CN107459538A

CN107459538A - 二吲哚‑2‑丙烷‑2‑吲哚‑3‑乙酰赖氨酰氨基葡萄糖,其合成,活性和应用

Info

Publication number: CN107459538A
Application number: CN201610391442.2A
Authority: CN
Inventors: 赵明; 彭师奇; 王玉记; 吴建辉; 耿常
Original assignee: Capital Medical University
Current assignee: Capital Medical University
Priority date: 2016-06-03
Filing date: 2016-06-03
Publication date: 2017-12-12
Anticipated expiration: 2036-06-03
Also published as: CN107459538B

Abstract

本发明公开了下式的N^α,N^ε‑二{甲基2‑(2‑(2‑(3‑(2‑氧乙基)‑1H‑吲哚‑2‑基)丙烷‑2‑基)‑1H‑吲哚‑3‑基)乙酰基}赖氨酰‑2‑氨基葡萄糖。公开了它的制备方法、公开了它的抗炎活性，因而本发明公开了它在制备抗炎药物中的应用。

Description

二吲哚-2-丙烷-2-吲哚-3-乙酰赖氨酰氨基葡萄糖,其合成, 活性和应用

技术领域

本发明涉及N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖，涉及它的制备方法、涉及它的抗炎活性，因而本发明涉及它在制备抗炎药物中的应用。本发明属于生物医药领域。

背景技术

炎症是临床普遍的疾病。非甾体抗炎药是临床应用最普遍的抗炎药。提高非甾体抗炎药的疗效一直是抗炎药物的研究重点。发明人曾经公开在8.9μmol/kg的剂量下2,2-二(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-丙烷在小鼠模型上具有抗肿瘤作用。3年来发明人一直对2,2-二(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-丙烷进行结构修饰，力图发明高效抗炎药物。氨基葡萄糖用于治疗关节炎和相关骨病。在小鼠模型上氨基葡萄糖的抗炎有效剂量为90μmol/kg。经过反复模索，发明发现赖氨酸作为连接臂，将氨基葡萄糖与2,2-二(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-丙烷连接，生成的N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖抗炎的有效剂量为10nmol/kg。这是意想不到的技术效果。按照这个发现，发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供下式的N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖。

本发明的第二个内容是提供Nα,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖的合成方法，该方法包括：

(1)吲哚乙酸在稀硫酸催化下与甲醇、丙酮进行酯化反应和Friedel-Crafts反应生成2,2-二(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-丙烷；

(2)2,2-二(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-丙烷转化为2-(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-2-(1H-吲哚-3-乙酸-2-基)-丙烷；

(3)2-(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-2-(1H-吲哚-3-乙酸-2-基)-丙烷与赖氨酸苄酯偶联得到N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酸苄酯；

(4)N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酸苄酯在含有钯碳的丙酮溶液中催化氢解得到N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酸；

(5)N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酸与氨基葡萄糖偶联得到N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖。

本发明的第三个内容是评价N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖对ICR小鼠炎症的抑制作用。

附图说明

图1 N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖的合成路线.i)CH₃OH,(CH₃)₂CO,H₂SO₄；ii)(CH₃)₂CO,NaOH,H₂O；iii)二环己基碳二亚胺(DCC),1-羟基苯并三唑(HOBt),N-甲基吗啉(NMM),N,N-二甲基甲酰胺(DMF)；iv)(CH₃)₂CO,H₂,Pd/C；v)二环己基碳二亚胺(DCC),1-羟基苯并三唑(HOBt),N-甲基吗啉(NMM),N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备2,2-二(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-丙烷(1)

将10g(57.14mmol)吲哚乙酸与150mL甲醇混合，超声溶解，缓慢滴加1mL浓硫酸，室温搅拌1h后加入100mL丙酮，避光搅拌反应10天后，TLC(石油醚/丙酮＝6/1)监测原料点消失，停止反应。减压浓缩除去甲醇和丙酮，残留物用乙酸乙酯溶解，酯层分别用5％NaHCO₃溶液和饱和NaCl溶液各洗3次，得到的酯层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到残留物以石油醚/丙酮为洗脱剂通过硅胶柱层析纯化，得到1.2g(10％)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):419[M+H]⁺.¹H-NMR(500MHz,CDCl₃):δ/ppm＝9.17(s,2H),7.50(d,J＝8.0Hz,2H),7.23(m,J＝8.0Hz,2H),7.11(td,J＝8.0Hz,1.0Hz,2H),7.06(m,J＝8.0Hz,1.0Hz,2H),3.91(s,4H),3.72(s,6H),2.02(s,6H)。

实施例2制备2-(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-2-(1H-吲哚-3-乙酸-2-基)-丙烷(2)

将1g(2.39mmol)2,2-二(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-丙烷与20mL丙酮混合，搅拌，滴加2mol/L NaOH溶液，调节溶液pH值至13，室温搅拌反应40min，TLC(石油醚/丙酮＝6/1，2滴HAc)监测，原料点还存在，但有新点产生。进行后处理，滴加饱和KHSO₄溶液，调节溶液pH值至中性，减压浓缩除去丙酮，剩余的水溶液用饱和KHSO₄溶液调节pH值至2，用乙酸乙酯萃取3次，收集酯层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩溶剂得到的残留物以石油醚/丙酮为洗脱剂通过硅胶柱层析纯化，纯化得到60mg(17％)标题化合物，为淡黄色粉末并回收630mg化合物1。ESI-MS(m/e):403[M-H]^-。

实施例3制备N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酸苄酯(3)

将300mg(0.74mmol)2-(1H-吲哚-3-乙酸甲酯-2-基)-2-(1H-吲哚-3-乙酸-2-基)-丙烷、120mg(0.89mmol)1-羟基苯并三氮唑(HOBt)和148mg(0.33mmol)Lys-OBzl·HCl·TsOH与15mL无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解，用NMM调节溶液pH值至8，冰浴搅拌20min，然后加入183mg(0.89mmol)二环己基碳二亚胺(DCC)，撤去冰浴，常温下反应14h，TLC(二氯甲烷/甲醇＝60/1，2滴HAc)监测，原料点消失。将反应化合物浓缩至干，残留物加乙酸乙酯溶解，滤除DCU，过滤反应液，然后依次用5％NaHCO₃溶液(15mL)、饱和NaCl溶液(15mL)、5％KHSO₄溶液(15mL)、饱和NaCl溶液(15mL)、5％NaHCO₃溶液(15mL)和饱和NaCl溶液(15mL)各洗三遍。无水Na₂SO₄干燥后，减压浓缩至干，将所得黄色固体以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行硅胶柱层析纯化，得到160mg(42％)标题化合物，为黄色固体。ESI-MS(m/e):1009[M+H]⁺。

实施例4制备N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酸(4)

将100mg(0.10mmol)N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酸苄酯、20mg钯碳及20mL丙酮混合，往化合物通氢气36h，TLC(二氯甲烷/甲醇＝8/1，2滴HAc)监测原料点消失。过滤除去钯碳，将滤液减压浓缩至干，得到78mg(86％)标题化合物，为黄色固体。ESI-MS(m/e):917[M-H]^-。

实施例5制备N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖(5)

将120mg(0.13mmol)N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酸、21mg(0.16mmol)HOBt和35mg(0.16mmol)氨基葡萄糖盐酸盐与6mL无水DMF溶解，用NMM调节溶液pH值至8，冰浴下反应20min，加入33mg(0.16mmol)DCC并于室温下反应10h，TLC(二氯甲烷/甲醇＝8/1，加2滴HAc)监测原料点消失。将反应化合物浓缩至干，残留物加甲醇溶解，滤除DCU，滤液减压浓缩至干，残留物以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行薄层层析纯化，得到46mg(32％)标题化合物，为淡黄色固体。Mp171-172℃.(c＝0.1,CH₃OH).HRMS-ESI:C₆₀H₇₀N₇O₁₂ ⁺理论值为1080.5077,测定值为1080.4873.¹H-NMR(300MHz,CD₃OD):δ/ppm＝7.44-7.31(m,8H),7.14-6.94(m,8H),5.02(m,0.70H),4.47(m,0.30H),4.19(m,1H),3.88-3.62(m,3H),3.40(m,2H),3.36-3.32(m,6H),3.29-3.23(m,9H),2.77(m,2H),1.91(s,12H),1.53(m,1H),1.30(m,1H),1.07(m,2H),1.02(m,2H).IR(cm^-1):3380,2946,1722,1647,1520,1459,1434,1339,1308,1243,1198,1158,1014,743。

实验例1评价化合物5的抗炎活性

1)实验方法

20±2g ICR雄性小鼠随机分为空白对照组、阳性用药组及给药组，小鼠使用前静息1天，操作间保持室内温度22℃，每组小鼠10只。一次给药30分钟后往小白鼠的左耳外廓涂二甲苯(0.03mL)，2小时后将小白鼠颈椎脱臼处死。将小鼠的左，右耳剪下，用直径7mm的打孔器在两耳的相同位置，取圆形耳片，分别称重，求出两圆耳片的重量差作为肿胀度。肿胀度＝左耳原片重量-右耳原片重量。

2)给药方法和剂量

给药方式为灌胃给药。空白对照：0.5％CMCNa溶液，给药剂量为0.2mL/20g；阳性对照：阿司匹林，给药剂量为1.11mmol/kg；本发明化合物5的给药剂量为10nmol/kg。

3)统计方法

本实验数据统计均采用t检验和方差分析，肿胀度以表示。

4)实验结果

表1表明10nmol/kg5治疗的鼠耳肿胀度与0.5％CMCNa治疗的鼠耳肿胀度相比显著低，显示抗炎作用和意想不到的技术效果。

表1化合物5的体内抗炎活性评价

n＝7；a)与0.5％CMCNa比p<0.05,与阿司匹林比p>0.05。

Claims

1.下式的N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖

2.制备权利要求1所述N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖的方法，该方法包括：

3.权利要求1的N^α,N^ε-二{甲基2-(2-(2-(3-(2-氧乙基)-1H-吲哚-2-基)丙烷-2-基)-1H-吲哚-3-基)乙酰基}赖氨酰-2-氨基葡萄糖在制备抗炎药物中的应用。