CN107530425A

CN107530425A - 治疗疾病的方法

Info

Publication number: CN107530425A
Application number: CN201680021688.9A
Authority: CN
Inventors: K·阿尔恩特-施米茨; A·伯顿; M·C·尼文斯; K·夸斯特; M·施莱皮茨; S·维斯瓦纳坦
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 2015-04-14
Filing date: 2016-04-13
Publication date: 2018-01-02
Also published as: IL253847A0; KR20170135972A; US20180334501A1; AU2016247921A1; HK1243937A1; JP2018512422A; US20190359701A1; CL2017002304A1; PH12017501872A1; EP3391905A1; CA2977534A1; EP3283109A1; MX2017013156A; EA201792282A1; EP3685856A1; SG11201708399WA; US20160304602A1; US20180009887A1; BR112017018574A2; HK1255728A1

Abstract

本发明一般地涉及用于利用抗IL‑23A抗体治疗呼吸系统疾病如哮喘的方法。

Description

治疗疾病的方法

技术领域

本发明一般地涉及利用抗IL-23A抗体治疗呼吸系统疾病例如哮喘的方法。

背景技术

哮喘是呼吸道的慢性炎性疾病，其特征在于如粘液生成增加、咳嗽和呼吸困难，并且作为气流阻塞的体征的喘鸣等各种症状。所述症状由上呼吸道也可能是下呼吸道的炎症诱导的高反应性引起。全球约有3亿人患有这种疾病。其中预计5-10％患有重度哮喘，驱动了大部分与哮喘有关的医疗保健利用和费用。

虽然重度哮喘是重要的健康经济问题，但在临床实践中，可采用的有效治疗仍然有限。然而，人们越来越意识到哮喘的异质性，哮喘不是种单一的病症而是由许多潜在的表型组成，其中一些表型可能显示与更重度的疾病状态的相关性。在这方面，最近采用无偏统计技术如聚类分析，已证明在成人和儿科群体两者中均存在重度哮喘簇。这些临床表型可能显示导致内型(endotypes)分类的特异性病理生理相关性。伴随对哮喘的多元特性(diverse nature)的日益增长的理解，人们认识到取决于个体疾病的潜在性质不同，治疗响应也存在多种多样的范围。

哮喘的病理生理学为异质性，并由遗传、表观遗传、环境以及未知原因驱动。标志是各种细胞类型，如嗜酸性粒细胞、T细胞亚群、肥大细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的参与，这些细胞响应于过敏触发因子、病毒感染及甚至细菌定殖而被激活。由于触发因子和免疫系统的响应的复杂性，不能将哮喘视为只为一种表型。目前，科研以及临床工作指向了上述疾病的各种亚型的鉴定，所述各种亚型可以反映来自这些细胞类型的不同的贡献。

例如，一种表型由在年龄低于12岁的儿童中已经早期发作疾病所代表，其为由IgE介导的机体对过敏原反应的致敏。在这里，血液和支气管肺泡灌洗液(BALF)和/或痰中的嗜酸性粒细胞，以及2型T辅助细胞(Th2)和2型先天淋巴样细胞(ILC2)响应较为普遍，并可以通过细胞因子IL4、IL5和IL13以及嗜酸性粒细胞趋化因子水平的增加来鉴定。其他潜在的表型视为非Th2表型，并可能具有疾病的较晚发病，即在成人中在四十年龄段早期至四十年龄段中期发病(Wenzel S 2012 Clin Exp Allergy.42:650-8)。在该组中发现吸烟性哮喘，其特征在于在呼吸道中嗜中性粒细胞数量增加。

非Th2和/或非嗜酸性粒细胞哮喘可能包括一组不同的细胞因子作为炎症过程的标记物。已经显示细胞因子如IL17A和F由特定一组免疫细胞，即T辅助型17细胞(Th17细胞)、3型先天淋巴样细胞(ILC3)、γδ-T、NK细胞等释放。对Th17细胞发育的容许环境，通过活化T细胞连同活化各种模式识别受体例如Toll样受体(TLR)而建立。在某些情况下，需要高抗原浓度来触发Th17细胞发育的启动(Lezzi G等人,2009 Proc Natl Acad SciUSA.106:876-81)。在高抗原浓度下，释放能够驱动T细胞向提供持续的炎症来源的Th17表型分化的细胞因子(即IL1β、IL6、TGFβ)。在各种组织如皮肤中，细胞因子IL-23似乎在扩展和维持Th17表型中较为重要。Th17细胞特异性释放细胞因子如IL17A和F，IL22，其转而诱导由上皮细胞进行的IL8的释放，IL8为嗜中性粒细胞向肺的诱引子(attractor)。

轻度至中度哮喘用抗炎剂如吸入类固醇、长效和短效β-激动剂、孟鲁司特(montelukast)和茶碱(theophylline)治疗。在更重度的人群中增加口服类固醇，但不足以控制所有哮喘表型。因此，存在对更重度类型的哮喘，例如对于显示数量高的特定细胞亚群和/或类固醇耐受的表型的治疗的医学需要。

发明内容

发明概述

本发明解决了上述需要，并提供了用于治疗哮喘特别是重度持续性哮喘的方法，其包括向患者施用抗IL-23A抗体。

在一个方面中，本发明的方法用于治疗嗜中性粒细胞哮喘。在一个方面中，本发明的方法用于治疗嗜酸性粒细胞哮喘。在一个方面中，本发明的方法用于治疗混合型嗜中性粒细胞和嗜酸粒细胞型哮喘。在一个方面中，本发明的方法用于治疗少粒细胞型哮喘。在一个方面中，哮喘由诱导痰分类。

在一个方面中，上述方法之一中的患者不对皮质类固醇响应。

在一个方面，在上述方法之一中，通过患者例如患有重度持续性哮喘(例如具有0.75的危险比(HR))的患者的年发作率的降低来评估治疗。在一个方面中，在上述方法之一中，治疗通过以具有症状改善(例如哮喘控制问卷(Asthma Control Questionnaire)(ACQ)得分减低0.5个单位(20％))的患者的比例的相对改善来评估。在一个方面中，在上述方法之一中，治疗通过以下指标评估：低谷1秒用力呼气量(trough Forced Expiratory Volumein 1 second)(FEV₁)例如＞125ml，现有控制疗法(current controller therapies)减少，健康相关的QoL(例如哮喘生活质量问卷(AQLQ))的改善，或症状评分/缓解药物使用的改善。

在一个方面中，在上述方法之一中，哮喘由Th17细胞或响应IL-23的细胞介导。在一个方面中，在上述方法之一中，哮喘由Th2细胞介导。在一个方面中，在上述方法之一中，哮喘由Th2/Th17双阳性细胞，或对Th2响应细胞因子和IL-23响应的细胞介导。

在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗或预防哮喘发作的方法，所述方法包括对患有哮喘，特别是重度哮喘例如重度持续性哮喘的患者施用抗IL-23A抗体。

在本发明的一个方面中，患者是经历频繁发作的患者，并在进一步的实施方案中，本发明提供了一种用于改善经历频繁发作的患者的发作的方法，所述方法包括向具有哮喘，特别是重度哮喘，例如重度持续性哮喘的患者施用抗IL-23A抗体。

在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗或控制重度哮喘的症状的方法，其包括向患有重度持续性哮喘的患者施用抗IL-23A抗体。

在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗或预防哮喘发作和用于治疗或控制重度哮喘的症状的方法，其包括向患有重度持续性哮喘的患者施用抗IL-23A抗体。

在另一方面中，本发明提供了降低哮喘发作速率的方法，其包括向患有重度持续性哮喘的患者施用抗IL-23A抗体。

在一个方面中，在上述方法之一中，哮喘是嗜中性粒细胞哮喘。在一个方面中，在上述方法之一中，哮喘是嗜酸粒细胞型哮喘。在一个方面中，在上述方法之一中，哮喘是混合性嗜中性粒细胞性和嗜酸性粒细胞哮喘。在一个方面中，在上述方法之一中，哮喘是少粒细胞型哮喘。在一个方面，哮喘的类型由诱导痰、血细胞计数或由血液生物标记物分类或表型，血液生物标记物可以是嗜酸性粒细胞和/或各种细胞因子或其他蛋白质。

在一个方面中，在上述方法之一中，患者不被吸入型皮质类固醇充分控制。在一个方面中，在上述方法之一中，患者不被吸入型皮质类固醇和第二控制发作药物充分控制。在一个方面中，在上述方法之一中，患者是年龄12岁以上。在一个方面中，在上述方法之一中，患者是年龄12岁以上，且不被吸入型皮质类固醇和第二控制发作药物充分控制。

在一个方面中，在上述方法中，治疗、预防、控制或减少通过患者，例如患有重度持续性哮喘(例如具有0.75的风险比(HR))的患者的年发作速率的降低来评估。在一个方面中，在上述方法中，治疗、预防、控制或减少通过以具有症状改善(例如哮喘控制问卷(ACQ)得分降低0.5个单位(20％))的患者的比例的相对改善来评估。在一个方面，在上述方法之一中，治疗、预防、控制或减少通过以下指标评估：低谷FEV₁(例如＞125ml)的改善，现有控制疗法减少，健康相关的QoL(例如哮喘生活质量问卷(AQLQ))的改善，或症状得分/缓解药物使用的改善。

在一个方面中，在上述方法之一中，抗IL-23A抗体是抗体A、抗体B、抗体C或抗体D。

在一个方面中，在上述方法之一中，抗IL-23A抗体通过皮下施用向所述患者施用。

在一个方面中，本发明提供了用于在本文所述方法中，例如在哮喘特别是重度持续性哮喘(例如本文所述)的治疗中使用的抗IL-23A抗体。

在一个方面中，本发明提供了抗IL-23A抗体的用途,其用于制备用于治疗哮喘，特别是重度持续性哮喘(例如本文所述)的药物。

在一个实施方案中，在上述任何一种方法或用途中，抗-IL-23A抗体为以下公开的抗-IL-23A抗体。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变区(CDR1-L)；SEQ ID NO:2的氨基酸序列(CDR2-L)；和SEQ ID NO:3的氨基酸序列(CDR3-L)；和包含SEQ ID NO:4、7、8或9的氨基酸序列的重链可变区(CDR1-H)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(CDR2-H)；和SEQ ID NO:6的氨基酸序列(CDR3-H)。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变区(CDR1-L)；SEQ ID NO:2的氨基酸序列(CDR2-L)；和SEQ ID NO:3的氨基酸序列(CDR3-L)；和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区(CDR1-H)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(CDR2-H)；和SEQ ID NO:6的氨基酸序列(CDR3-H)。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变区(CDR1-L)；SEQ ID NO:2的氨基酸序列(CDR2-L)；和SEQ ID NO:3的氨基酸序列(CDR3-L)；和包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变区(CDR1-H)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(CDR2-H)；和SEQ ID NO:6的氨基酸序列(CDR3-H)。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变区(CDR1-L)；SEQ ID NO:2的氨基酸序列(CDR2-L)；和SEQ ID NO:3的氨基酸序列(CDR3-L)；和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区(CDR1-H)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(CDR2-H)；和SEQ ID NO:6的氨基酸序列(CDR3-H)。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变区(CDR1-L)；SEQ ID NO:2的氨基酸序列(CDR2-L)；和SEQ ID NO:3的氨基酸序列(CDR3-L)；和包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区(CDR1-H)；SEQ ID NO:5的氨基酸序列(CDR2-H)；和SEQ ID NO:6的氨基酸序列(CDR3-H)。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:10、11、12或13中任一个氨基酸序列的轻链可变区；和包含SEQ ID NO:14、15、16或17中任一个氨基酸序列的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包含与人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA或IgE重链恒定区连接的氨基酸序列SEQ ID NO:14或15。在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包含与人IgG1重链恒定区连接的SEQ ID NO:14或15的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包含与人κ或λ轻链恒定区连接的SEQ ID NO:10或11的氨基酸序列。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包含与人IgG1重链恒定区连接的SEQ ID NO:14或15的氨基酸序列；和与人κ轻链恒定区连接的SEQ ID NO:10或11的氨基酸序列。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体是人源化单克隆抗体，其包括包含选自SEQ IDNO:10、11、12和13中任一个的氨基酸序列的轻链可变区，和包含选自SEQ ID NO:14、15、16和17中的任一个的氨基酸序列的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体是人源化单克隆抗体，其包括包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体是人源化单克隆抗体，其包括包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体是人源化单克隆抗体，其包括包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变区，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:14的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体是人源化单克隆抗体，其包括包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变区，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:15的重链可变区。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:18或21的氨基酸序列的轻链，和包含SEQ ID NO:19或20的氨基酸序列的重链。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链，和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链，和包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的重链。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链，和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体包括：包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链，和包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的重链。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体是抗体A、抗体B、抗体C或抗体D。

在一个实施方案中，抗IL-23A抗体如WO2007/005955、WO2007/024846、WO2007/027714、WO2007/076524、WO2008/103432或WO2012/061448中所公开。

附图说明

图1：用IL-23处理大鼠精密切割(precision-cut)肺切片后的IL8(CINC1)的释放(中位数，四分位范围和5-95％置信区间)。

图2：用IL-23处理大鼠精密切割肺切片后的IL22的释放(中位数，四分位范围和5-95％置信区间)。

图3：来自由IL23刺激的大鼠精密切割肺切片(PCLS)的IL22释放。数据以散点图显示并描述了平均值±SD。重复试验来源于n＝5-6只大鼠。平均值利用非参数Kruskal-Wallis检验进行比较，然后进行Dunn后检验(Dunn’s post test)。

图4A和4B：用IL23(A)或IL17(B)刺激的来自人PCLS的IL22释放。数据以散点图显示并描述了平均值±SD。重复试验来源于n＝3名人供体。每个供体的批次以复本进行，并在细胞因子分析之前合并上清液。平均值通过单因素方差分析进行比较，然后进行Dunnett’s多重比较检验；*，p＜0.05对比对照组。

具体实施方式

发明详述

IL-23的p19亚基(本文中也称为“IL-23A”、“IL-23p19”和“p19亚基”)，是含有21aa前导序列的189个氨基酸的多肽(Oppmann等人,Immunity 13:715(2000),SEQ ID NO:22)。该分子的生物学活性只有当其与IL-12p40亚基配对而形成IL-23时才能检测到。IL-23主要由活化的树突状细胞(DCs)和吞噬细胞表达。

SEQ ID NO:22：

mlgsravmll lllpwtaqgr avpggsspaw tqcqqlsqkl ctlawsahpl vghmdlreeg

deettndvph iqcgdgcdpq glrdnsqfcl qrihqglify ekllgsdift gepsllpdsp

vgqlhasllg lsqllqpegh hwetqqipsl spsqpwqrll lrfkilrslq afvavaarvf

ahgaatlsp

发现IL-23的受体由与称为IL-23R的独特亚基配对的IL-12受体的IL-12Rβ1亚基构成(Parham等人,J.Immunol.168:5699(2002))。主要在记忆T细胞(例如Th17细胞)和NK细胞上检测到所述受体的表达。因此，这种细胞因子：受体对的表达，似乎限于免疫细胞的特异性群体。发现IL-23亚单元决定性地参与Th17细胞的产生和维持(Kikly等人,Curr.Opin.Immunol.18:670(2006),Kastelein等人,Ann.Rev.Immunol.25:221(2007))。这些细胞产生IL-17A、IL-17F、IL-22和其他促炎性细胞因子如IL-6和TNF-α。最近，越来越明显的是，IL23R标记在实验性自身免疫性脑脊髓炎中分泌GM-CSF的Th17细胞的特异性致病亚群，表明Th17细胞的特异性亚群可能驱动疾病。如下所述，对这些Th17细胞的作用的动物模型研究，显示它们作为慢性炎症和自身免疫的驱动力的重要性。

最近，已经在哮喘中研究了Th17细胞以及Th2细胞和Th2/Th17双阳性细胞的作用，以及由这些类型的细胞表达或控制的细胞因子(即IL17A、IL17F)的作用。然而，目前尚不清楚靶向这些细胞因子之一特别是IL-23，是否能例如通过减轻发作而带来对重度哮喘患者的治疗性益处。

本发明提供了用于治疗哮喘，特别是重度持续性哮喘的方法，其包括向患者施用抗IL-23A抗体。在一个方面中，本发明的方法用于治疗患有嗜中性粒细胞哮喘的患者，即痰中的嗜中性粒细胞水平升高的患者，也称为嗜中性粒细胞哮喘患者。因此，在一个方面中，在本发明的方法中，患者是嗜中性粒细胞哮喘患者。在另一方面中，本发明的方法用于治疗患有嗜酸粒细胞型哮喘的患者，即患有痰中的嗜酸性粒细胞水平升高的患者，也称为嗜酸细胞型哮喘患者。因此，在一个方面中，在本发明的方法中，患者是嗜酸粒细胞型哮喘患者。在另一方面中，本发明的方法用于治疗患有混合型哮喘的患者，即患有痰中的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞水平升高的患者。因此，在一个方面中，在本发明的方法中，患者是患有混合型哮喘的患者。在另一方面中，本发明的方法用于治疗患有少粒细胞型哮喘的患者，即在痰中具有正常或低于正常水平的粒细胞的患者。因此，在一个方面中，在本发明的方法中，患者是患有少粒细胞型哮喘的患者。

在一个方面中，重度持续性哮喘指按照GINA指南(全球哮喘防治创议，GlobalInitiative for Asthma)以前的分类，例如2012年和2014年的分类，但将对于哮喘患者的纳入和排除标准定义为根据关于哮喘控制的最近的GINA指南(GINA 2015)。这些是根据2015指南(GINA 2015)需要步骤4或5治疗方案的患者。

一方面，患有严重持续性哮喘的患者也服用中等或高剂量的ICS，加上至少一种控制发作药物(例如LABA、LTRA、茶碱)。

在一个方面中，哮喘的类型由诱导痰，血细胞计数或由血液生物标记物分类，血液生物标记物可以是嗜酸性粒细胞和/或各种细胞因子或其他蛋白质或基因表达。

在另一方面中，在本发明的方法中对患者治疗哮喘，特别是由Th17细胞或对IL-23响应的细胞介导的重度持续性哮喘。在另一方面中，在本发明的方法中，对患者治疗哮喘，特别是由Th2细胞介导的重度持续性哮喘。在另一方面中，在本发明的方法中，对患者治疗哮喘，特别是由Th2/Th17双阳性细胞或对Th2响应细胞因子和IL-23有响应的细胞介导的重度持续性哮喘。

在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗或预防哮喘发作的方法，其包括向患有重度持续性哮喘的患者施用抗IL-23A抗体。

在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗或预防哮喘发作、和用于治疗或控制重度哮喘的症状的方法，其包括向患有重度持续性哮喘的患者施用抗IL-23A抗体。

在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗重度持续性哮喘的方法，其包括按足以减少哮喘的症状的时间表和一次的剂量，向成年患者皮下施用抗IL-23A抗体。

在另一方面中，本发明提供一种用于治疗重度持续性哮喘的方法，其包括通过以每四周一次，每次90mg的剂量向成年患者皮下施用抗IL-23A抗体，从而减轻哮喘的症状。

在另一方面中，本发明提供一种用于治疗重度持续性哮喘的方法，其包括以每四周一次，每次90mg的剂量向成年患者皮下施用选自抗体A、抗体B、抗体C或抗体D的抗IL-23A抗体，从而减轻哮喘的症状。

在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗重度持续性哮喘的方法，其包括以每四周一次，每次90mg的剂量向成人患者皮下施用抗IL-23A抗体A，从而减轻哮喘的症状。

在一个方面中，在本文所述的方法中，治疗、预防、控制或减少通过所述患者的年发作速率的降低来测量，例如具有0.75的风险比(HR)。

在一个方面中，在本文所述的方法中，治疗、预防、控制或减少通过以具有哮喘控制问卷(ACQ)得分降低0.5个单位(20％)的患者的比例的相对改善来测量。

在一个方面中，在本文所述的方法中，治疗、预防、控制或减少通过以下指标测量：低谷FEV₁的改善(例如＞125ml)，健康相关的QoL(例如哮喘生活质量问卷(AQLQ))的改善，或症状评分/缓解药物使用的改善。

在另一方面中，在本发明的方法中，患者不被吸入型皮质类固醇充分控制。在另一方面中，患者不被吸入型皮质类固醇和第二控制发作药物充分控制。在另一方面中，患者是年龄12岁以上。

在一个方面，本发明提供了在本文所述方法中，特别是在哮喘特别是例如本文所述的重度持续性哮喘的治疗中使用的抗IL-23A抗体。

在一个方面中，本发明提供了一种抗IL-23A抗体的用途，其用于制备用于治疗哮喘，特别是例如本文所述的重度持续性哮喘的药物。

在一个实施方案中，在上述方法中任一种中的抗IL-23A抗体在本文公开。

在一个方面中，在上述方法中任一种中，向所述患者施用包含抗IL-23A抗体的药物组合物。在一个方面中，向患者施用在实施例3中公开的包含抗IL-23A抗体，例如抗体A、抗体B、抗体C或抗体D的制剂2。在一个方面中，向患者施用在实施例3中公开的包含抗IL-23A抗体，例如抗体A、抗体B、抗体C或抗体D的制剂3。

在一个方面中，抗IL-23A抗体是人源化抗体。在一个方面中，抗IL-23A抗体是单克隆抗体。在一个方面中，抗IL-23A抗体是全长抗体。在一个方面中，抗IL-23A抗体是人源化单克隆抗体，例如全长人源化单克隆抗体。

本文所述的抗体识别特异性的“IL-23A抗原表位”或“IL-23A表位”。如本文所用，这些术语是指能够与抗IL-23A抗体免疫响应的分子(例如肽)或分子片段，且例如包括由具有以下轻链/重链序列组合的任何抗体识别的IL-23A抗原决定簇：SEQ ID NO:11/14、11/15、10/14或10/15。

抗体或免疫球蛋白的一般化结构为本领域技术人员所熟知。这些分子为通常约150,000道尔顿(dalton)的杂四聚糖蛋白，由两条相同轻(L)链及两条相同重(H)链构成且通常称为全长抗体。各轻链由一个二硫键与重链共价连接以形成杂二聚体，且杂四聚分子经由杂二聚体的两条相同重链之间的共价二硫键形成。尽管轻链与重链由一个二硫键连接在一起，但两条重链之间的二硫键数目随免疫球蛋白同种型而变化。各重链及轻链亦具有规则间隔的链内二硫桥。各重链在氨基端具有可变域(V_H)，随后为三个或四个恒定域(C_H1、C_H2、C_H3及C_H4)以及介于C_H1与C_H2之间的铰链区。各轻链具有两个域，即氨基端可变域(V_L)及羧基端恒定域(C_L)。V_L域与V_H域非共价缔合，而C_L域通常经由二硫键与C_H1域共价连接。据信特定氨基酸残基在轻链与重链可变域之间形成界面(Chothia等人，1985，J.Mol.Biol.186：651-663)。可变域在本文中也称为可变区。

可变域内的某些域在不同抗体之间颇为不同，亦即为“高变的”。这些高变域含有直接参与各特定抗体对其特定抗原决定簇的结合及特异性中的残基。轻链与重链可变域两者的高变性集中在称为互补决定区(CDR)或高变环(HVL)的三个区段中。CDR通过Kabat等人，1991，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版,Public HealthService，National Institutes of Health，Bethesda，Md.中的序列比较确定，而HVL(在本文中亦称为CDR)根据可变域的三维结构确定结构，如由Chothia及Lesk，1987，J.Mol.Biol.196：901-917所述。此两种方法会导致对CDR的鉴定略有不同。如由Kabat所确定，CDR-L1位于轻链可变域中的约残基24-34处，CDR-L2位于约残基50-56处，且CDR-L3位于约残基89-97处；CDR-H1位于重链可变域中的约残基31-35处，CDR-H2位于约残基50-65处，且CDR-H3位于约残基95-102处。涵盖特定CDR的精确残基数目将视CDR的序列及尺寸而变化。本领域技术人员可鉴于抗体的可变区氨基酸序列按常规确定哪些残基构成特定CDR。因此，重链和轻链的CDR1，CDR2，CDR3定义了给定抗体特异的独特和功能特性。

每一重链及轻链内的三个CDR为由骨架区(FR)来间隔，骨架区含有可变性通常较低的序列。自重链及轻链可变域的氨基末端至羧基末端，FR及CDR以以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。FR的较大β-折叠构型使每一链内的CDR彼此紧邻且与另一链中的CDR紧邻。所得构象有助于抗原结合位点(参见Kabat等人，1991，NIH Publ.第91-3242号，第I卷，第647-669页)，但并非所有CDR残基皆必须直接参与抗原结合。

FR残基及Ig恒定域并不直接参与抗原结合，但有助于抗原结合和/或介导抗体效应子功能。人们认为，一些FR残基以至少三种方式对抗原结合产生显著效应：直接与表位非共价结合，与一或多个CDR残基相互作用，及影响重链及轻链之间的接口。恒定域并不直接参与抗原结合，但介导各种Ig效应子功能，例如介导抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞毒性(CDC)及抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。

可基于恒定域的氨基酸序列将脊椎动物免疫球蛋白的轻链分配至两个显著不同的种类(κ及λ)中的一类。通过比较，根据恒定域的序列将哺乳动物免疫球蛋白的重链分为以下五个主要类别：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。将IgG及IgA进一步分为亚类(同种型)，例如IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁及IgA₂。对应于不同免疫球蛋白种类的重链恒定域分别称作α、δ、ε、γ及μ。各天然免疫球蛋白种类的亚单元结构及三维构型为人所熟知。

术语“抗体”、"抗IL-23A抗体"、“抗IL-23p19抗体”、“人源化抗IL-23A抗体"、“人源化抗IL-23p19表位抗体”、“人源化抗IL-23A表位抗体"及”人源化抗IL-2319表位抗体"、“变体人源化抗IL-23A表位抗体”和"变体人源化抗IL-23p19表位抗体"具体涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、及表达期望生物学活性(例如IL-23A结合)的抗体片段(例如可变域及抗体的其他部分)。术语“单克隆抗体”(mAb)是指具有高度特异性，即针对单一抗原决定簇(即“表位”)具有高度特异性。因此，修饰词“单克隆”指示针对相同表位的抗体，且不应理解为需要通过任何特定方法来产生该抗体。应理解，单克隆抗体可通过本领域已知的任何技术或方法来制备；包括(例如)杂交瘤方法(Kohler等人，1975，Nature 256：495)，或本领域已知的重组DNA方法(例如，参见美国专利第4,816,567号)，或使用噬菌体抗体文库通过以下文献中所述技术分离以重组方式产生的单克隆抗体的方法：Clackson等人，1991，Nature 352：624-628；及Marks等人，1991，J.Mol.Biol.222：581-597。

术语“单体”是指抗体的均质形式。例如，对于全长抗体，单体是指具有两条相同重链及两条相同轻链的单体抗体。

嵌合抗体为由来自一个物种(例如，非人哺乳动物，例如小鼠)的抗体重链及轻链可变区及另一物种(例如，人)抗体的重链及轻链恒定区组成，且可通过以下方式来获得：连接来自第一物种(例如，小鼠)的编码抗体可变区的DNA序列与来自第二物种(例如人)的编码抗体恒定区的DNA序列，并用含有所述经连接序列的表达载体转化宿主，从而使其可产生嵌合抗体。或者，嵌合抗体中，重链和/或轻链中的一或多个区域或域亦可与来自另一免疫球蛋白种类或同种型的单克隆抗体中的对应序列相同、同源或为其变体、或来自共有序列或种系序列。嵌合抗体可包括所述抗体的片段，条件是抗体片段表达出其亲代抗体的期望生物学活性，例如与相同表位结合(例如，参见美国专利第4,816,567号；及Morrison等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855)。

术语"抗体片段"、"抗IL-23A抗体片段"、"抗IL-23A表位抗体片段"、"人源化抗IL-23A抗体片段"、"人源化抗IL-23A表位抗体片段"、"变体人源化抗IL-23A表位抗体片段"指全长抗IL-23A抗体的一部分，其中保留可变域或或功能能力，例如特异性IL-23A表位结合。抗体片段的实例包括(但不限于)Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、Fv、scFv和scFv-Fc片段。

可用例如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶等酶处理全长抗体以生成可用抗体片段。使用木瓜蛋白酶消化来产生两个相同的称作“Fab”片段的抗原结合抗体片段(各自具有单一抗原结合位点)及残留的“Fc”片段。Fab片段亦含有轻链恒定域及重链C_H1域。胃蛋白酶处理产生F(ab')₂片段，其具有两个抗原结合位点且仍能交联抗原。

Fab'片段与Fab片段的不同之处在于在C_H1域的C末端存在额外残基，包括一或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸。F(ab')₂抗体片段为通过铰链区中的半胱氨酸残基连接的Fab'片段对。亦已知抗体片段的其他化学偶联。

“Fv”片段含有完整抗原识别及结合位点，该位点为由一个重链可变域与一个轻链可变域呈紧密非共价连接的二聚体组成。在此构型中，每一可变域的三个CDR相互作用，从而在该V_H-V_L二聚体的表面上界定抗原结合位点。该六个CDR共同赋予该抗体抗原结合特异性。

“单链Fv”或“scFv”抗体片段为包含抗体V_H及V_L域的单链Fv变体，其中所述域存在于单一多肽链中。单链Fv能识别并结合抗原。scFv多肽亦可任选含有位于V_H域与V_L域之间的多肽接头，以促进scFv形成用于抗原结合的期望三维结构(例如，参见Pluckthun，1994，InThe Pharmacology of monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore编辑，Springer-Verlag，New York，第269-315页)。

“人源化抗体”或“人源化抗体片段”为特定类型的嵌合抗体，其包括免疫球蛋白氨基酸序列变体或其片段，其能结合预定抗原，且其包含一或多个基本上具有人免疫球蛋白氨基酸序列的FR及一或多个基本上具有非人免疫球蛋白氨基酸序列的CDR。此非人氨基酸序列通常称作“输入”序列，通常取自“输入”抗体域，尤其是可变域。通常，人源化抗体至少包括非人抗体的CDR或HVL，插入人重链或轻链可变域的FR之间。本发明阐述特定人源化抗IL-23A抗体，其含有插入人种系序列重链及轻链可变域的FR之间的表1及2所示源自鼠类单克隆抗体的CDR或人源化CDR。应理解，一定鼠类FR残基可能对人源化抗体的功能重要，且因此将修饰一定人种系序列重链及轻链可变域残基，以与对应鼠类序列中的那些相同。

在另一方面中，人源化抗IL-23A抗体基本上包含所有至少一个(通常两个)可变域(例如含于例如Fab、Fab'、F(ab')₂、Fabc及Fv片段中者)，其中所有或基本上所有CDR对应于非人免疫球蛋白的CDR，且在本文中特别是所有CDR为本文下表1至2中所详述的鼠类序列或人源化序列，且所有或基本上所有FR为人免疫球蛋白共有序列或种系序列的FR。在另一方面中，人源化抗IL-23A抗体亦包括免疫球蛋白(通常为人免疫球蛋白)Fc区的至少一部分。通常，抗体含有轻链以及至少重链可变域二者。若适宜，抗体亦可包括重链C_H1、铰链、C_H2、C_H3和/或C_H4区中的一或多者。

人源化抗IL-23A抗体可选自任一种类免疫球蛋白(包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE)及任一同种型(包括IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁及IgA₂₎。例如，恒定域可为补体固定的恒定域，其中期望人源化抗体表达细胞毒性活性，且同种型通常为IgG₁。倘若不期望该细胞毒性活性，则恒定域可为另一同种型，例如IgG₂。替代性人源化抗IL-23A抗体可包含来自不止一种免疫球蛋白种类或同种型的序列，且本领域技术人员可熟练选择特定恒定域来优化所期望的效应子功能。在具体实施方案中，本发明所提供抗体为IgG1抗体，且更具体而言为剔除效应子功能的IgG1抗体。

人源化抗IL-23A抗体的FR及CDR或HVL不需要与亲代序列精确对应。例如，可通过取代、插入或缺失来改变(例如，诱变处理)输入CDR或HVL或共有FR或种系FR序列中的一或多个残基，从而使得所得氨基酸残基与任一亲代序列中对应位置的原始残基不再相同，但抗体仍保留与IL-23A结合的功能。该改变通常可并非广泛改变且可为保守改变。通常，至少75％人源化抗体残基可与亲代共有FR或种系FR及输入CDR序列中的那些残基对应，更通常有至少90％、且最通常有超过95％或超过98％或超过99％的残基对应。

影响重链与轻链可变区之间的接口(“V_L-V_H接口”)的免疫球蛋白残基为那些影响两条链相对于彼此接近或定向的残基。某些可能参与链间相互作用的残基包括V_L残基34、36、38、44、46、87、89、91、96及98以及V_H残基35、37、39、45、47、91、93、95、100及103(采用Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutesof Health，Bethesda，Md.，1987)中所述的编号系统)。美国专利第6,407,213号亦论述，例如V_L残基43及85以及V_H残基43及60等残基亦可能参与此相互作用。尽管仅针对人IgG阐述所述残基，但其亦适用于其他物种。选择合理地预期参与链间相互作用的重要抗体残基用于共有序列中的取代。

术语“共有序列”及“共有抗体”是指在任一特定种类、同种型或亚单元结构的所有免疫球蛋白(例如人免疫球蛋白可变域)中的每一位置包含最常出现的氨基酸残基的氨基酸序列。共有序列可基于特定物种或多个物种的免疫球蛋白。“共有”序列、结构或抗体可理解为涵盖一定实施方案中所述的共有人序列，且是指在任一特定种类、同种型或亚单元结构的所有人免疫球蛋白中的每一位置包含最常出现的氨基酸残基的氨基酸序列。因此，共有序列所含有的氨基酸序列在每一位置具有存在于一或多种已知免疫球蛋白中的氨基酸，但其可能并不精确复制任一单一免疫球蛋白的整个氨基酸序列。可变区共有序列并非自任何天然产生的抗体或免疫球蛋白及其变体均可获得(Kabat等人，1991，Sequences ofProteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，NationalInstitutes of Health，Bethesda，Md.)。重链及轻链共有序列及其变体的FR为人源化抗IL-23P19抗体的制备提供可用序列。例如，参见美国专利第6,037,454号及第6,054,297号。

人种系序列天然存在于人种群中。所述种系基因的组合产生抗体多样性。抗体轻链的种系抗体序列来自保守人种系κ或λv-基因及j-基因。类似地，重链序列来自种系v-、d-及j-基因(LeFranc，M-P及LeFranc，G，“The Immunoglobulin Facts Book”AcademicPress，2001)。

如本文所用，“变体”、“抗IL-23A变体”、“人源化抗IL-23A变体”或“变体人源化抗IL-23A”各自是指至少具有来自如表1中所示的任何序列的轻链可变鼠类CDR序列、或至少具有如表2中所示的源于鼠类单克隆抗体的重链鼠类CDR序列的人源化抗IL-23A抗体。变体包括在一或两个轻链或重链可变域中具有一或多个氨基酸变化的变体，其限制条件为氨基酸变化不会实质上损害抗体与IL-23A的结合。本文中产生的例示性抗体包括称为抗体A、抗体B、抗体C及抗体D的抗体，且所述抗体的各种轻链及重链分别展示于SEQ ID NO:18及21、以及SEQ ID NO:19及20中。

“分离的”抗体为已经鉴定且已自其天然环境组分中分离和/或回收的抗体。抗体天然环境中的污染物组分为那些可干扰抗体的诊断性或治疗性应用的物质，且可为酶、激素或其他蛋白性或非蛋白性溶质。在一个方面中，可将抗体纯化至以抗体重量计分离度至少大于95％。

由于抗体天然环境中的至少一种组分不会存在，故分离的抗体包括产生其的重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常可通过至少一个纯化步骤来制备，其中移除了重组细胞物质。

术语“抗体性能”是指有助于抗体识别抗原或者抗体活体内效力的因素。抗体氨基酸序列的变化可影响例如折叠等抗体特性，且可影响例如以下的物理因素：抗体与抗原结合的初始速率(k_a)、抗体与抗原的解离常数(k_d)、抗体对抗原的亲和常数(Kd)、抗体构象、蛋白稳定性及抗体半衰期。

本文所用术语“表位标记的”是指抗IL-23A抗体与“表位标签”融合。“表位标签”为具有足量氨基酸以为抗体产生提供表位的多肽，且其经设计以使得其不干扰抗IL-23A抗体的期望活性。表位标签通常具有充分独特性以使得针对该表位标签产生的抗体基本上不会与其他表位交叉响应。适宜的标签多肽一般含有至少6个氨基酸残基且通常含有约8至50个氨基酸残基或约9至30个残基。表位标签及结合表位的抗体的实例包括流感HA标签多肽及其抗体12CA5(Field等人，1988Mol.Cell.Biol.8：2159-2165)；c-myc标签及其8F9、3C7、6E10、G4、B7及9E10抗体(Evan等人，1985，Mol.Cell.Biol.5(12)：3610-3616)；及单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体(Paborsky等人，1990，Protein Engineering 3(6)：547-553)。在一定实施方案中，表位标签为“补救受体结合表位”。本文所用术语“补救受体结合表位(salvage receptor binding epitope)”是指IgG分子(例如IgG₁、IgG₂、IgG₃或IgG₄)Fc区中的表位，其负责延长IgG分子的活体内血清半衰期。

出于诊断性以及治疗性监测目的亦可使本发明的抗体与标记(单独的标记或者标记与另外的第二药物(前药、化学治疗药物等))缀合。标记与其他第二药物不同，其是指可检测的化合物或组合物药物，且其可与本发明的抗体直接或间接缀合。标记本身可被可检测(例如，放射性同位素标记或荧光标记)，或在酶标记情况下，标记可催化底物化合物或组合物发生可检测的化学变化。可制备经标记抗IL-23A抗体并用于各种应用中，包括活体外及活体内诊断学。

在本发明各方面中，重组表达所述抗体的一或多个域。该重组表达可采用一或多种控制序列，即在特定宿主有机体中表达可操作连接的编码序列所需的聚核苷酸序列。适用于原核细胞中的控制序列包括(例如)启动子、操纵子及核糖体结合位点序列。真核控制序列包括(但不限于)启动子、聚腺苷酸化信号及增强子。所述控制序列可用于在原核及真核宿主细胞中表达及产生抗IL-23A抗体。

在使核酸序列与另一核酸序列具有功能性联系时，该核酸序列经“可操作连接”。例如，若前序列或分泌前导序列表达为参与多肽分泌的前蛋白，则该前序列或分泌前导序列与编码该多肽的核酸可操作连接；若启动子或增强子影响该序列的转录，则该启动子或增强子与该序列可操作连接；或若核糖体结合位点的定位可促进翻译，则该核糖体结合位点与该编码序列可操作连接。通常，“可操作连接”意指所连接DNA序列为连续序列，且在分泌前导序列情形下为连续序列且位于阅读框内。然而，增强子任选是连续的。可通过在便捷的限制位点处接合来完成连接。若不存在所述位点，则可使用合成寡核苷酸衔接子或接头。

本文所用术语“细胞”、“细胞系”及“细胞培养物”可互换使用，且所有所述名称皆包括其子代。因此，“转化体”及“转化细胞”包括原代受试者细胞及其衍生的培养物而不考虑转移次数。

用于治疗目的的术语“哺乳动物”是指任何归类为哺乳动物的动物，包括人、家畜及农场动物，以及动物园动物、运动用动物或宠物，例如狗、马、猫、牛等。优选地，哺乳动物为人。

本文所用“病症”为可受益于使用本文所述抗IL-23A抗体治疗的任何病况。该术语包括慢性及急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所述病症的病理学病况。

如本文所用，术语“IL-23相关病症”或“IL-23相关疾病”是指由IL-23活性促成、且IL-23通常异常表达的病状。IL-23相关病症包括免疫系统疾病及病症，例如自身免疫病症及炎症疾病。该条件包括以下疾病：银屑病、炎性肠道疾病，例如溃疡性结肠炎或克罗恩病，和脊椎关节炎，例如强直性脊椎炎、放射学阴性中轴脊椎关节炎、外周脊椎关节炎或银屑病性关节炎。

术语“静脉内输注”是指在动物或人患者静脉中经大于约15分钟、一般介于约30至90分钟之间的一段时间引入药物。

术语“静脉内推注”或“静脉内推射”是指将药物施用至动物或人的静脉中，从而使机体在约15分钟或更短、一般5分钟或更短时间内接受药物。

术语“皮下施用”是指在动物或人患者的皮肤下、优选在皮肤与基底组织之间的囊内通过自药物贮器相对缓慢的持续递送来引入药物。将皮肤向上捏离或拉离基底组织可产生囊。

术语“皮下输注”是指在动物或人患者的皮肤下、优选在皮肤与基底组织之间的囊内经一段时间(包括(但不限于)30分钟或更短、或90分钟或更短)通过自药物贮器相对缓慢的持续递送来引入药物。任选地，输注可通过皮下植入药物递送泵(植入动物或人患者的皮肤下)来实施，其中该泵经预定时间段(例如30分钟、90分钟或跨越整个治疗方案的时间段)递送预定量的药物。

术语“皮下推注”是指在动物或人患者的皮肤下施用药物，其中推注药物递送短于约15分钟；在另一方面中，短于5分钟；且在另一方面中，短于60秒。在另一方面中，在皮肤与基底组织之间的囊内施用，其中该囊可通过将皮肤向上捏离或拉离基底组织来产生。

所用术语“治疗有效量”是指活性药物可缓解或改善所治疗病症的一或多种症状的量。在另一方面中，治疗有效量是指已显示可有效(例如)减慢疾病进展的目标血清浓度。可取决于欲治疗病况以常用方式来测量功效。

本文所用“治疗”及“疗法”及类似术语意欲包括针对疾病或病症的治疗性以及预防性或抑制性措施，其产生任何临床上期望或有益的效应，包括(但不限于)减轻或缓解疾病或病症的一或多个症状、使疾病或病症消退、减慢或停止疾病或病症的进展。因此，例如，术语治疗包括在疾病或病症的症状发作之前或之后施用药物，由此预防或消除疾病或病症的一或多个体征。作为另一实例，该术语包括在疾病的临床表达后施用药物，从而抵抗该疾病的症状。此外，在发作后及在已出现临床症状后施用药物包含本文所用“治疗”或“疗法”，其中不论该治疗是否引起疾病改善，施用皆影响疾病或病症的临床参数，例如组织损伤度或转移的量或程度。另外，只要单独或与另一治疗药物组合的本发明组合物与未使用抗IL-23A抗体组合物时相比减轻或改善所治疗病症的至少一个症状，不论是否减轻该病症的所有症状，该结果即应视为可有效治疗潜在病症。

所用术语“包装说明书”是指通常包括于治疗产品商业包装内的说明书，其含有关于使用所述治疗产品的适应症、用法、施用、禁忌症和/或警告的信息。

抗体

本发明的内容中使用的所选抗体的CDRs示于表1和2中。本发明上下文中使用的所选抗体的可变区显示在表3和4中。

表1：轻链CDR序列

表2：重链CDR序列

表3：人源化6B8-VK序列

表4：人源化6B8-VH序列

源于小鼠抗体6B8的人源化轻链可变区及重链可变区的所选组合产生抗体A、B、C及D：

抗体A：具有IgK-66的6B8-IgG1KO-2(重链可变区6B8CVH-02及轻链可变区6B8CVK-66)；

抗体B：具有IgK-66的6B8-IgG1KO-5(重链可变区6B8CVH-05及轻链可变区6B8CVK-66)；

抗体C：具有IgK-65的6B8-IgG1KO-2(重链可变区6B8CVH-02及轻链可变区6B8CVK-65)；

抗体D：具有IgK-65的6B8-IgG1KO-5(重链可变区6B8CVH-05及轻链可变区6B8CVK-65)。

抗体A、B、C及D具有展示于表5中的重链及轻链序列。

表5：抗体A、B、C及D的重链及轻链DNA及氨基酸序列

上表5中，抗体A、B、C及D的轻链可变区及重链可变区加有下划线。

在另一个实施方案中，抗IL-23A抗体包含轻链序列SEQ ID NO:18及重链序列SEQID NO:19。在另一个实施方案中，抗IL-23A抗体包含轻链序列SEQ ID NO:18及重链序列SEQID NO:20。在另一个实施方案中，抗IL-23A抗体包含轻链序列SEQ ID NO:21及重链序列SEQID NO:19。在另一个实施方案中，抗IL-23A抗体包含轻链序列SEQ ID NO:21及重链序列SEQID NO:20。

在另一个实施方案中，抗IL-23A抗体由轻链序列SEQ ID NO:18及重链序列SEQ IDNO:19组成。在另一个实施方案中，抗IL-23A抗体由轻链序列SEQ ID NO:18及重链序列SEQID NO:20组成。在另一个实施方案中，抗IL-23A抗体由轻链序列SEQ ID NO:21及重链序列SEQ ID NO:19组成。在另一个实施方案中，抗IL-23A抗体由轻链序列SEQ ID NO:21及重链序列SEQ ID NO:20组成。

在另一个实施方案中，抗IL-23A抗体在由SEQ ID NO:22的氨基酸残基108至126及氨基酸残基137至151组成的表位处与人类IL23A结合。

在另一个实施方案中，一种与本发明的抗体(例如本文所述的抗体A、抗体B、抗体C抗体D)竞争性结合人类IL-23A的抗IL23A抗体。可使用本领域中已知的竞争结合分析来测量抗体竞争性结合IL23A的能力。

在一些实施方案中，阐述轻链可变区序列具有SEQ ID NO:10、11、12或13所示氨基酸序列的抗IL-23A抗体。在一些实施方案中，阐述重链可变区区序列具有SEQ ID NO:14、15、16或17(参见以上表3和4)所示氨基酸序列的抗IL-23A抗体。这些抗体的CDR序列展示于表1及表2中。例如，抗IL-23A抗体为，具有轻链可变区与重链可变区的组合为SEQ ID NO:11/14、11/15、10/14或10/15的单克隆抗体。这些可变区可与人类恒定区组合。

聚核苷酸、载体、宿主细胞及重组方法

其它实施方案涵盖包含编码抗IL-23A抗体的序列的分离聚核苷酸，和包含所述多核苷酸的载体、宿主细胞，和用于产生所述人源化抗体的重组技术。所述分离多核苷酸能够编码所述抗IL-23A抗体的任何期望形式，包括例如全长单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')₂和Fv片段。

包含编码抗IL-23A抗体的序列的聚核苷酸可与一或多种本领域已知的调节或控制序列融合，且可含于本领域已知的适宜的表达载体或宿主细胞中。编码重链或轻链可变域的每一聚核苷酸分子皆可独立地与编码恒定域(例如人恒定域)的聚核苷酸序列融合，从而使得能产生完整抗体。或者，可使聚核苷酸或其部分融合在一起，从而提供产生单链抗体的模板。

对于重组产生，将编码抗体的聚核苷酸插入可复制载体中以供克隆(扩增DNA)或表达。可使用多种适合表达重组抗体的载体。载体组分一般包括(但不限于)以下中的一或多者：信号序列、复制起点、一或多个标记基因、增强子组件、启动子及转录终止序列。

抗IL-23A抗体亦可以融合多肽形式产生，其中抗体与异源多肽融合，例如信号序列或在成熟蛋白或多肽的氨基末端具有特异性裂解位点的其他多肽。所选异源性信号序列通常为宿主细胞可识别及加工(即，通过信号肽酶裂解)的序列。对于不能识别并加工抗IL-23A抗体信号序列的原核宿主细胞而言，信号序列可由原核信号序列取代。信号序列可为(例如)碱性磷酸酶、青霉素酶、脂蛋白、耐热肠毒素II前导序列等。对于酵母分泌，可用(例如)以下信号来取代天然信号序列：得自酵母转化酶α-因子的前导序列(包括酵母菌属(Saccharomyces)及克鲁维酵母属(Kluyveromyces)α-因子前导序列)、酸性磷酸酶、白色念珠菌(C.albicans)葡糖淀粉酶或WO90/13646中所述的信号。在哺乳动物细胞中可使用哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导序列(例如单纯疱疹病毒gD信号)。该前体区的DNA在阅读框中与编码抗IL-23A抗体的DNA接合。

表达及克隆载体含有使载体能在一或多个所选宿主细胞中复制的核酸序列。通常，在克隆载体中，此序列为使载体能独立于宿主染色体DNA而复制者，且其包括复制起点或自主复制序列。用于多种细菌、酵母及病毒的所述序列为本领域所熟知。来自质粒pBR322的复制起点适用于大多数革兰氏(Gram)阴性细菌，2-υ质粒起点适用于酵母，且多种病毒起点(SV40、多瘤、腺病毒、VSV及BPV)可用于在哺乳动物细胞中克隆载体。通常，哺乳动物表达载体不需要复制起点组分(通常可仅使用SV40起点，这是因为其含有早期启动子)。

表达及克隆载体可含有编码可选择标记物的基因以有助于对表达的鉴定。典型可选择标记基因编码如下蛋白：赋予对抗生素或其他毒素(例如，氨苄西林(ampicillin)、新霉素、甲氨蝶呤或四环素)的抗性；或者，为营养缺陷的补体；或在其他备选方案中供应复合培养基中不存在的特定营养素，例如编码杆菌(Bacilli)的D-丙氨酸消旋酶的基因。

选择方案的一个实例利用药物来阻止宿主细胞的生长。那些经异源基因成功转化的细胞产生赋予抗药性的蛋白，且因此可在该选择方案中存活。该显性选择的实例使用药物新霉素、霉酚酸及潮霉素。哺乳动物细胞的常用可选择标记物为那些使得能鉴定可吸收编码抗IL-23A抗体的核酸的细胞的标记物，例如DHFR(二氢叶酸还原酶)、胸苷激酶、金属硫蛋白-I及-II(例如灵长类动物金属硫蛋白基因)、腺苷脱胺酶、鸟氨酸脱羧酶等。首先通过在含有甲氨蝶呤(Mtx)(DHFR的竞争性拮抗剂)的培养基中培养所有转化体来鉴定经DHFR选择基因转化的细胞。在采用野生型DHFR时，适宜的宿主细胞为DHFR活性缺陷的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系(例如DG44)。

或者，经编码抗IL-23A抗体、野生型DHFR蛋白及另一可选择标记物(例如氨基葡萄糖苷3'-磷酸转移酶(APH))的DNA序列转化或共转化的宿主细胞(尤其是含有内源性DHFR的野生型宿主)可通过在含有针对所述可选择标记物的选择剂(例如氨基糖苷抗生素，例如卡那霉素(kanamycin)、新霉素或G418的培养基中使细胞生长来进行选择。例如，参见美国专利第4,965,199号。

倘若使用酵母细胞作为宿主细胞来实施重组产生，则可使用存在于酵母质粒YRp7中的TRP1基因(Stinchcomb等人，1979，Nature 282：39)作为可选择标记物。TRP1基因为缺少在色氨酸中生长的能力的酵母突变体菌株(例如，ATCC第44076号或PEP4-1)提供选择标记物(Jones，1977，Genetics 85：12)。则酵母宿主细胞基因组中trp1损伤的存在可提供有效环境以通过在不存在色氨酸时生长来检测转化。类似地，Leu2p缺陷型酵母菌株(例如ATCC 20,622或38,626)通过具有LEU2基因的已知质粒来补足。

另外，可使用得自1.6μm环形质粒pKD1的载体来转化克鲁维酵母。或者，已报导用于大规模产生重组牛凝乳酶的表达系统可用于乳酸克鲁维酵母(K.lactis.)(Van denBerg，1990，Bio/Technology 8：135)。亦已公开通过克鲁维酵母属的工业菌株分泌成熟重组人血清白蛋白的稳定多拷贝表达载体(Fleer等人，1991，Bio/Technology 9：968-975)。

表达及克隆载体通常含有宿主有机体可识别且与编码抗IL-23P19抗体或其多肽链的核酸分子可操作连接的启动子。适用于原核宿主的启动子包括phoA启动子、β-内酰胺酶及乳糖启动子系统、碱性磷酸酶、色氨酸(trp)启动子系统及杂合启动子(例如tac启动子)。其他已知的细菌启动子亦适宜。用于细菌系统的启动子亦可含有与编码抗IL-23A抗体的DNA可操作连接的Shine-Dalgamo(S.D.)序列。

已知多种真核启动子序列。事实上，所有真核基因皆具有富AT区，其位于转录起始位点上游约25至30个碱基处。在许多基因的转录起始点上游70至80个碱基处发现的另一序列为CNCAAT区，其中N可为任一核苷酸。在大多数真核基因的3'端处为AATAAA序列，其可能向编码序列的3'端添加聚A尾的信号。所有所述序列皆以适宜方式插入真核表达载体中。

适用于酵母宿主的启动序列的实例包括以下酶的启动子：3-磷酸甘油酸酯激酶或其他糖酵解酶，例如烯醇化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶及葡糖激酶。

诱导型启动子的另一优点为通过生长条件来控制转录。所述启动子包括以下酶的酵母启动子区：醇脱氢酶2、异细胞色素C、酸性磷酸酶、与氮代谢相关的衍生物酶、金属硫蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶及负责麦芽糖及半乳糖利用的酶。用于酵母表达的适宜载体及启动子进一步阐述于EP 73,657中。酵母增强子亦可有利地与酵母启动子一起使用。

在哺乳动物宿主细胞中自载体转录抗IL-23A抗体受(例如)自以下获得的启动子控制：病毒基因组，例如多瘤、鸡痘病毒、腺病毒(例如腺病毒2)、牛乳头瘤病毒、禽肉瘤病毒、细胞巨化病毒、逆转录病毒、肝炎B病毒及猿猴病毒40(SV40)；异源性哺乳动物启动子，例如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子；热休克启动子，条件是所述启动子与宿主细胞系统兼容。

SV40病毒的早期及晚期启动子为便捷地以SV40限制性片段形式获得，其亦含有SV40病毒复制起点。人细胞巨化病毒的立即早期启动子为便捷地以HindIII E限制性片段形式获得。使用牛乳头瘤病毒作为载体在哺乳动物宿主中表达DNA的系统公开于美国专利第4,419,446号中。此系统的修改形式阐述于美国专利第4,601,978号中。亦可参见Reyes等人，1982，Nature 297：598-601，其公开在来自单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子控制下在小鼠细胞中表达人p-干扰素cDNA。或者，可使用劳斯肉瘤病毒(rous sarcoma virus)长末端重复序列作为启动子。

可用于重组表达载体的另一可用组件为增强子序列，其用于提高高等真核生物中编码抗IL-23A抗体的DNA的转录。现已知多种增强子序列来自哺乳动物基因(例如珠蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白及胰岛素)。然而，通常使用来自真核细胞病毒的增强子。实例包括位于复制起点迟侧(late side)上的SV40增强子(bp 100-270)、细胞巨化病毒早期启动子增强子、位于复制起点迟侧上的多瘤增强子及腺病毒增强子。关于活化真核启动子的增强组件的描述亦可参见Yaniv，1982，Nature 297：17-18。可将增强子剪接至载体中抗IL-23A抗体编码序列的5'或3'位置处，但优选位于启动子的5'位点。

用于真核宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人细胞或来自其他多细胞有机体的有核细胞)中的表达载体亦可含有终止转录及稳定mRNA所需的序列。所述序列一般可自真核生物或病毒DNA或cDNA的5'及偶而其3'非翻译区获得。所述区域含有在编码抗IL-23A抗体的mRNA的非翻译部分中转录为聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。一种可用的转录终止组分为牛生长激素聚腺苷酸化区。参见WO94/11026及其中所公开的表达载体。在一些实施方案中，人源化抗IL-23P19抗体可使用CHEF系统来表达。(例如，参见美国专利第5,888,809号，其公开内容为以引用方式并入本文中。)

在本文载体中克隆或表达DNA的适宜的宿主细胞为上述原核细胞、酵母细胞或高等真核细胞。适用于此目的的原核生物包括真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性有机体，例如：肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，例如埃希氏菌属(Escherichia)(例如大肠杆菌)、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、沙门氏菌属(Salmonella)(例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium))、沙雷菌属(例如黏质沙雷氏菌(Serratia marcescans))及志贺氏菌属(Shigella)，以及杆菌属(例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)及地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)(例如于1989年4月12日出版的DD 266,710中所公开的地衣芽孢杆菌41P))、假单胞菌属(Pseudomonas)(例如铜绿假单胞菌)及链霉菌属(Streptomyces)。优选的大肠杆菌克隆宿主为大肠杆菌294(ATCC 31,446)，但其他菌株(例如大肠杆菌B、大肠杆菌X1776(ATCC 31,537)及大肠杆菌W3110(ATCC 27,325))亦适合。所述实例为例示性而非限制性。

除原核生物外，例如丝状真菌或酵母等真核微生物亦为抗IL-23A抗体编码载体的适宜的克隆或表达宿主。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或常见的面包酵母(baker's yeast)为最常用的低等真核宿主微生物。然而，一般可使用多种其他属、种及菌株且可用于本文中，例如裂殖酵母菌(Schizosaccharomyces pombe)；克鲁维酵母属宿主，例如乳酸克鲁维酵母、脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)(ATCC 12,424)、保加利亚克鲁维酵母(K.bulgaricus)(ATCC 16,045)、威克克鲁维酵母(K.wickeramii)(ATCC 24,178)、瓦尔特克鲁维酵母(K.waltii)(ATCC 56,500)、果蝇克鲁维酵母(K.drosophilarum)(ATCC 36,906)、耐热克鲁维酵母(K.thermotolerans)及马科斯克鲁维酵母(K.marxianus)；耶氏酵母属(yarrowia)(EP 402,226)；巴斯德毕赤酵母菌(Pichia pastoris)(EP 183,070)；念珠菌属(Candida)；里氏木霉菌(Trichoderma reesia)(EP 244,234)；粗糙链孢霉菌(Neurospora crassa)；许旺酵母属(Schwanniomyces)，例如西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)；及丝状真菌，例如链孢霉属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、弯颈霉属(Tolypocladium)及曲霉菌属(Aspergillus)宿主(例如构巢曲霉(A.nidulans)及黑曲霉(A.niger))。

表达糖基化抗IL-23A抗体的适宜宿主细胞得自多细胞有机体。无脊椎动物细胞的实例包括植物及昆虫细胞，包括(例如)多种杆状病毒株及变体及来自例如以下宿主的相应许可的昆虫宿主细胞：草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(毛虫)、埃及伊蚊(Aedesaegypti)(蚊子)、白纹伊蚊(Aedes albopictus)(蚊子)、黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)(果蝇)及家蚕(Bombyx mori)(蚕)。多种转染用病毒株可自公开途径获得，例如苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)NPV的L-1变体及家蚕NPV的Bm-5株，且所述病毒尤其可用于转染草地贪夜蛾细胞。

亦可采用棉花、玉米、马铃薯、大豆、矮牵牛花、西红柿及烟草的植物细胞培养物作为宿主。

在另一方面中，抗IL-23A抗体的表达为在脊椎动物细胞中实施。脊椎动物细胞在培养(组织培养)中的繁殖已成为常规操作且技术随处可得。可用哺乳动物宿主细胞系的实例为经SV40转化的猴肾CV1为(COS-7，ATCC CRL 1651)、人胚肾系(293系或经亚克隆以供在悬浮培养中生长的293细胞，Graham等人，1977，J.Gen Virol.36：59)、幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)、中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR1(CHO，Urlaub等人，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216；例如DG44)、小鼠睾丸支持细胞(TM4，Mather，1980，Biol.Reprod.23：243-251)、猴肾细胞(CV1ATCC CCL 70)、非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCCCRL-1587)、人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)、犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)、水牛鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)、人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)、人肝细胞(Hep G2，HB 8065)、小鼠乳房肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)、TR1细胞(Mather等人，1982，AnnalsN.Y.Acad.Sci.383：44-68)、MRC 5细胞、FS4细胞及人肝细胞瘤系(Hep G2)。

用上述用于产生抗IL-23A抗体的表达或克隆载体来转化宿主细胞，并在常用营养培养基中培养，所述营养培养基经修改以适于诱导启动子、选择转化体或扩增编码期望序列的基因。

可在多种培养基中培养用于产生本文所述抗IL-23A抗体的宿主细胞。市售培养基适用于培养宿主细胞，例如Ham's F10(Sigma-Aldrich公司，St.Louis，Mo.)、最小必需培养基((MEM)，Sigma-Aldrich公司)、RPMI-1640(Sigma-Aldrich公司)及达尔伯克氏改良的伊格尔氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)((DMEM)，Sigma-Aldrich公司)。另外，可使用以下文献中的一或多者阐述的任一培养基来作为宿主细胞的培养基：Ham等人，1979，Meth.Enz.58：44；Barnes等人，1980，Anal.Biochem.102：255；美国专利第4,767,704号、美国专利第4,657,866号、美国专利第4,927,762号、美国专利第4,560,655号、美国专利第5,122,469号、WO 90/103430及WO 87/00195。所述培养基中的任一者可根据需要补加有激素和/或其他生长因子(例如胰岛素、转铁蛋白或表皮生长因子)、盐(例如氯化钠、钙盐、镁盐及磷酸盐)、缓冲液(例如HEPES)、核苷酸(例如腺苷及胸苷)、抗生素(例如庆大霉素)、微量元素(定义为通常以微摩尔范围的最终浓度存在的无机化合物)及葡萄糖或等效能量来源。亦可以包括本领域技术人员已知的适当浓度的其他补加物。例如温度、pH等培养条件为那些先前用于所选表达用宿主细胞的条件，且对本领域技术人员而言是显而易见的。

在使用重组技术时，抗体可在细胞内、在壁膜间隙中产生，或直接分泌至培养基中。若在细胞内产生抗体，则作为第一步骤可使细胞破裂以释放蛋白。可以例如通过离心或超滤来去除颗粒碎片，宿主细胞或裂解片段。Carter等人，1992，Bio/Technology 10：163-167阐述分离分泌至大肠杆菌壁膜间隙中的抗体的操作。简言之，在乙酸钠(pH 3.5)、EDTA及苯甲磺酰氟(PMSF)存在下经约30分钟使细胞糊剂解冻。可通过离心移除细胞碎片。倘若抗体分泌至培养基中，则通常首先使用市售蛋白浓缩滤器(例如Amicon或MilliporePellicon超滤单元)浓缩来自所述表达系统的上清液。在任一前述步骤中可包括例如PMSF等蛋白酶抑制剂以抑制蛋白水解，且可包括抗生素以防止外来污染物生长。可使用多种方法自宿主细胞分离抗体。

可使用(例如)羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、透析及亲和色谱来纯化自细胞制备的抗体组合物，其中亲和色谱为常用纯化技术。蛋白A作为亲和配体的适合性取决于存在于抗体中的任一免疫球蛋白Fc域的物种及同种型。蛋白A可用于纯化基于人γ1、γ2或γ4重链的抗体(例如，参见Lindmark等人，1983J.Immunol.Meth.62：1-13)。推荐蛋白G用于所有小鼠同种型及人γ3(例如，参见Guss等人，1986EMBO J.5：1567-1575)。亲和配体所附接的基质最经常为琼脂糖，但亦可使用其他基质。机械上稳定的基质(例如可控多孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯)使得可达成较使用琼脂糖更快的流速及更短的处理时间。倘若抗体包含C_H3域，则Bakerbond ABX^TM树脂(J.T.Baker，Phillipsburg，N.J.)可用于纯化。取决于欲回收的抗体，亦可使用其他蛋白纯化技术，例如离子交换柱分级分离、乙醇沉淀、反相HPLC、硅胶色谱、肝素SEPHAROSE^TM色谱、阴离子或阳离子交换树脂(例如聚天冬氨酸柱)色谱、色谱聚焦、SDS-PAGE及硫酸铵沉淀。

在任何初步纯化步骤后，可使用pH介于约2.5至4.5之间的洗脱缓冲液对包含目标抗体及污染物的混合物实施低pH疏水相互作用色谱，其通常在低盐浓度(例如，约0-0.25M盐)下实施。

治疗性用途

在另一实施方案中，本文所公开抗IL-23A抗体可用于治疗如本文所述各种与IL-23p19的表达有关的病症。在一个方面中，用于治疗IL-23相关病症的方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的抗IL-23A抗体。

抗IL-23A抗体或药物通过任何适宜方式来施用，包括肠胃外、皮下、腹膜内、肺内及鼻内，且若需要局部免疫抑制治疗，则实施病灶内施用(包括灌注或以其他方式使移植物在移植前与抗体接触)。抗IL-23A抗体或药物可以(例如)输注或推注形式来施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。另外，抗IL-23A抗体通过脉冲输注适当施用，尤其是以抗体的递减剂量来施用。在一方面中，通过注射来实施给药，最优选通过静脉内或皮下注射来施用，这部分地取决于施用是短期施用还是长期施用。在一个方面中，抗IL-23抗体通过皮下注射来实施给药。

在预防或治疗疾病时，抗体的适宜剂量可取决于多种因素，例如如上文所定义欲治疗疾病的类型、疾病的严重程度及病程、施用抗体的目的是预防性还是治疗性、先前治疗、患者临床史及对抗体的响应，以及主治医师的决定。抗体一次性施用或经一系列治疗以适当方式施用患者。

本文所用术语“抑制”在与“改善”及“减轻”相同的背景中意指疾病的一或多个特征减少。

可以与良好医疗实践一致的方式对抗体进行调配、配量及施用。在此上下文中需考虑的因素包括所治疗的特定病症、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病况、病因、药物的递送位点、施用方法、施用时间安排及从业医师所知的其他因素。欲施用抗体的“治疗有效量”可取决于所述因素。

抗体可以任选与该一或多种当前用于预防或治疗所述病症的药物一起调配。所述其他药物的有效量取决于抗IL-23A抗体存在于调配物中的量、病症或治疗的类型及上述其他因素。

在一个方面中，抗IL-23A抗体药剂可用于治疗或预防特征在于例如因免疫细胞(例如淋巴细胞或树突状细胞)活化不当所致的IL-23表达异常的病症。此IL-23的异常表达可归因于例如IL-23蛋白含量增加。

一方面，在本发明的上下文中，该疾病是哮喘，特别是严重的持续性哮喘。临床试验中重度持续性哮喘的疗效，通常以在治疗期间到首次哮喘恶化的时间(例如以天为单位)计量。功效的其他评估例如为：治疗期间哮喘发作的年化率(annualized rate)，治疗期间重度哮喘发作的年化率，在特定时间点(例如在第24周)的每周ACQ₅(哮喘控制问卷)评分，在特定时间点(例如第24周)的低谷FEV₁自基线的临床改变，在特定时间点(例如第24周)的支气管扩张(post-bronchodilator)FEV₁自基线的临床改变，或在治疗期间到第一次重度哮喘发作的时间。在一个方面，使用上述任一种来评估抗IL23A抗体(例如抗体A、抗体B、抗体C或抗体D)在治疗重度持续性哮喘中的功效。

药物组合物及其施用

可将包含抗IL-23A抗体的组合物施用于处于患有免疫病症的风险的受试者。本文所用术语“受试者”意指可施用抗IL-23A抗体的任何哺乳动物患者，包括(例如)人及非人哺乳动物，例如灵长类动物、啮齿类动物及狗。明确意欲使用本文所述方法治疗的受试者包括人。在呼吸系统病症的预防或治疗中，抗体可单独或与其他组份组合施用。

本文描述了用于此类药物组合物的抗IL-23A抗体的实例，例如抗体A、抗体B、抗体C或抗体D。

已知且可使用多种递送系统来施用抗IL-23A抗体。引入方法包括(但不限于)真皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外及经口途径。所述抗IL-23A抗体可通过(例如)输注、推注或注射来施用，且可与例如化学治疗药物等其他生物活性药物一起施用。施用可为全身性或局部施用。在一个实施方案中，所述施用通过皮下注射。可在(例如)预填充注射器中制备用于所述注射的调配物，其可每隔一周施用一次。

在具体实施方案中，所述抗IL-23A抗体为通过注射、借助导管、借助栓剂或借助植入体来施用，该植入体为有孔、无孔或凝胶状材料，其包括例如硅橡胶膜等膜或纤维。通常，在施用组合物时，使用抗IL-23A抗体或药物不能吸附的材料。

在其他的实施例中，所述抗IL-23A抗体以控释系统来递送。在一实施方案中，可使用泵(例如，参见Langer，1990，Science 249:1527-1533；Sefton，1989，CRCCrit.Ref.Biomed.Eng.14:201；Buchwald等人，1980，Surgery 88:507；Saudek等人，1989，N.Engl.J.Med.321:574)。在另一实施方案中，可使用聚合材料。(例如，参见MedicalApplications of Controlled Release(Langer及Wise编辑，CRC Press，Boca Raton，Fla.，1974)；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design andPerformance(Smolen及Ball编辑，Wiley，New York，1984)；Ranger及Peppas，1983，Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61。亦参见Levy等人，1985，Science 228:190；During 等人，1989，Ann.Neurol.25:351；Howard等人，1989，J.Neurosurg.71:105。)其他控释系统论述于(例如)Langer(上述文献)中。

抗IL-23P19抗体通常以包含治疗有效量的抗体及一或多种药学上相容的成分的药品组合物形式来施用。

在典型实施方案中，根据常规操作将药物组合物调配为适用于静脉内或皮下施用于人的药物组合物。通常，注射施用用组合物为存在于无菌等渗水性缓冲液中的溶液。若需要，药物亦可包括增溶剂及局部麻醉剂(例如利诺卡因(lignocaine))以减轻注射位点的疼痛。通常，各成分单独或混合在一起以单位剂型来供应，例如，作为冻干干粉或无水浓缩物存在于例如安瓿或药囊等标明活性药物的量的密封容器中。若药物为通过输注来施用，则可将其分配至含有无菌药物级水或盐水的输注瓶中。倘若药物通过注射来施用，则可提供含有注射用无菌水或盐水的安瓿以使得可在施用之前混合各成分。

此外，可以以药品试剂盒形式来提供药物组合物，所述试剂盒包括：(a)含有呈冻干形式的抗IL-23A抗体的容器，及(b)含有药学上可接受的注射用稀释剂(例如，无菌水)的第二容器。所述药学上可接受的稀释剂可用于复水或稀释冻干抗IL-23A抗体。任选地，该容器可附带有监管药物或生物产品的制备、使用或销售的政府机构所规定形式的公告，该公告显示政府机构已批准用于人施用的制备、使用或销售。

在一个方面中，(例如每4周一次)向患者施用90mg抗IL23A抗体，例如抗体A、抗体B、抗体C或抗体D。抗IL-23A抗体例如在第0周、第4周、第8周、第12周、第16周、第20周和之后以4周间隔施用于患者。在一个方面中，所述施用通过皮下注射。

本发明的内容中使用的药品组合物的实例公开于下文的实施例3中。

本发明进一步在下列实施例中加以描述，所述实施例不意欲限制本发明范畴。

实施例

实施例1a：药理学研究

使用了大鼠精密切割肺切片来研究IL-23受体激活的下游信号。

从雄性Wistar大鼠(250-400g)取出肺，并保持在受控条件(22℃，湿度55％，12小时日/夜节律)下。为了获得肺切片，通过腹膜内注射60mg/kg戊巴比妥钠(Narcoren，MerialGmbH，Germany)麻醉大鼠。在动物放血并死亡后，肺用在培养基中的1.5％的低熔点琼脂糖(Sigma Aldrich)进行原位填充，并用冰覆盖10分钟，以使琼脂糖冷却并固化。从胸腔中移出肺并分离肺叶。用取芯工具冲压出圆柱(直径：8mm)，并用Krumdieck组织切片机(AlabamaResearch and Development，Munford，US)切成250μm薄的水平切片。肺切片在细胞培养条件下，在37℃，5％CO₂和95％空气湿度在培养基中孵育。包含MEM(最低限度培养基，LifeTechnologies)的用于培养的培养基已补充了以下成分(供应商，终浓度)。葡萄糖(B.Braun，17mM)、NaHCO₃(Sigma，26mM)、Hepes(Gibco，25mM)、丙酮酸钠(Gibco，1mM)、GlutaMax(Gibco，2mM)，青霉素-链霉素(Sigma，1％v/v)。

用IL-23进行刺激。用R&D Systems公司的ELISA测定了细胞因子释放。

向切片加IL-23(10或100nM)。将切片在37℃，5％CO₂和95％空气湿度下孵育，并以1rpm于指定的时间点中旋转。在孵育(时间点在下文给出)后，收集培养上清并储存在-80℃直到进行ELISA。每个数据点使用了6个切片。在基线，这些组织切片不在mRNA水平表达嗜中性粒细胞标记物，或不表达Th17细胞的典型标记物。

图1显示，用IL-23处理大鼠精确切割肺切片，在刺激开始后2小时后驱动了嗜中性粒细胞趋化因子Cxcl1(CINC1)的快速释放。

图2显示，用IL-23处理大鼠精确切割肺切片，在刺激开始后48小时后驱动了IL22的释放。

实施例1b：药理学研究

如下概述地从成年雄性Wistar大鼠制备了精密切割肺切片(PCLS)。大鼠在常规条件下饲养在隔离的通风笼中，可自由饮水和取食。

大鼠肺或人的肺叶分别经气管和小叶支气管用溶解在Williams最小必需培养基(MEM)中的1.5％低熔点琼脂糖进行填充，并在冰上冷却以凝胶化。冲压出组织芯(tissuecores)(直径8mm)并借助Krumdieck组织切片机切成PCLS。收获PCLS并保持在标准细胞培养条件(MEM，37℃，5％CO₂)下。在制备后的第一个4h中每30分钟更换一次培养基，然后在第二天更换培养基。为了进行激发，将PCLS转移至48孔板(1PCLS/500μL)。激发包括IL23(100ng/mL或300ng/mL)24或48小时，或留下不处理(对照)。在人PCLS中，额外测试了IL17(100ng/mL或300ng/mL)。

IL22的测量

细胞因子IL22在来自PCLS处理的上清中进行测量。对于大鼠，根据制造商的说明书进行了ELISA(R&D，M2200)。人IL22通过高灵敏度Singulex分析(high-sensitiveSingulex assay)进行测定。

统计：

使用GraphPad Prism 6进行数据分析，通过Bartlett's test检查方差的均等。如果方差相等，则通过ANOVA比较组平均值，然后进行Dunnett’s多重比较检验。如果方差不相等，则通过Kruskal-Wallis检验来比较组平均值，然后进行Dunn后检验来纠正多重比较。如果p值小于0.05，则认为组间差异显著。

结果

为了筛选参与IL23信号传导的肺部生物标记物，用IL23激发了PCLS并对释放的细胞因子(TNFα、IL1β、IL6、IL18、IL13、IL17、IL21和IL22)进行定量。在大鼠PCLS中，只有IL22以浓度和时间依赖的方式被可重复性地诱导(图3)。

对来自IL23激发的人PCLS的上清分析了IL17A/F、IL22和β2β防御素蛋白释放。再次，只有IL22在24小时的IL23处理后显著升高(图4A)。相比之下，IL17没有诱导IL22(图4B)。

实施例2：临床研究

在随机、双盲、安慰剂对照的平行组研究中，对患有重度持续性哮喘的患者皮下施用抗体A，以评估其作为附加疗法的超过24周的安全性和功效。在第0、4、8、12、16和20周，每4周给予90mg抗体A。

所述研究的纳入标准如下：

1.预支气管扩张(Pre-bronchodilator)临床测量的FEV1＝40％，且预期的正常＝85％(FEV1＝1秒用力呼气量)。

2.由医师诊断的一年哮喘史，并具有＝12％的FEV1可逆性，并在使用400μg沙丁胺醇后绝对变化至少为200mL。

3.必须处于至少中等剂量的吸入型皮质类固醇和至少一种其他哮喘控制发作药物下至少一年。

4.在最近12个月内，必须记录过两次或更多次的重度哮喘发作史。

抗体A的功效通过使用已知方法测定的以下终点中的一个或多个来评估。

主要终点是，对比以安慰剂治疗的患者，对于活跃患者，在标准护理治疗基础上在计划的24周治疗期间到第一次哮喘恶化的时间。

额外终点是：

-在计划的24周治疗期间，哮喘年化率恶化。

-在第24周，低谷FEV1自基线发生临床改变。

-在计划的24周治疗期间，重度哮喘发作的年化率。

-在第24周，支气管扩张FEV1自基线发生临床改变。

-在计划的24周治疗期间，至第一次重度哮喘发作的时间。

-在第24周的每周哮喘控制问卷的得分。

实施例3：药品组合物

适用于本发明的抗体的制剂的实例如下所示。以下制剂中使用的抗体是例如抗体A、抗体B、抗体C或抗体D。

制剂1：

制剂1的pH通常在pH 6.0至7.0的范围内，例如pH 6.5。本制剂特别适合于静脉内施用。

使用的赋形剂的分子量(以g/mol计的MW)：琥珀酸二钠六水合物＝270.14g/mol；琥珀酸＝118.09g/mol；氯化钠＝58.44g/mol。

使用Osmomat 030(Gonotec GmbH，Berlin，Germany)测定的制剂的渗透压为300+/-30mOsmol/kg。使用测量单位DMA 4500(Anton Paar GmbH，Ostfildern-Scharnhausen，Germany)测定的制剂在20℃下的密度为约1.0089g/cm³。

制剂2：

制剂2的pH通常在pH 5.5至6.5的范围内，例如5.5至6.1，例如pH为5.8。本制剂特别适合于皮下施用。

使用的赋形剂的分子量(MW，以g/mol计)：

MW：琥珀酸(C₄H₆O₄)＝118.09g/mol

MW：琥珀酸二钠六水合物(C₄O₄Na₂H₄×6H₂O)＝270.14g/mol

MW：山梨醇＝182.17g/mol

MW：聚山梨醇酯20＝1227.72g/mol

使用Osmomat 030(Gonotec GmbH，Berlin，Germany)测定的制剂的渗透压为300+/-30mOsmol/kg。使用测量单位DMA 4500(Anton Paar GmbH，Ostfildern-Scharnhausen，Germany)测定的制剂在20℃下的密度为约1.040g/cm³。

制剂3：

制剂3的pH通常在pH 5.5至6.5的范围内，例如5.5至6.1，例如pH为5.8。本制剂特别适合于皮下施用。

使用的赋形剂的分子量(MW，以g/mol计)：

MW：山梨醇＝182.17g/mol

MW：聚山梨醇酯20＝1227.72g/mol。

使用Osmomat 030(Gonotec GmbH，Berlin，Germany)测定的制剂的渗透压为300+/-30mOsmol/kg。

序列表

<110> 勃林格殷格翰国际有限公司

<120> 治疗疾病的方法

<130> 09-0640-WO-1

<140>

<141>

<150> 62/220,385

<151> 2015-09-18

<150> 62/147,281

<151> 2015-04-14

<160> 22

<170> PatentIn version 3.5

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

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<220>

<221> 来源

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<221> 来源

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<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

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Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln

20 25 30

Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His

35 40 45

Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr

50 55 60

Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln

65 70 75 80

Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly

85 90 95

Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu

100 105 110

Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu

115 120 125

Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr

130 135 140

Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu

145 150 155 160

Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala

165 170 175

Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro

180 185

Claims

1.一种用于治疗重度持续性哮喘的方法，其包括向患者施用抗IL-23A抗体。

2.根据权利要求1的方法，其中所述患者对皮质类固醇不响应。

3.根据权利要求1或2中任一项的方法，其中所述抗IL-23A抗体是抗体A、抗体B、抗体C或抗体D。

4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中所述抗IL-23A抗体通过皮下施用对所述患者施用。

5.根据权利要求1至4中任一项的方法，其中所述哮喘是嗜中性粒细胞哮喘，嗜酸性粒细胞哮喘，混合型嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞哮喘，或少粒细胞型哮喘。

6.根据权利要求1至5中任一项的方法，其中所述抗IL-23A抗体包括含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链。

7.根据权利要求1至5中任一项的方法，其中所述抗IL-23A抗体包括含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的重链。

8.根据权利要求1至5中任一项的方法，其中所述抗IL-23A抗体包括含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链。

9.根据权利要求1至5中任一项的方法，其中所述抗IL-23A抗体包括含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的重链。