CN107550815A - 一种玉米种子提取物及其在皮肤外用剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种玉米种子提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：a)提供玉米种子；b)超声提取；c)将步骤b)得到的提取液过滤；d)将步骤c)得到的滤液浓缩，挥干溶剂，得到玉米种子提取物。本发明还公开玉米种子提取物在皮肤保湿、皮肤抗炎、缓解皮肤刺激和缓解皮肤瘙痒中的应用。

Description

一种玉米种子提取物及其在皮肤外用剂中的应用

技术领域

本发明属于化妆品制备领域，尤其涉及一种玉米种子提取物的制备方法及该提取物的用途，用于皮肤护理。本发明具体涉及该玉米种子提取物在保湿、抗炎、缓解刺激、抗瘙痒的皮肤外用剂中的用途。

背景技术

皮肤是指身体表面包在肌肉外面的组织，是人体最大的器官，主要承担着保护身体、排汗、感觉冷热和压力等功能。皮肤覆盖全身，保护着人体内各组织和器官免受病原微生物等外界物质以及物理等机械损伤的侵袭，有效地抵御外界刺激；皮肤还保持着人体的水分、电解质和营养物质等的流失，有效地维持了人体内环境的稳定，是保护人体的天然屏障。

皮肤的含水量很高，占全身体质量的18-20％。健康的皮肤柔软、光滑，富有弹性，很大程度上归功于皮肤内充足的水分，当皮肤含水量低于10％时，就会出现干燥、粗糙甚至皴裂，而环境干燥、肌肤水油失衡、清洁过度等原因都会导致皮肤失水。皮肤过度失水会破坏皮肤屏障，使其不能起到充分保留水分的作用。皮肤长期没有充足的水分，会导致皮肤干燥，加速皮肤老化，继而出现各种各样的肌肤问题；另外，皮肤含水量充足还是改善皮肤生理环境、促进皮肤新陈代谢的先决条件。因此，保持皮肤的湿润在肌肤日常护理中尤为重要。

透明质酸(HA)被称为最理想的天然保湿因子，是细胞外基质(ECM)中含量最多、所占比例最大的成分，具有很强的水结合能力和粘滞性，在维持皮肤水分和弹性等方面起主要的作用；同时，透明质酸特殊的糖胺聚糖结构，可以防止皮肤的水分蒸发。内在或外在的因素引起的透明质酸(HA)含量的减少，会导致皮肤弹性减少，皮肤粗糙，皱纹形成等现象。因此，保持或提高皮肤的透明质酸(HA)含量是维持健康滋润皮肤的重要途径之一，通过测定皮肤细胞内的透明质酸(HA)含量，可评价皮肤保湿效能。

随着人们生活水平和自我养护意识的增强，除了保湿等对皮肤的基础护理作用外，敏感性肌肤带来的各种皮肤问题引起了人们的广泛关注。敏感性皮肤是一种特殊的皮肤类型，指皮肤在受外界刺激时，易出现红斑、丘疹、毛细血管扩张等客观症状，伴随瘙痒、刺痛、灼烧、紧绷感等主观症状。敏感肌肤的主要特点是更为干燥、容易紧绷和发红，受到轻微刺激，即可产生瘙痒、脱屑甚至烧灼和刺痛等感觉，严重者可产生不良情绪或者精神症状。

敏感皮肤的成因有多种，主要包括屏障功能缺陷、神经反应性过强或炎症反应的恶性循环，在此基础上将抗敏活性分为屏障功能修护、神经镇静及抑制炎症3种类型。与正常皮肤相比，敏感皮肤存在屏障功能损伤或神经功能异常的特点，更难于抵御外界刺激物与过敏原的侵袭，容易发生一系列刺激或过敏导致的皮肤炎症反应，然后进一步损害皮肤屏障结构与神经末梢，导致恶性循环。因此，对敏感皮肤进行日常护理和改善，舒缓炎症，缓解皮肤刺激及瘙痒等，对改善敏感性肌肤有积极促进作用。

脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)，又叫内毒素，是革兰氏阴性细胞所特有的一种成分。脂多糖只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，作用于巨噬细胞，引起炎症反应。巨噬细胞是一种位于组织内的白血球，属于免疫细胞，在机体免疫应答和炎症反应中具有重要作用。炎症反应时，巨噬细胞在细菌及其内毒素的刺激下，会分泌大量的具有致炎作用的内源性化学物质——炎症因子，如一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素1β(lL-1β)等，这些炎症因子又可以进一步活化巨噬细胞，活化后的巨噬细胞会释放大量NO，会造成细胞的伤害与血管过度的舒张，最后造成严重的发炎反应以及并发症。NO作为一种炎症介质，在炎症和免疫应答中起着关键的调节作用，抑制巨噬细胞活化引起的NO的释放，能够一定程度上减轻炎症。此外，NO能与超氧化阴离子形成过氧化亚硝基离子而分解为具有强毒性的·OH，一旦进入靶细胞或临近细胞将引起细胞毒性作用甚至损伤组织。因此，减少活化巨噬细胞过量释放NO具有一定的抗炎意义。对巨噬细胞释放炎症介质的抑制作用研究是检测物质对抗迟发型过敏作用的常用方法。

十二烷基硫酸钠(Sodium lauryl sulfate，SLS)作为阴离子表面活性剂，是一种具有代表性的皮肤刺激物质，其与细胞膜结合可以抑制细胞代谢并破坏细胞膜，从而破坏角质层的屏障功能，使刺激物易于渗透皮肤，引起皮肤异常反应。当刺激物通过角质层达到外皮组织，改变细胞膜的体内平衡，影响细胞增殖和分化，诱导炎症介质的释放；刺激物在角质形成细胞内破坏皮肤屏障，导致炎症因子IL-1α等的释放，促进细胞变性、死亡。因此，用SLS处理试料，评估样品对细胞存活力以及炎症因子释放的影响，可评价样品的抗炎和缓解刺激等效能。

P物质(substance P，SP)是世界上发现最早的神经肽，是一种高活性的神经肽类物质，广泛地分布于神经系统和其他外周组织器官内，具有多种生理功能。皮肤中的SP主要源自于感觉神经纤维末梢，少数由组织细胞如角质形成细胞(KC)、肥大细胞、单核巨噬细胞等细胞合成。SP能够促进角朊细胞释放IL-1、IL-8、TNF-α，促进单核巨噬细胞产生和释放IL-1、IL-6、TNF-α和IFN-γ，增强活化的T细胞产生IL-2以及表达IL-2受体，刺激肥大细胞产生TNF-α，中性粒细胞及血管内皮细胞产生II-8，并借用这些细胞因子的作用，影响和调控皮肤免疫和炎症反应。研究表明，SP是一种重要的瘙痒介质，可通过激活NK1受体的直接方式，或通过促进其他瘙痒介质释放的间接方式，参与瘙痒机制，从而造成皮肤的红肿和瘙痒。

缓激肽(bradykinin，BK)是一种其能与缓激肽受体B1和B2结合的激肽，皮肤注射缓激肽后通过与神经纤维的缓激肽受体B2结合，使外周小血管扩张，毛细血管通透性增强，同时对痛觉神经末梢具有强烈的刺激作用，从而引起皮肤的红肿、瘙痒和疼痛等炎症反应，因此常用于作为物质刺激造成瘙痒模型。

白细胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)，又称作前炎症细胞因子，是一种由单核巨噬细胞分泌的具有多种功能的细胞因子，可通过体液和细胞免疫功能影响炎症、宿主防御和组织损伤，是急性反应的介质之一，也是重要的促炎症反应因子之一。趋化因子主要由白细胞、表皮细胞和成纤维细胞等组织细胞所分泌，是一类对炎症细胞具有趋化和激活作用的细胞因子，而白细胞介素-8(Interleukin-8，IL-8)则是最主要的嗜中性粒细胞趋化因子，主要吸引中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和T细胞等，是嗜中性粒细胞穿越血管内皮到达炎症部位的重要因素。IL-6和IL-8都是免疫和炎症反应的重要调节因子，在皮肤炎症反应中，IL-6是角质形成细胞(Keratinocyte，KC)产生的细胞因子之一，对KC增殖有促进作用；而IL-8则是皮肤炎症反应中重要的炎性趋化因子。细胞组织中过量的IL-6和IL-8会引起皮肤的炎症损伤，因此，一定程度上抑制IL-6和IL-8等炎症因子的分泌，可以有效抑制炎症反应的发生，改善皮肤的炎症及过敏反应。研究还发现IL-6和IL-8等细胞因子在炎性皮肤瘙痒的病理生理过程中起重要作用，常用于瘙痒症状分析检测的因子。

玉米(拉丁学名：Zea mays L.)为禾本科玉蜀黍属一年生草本植物，是重要的粮食作物和饲料作物，也是全世界总产量最高的农作物。它含有丰富的营养物质，特别是蛋白质、脂肪、糖类、纤维素、无机盐、维生素等含量相当大，同时还含有丰富的油酸、亚油酸、叶黄素、谷胱甘肽等高级营养素，具有健脾益胃、降糖通便、抗衰老、防癌、防便秘、防动脉粥样硬化等作用。

目前，尚无文献报道玉米种子具有抑制脂多糖诱导的巨噬细胞释放NO、抑制SLS诱导的角质形成细胞死亡、抑制BK诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-6、抑制SP诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-8以及促进角质形成细胞生成透明质酸的活性。

本专利首次以玉米种子为研究对象，考察其对脂多糖诱导的巨噬细胞释放NO、抑制SLS诱导的角质形成细胞死亡、抑制BK诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-6、抑制SP诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-8以及促进角质形成细胞生成透明质酸的活性。

发明内容

本发明的发明人在经过了广泛而深入的研究之后发现：玉米种子提取物具有保湿、抗炎、缓解刺激、抗瘙痒等相关作用。因此，玉米种子提取物可以作为功效添加剂加入到皮肤外用剂，尤其化妆品中，用于保湿、抗炎、缓解刺激和抗瘙痒。

在本发明的一方面，提供了一种玉米种子提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供玉米种子；

b)超声提取；

c)将步骤b)得到的提取液过滤；

d)将步骤c)得到的滤液浓缩，挥干溶剂，得到玉米种子提取物。

在一些优选的实施方式中，上述步骤b)的超声提取采用的溶剂是体积浓度为60-80％的乙醇，优选70％的乙醇。

在一些优选的实施方式中，上述步骤d)在45℃下进行。

另一方面，本发明还涉及根据本发明所述方法制备得到的玉米种子提取物。

另一方面，本发明还涉及根据本发明所述方法制备得到的玉米种子提取物在皮肤保湿、皮肤抗炎、缓解皮肤刺激和缓解皮肤瘙痒中的应用。

在一些优选的实施方式中，所述皮肤保湿通过促进角质形成细胞生成透明质酸的活性实现。

在一些优选的实施方式中，所述皮肤抗炎通过抑制脂多糖诱导的巨噬细胞释放NO实现。

在一些优选的实施方式中，所述缓解皮肤刺激通过抑制SLS诱导的角质形成细胞死亡实现。

在一些优选的实施方式中，所述缓解皮肤瘙痒通过抑制缓激肽诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-6和/或抑制P物质诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-8实现。

另一方面，本发明还涉及一种皮肤外用剂，其包含根据本发明所述方法制备得到的玉米种子提取物，所述玉米种子提取物在皮肤外用剂中的重量百分比为0.0001％-20％(w/w)，优选的重量百分比为0.001％-10％(w/w)，更优选的重量百分比为0.001％-5％(w/w)，最优选的重量百分比为0.01％-5％(w/w)。

发明详述

本发明提供了一种具有皮肤保湿、皮肤抗炎、缓解皮肤刺激和/或缓解皮肤瘙痒功效的玉米种子提取物。本发明首次发现玉米种子提取物具有保湿、抗炎、缓解刺激、抗瘙痒的功效，适合作为功效添加剂用于皮肤外用剂中。

本发明提供了一种玉米种子提取物的制备方法，其制备包括如下步骤：

a)提供玉米种子；

b)超声提取；

c)将步骤b)得到的提取液过滤；

d)将步骤c)得到的滤液浓缩，挥干溶剂，得到玉米种子提取物。

在一些具体的实施方式中，超声提取在常温下进行。例如，常温条件包括25±5℃的温度范围。

在一些具体的实施方式中，步骤b)的提取的物料比为1:5至1:15，优选物料比为1:10。在一些具体的实施方式中，超声提取采用的溶剂是60-80％乙醇(体积浓度)，优选溶剂为70％乙醇(体积浓度)。在一些具体的实施方式中，超声提取温度为20-30℃，优选超声提取温度为25℃。在一些具体的实施方式中，超声提取时间为2-4小时，优选超声提取时间为3小时。

在一些具体的实施方式中，步骤c)的过滤可为筛滤、抽滤、滤纸过滤。在一些具体的实施方式中，步骤c)的过滤采用滤纸过滤，例如，可以采用HYUNDAI No.53滤纸进行过滤。

在一些具体的实施方式中，步骤d)浓缩方式是减压浓缩，优选浓缩温度为45℃。

本发明首次发现玉米种子提取物具有皮肤保湿作用，能够促进角质形成细胞生成透明质酸的活性。因此，玉米种子提取物可以作为具有保湿功效的添加剂加入化妆品中，起到皮肤保湿作用。

本发明首次发现玉米种子提取物具有皮肤抗炎作用，能够抑制脂多糖诱导的巨噬细胞释放NO。因此，玉米种子提取物可以作为具有抗炎功效的添加剂加入化妆品中，起到皮肤抗炎作用。

本发明首次发现玉米种子提取物具有缓解皮肤刺激作用，能够抑制SLS诱导的角质形成细胞死亡。因此，玉米种子提取物可以作为具有缓解皮肤刺激功效的添加剂加入化妆品中，起到舒缓皮肤刺激的功效。

本发明首次发现玉米种子提取物具有缓解皮肤瘙痒作用，能够抑制缓激肽诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-6和/或抑制P物质诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-8。因此，玉米种子提取物可以作为具有缓解皮肤瘙痒功效的添加剂加入化妆品中，起到抗瘙痒的功效。

因此，本发明还涉及玉米种子提取物在皮肤保湿中的应用。在一些具体的实施方式中，所述皮肤保湿作用是通过促进角质形成细胞生成透明质酸的活性实现的。

本发明还涉及玉米种子提取物在皮肤抗炎中的应用。在一些具体的实施方式中，所述皮肤抗炎作用是通过抑制脂多糖诱导的巨噬细胞释放NO实现的。

本发明还涉及玉米种子提取物在缓解皮肤刺激中的应用。在一些具体的实施方式中，所述缓解皮肤刺激作用是通过抑制SLS诱导的角质形成细胞死亡实现的。

本发明还涉及玉米种子提取物在缓解皮肤瘙痒中的应用。在一些具体的实施方式中，所述缓解皮肤瘙痒作用是通过抑制缓激肽诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-6和/或抑制P物质诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-8实现的。

在本发明的另一方面，提供了一种具有皮肤保湿功效的皮肤外用剂，所述皮肤外用剂包含按照本发明方法制备得到的玉米种子提取物及化妆品领域可接受的赋形剂。

在本发明的另一方面，提供了一种具有皮肤抗炎功效的皮肤外用剂，所述皮肤外用剂包含按照本发明方法制备得到的玉米种子提取物及化妆品领域可接受的赋形剂。

在本发明的另一方面，提供了一种能够缓解皮肤刺激的皮肤外用剂，所述皮肤外用剂包含按照本发明方法制备得到的玉米种子提取物及化妆品领域可接受的赋形剂。

在本发明的另一方面，提供了一种能够缓解皮肤瘙痒的皮肤外用剂，所述皮肤外用剂包含按照本发明方法制备得到的玉米种子提取物及化妆品领域可接受的赋形剂。

玉米种子提取物可应用于皮肤外用剂，尤其是可应用于化妆品中，根据制剂的不同类型添加不同的用量。

本发明所述的玉米种子提取物可以作为具有保湿功效的添加剂应用于皮肤外用剂。在一个具体的实施方式中，玉米种子提取物可以作为具有保湿功效的添加剂应用于化妆品中。在一个具体的实施方式中，所述化妆品选自：洁面乳、化妆水、乳液、膏霜、啫喱、面膜。根据制剂的不同类型添加不同的用量。

本发明所述的玉米种子提取物可以作为具有抗炎功效的添加剂应用于皮肤外用剂。在一个具体的实施方式中，玉米种子提取物可以作为具有抗炎功效的添加剂应用于化妆品中。在一个具体的实施方式中，所述化妆品选自：洁面乳、化妆水、乳液、膏霜、啫喱、面膜。根据制剂的不同类型添加不同的用量。

本发明所述的玉米种子提取物可以作为具有缓解皮肤刺激功效的添加剂应用于皮肤外用剂。在一个具体的实施方式中，玉米种子提取物可以作为具有缓解皮肤刺激功效的添加剂应用于化妆品中。在一个具体的实施方式中，所述化妆品选自：洁面乳、化妆水、乳液、膏霜、啫喱、面膜。根据制剂的不同类型添加不同的用量。

本发明所述的玉米种子提取物可以作为具有缓解皮肤瘙痒功效的添加剂应用于皮肤外用剂。在一个具体的实施方式中，玉米种子提取物可以作为具有缓解皮肤瘙痒功效的添加剂应用于化妆品中。在一个具体的实施方式中，所述化妆品选自：洁面乳、化妆水、乳液、膏霜、啫喱、面膜。根据制剂的不同类型添加不同的用量。

含有本发明的玉米种子提取物的皮肤外用剂也属于本发明的保护范围。

所述皮肤外用剂是通常用于皮肤外部的所有成分的统称概念，例如可以是化妆料组合物或药学组合物。所述化妆料组合物中可以是基础化妆料、面部妆容化妆料、身体用化妆料、头发护理用化妆料等，对其剂型无特殊限制，根据不同目的可合理选择。

所述化妆料组合物中根据剂型和目的的不同还含有不同的化妆品学层面允许的介质或基质赋形剂。

可以用于本发明皮肤外用剂组合物的化妆品、皮肤病学或药学上可接受的赋形剂为水相、油相、凝胶、水包蜡型乳液、水包油型乳液或油包水型乳液的形式。水相为一种或多种水溶性或分散性组分的混合物，其在室温(25℃)下可以为液体、半固体或固体。赋形剂包括或可以为在水或水-醇赋形剂中的混悬液、分散液或溶液的形式，其可以含有增稠剂或凝胶剂。本领域技术人员可以基于本领域技术人员掌握的知识选择合适的产品形式，其中包含的组分。

所述的组合物可以包括水相，该水相可以含有水或水与至少一种亲水性有机溶剂的混合物，所述的亲水性有机溶剂诸如醇，尤其是含有2-5个碳原子的直链或支链低级一元醇，如乙醇或丙醇；多元醇，如丙二醇、山梨醇、甘油、泛醇或聚乙二醇及其混合物。

当发明的组合物为乳液形式时，该组合物还可以任选包含表面活性剂。

所述的组合物还可以包含成膜聚合物，如聚氨基甲酸酯、聚丙烯酸均聚物或共聚物、聚酯、基于烃的树脂和/或硅氧烷树脂。可以将聚合物溶于或分散于化妆品可接受的赋形剂中并且任选与增塑剂合并。

本发明的组合物还可以包含油相，所述的油相含有在室温(25℃)下为液体的油溶性或油分散性组分和/或在室温下为油状或蜡状的物质，如蜡、半固体、树胶及其混合物。该油相还可以含有有机溶剂。

通常在室温下为液体，合适的油性物质包括：来源于动物的基于烃的油，如全氢化角鲨烯；基于烃的植物油，如液体的C4-10脂肪酸的甘油三酯类，例如庚酸或辛酸甘油三酯类，或油，例如向日葵油、玉米油、大豆油、葡萄籽油、蓖麻油、鳄梨油、辛酸/癸酸甘油三酯类、霍霍巴油；矿物或合成来源的直链或支链烃类，例如液体石蜡及其衍生物、凡士林；合成酯类和醚类，特别是脂肪醇的酯类，例如肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸2-乙基己酯、硬脂酸2-辛基十二烷基酯、异硬脂酸异硬脂醇酯；羟基化酯类，例如乳酸异硬脂醇酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛酯、羟基硬脂酸辛基十二烷基酯、脂肪醇的庚酸酯类、辛酸酯类和癸酸脂类；多元醇酯类，例如丙二醇二辛酸酯、新戊二醇二庚酸酯、二甘醇二异壬酸酯和季戊四醇酯类；含有C12-26的脂肪醇类，例如辛基十二烷醇、2-丁基辛醇、2-己基癸醇、2-十一烷基十五烷醇、油醇；基于部分烃的氟油和/或氟硅油，硅油，在室温下为液体或半固体的挥发性或非挥发性的直链或环状聚甲基硅氧烷，例如环状聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷，其任选包含苯基，例如苯基三甲基硅氧烷、硅氧烷及其混合物。

本发明的组合物可以进一步包含常用于化妆品领域中的任何组分。这些组分包括防腐剂、水相增稠剂(提取物生物聚合物、合成聚合物)和脂肪相增稠剂、芳香剂、亲水性和亲脂性活性剂及其混合物。

本发明的组合物还可以包含另外的颗粒相，所述的颗粒相可以为化妆品组合物中使用的颜料和/或珠光剂和/或填充剂。

颜料可以存在于组合物中，合适的无机颜料包括氧化钛、氧化锆和氧化铈以及氧化锌、氧化铁和铁蓝；合适的有机颜料包括钡、锶、钙和铝色淀和碳黑。

珠光剂可以存在于组合物中，合适的珠光剂包括涂覆了氧化钛、氧化铁或天然颜料的云母。

填充剂可以存在于组合物中，合适的填充剂包括滑石粉、二氧化硅、硬脂酸锌、云母、高岭土、尼龙粉末、聚乙烯粉末、特氟龙、淀粉、一氮化硼、共聚物微球，例如硅氧烷树脂微珠。

本发明组合物的油相可以包含一种或多种蜡、树胶或其混合物。蜡包括基于烃的蜡、氟蜡和/或硅氧烷蜡，并且可以来源于植物、矿物、动物和/或合成来源。合适的蜡包括蜂蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、石蜡、微晶蜡、地蜡；合成蜡包括聚乙烯蜡、含有C16-45的硅氧烷蜡。树胶一般为聚二甲基硅氧烷或羧甲基纤维素钠或提取物类，并且半固体物质一般为基于烃的化合物，如羊毛脂及其衍生物。

可以将本发明的组合物配制成任何合适的产品形式。这类产品形式包括，但不限于气溶胶型喷雾剂、霜剂、乳液、固体、液体、分散体、泡沫、凝胶、化妆水、摩丝、软膏、粉剂、贴剂、润发油、溶液、手按泵型喷雾剂、棒状物、面膜和湿纸巾。可以将本发明的组合物通过本领域众所周知的各种方法便利地用于制备或作为化妆品、皮肤病学或药物局部施用产品。

本发明的皮肤外用剂组合物可以包括一种或多种下列成分：抗过敏剂、抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、着色剂去色素剂、润肤剂、乳化剂、表皮脱落剂、成膜剂、香料、保湿剂、昆虫驱避剂、润滑剂、药物活性剂、增湿剂、耐光剂、防腐剂、护肤剂、皮肤渗透增强剂、防晒剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素或其任意组合。

具体实施方式

文献中均未涉及玉米种子提取物具有保湿、抗炎、缓解皮肤刺激和/或皮肤瘙痒的功效，也未提及将其作为具有保湿、抗炎、缓解皮肤刺激和/或缓解皮肤瘙痒的添加剂加入化妆品中。因此，本发明首次提出玉米种子提取物具有保湿、抗炎、缓解皮肤刺激和/或皮肤瘙痒的功效，同时该提取物也可以作为功能添加剂加入皮肤外用剂，尤其化妆品中。

下面结合具体的实施例进一步阐述本发明。但是，应该明白，这些实施例仅用于说明本发明而不构成对本发明范围的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另有说明，所有的百分比和份数按重量计。

实施例中使用的玉米为GuangPyeong玉米，原产地为韩国，通过“YeLimCorporation”供应商收购种子。

所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1：玉米种子提取物的制备

取一定量干燥玉米种子，10倍70％乙醇(体积浓度)常温超声提取3h，提取液滤纸(HYUNDAI No.53)过滤，于旋转蒸发器低温(45℃)浓缩，得到玉米种子提取物。

实施例2：对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞释放一氧化氮(NO)的影响

本实验采用小鼠RAW 264.7单核巨噬细胞株(由韩国细胞系银行提供)进行实验检测，采用含10％FBS(fetal bovine serum)的DMEM(Dulbecco's Modified Eagle'sMedium)培养基，在37℃、5％CO₂恒温培养箱中培养。

RAW 264.7细胞以2.5x 10⁴/孔浓度接种于96孔板，培养24h。除去培养基，FBS洗涤，不含FBS的DMEM培养基(无血清培养基)制成饥饿状态的细胞。第二天用1ug/mL的LPS和适当浓度的样品处理，培养24h。

采用Griess法检测NO的释放量。将细胞培养基和同量的Griess试剂混合后室温下反应10分钟。用ELISA读数仪(Thermo,51119300)在540nm处测定OD值。根据公式(1)计算实施例1样品对LPS诱导的巨噬细胞释放NO的抑制率：

NO释放抑制率(％)＝(OD_LPS﹣OD_样品)/(OD_LPS﹣OD_对照)*100％

公式(1)

表1：实施例1样品在不同浓度下对LPS刺激的巨噬细胞释放NO的影响

由在不同浓度下实施例1样品对巨噬细胞RAW 264.7释放NO的影响结果(表1)可知，在不同浓度下实施例1样品对LPS刺激的巨噬细胞释放NO具有不同程度的抑制作用，随着浓度的升高，对巨噬细胞释放NO的抑制率增大，呈浓度依赖性，在浓度为100ug/ml最大，达到51.84％。说明实施例1样品可以有效地抑制小鼠腹腔巨噬细胞(RAW 264.7)释放NO，即玉米种子提取物具有一定的抗炎作用。

实施例3：对SLS诱导的HaCaT细胞死亡的影响

本实验采用人角质形成细胞(Human Keratinocyte)HaCaT(德国癌研究所DKFZ提供)进行实验检测，采用含10％FBS(fetal bovine serum)的DMEM(Dulbecco's ModifiedEagle's Medium)培养基，在37℃、5％CO₂恒温培养箱中培养。

HaCaT细胞以1.5x 10⁴/孔浓度接种于96孔板，培养24h。除去培养基，FBS洗涤，用不含FBS的DMEM培养基(无血清培养基)制成饥饿状态的细胞。第二天用20ug/ml的SLS和适当浓度的受试样品处理，培养24h。

培养基中加入10倍稀释的WST-1试剂，每个孔加入100μL后，培养2h，通过ELISA读数仪(Thermo，51119300)在450nm处测定吸光度OD。根据公式(2)计算实施例1样品对SLS诱导的HaCaT细胞死亡抑制率。

细胞死亡抑制率(％)＝(OD_样品﹣OD_SLS)/(OD_对照﹣OD_SLS)*100％

公式(2)

表2：实施例1样品在不同浓度下对SLS诱导的HaCaT细胞死亡的影响

由在不同浓度下实施例1样品对SLS诱导的人角质形成细胞(HaCaT)死亡的影响结果(表2)可知，在不同浓度下实施例1样品对SLS诱导的HaCaT细胞死亡具有不同程度的抑制作用，在浓度为200ug/ml最大，达到43.20％。说明实施例1样品可以有效地抑制SLS诱导的HaCaT细胞死亡，即玉米种子提取物有效缓解SLS对表皮细胞造成的死亡损伤，从而起到舒缓皮肤刺激的作用。

实施例4：对BK诱导的NHF细胞生成IL-6的影响

本实验采用正常人成纤维细胞NHF(LONZA提供)进行实验检测，采用含青霉素(100IU/mL)和链霉素(100μg/mL)、补充试剂(胰岛素0.1％，rhFGF-B 0.1％，GA-10000.1％，FBS 2％)的成纤维细胞培养基(FBM)，在37℃、5％CO₂恒温培养箱中培养。

NHF细胞以1.5x 10⁴/孔浓度接种于48孔板，培养24h。用不含补充试剂的DMEM培养基(无血清培养基)制成饥饿状态的细胞。第二天用10nM BK适当浓度的实施例样品处理，并培养24h。

用R&D System的ELISA KIT(DY206，DY208)进行实验后，用ELISA读数仪在450nm处测定吸光度OD，根据公式(3)计算实施例1样品对BK诱导的IL-6生成的抑制率。

IL-6生成抑制率(％)＝(OD_BK﹣OD_样品)/(OD_BK﹣OD_对照)*100％

公式(3)

表3：实施例1样品对BK诱导的NHF细胞生成IL-6的影响

由实施例1样品对BK诱导的NHF细胞生成IL-6的影响(表3)可知，在浓度为1ug/ml，IL-6生成抑制率为21.70％。说明实施例1样品可以抑制BK诱导的NHF细胞生成IL-6，即玉米种子提取物可以有效抑制瘙痒因子IL-6的生成，从而起到止痒作用。

实施例5:对SP诱导的NHF细胞生成IL-8的影响

本实验采用正常人成纤维细胞NHF(LONZA提供)进行实验检测，采用含青霉素(100IU/mL)和链霉素(100μg/mL)、补充试剂(胰岛素0.1％，rhFGF-B 0.1％，GA-10000.1％，FBS 2％)的成纤维细胞培养基(FBM)，在37℃、5％CO₂恒温培养箱中培养。

NHF细胞以1.5x 10⁴/孔浓度接种于48孔板，培养24h。用不含补充试剂的DMEM培养基(无血清培养基)制成饥饿状态的细胞。第二天用500nM SP和适当浓度的实施例样品处理，并培养5h。

用R&D System的ELISA KIT(DY206，DY208)进行实验后，用ELISA读数仪在450nm处测定吸光度OD，根据公式(4)计算实施例1样品对SP诱导的IL-8生成的抑制率。

IL-8生成抑制率(％)＝(OD_sp﹣OD_样品)/(OD_sp﹣OD_对照)*100％

公式(4)

表4：实施例1样品对SP诱导的NHF细胞生成IL-8的影响

由实施例1样品对SP诱导的NHF细胞生成IL-8的影响(表4)可知，在浓度为1ug/ml，IL-8生成抑制率为7.66％。说明实施例1样品可以抑制P物质诱导的NHF细胞生成IL-8，说明玉米种子提取物可以有效抑制瘙痒因子IL-8的生成，从而起到止痒作用。

实施例6：对HaCaT细胞生成透明质酸(HA)的影响

本实验采用人角质形成细胞(Human Keratinocyte)HaCaT(德国癌研究所(DKFZ)提供)进行实验检测，采用含10％FBS(fetal bovine serum)的DMEM(Dulbecco's ModifiedEagle's Medium)培养基，在37℃、5％CO₂恒温培养箱中培养。

HaCaT细胞以1.5x 10⁴/孔浓度接种于96孔板，放入培养箱培养24h。除去培养基，FBS洗涤，用不含FBS的DMEM培养基(无血清培养基)制成饥饿状态的细胞。加入不同浓度受试样品，培养24h。

利用R&D System的ELISA KIT(DY3614)进行实验，用ELISA读数仪在450nm处测定吸光度OD。根据公式(5)计算实施例1样品对HaCaT细胞生成HA的促进率。

HA生成促进率(％)＝(OD_样品﹣OD_对照)/OD_对照*100％

公式(5)

表5：实施例1样品在不同浓度下对HaCaT细胞生成HA的影响

由在不同浓度下实施例1样品对HaCaT细胞生成HA的影响结果(表5)可知，在不同浓度下实施例1样品对HaCaT细胞生成HA具有不同程度的促进作用，随着浓度的升高，对原始细胞释放NO的抑制率增大，呈浓度依赖性，在浓度为200ug/ml最大，达到55.11％。说明实施例1样品可以有效地促进HaCaT细胞生成HA，即玉米种子提取物具有一定的保湿作用。

取实施例1玉米种子提取物，用于皮肤外用剂的制备。所述皮肤外用剂优选为化妆品组合物，例如化妆水、精华液、乳霜等。所述玉米种子提取物的用量为0.0001％-20％(w/w)。优选的重量百分比为0.01％-20％(w/w)。更优选的重量百分比为0.01％-10％(w/w)。最优选的重量百分比为0.1％-5％(w/w)。

以下是含有玉米种子提取物的皮肤外用剂中的具体应用的实施例，及其这些剂型的配方和制备方法。以下各表中“-”表示无添加。

实施例7：面霜的制备

实施例8：乳液的制备

实施例9：啫喱的制备

实施例10：化妆水的制备

实施例12：精华液的制备

实施例13：面膜的制备

实施例14：眼霜的制备

实施例15：气雾(清洁泡)的制备

实施例16：喷雾的制备

实施例17：沐浴露的制备

实施例18：洗面奶的制备

Claims (10)

1.一种玉米种子提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供玉米种子；

b)超声提取；

c)将步骤b)得到的提取液过滤；

d)将步骤c)得到的滤液浓缩，挥干溶剂，得到玉米种子提取物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤b)的超声提取采用的溶剂是体积浓度为60-80％的乙醇，优选70％的乙醇。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤d)在45℃下进行。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法制备得到的玉米种子提取物。

5.如权利要求4所述的玉米种子提取物在皮肤保湿、皮肤抗炎、缓解皮肤刺激和缓解皮肤瘙痒中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述皮肤保湿通过促进角质形成细胞生成透明质酸的活性实现。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述皮肤抗炎通过抑制脂多糖诱导的巨噬细胞释放NO实现。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述缓解皮肤刺激通过抑制SLS诱导的角质形成细胞死亡实现。

9.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述缓解皮肤瘙痒通过抑制缓激肽诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-6和/或抑制P物质诱导的成纤维细胞释放炎症因子IL-8实现。

10.一种皮肤外用剂，其包含如权利要求4所述的玉米种子提取物，所述玉米种子提取物在皮肤外用剂中的重量百分比为0.0001％-20％(w/w)，优选的重量百分比为0.001％-10％(w/w)，更优选的重量百分比为0.001％-5％(w/w)，最优选的重量百分比为0.01％-5％(w/w)。