本发明提出的一种瓜蒌组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：取雌性瓜蒌当年抽生的枝条，取枝条中部切成1cm的茎段，每个茎段上含有一个腋芽，将茎段用洗衣粉水溶液清洗，然后在流水下冲洗干净，然后将瓜蒌茎段用70％的乙醇浸泡50s，无菌水清洗2遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡5min，用无菌水冲洗3次，用无菌纸吸干表面水分；
S2、组培苗培养：将瓜蒌茎段置于培养室中，依次采用愈伤诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中进行培养，得组培苗；
1)愈伤诱导培养：将瓜蒌茎段接种到愈伤诱导培养基进行培养，得到愈伤组织，所述愈伤诱导培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L SA+0.5mg/L 2,4-D+4.0g/L蔗糖+1.5g/L琼脂，调节pH至5.8，先在10℃下暗培养3d，然后在15℃下光照培养10d，光照时间12h/d，光照强度1500Lx，得愈伤组织；
2)增殖培养：将愈伤组织转移到增殖培养基进行继代培养，得到继代苗，所述增殖培养基为MS+0.3mg/L 6-BA+0.2mg/L SA+0.2mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.8，在18℃下光照培养10d，光照时间12h/d，光照强度2000Lx，得继代苗；
3)生根培养：将继代苗转移到生根培养基进行生根培养，得组培苗，所述生根培养基为1/2MS+0.4mg/L IBA+0.1mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.8，在20℃下光照培养10d，光照时间12h/d，光照强度2000Lx，得组培苗；
S3、苗圃选择：选择排灌良好、土层深厚、疏松肥沃的砂质壤的向阳地块，整地，移栽前一个月，每亩施生石灰220kg，深耕翻土，移栽前一周，每亩施基肥腐熟农家肥2700kg、三元复合肥70kg、硼砂1.2kg、过磷酸钙46kg、硫酸锌1.7kg，中耕翻土，搭建遮阳网；
S4、组培苗移栽育苗：将组培苗从培养室中取出，用水冲洗干净表面的培养基，晾干，将其移栽到苗圃上，株距22cm，行距32cm，当幼苗高度达10cm以上时移栽到大田中。
实施例3
本发明提出的一种瓜蒌组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：取雌性瓜蒌当年抽生的枝条，取枝条中部切成1.5cm的茎段，每个茎段上含有一个腋芽，将茎段用洗衣粉水溶液清洗，然后在流水下冲洗干净，然后将瓜蒌茎段用70％的乙醇浸泡55s，无菌水清洗3遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡8min，用无菌水冲洗3次，用无菌纸吸干表面水分；
S2、组培苗培养：将瓜蒌茎段置于培养室中，依次采用愈伤诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中进行培养，得组培苗；
1)愈伤诱导培养：将瓜蒌茎段接种到愈伤诱导培养基进行培养，得到愈伤组织，所述愈伤诱导培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L SA+0.5mg/L 2,4-D+4.0g/L蔗糖+1.5g/L琼脂，调节pH至5.8，先在15℃下暗培养4d，然后在18℃下光照培养12d，光照时间12h/d，光照强度1700Lx，得愈伤组织；
2)增殖培养：将愈伤组织转移到增殖培养基进行继代培养，得到继代苗，所述增殖培养基为MS+0.3mg/L 6-BA+0.2mg/L SA+0.2mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.8，在20℃下光照培养13d，光照时间12h/d，光照强度2200Lx，得继代苗；
3)生根培养：将继代苗转移到生根培养基进行生根培养，得组培苗，所述生根培养基为1/2MS+0.4mg/L IBA+0.1mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至6.0，在22℃下光照培养13d，光照时间12h/d，光照强度2200Lx，得组培苗；
S3、苗圃选择：选择排灌良好、土层深厚、疏松肥沃的砂质壤的向阳地块，整地，移栽前一个月，每亩施生石灰240kg，深耕翻土，移栽前一周，每亩施基肥腐熟农家肥2800kg、三元复合肥85kg、硼砂1.3kg、过磷酸钙48kg、硫酸锌1.8kg，中耕翻土，搭建遮阳网；
S4、组培苗移栽育苗：将组培苗从培养室中取出，用水冲洗干净表面的培养基，晾干，将其移栽到苗圃上，株距24cm，行距34cm，当幼苗高度达10cm以上时移栽到大田中。
实施例4
本发明提出的一种瓜蒌组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1、外植体选择：取雌性瓜蒌当年抽生的枝条，取枝条中部切成2cm的茎段，每个茎段上含有一个腋芽，将茎段用洗衣粉水溶液清洗，然后在流水下冲洗干净，然后将瓜蒌茎段用70％的乙醇浸泡60s，无菌水清洗3遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡10min，用无菌水冲洗4次，用无菌纸吸干表面水分；
S2、组培苗培养：将瓜蒌茎段置于培养室中，依次采用愈伤诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中进行培养，得组培苗；
1)愈伤诱导培养：将瓜蒌茎段接种到愈伤诱导培养基进行培养，得到愈伤组织，所述愈伤诱导培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L SA+0.5mg/L 2,4-D+4.0g/L蔗糖+1.5g/L琼脂，调节pH至6.0，先在20℃下暗培养5d，然后在20℃下光照培养15d，光照时间12h/d，光照强度1800Lx，得愈伤组织；
2)增殖培养：将愈伤组织转移到增殖培养基进行继代培养，得到继代苗，所述增殖培养基为MS+0.3mg/L 6-BA+0.2mg/L SA+0.2mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.8，在22℃下光照培养15d，光照时间12h/d，光照强度2300Lx，得继代苗；
3)生根培养：将继代苗转移到生根培养基进行生根培养，得组培苗，所述生根培养基为1/2MS+0.4mg/L IBA+0.1mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.6，在25℃下光照培养15d，光照时间12h/d，光照强度2300Lx，得组培苗；
S3、苗圃选择：选择排灌良好、土层深厚、疏松肥沃的砂质壤的向阳地块，整地，移栽前一个月，每亩施生石灰250kg，深耕翻土，移栽前一周，每亩施基肥腐熟农家肥3000kg、三元复合肥100kg、硼砂1.5kg、过磷酸钙50kg、硫酸锌2kg，中耕翻土，搭建遮阳网；
S4、组培苗移栽育苗：将组培苗从培养室中取出，用水冲洗干净表面的培养基，晾干，将其移栽到苗圃上，株距25cm，行距35cm，当幼苗高度达10cm以上时移栽到大田中。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种瓜蒌组织培养育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、外植体选择：取雌性瓜蒌当年抽生的枝条，取枝条中部切成茎段，每个茎段上含有一个腋芽，将茎段用洗衣粉水溶液清洗，然后在流水下冲洗干净，消毒灭菌；
S2、组培苗培养：将瓜蒌茎段置于培养室中，依次采用愈伤诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中进行培养，得组培苗；
1)愈伤诱导培养：将瓜蒌茎段接种到愈伤诱导培养基进行培养，得到愈伤组织，所述愈伤诱导培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L SA+0.5mg/L 2,4-D+4.0g/L蔗糖+1.5g/L琼脂，调节pH至5.6-6.0；
2)增殖培养：将愈伤组织转移到增殖培养基进行继代培养，得到继代苗，所述增殖培养基为MS+0.3mg/L 6-BA+0.2mg/L SA+0.2mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.6-6.0；
3)生根培养：将继代苗转移到生根培养基进行生根培养，得组培苗，所述生根培养基为1/2MS+0.4mg/L IBA+0.1mg/L NAA+5.0g/L蔗糖+2g/L琼脂，调节pH至5.6-6.0；
S3、苗圃选择：选择排灌良好、土层深厚、疏松肥沃的砂质壤的向阳地块，整地，移栽前一个月，每亩施生石灰200-250kg，深耕翻土，移栽前一周，每亩施基肥腐熟农家肥2500-3000kg、三元复合肥50-100kg、硼砂1-1.5kg、过磷酸钙45-50kg、硫酸锌1.5-2kg，中耕翻土，搭建遮阳网；
S4、组培苗移栽育苗：将组培苗从培养室中取出，用水冲洗干净表面的培养基，晾干，将其移栽到苗圃上，株距20-25cm，行距30-35cm，当幼苗高度达10cm以上时移栽到大田中。
2.根据权利要求1所述的瓜蒌组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤S1中，茎段的长度为1-2cm。
3.根据权利要求1所述的瓜蒌组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤S1中，消毒灭菌是将瓜蒌茎段用70％的乙醇浸泡50-60s，无菌水清洗2-3遍，再用10％次氯酸钠溶液浸泡5-10min，用无菌水冲洗3-4次，用无菌纸吸干表面水分。
4.根据权利要求1所述的瓜蒌组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤S2中，愈伤诱导培养是先在10-20℃下暗培养3-5d，然后在15-20℃下光照培养10-15d，光照时间12h/d，光照强度1500-1800Lx，得愈伤组织。
5.根据权利要求1所述的瓜蒌组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤S2中，增殖培养是在18-22℃下光照培养10-15d，光照时间12h/d，光照强度2000-2300Lx，得继代苗。
6.根据权利要求1所述的瓜蒌组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤S2中，生根培养是在20-25℃下光照培养10-15d，光照时间12h/d，光照强度2000-2300Lx，得组培苗。
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