CN107429284A

CN107429284A - 皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法

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Publication number: CN107429284A
Application number: CN201680004330.5A
Authority: CN
Inventors: 井上高良; 八谷辉; 加藤亚里沙
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2016-03-25
Filing date: 2016-03-25
Publication date: 2017-12-01
Anticipated expiration: 2036-03-25
Also published as: US20180325938A1; JP6006906B1; EP3444356A1; JPWO2017163391A1; EP3444356B1; WO2017163391A1; CN107429284B; EP3444356A4

Abstract

本发明提供一种探索用于迅速且高精度、而且选择性地控制皮脂腺及毛囊的雄激素受体的活性的物质的方法。一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法，其包括：(A)在低氧条件下将被检测物质适用于源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞；(B)测定该细胞中的HIF1α的活性；(C)将该(B)中测定的活性与对照组中的HIF1α的活性进行比较；以及(D)基于该(C)的结果，评价被检测物质的控制HIF1α的活性的效果。

Description

皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法

技术领域

本发明涉及一种探索用于选择性地对皮脂腺或毛囊的雄激素受体的活性进行控制的物质的方法。

背景技术

雄激素受体(AR)是包含盐皮质激素(mineralocortocoid)受体(MR)、孕酮受体(PR)、雌激素受体(ER)、及糖皮质激素受体(GR)的类固醇激素受体亚家族的一部分。内源性类固醇性雄激素(例如，睾酮及5α-二氢睾酮(DHT))是主要的循环性激素，除了促进第二性征以外，在各种生理过程的调节中也发挥重要的作用。关于雄激素在皮肤上的作用，报道有脱氢表雄酮(DHEA)的口服给药改善了老年人的皮肤状态；及通过DHEA对皮肤的局部给药，通常在皮脂量减少的闭经后女性中皮脂量增加(非专利文献1)。进一步，报道有：在摄取了雄激素受体抑制剂的情况下，促进头顶部的头发的生长，但抑制头顶部以外的体毛的生长，皮脂分泌量进一步减少；另一方面，在摄取了雄激素的情况下，抑制头顶部的头发的生长，但促进头顶部以外的体毛的生长，皮脂分泌量进一步增加，由此，认为雄激素综合地控制与皮脂腺和毛发有关的特性(非专利文献2、3)。迄今为止，开发了用于通过雄激素受体活性的抑制来改善粉刺、脱发症或多毛症的物质(非专利文献4、5)。

但是，雄激素受体活性的抑制可以产生性腺功能降低带来的副作用，例如月经不调、男性的乳房肥大、睾丸萎缩、性功能障碍(睾丸、乳腺、子宫、卵巢等的性腺的功能不全)等，因此，在美国，不允许使用用于改善上述皮脂腺和毛发的症状的雄激素受体活性抑制剂。因此，期望没有性腺功能降低带来的副作用的、对皮脂腺及毛囊组织选择性的雄激素受体活性控制剂。

HIF1α(缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1)，α亚基(alpha subunit))是通过低氧进行诱导表达的分子，通过将参与能量代谢、血管生成、细胞凋亡等的许多基因的转录活化，HIF1α发挥作为细胞的低氧应答的主调节因子的作用。在免疫系统方面，报道有HIF1α具有抑制由中性粒细胞的凋亡引起的细胞死亡的效果(非专利文献6)。在皮肤方面，还报道有HIF1α控制伤口愈合、屏障功能(非专利文献7)。另外，报道有HIF1α诱导低氧环境下的糖酵解酶组的表达上升(非专利文献8)。进一步，报道有人的皮脂腺中，氧浓度显著低至0.1％～1.3％，HIF1α表达(非专利文献9、10)。但是，皮脂腺及毛囊中的雄激素受体与HIF1α或糖酵解酶的关系还未知。

(非专利文献1)Maturitas,2008,59:174-181

(非专利文献2)Dermatol Ther,2008,21:314-328

(非专利文献3)J Clin Endocrinol Metab,2000,85:2913-2921

(非专利文献4)Cochrane database of systematic reviews,2001,CD000194

(非专利文献5)Br J Dermatol,2005,152:466-473

(非专利文献6)J Exp Med,2005,201:105-115

(非专利文献7)J invest Dermatol,2011,131:1793-1805

(非专利文献8)MoL Cell,2010,40:294-309

(非专利文献9)J Invest Dermatol,2006,126:2596-2606

(非专利文献10)J Invest Dermatol,2007,127:2445-2452

发明内容

本发明提供一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法，其中，包括以下的(A)～(D)。

(A)在低氧条件下将被检测物质适用于源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞；

(B)测定该细胞中的HIF1α的活性；

(C)将该(B)中测定的活性与对照组中的HIF1α的活性进行比较；以及

(D)基于该(C)的结果，评价被检测物质的控制HIF1α活性的效果。

另外，本发明提供一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法，其中，包括以下的(A)～(D’)。

(B’)测定该细胞中的被HIF1α诱导的因子的活性；

(C’)将该(B’)中测定的活性与对照组中的该因子的活性进行比较；以及

(D’)基于该(C’)的结果，评价被检测物质的控制该因子的活性的效果。

另外，本发明提供一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂、皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂，其中，将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种作为有效成分。

另外，本发明提供一种选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于制造皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂、皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂的用途。

另外，本发明提供一种选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制、皮脂分泌抑制、粉刺预防或改善、脱发症预防或改善、或者多毛症预防或改善的非治疗性用途。

另外，本发明提供一种用于皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制、皮脂分泌抑制、粉刺预防或改善、脱发症预防或改善、或者多毛症预防或改善中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

另外，本发明提供一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制方法、皮脂分泌抑制方法、粉刺预防或改善方法、脱发症预防或改善方法、或者多毛症预防或改善方法，其中，包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的皮脂腺细胞或毛囊细胞给药。

附图说明

图1是糖酵解酶的表达对AR活性产生的影响。

图2是HIF1α对于糖酵解酶组的表达的影响。

图3是HIF1α对于皮脂腺细胞(SZ95)中的AR活性的影响。

图4是HIF1α对于前列腺癌细胞(LNCaP)中的AR活性的影响。

图5是视黄酸添加引起的HIF1α活性变化。

具体实施方式

在本说明书中，“HIF1α(缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1)，α亚基(alpha subunit))”是指作为603348注册于OMIM、作为NG_029470.1注册于Genbank的蛋白质、其同族体(homolog)、横向同源物(paralog)或直向同源物(ortholog)。优选本说明书中的“HIF1α”是指由序列号2所示的氨基酸序列或与该序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成，且通过低氧进行表达诱导并作为转录因子起作用的蛋白质。HIF1α转至核内后，形成与其它蛋白质的杂合物，并与DNA上的被称为缺氧应答元件(Hypoxia ResponseElement，HRE)的位点结合，由此诱导细胞中的各种低氧应答。作为被HIF1α诱导的因子，可以列举糖酵解酶。作为糖酵解酶的例子，可以列举：烯醇酶1、乳酸脱氢酶A、磷酸甘油酸酯激酶1、6-磷酸葡萄糖异构酶、及己糖激酶1，这些分别被基因ENO1、LDHA、PGK1、GPI及HK1编码。

因此，在本说明书中，“HIF1α的活性”是指HIF1α产生的转录活性。HIF1α产生的转录活性可以通过检测HIF1α对HRE的结合水平、HIF1α基因的表达水平、或HIF1α蛋白质的表达水平来进行测定。

本说明书中的“HIF1α基因”是指编码上述“HIF1α”的基因。本说明书中的“HIF1α基因”优选是指作为NG_029470.1注册于Genbank的基因、其同族体、横向同源物或直向同源物，更优选是指由序列号1所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成且通过低氧而进行表达诱导、且编码作为转录因子起作用的蛋白质的多核苷酸。

本说明书中的“被HIF1α诱导的因子”(在以下的本说明书中，也称为“HIF1α诱导性因子”)是指通过HIF1α来诱导其表达或活化的因子，优选是指选自烯醇酶1、乳酸脱氢酶A、磷酸甘油酸酯激酶1、6-磷酸葡萄糖异构酶、及己糖激酶1中的糖酵解酶的至少1种。作为编码这些糖酵解酶的基因，可以列举ENO1、LDHA、PGK1、GPI及HK1。

ENO1为作为OMIM 172430、GenBank Accession No.NG_029470.1被注册的基因。优选本说明书中的“ENO1”是指由序列号3所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成，并且编码将2-磷酸甘油酸变换为磷酸烯醇丙酮酸的酶的多核苷酸。

LDHA为作为OMIM 150000、GenBank Accession No.NG_008185.1被注册的基因。优选本说明书中的“LDHA”是指由序列号4所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成，并且编码将L-乳酸和NAD变换为丙酮酸盐(或酯)和NADH的酶的多核苷酸。

PGK1为作为OMIM 311800、GenBank Accession No.NG_008862.1被注册的基因。优选本说明书中的“PGK1”是指由序列号5所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成，并且编码将1,3-二磷酸甘油酸(1,3-diphosphoglycerate)变换为3-磷酸甘油酸(3-phosphoglycerate)的酶的多核苷酸。

GPI为作为OMIM 172400、GenBank Accession No.NG_012838.2被注册的基因。优选本说明书中的“GPI”是指由序列号6所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成，并且编码将葡萄糖-6-磷酸变换为果糖-6-磷酸的酶的多核苷酸。

HK1为作为OMIM 142600、GenBank Accession No.NG_012077.1被注册的基因。优选本说明书中的“HK1”是指由序列号7所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成，并且编码将葡萄糖变换为葡萄糖-6-磷酸的酶的多核苷酸。

在本说明书中，“被HIF1α诱导的因子(或HIF1α诱导性因子)的活性”优选是指选自烯醇酶1、乳酸脱氢酶A、磷酸甘油酸酯激酶1、6-磷酸葡萄糖异构酶、及己糖激酶1中的糖酵解酶的至少1种的活性。

在本说明书中，与氨基酸序列及核苷酸序列有关的“至少90％的同一性”是指90％以上、优选为95％以上、更优选为98％以上、进一步优选为99％以上的同一性。

本说明书中，核苷酸序列及氨基酸序列的同一性通过李普曼-皮尔逊法(Lipman-Pearson法；Science,1985,227:1435-1441)进行计算。具体而言，通过使用遗传信息处理软件Genetyx-Win(Ver.5.1.1，软件开发)的同源性分析(Search homology)程序，将Unitsize to compare(ktup)设定为2进行分析而算出。

本说明书中，“脱发症”是指以头发的减少或头发稀疏为特征的症状，“多毛症”是指以胡须、手足、躯干部等的毛发变粗或变长而导致的毛量的增加为特征的症状。

本说明书中，“预防”是指个体中的疾病或状态的发病的防止、抑制或延迟、或者使个体的疾病或状态的发病的危险性降低。本说明书中，“改善”是指疾病或状态的好转、疾病或状态的恶化的防止、抑制或延迟、或者疾病或状态的进行的逆转、防止、抑制或延迟。

本说明书中，“非治疗性”是指不包括医疗行为，即不包括对人进行手术、治疗或诊断的方法的概念，更具体而言，为不包括医师、或者接受了医疗从业者或医师的指示的人对人实施手术、治疗或诊断的方法的概念。

本发明涉及提供一种探索不担心通过性腺的雄激素受体的副作用的物质的方法，所述物质用于选择性地对皮脂腺及毛囊的雄激素受体的活性进行控制。

本发明者们为了探索在皮脂腺及毛囊中选择性地有助于雄激素受体活性的分子，进行了深入研究。其结果，本发明者们发现：HIF1α在皮脂腺及毛囊中的表达显著地高于在性腺中的表达；及HIF1α在皮脂腺细胞及毛囊中，在低氧条件下正向控制雄激素受体活性。即，发现：可以通过以低氧条件下的细胞的HIF1α活性水平作为指标，评价或选择能够选择性地控制皮脂腺及毛囊的雄激素受体活性的雄激素受体活性控制剂。

根据本发明，可以探索选择性地对皮脂腺及毛囊的雄激素受体的活性进行控制的物质。通过本发明的方法所探索的雄激素受体活性控制剂可以用于与皮脂腺及毛发有关的症状的控制，例如皮脂分泌控制、粉刺预防或改善、脱发症预防或改善、多毛症预防或改善、老年性干皮症预防或改善等。通过本发明的方法所探索的雄激素受体活性控制剂的由性腺的雄激素受体引发的副作用的危险性低，可以安全地使用。

如后述的实施例所示，HIF1α的表达水平与性腺相比，在皮脂腺及毛囊中显著地较高(实施例1)。本发明者们发现：HIF1α在低氧条件下正向控制皮脂腺的雄激素受体活性(实施例4)。另外，本发明者们发现：通过HIF1α活化而诱导表达的因子正向地控制皮脂腺的雄激素受体活性(实施例2)。另一方面，众所周知雄激素作用于皮脂腺或毛囊并参与皮脂分泌或毛发生长(例如，非专利文献1、2)。因此，使HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性变化的物质皮脂腺细胞或毛囊细胞选择性地使雄激素受体的活性变化，进而，可以预防或改善通过皮脂腺或毛囊细胞中的雄激素受体的活化或抑制而带来的各种状态，例如皮脂的过量分泌或分泌减少、粉刺、脱发、多毛等。

本发明提供一种方法，其中，以HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性为指标，评价各种物质的雄激素受体活性控制作用，或者进一步基于该评价，选择皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂、或与皮脂腺及毛发有关的症状的控制剂，例如皮脂分泌控制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、多毛症预防或改善剂、老年性干皮症预防或改善剂等。本发明的评价或选择方法可以在体外(in vitro)或离体(ex vivo)进行。

因此，本发明的一个实施方式为一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法，其中，包括以下的(A)～(D)：

(B)测定该细胞中的HIF1α的活性；

(C)将该(B)中测定的活性与对照组的HIF1α的活性进行比较；以及

(D)基于该(C)的结果，评价被检测物质的控制HIF1α的活性的效果。

另外，本发明的另一实施方式为一种皮脂分泌控制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、多毛症预防或改善剂、或者老年性干皮症预防或改善剂的评价或选择方法，其中，包括上述(A)～(D)。

本发明的另外的实施方式为一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法，其中，包括以下的(A)～(D’)：

(B’)测定该细胞中的被HIF1α诱导的因子的活性；

(C’)将该(B’)中测定的活性与对照组的该因子的活性进行比较；以及

(D’)基于该(C’)的结果，评价被检测物质的控制该因子的活性的效果。在优选的实施方式中，该被HIF1α诱导的因子为选自烯醇酶1、乳酸脱氢酶A、磷酸甘油酸酯激酶1、6-磷酸葡萄糖异构酶、及己糖激酶1中的糖酵解酶的至少1种。

另外，本发明的另外的实施方式为一种皮脂分泌控制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、多毛症预防或改善剂、或者老年性干皮症预防或改善剂的评价或选择方法，其中，包括上述(A)及(B’)～(D’)。

本发明的方法中所使用的被检测物质只要是期望作为雄激素受体活性控制剂、皮脂分泌控制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、多毛症预防或改善剂、或者老年性干皮症预防或改善剂使用的物质，就没有特别地限制。该被检测物质可以为天然存在的物质，也可以为用化学或生物学的方法等人工地合成的物质，另外，可以为化合物，也可以为组合物或混合物。

作为本发明的方法中所使用的“源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞”，可以列举从哺乳动物中分离的皮脂腺细胞或毛囊细胞、或者它们的培养物。作为该皮脂腺细胞或毛囊细胞的培养物，可以列举皮脂腺细胞株、毛囊细胞株、皮肤或毛囊的组织或器官培养物(分离毛囊培养物、器官培养毛囊、三维培养皮肤等)等，优选为确定的人皮脂腺细胞株。作为人皮脂腺细胞株的实例，可以列举永生化源自人的皮脂腺细胞细胞株(例如，DSMACC2383或SZ95、及SEB-1)(参照日本特表2002-535984号公报、JInvest Dermatol,1999,113:1011-1120及JInvest Dermatol,2003,120:905-914)，但并不限定于这些。

作为上述源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞来源的哺乳动物，可以列举例如人、小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔、猫、狗、猪、猴等，优选为人，但并不限定于这些。

在本发明的方法中，在低氧条件下将被检测物质适用于上述源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞。作为其具体的顺序的实例，可以列举：在预先添加有被检测物质的培养基中播种该细胞，在低氧条件下进行培养；将被检测物质添加于在低氧条件下培养该细胞的培养基，进一步在低氧条件下进行培养；将被检测物质添加于在通常氧浓度下培养该细胞的培养基之后，在低氧条件下进一步培养等。在该细胞为器官培养或组织培养的细胞的情况下，代替将被检测物质添加于培养基，也可以将其对该器官或组织直接给药。

在本发明的方法中，通过将上述源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞在低氧条件下进行培养，诱导该细胞中的HIF1α或HIF1α诱导性因子的表达。因此，本发明中的“低氧条件”只要是可以诱导细胞中的HIF1α的表达的氧浓度条件即可，但优选细胞培养气氛中的氧浓度为约5％以下，更优选为约0.1％～约5％的条件。低氧条件可以通过具备氧浓度控制器的培养器来实现。这样的培养器为公知的，市售有各种类型(例如，BIONIX低氧培养试剂盒，SUGIYAMA-GEN CO.,LTD；AnaeroPack-Anaero，三菱瓦斯化学株式会社)。

接着，在本发明的方法中，测定上述源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞中的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性。优选HIF1α的活性的测定通过测定HIF1α对HRE的结合水平、HIF1α基因的表达水平、或HIF1α的蛋白质表达水平来进行。其中，从简便且迅速方面出发，优选为测定对HRE的结合水平的方法。HIF1α诱导性因子的活性的测定通过该因子的基因或其所编码的蛋白质的表达水平的测定来进行。优选HIF1α诱导性因子的活性的测定通过选自ENO1、LDHA、PGK1、GPI及HK1中的至少1种基因的表达水平、或者选自这些基因所编码的酶中的至少1种酶的表达或酶活性的水平的测定来进行。

HIF1α对HRE的结合活性水平的测定只要按照该领域中公知的方法进行即可。例如，只要测定在HRE的下游导入有可操作地连结有标记基因(例如荧光素酶基因)得到的细胞中的该标记基因的表达(例如荧光素酶活性)即可。HIF1α或HIF1α诱导性因子的表达量可以通过测定HIF1α或HIF1α诱导性因子的基因的表达量或蛋白质的表达量而求出。HIF1α或HIF1α诱导性因子的基因的表达量可以通过将由该基因转录的mRNA定量来进行测定。mRNA的定量可以通过实时RT-PCR法、RNA分解酶保护实验法、或Northern印迹分析法来进行。HIF1α或HIF1α诱导性因子的蛋白质表达量的测定可以通过通常的免疫测定法，例如RIA法、EIA法、ELISA、生物测定法、蛋白质组、蛋白质免疫印迹(western blot)等来进行。其中，实时RT-PCR法廉价且简便。

本发明的方法中，测定对象的源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞(试验组)的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性与对照组的活性进行比较。作为对照组，可以列举为与试验组相同的源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞且没有使之接触被检测物质的细胞。对照组的HIF1α活性或HIF1α诱导性因子的表达量的测定顺序如上所述。

上述比较的结果，与对照组相比，如果试验组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性增加或减少，则上述被检测物质被评价为具有控制HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性的效果。

例如，与对照组相比，如果试验组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性减少，则上述被检测物质被评价为具有使HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性减少的效果。在优选的实施方式中，在试验组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性相对于对照组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性统计学上显著性减少的情况下，被检测物质被评价为具有使HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性减少的效果。在其它优选的实施方式中，在将对照组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性设定为100％时，如果试验组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性为95％以下、优选为90％以下、更优选为85％以下、进一步优选为80％以下，则被检测物质被评价为具有减少HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性的效果。

另一方面，与对照组相比，如果试验组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性增加，则上述被检测物质被评价为具有使HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性增加的效果。在优选的实施方式中，在试验组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性相对于对照组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性统计学上显著性增加的情况下，被检测物质被评价为具有使HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性增加的效果。在其它优选的实施方式中，在将对照组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性设定为100％时，在试验组的HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性为105％以上、优选为110％以上、更优选为115％以上、进一步优选为120％以上的情况下，被检测物质被评价为具有增加HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性的效果。

上述评价的结果，被评价为具有控制HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性的效果的被检测物质被选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂。更详细而言，将被评价为具有使HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性减少的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂、皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂。另一方面，将被评价为具有使HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性增加的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性促进剂、皮脂分泌促进剂、或者老年性干皮症预防或改善剂。

作为具有使HIF1α或HIF1α诱导性因子的活性减少的效果的物质的实例，可以列举对于HIF1α或HIF1α诱导性因子的基因的siRNA等。因此，对于HIF1α或HIF1α诱导性因子的基因的siRNA可以用于皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制、皮脂分泌抑制、粉刺预防或改善、脱发症预防或改善、或者多毛症预防或改善。

本发明的上述siRNA的用途可以为治疗性用途，也可以为非治疗性用途。作为治疗性用途的实例，可以列举对于患有脱发症或多毛症的人及非人哺乳动物的用途。作为非治疗性用途的实例，可以列举用于美容目的的皮脂分泌抑制、油性皮肤的改善、或者粉刺防止的用途，以及用于美容目的的头发的脱发防止或体毛减少的用途。

因此，本发明的另外的实施方式为一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂、皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂，其中，以选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种作为有效成分。

本发明的另外的实施方式为一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制方法、皮脂分泌抑制方法、粉刺预防或改善方法、脱发症预防或改善方法、或者多毛症预防或改善方法，其中，包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的皮脂腺细胞或毛囊细胞给药。作为这些方法中的对象，可以列举人及非人哺乳动物。优选作为该对象，可以列举需要皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制或者期望其的对象。更详细而言，可以列举需要皮脂分泌抑制、粉刺预防或改善、脱发症预防或改善、或多毛症预防或改善或者期望其的对象。

在上述皮脂分泌抑制方法及粉刺预防或改善方法中，优选将该siRNA对皮脂腺细胞给药。在上述脱发症预防或改善方法中，优选将该siRNA向头部的毛囊细胞给药。在上述多毛症预防或改善方法中，优选将该siRNA向头部、或头部以外的部位(例如脸、颈、手臂、手、腿、脚、躯干等)的毛囊细胞给药。

在优选的实施方式中，将上述siRNA经皮给药，或者对皮肤局部给药。

在优选的实施方式中，作为上述非人哺乳动物，可以列举小鼠、大鼠等。

对于HIF1α或HIF1α诱导性因子的基因的siRNA可以利用公知的软件(例如siDirect)、或合成受托服务(Life technologies，由Sigma-Aldrich等提供)等进行设计或合成。一般而言，siRNA被设计为21～30个碱基、优选为21～25个碱基左右的短的双链RNA(或RNA/DNA)。siRNA可以具有平滑末端，但通常在两条链的各3’末端具有2个碱基左右的突出部(overhang)。突出部位大多被设计为TT，但并不限定于此。

作为可以在本发明中使用的siRNA的优选的实例，可以列举由以下的序列的RNA及其互补链构成的双链RNA或RNA/DNA双链。这些为对于HIF1α基因的siRNA。

5’-CCAGCCGCUGGAGACACAAUCAUAU-3’(序列号8)

5’-GGGAUUAACUCAGUUUGAACUAACU-3’(序列号9)

5’-GAAAUUCCUUUAGAUAGCAAGACUU-3’(序列号10)

序列号8的RNA对应于序列号1的1204～1228号碱基。序列号9的RNA对应于序列号1的360～384号碱基。序列号9的RNA对应于序列号1的700～724号碱基。

作为可以在本发明中使用的siRNA的另外的实例，可以列举由与序列号1的1204～1228号碱基、序列号1的360～384号碱基、或序列号1的700～724号碱基特异性结合的RNA和其互补链构成的双链RNA或RNA/DNA双链。作为该siRNA的优选的实例，可以列举由与序列号8、序列号9或序列号10的RNA的任一个有90％以上、优选为95％以上相同序列的RNA和其互补链构成的双链RNA或RNA/DNA双链。

作为本发明的例示性实施方式，进一步在本说明书中公开以下的物质、制造方法、用途或方法。但是，本发明并不限定于这些实施方式。

＜1＞一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法，其中，包括以下的(A)～(D)。

(B)测定该细胞中的HIF1α的活性；

＜2＞根据＜1＞所述的方法，其中，优选还包括以下的(E)：

(E)将在上述(D)中被评价为具有使HIF1α的活性减少的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂、皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂。

＜3＞根据＜1＞所述的方法，其中，优选还包括以下的(E)：

(E)将在上述(D)中被评价为具有使HIF1α的活性增加的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性促进剂，皮脂分泌促进剂，或者老年性干皮症预防或改善剂。

＜4＞一种皮脂分泌控制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、多毛症预防或改善剂、或者老年性干皮症预防或改善剂的评价或选择方法，其中，包括以下的(A)～(D)。

(B)测定该细胞中的HIF1α的活性；

＜5＞根据＜4＞所述的方法，其中，优选还包括以下的(E)：

(E)将在上述(D)中被评价为具有使HIF1α的活性减少的效果的被检测物质选择作为皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂。

＜6＞根据＜4＞所述的方法，其中，优选还包括以下的(E)：

(E)将在上述(D)中被评价为具有使HIF1α的活性增加的效果的被检测物质选择作为皮脂分泌促进剂、或者老年性干皮症预防或改善剂。

＜7＞根据＜1＞～＜6＞中任一项所述的方法，其中，优选上述源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞为源自人的细胞。

＜8＞根据＜1＞～＜6＞中任一项所述的方法，其中，优选上述源自皮脂腺的细胞为确定的人皮脂腺细胞株。

＜9＞根据＜1＞～＜8＞中任一项所述的方法，其中，上述低氧条件为培养气氛中的氧浓度为优选约5％以下、更优选约0.1％～约5％的条件。

＜10＞根据＜1＞～＜9＞中任一项所述的方法，其中，优选上述HIF1α的活性的测定为HIF1α对缺氧应答元件的结合水平的测定。

＜11＞根据＜1＞～＜9＞中任一项所述的方法，其中，优选上述HIF1α的活性的测定为HIF1α基因的表达水平或HIF1α的蛋白质表达水平的测定。

＜12＞根据＜11＞所述的方法，其中，优选上述HIF1α基因为由序列号1所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成的多核苷酸。

＜13＞根据＜1＞～＜12＞中任一项所述的方法，其中，优选上述HIF1α为由序列号2所示的氨基酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成的蛋白质。

＜14＞根据＜1＞～＜13＞中任一项所述的方法，其中，优选在上述(B)中测定的活性相对于上述对照组的活性统计学上显著性减少的情况下，上述被检测物质被评价为具有使HIF1α的活性减少的效果。

＜15＞根据＜1＞～＜13＞中任一项所述的方法，其中，优选在上述(B)中测定的活性相对于上述对照组的活性统计学上显著性增加的情况下，上述被检测物质被评价为具有使HIF1α的活性增加的效果。

＜16＞根据＜1＞～＜13＞中任一项所述的方法，其中，优选在将上述对照组的HIF1α的活性设定为100％时，在上述(B)中测定的活性为95％以下、优选为90％以下、更优选为85％以下、进一步优选为80％以下的情况下，上述被检测物质被评价为具有使HIF1α的活性减少的效果。

＜17＞根据＜1＞～＜13＞中任一项所述的方法，其中，优选在将上述对照组的HIF1α的活性设定为100％时，在上述(B)中测定的活性为105％以上、优选为110％以上、更优选为115％以上、进一步优选为120％以上的情况下，上述被检测物质被评价为具有使HIF1α的活性增加的效果。

＜18＞一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法，其中，包括以下的(A)～(D’)。

(B’)测定该细胞中的被HIF1α诱导的因子的活性；

＜19＞根据＜18＞所述的方法，其中，优选还包括以下的(E’)：

(E’)将在上述(D’)中被评价为具有使被HIF1α诱导的因子的活性减少的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂、皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂。

＜20＞根据＜18＞所述的方法，其中，优选还包括以下的(E’)：

(E’)将在上述(D’)中被评价为具有使被HIF1α诱导的因子的活性增加的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性促进剂、皮脂分泌促进剂、或者老年性干皮症预防或改善剂。

＜21＞一种皮脂分泌控制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、多毛症预防或改善剂、或者老年性干皮症预防或改善剂的评价或选择方法，其中，包括以下的(A)～(D’)：

(B’)测定该细胞中的被HIF1α诱导的因子的活性；

＜22＞根据＜21＞所述的方法，其中，优选还包括以下的(E’)：

(E’)将在上述(D’)中被评价为具有使被HIF1α诱导的因子的活性减少的效果的被检测物质选择作为皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂。

＜23＞根据＜21＞所述的方法，其中，优选还包括以下的(E’)：

(E’)将在上述(D’)中被评价为具有使被HIF1α诱导的因子的活性增加的效果的被检测物质选择作为皮脂分泌促进剂、或者老年性干皮症预防或改善剂。

＜24＞根据＜18＞～＜23＞中任一项所述的方法，其中，优选上述源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞为源自人的细胞。

＜25＞根据＜18＞～＜23＞中任一项所述的方法，其中，优选上述源自皮脂腺的细胞为确定的人皮脂腺细胞株。

＜26＞根据＜18＞～＜25＞中任一项所述的方法，其中，上述低氧条件为培养气氛中的氧浓度为优选约5％以下、更优选约0.1％～约5％的条件。

＜27＞根据＜18＞～＜26＞中任一项所述的方法，其中，上述被HIF1α诱导的因子的活性的测定优选为选自ENO1、LDHA、PGK1、GPI、及HK1中的至少1种基因的表达水平、或选自该基因所编码的酶中的至少1种酶的表达水平、或选自该基因所编码的酶中的至少1种酶的酶活性水平的测定。

＜28＞根据＜27＞所述的方法，其中，优选：

上述ENO1基因为由序列号3所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成的多核苷酸，

上述LDHA基因为由序列号4所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成的多核苷酸，

上述PGK1基因为由序列号5所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成的多核苷酸，

上述GPI基因为由序列号6所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成的多核苷酸，

上述HK1基因为由序列号7所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成的多核苷酸。

＜29＞根据＜18＞～＜28＞中任一项所述的方法，其中，优选在上述(B’)中测定的活性相对于上述对照组的活性统计学上显著性减少的情况下，上述被检测物质被评价为具有使被HIF1α诱导的因子的活性减少的效果。

＜30＞根据＜18＞～＜28＞中任一项所述的方法，其中，优选在上述(B’)中测定的活性相对于上述对照组的活性统计学上显著性增加的情况下，上述被检测物质被评价为具有使被HIF1α诱导的因子的活性增加的效果。

＜31＞根据＜18＞～＜28＞中任一项所述的方法，其中，优选在将上述对照组的HIF1α的活性设定为100％时，在上述(B’)中测定的活性为95％以下、优选为90％以下、更优选为85％以下、进一步优选为80％以下的情况下，上述被检测物质被评价为具有减少被HIF1α诱导的因子的活性的效果。

＜32＞根据＜18＞～＜28＞中任一项所述的方法，其中，优选在将上述对照组的HIF1α的活性设定为100％时，在上述(B’)中测定的活性为105％以上、优选为110％以上、更优选为115％以上、进一步优选为120％以上的情况下，上述被检测物质被评价为具有增加被HIF1α诱导的因子的活性的效果。

＜33＞一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂，其中，以选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种作为有效成分。

＜34＞一种皮脂分泌抑制剂，其中，以选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种作为有效成分。

＜35＞一种粉刺预防或改善剂，其中，以选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种作为有效成分。

＜36＞一种脱发症预防或改善剂，其中，以选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种作为有效成分。

＜37＞一种多毛症预防或改善剂，其中，以选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种作为有效成分。

＜38＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于制造皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂的用途。

＜39＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于制造皮脂分泌抑制剂的用途。

＜40＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于制造粉刺预防或改善剂的用途。

＜41＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于制造脱发症预防或改善剂的用途。

＜42＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于制造多毛症预防或改善剂的用途。

＜43＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于抑制皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性的用途。

＜44＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于抑制皮脂分泌的用途。

＜45＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于预防或改善粉刺的用途。

＜46＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于预防或改善脱发症的用途。

＜47＞选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种用于预防或改善多毛症的用途。

＜48＞在上述＜43＞～＜47＞中任一项中，优选上述用途为非治疗性用途。

＜49＞用于在皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

＜50＞用于在皮脂分泌抑制中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

＜51＞用于在粉刺预防或改善中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

＜52＞用于在脱发症预防或改善中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

＜53＞用于在多毛症预防或改善中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

＜54＞一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制方法，其中，包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的皮脂腺细胞或毛囊细胞给药。

＜55＞一种皮脂分泌抑制方法，其中，包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的皮脂腺细胞给药。

＜56＞一种粉刺预防或改善方法，其中，包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的皮脂腺细胞给药。

＜57＞一种脱发症预防或改善方法，其中，包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的头部的毛囊细胞给药。

＜58＞一种多毛症预防或改善方法，其中，包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的毛囊细胞给药。

＜59＞根据＜54＞～＜58＞中任一项所述的方法，其中，优选上述对象为人或非人哺乳动物。

＜60＞根据＜54＞～＜59＞中任一项所述的方法，其中，优选上述给药为经皮给药或对皮肤的局部给药。

＜61＞在上述＜33＞～＜60＞中任一项中，优选：

上述HIF1α基因为由序列号1所示的核苷酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的核苷酸序列构成的多核苷酸，

＜62＞在上述＜33＞～＜61＞中任一项中，优选上述siRNA为由序列号8、序列号9或序列号10的RNA及其互补链构成的双链RNA或RNA/DNA双链，或为由与序列号8、序列号9或序列号10的RNA的任一个有90％以上、优选为95％以上相同序列的RNA及其互补链构成的双链RNA或RNA/DNA双链。

实施例

以下，示出实施例来更具体地说明本发明。

＜方法＞

参考例1.细胞

将人皮脂腺细胞株(SZ95)在含有10％FBS、5ng/mL表皮生长因子(EpidermalGrowth Factor)的Sebomed^TM基础培养基(Biochrom)中进行培养。将人前列腺癌细胞株(LNCaP)在含有10％FBS的RPMI1640(Life technologies)中进行培养。通常氧浓度下的培养在大气中(氧浓度20.9％)进行。低氧条件下的培养使用AnaeroPack-Anaero 5％(三菱瓦斯化学株式会社)及角型广口保温瓶(SUGIYAMA-GEN CO.,LTD)、在氧浓度为0.1％、5％CO₂、37℃的条件下进行培养。SZ95由Prof.Dr.Prof.h.c.Dr.h.c.Christos C.Zouboulis供给。LNCaP由ATCC购入。

参考例2.质粒DNA的制作

(1)雄激素受体基因

使用PrimeSTAR(注册商标)GXL DNA Polymerase(Takara bio)，通过PCR将编码人雄激素受体(androgen reseptor，AR)的基因的可读框(ORF)区域扩增，接着使用In-FusionHD Cloning Kit(Takara Bio)将其插入到用EcoRI进行过处理的pcDNA3.1(Lifetechnologies)。由用目标质粒DNA进行了转化的大肠杆菌，使用EndoFree PlasmidPurification Kit(Qiagen)精制质粒DNA。将精制后的质粒DNA命名为pcDNA3.1-AR。

(2)糖酵解酶基因

以与(1)同样的顺序将编码与糖酵解有关的酶烯醇酶1、乳酸脱氢酶A、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、磷酸甘油酸酯激酶1、醛缩酶A、己糖激酶1、6-磷酸葡萄糖异构酶、以及磷酸丙糖异构酶的基因(分别为ENO1、LDHA、GAPDH、PGK1、ALDOA、HK1、GPI及TPI)的可读框(ORF)区域插入到pcDNA3.1(Life technologies)。由用目标的质粒DNA进行了转化的大肠杆菌，使用EndoFree Plasmid Purification Kit(Qiagen)精制质粒DNA。

(3)HIF1α活性标记基因

作为HIF1α活性测定用的质粒DNA的pGL4.42(Promega)在HRE的控制下表达萤火虫荧光素酶。将在pGL4.42中存在于萤火虫荧光素酶基因的下游的巨细胞病毒增强/早期启动子(Cytomegalovirus enhance/early promoter)和潮霉素耐性基因用Sal1和BamH1切出，使用In-Fusion HD Cloning Kit(Takara Bio)向其中插入与SV40启动子连结的海肾荧光素酶(Renilla luciferase)基因。由目标质粒DNA发生了转化的大肠杆菌，使用EndoFreePlasmid Purification Kit(Qiagen)精制质粒DNA。将精制的质粒DNA命名为pGL4.42(Rluc)。

参考例3.RNA提取、cDNA合成、实时PCR

使用RNeasy(注册商标)少量提取试剂盒，从细胞中按照所附的说明书提取总RNA。来自提取的总RNA的cDNA合成中使用QuantiTect(注册商标)反转录试剂盒(QlAGEN)。实时用PCR使用TaqMan(注册商标)Universal master Mix(Life technologies)和TaqMan(注册商标)探针(Life technoIogies)，将各基因的mRNA表达量定量。定量得到的表达量以RPLP0的表达量进行校正。

参考例4.HIF1α免疫组织化学染色

用于免疫组织化学染色的组织标本在制作冷冻切片之后，在-20℃下在冷丙酮中固定10分钟。然后，使用Histofine试剂盒(NICHIREI BIOSCIENCE INC.)，按照所附的说明书实施染色。将抗HIF1α抗体(Novus Biologicals)稀释成1/300来使用。显色中使用DAB溶液(1mM DAB、50mM Tris-HCL缓冲液(pH7.6)、0.006％过氧化氢)，复染中使用苏木精溶液。为了半定量地分析组织标本中的HIF1α的表达强度，在显微镜下计数了HIF1α阳性(被茶色染色的细胞)及阴性(被紫色染色的细胞)的细胞数。作为HIF1α阳性/阴性的评价对象的细胞为皮脂腺、毛囊、卵巢及睾丸中的AR阳性细胞即皮脂腺构成细胞、毛囊构成细胞、卵巢的卵泡囊细胞、及睾丸的细精管构成细胞。

实施例1.皮脂腺中的HIF1α的表达

制备皮脂腺及毛囊(35岁男性1名)、睾丸组织(33岁男性1名)、以及卵巢组织(30岁女性1名)的标本。各组织标本的HIF1α免疫组织化学染色的结果明确了，在皮脂腺及毛囊中，与睾丸及卵巢相比，HIF1α的表达(阳性率)显著较高(表1)。

[表1]

	皮脂腺	毛囊	睾丸	卵巢
					评价的细胞数	300个细胞	300个细胞	300个细胞	300个细胞
阳性细胞数	157个细胞	107个细胞	4个细胞	5个细胞
					阴性细胞数	143个细胞	293个细胞	296个细胞	295cells个细胞
阳性率	47.60％	35.60％	1.30％	1.60％

实施例2.糖酵解酶的表达对AR活性产生的影响

按照J Steroid Biochem&Mol Biol,123；58-64,2011中记载的顺序，制作过量表达AR的细胞，研究了糖酵解酶表达对于该AR活性的影响。

将SZ95细胞播种于96孔板，置换成含有5％木炭处理血清的Sebomed^TM基础培养基(Biochrom)。由在萤火虫荧光素酶基因的上游含有AR的结合序列(MMTV)的pGL4.36(Promega)，用限制性内切酶除去耐药基因Hygro，将海肾萤光素酶基因克隆至其中。使用ViaFect(Promega)，按照产品所附的说明书在上述SZ95细胞中导入该修饰pGL4.36、参考例2(1)中制作的pcDNA3.1-AR、和参考例2(2)中制作的各种糖酵解酶的任一种的ORF被插入到pcDNA3.1而成的质粒DNA。作为对照，导入在pcDNA3.1的多克隆位点上不含任何序列的质粒DNA。从导入至24小时后，置换成含有DHT(二氢睾酮，终浓度1nM)的培养基并培养6小时，其后，测定细胞的AR活性。AR活性的测定中，使用Dual-Glo Luciferase Assay System(Promega公司)，按照所附的说明书测定细胞的萤火虫荧光素酶(AR的经由MMTV的转录活化的指标)及海肾荧光素酶(质粒导入效率的指标)的发光强度。将萤火虫荧光素酶的发光强度除以海肾荧光素酶的发光强度所得到的值作为相对发光值(Relative Light Unit，RLU)算出。将相对于对照的RLU值的相对RLU值作为各细胞的AR活性取得。

将结果示于图1及表2中。与导入有对照质粒的细胞相比，在使ENO1、LDHA、PGK1、GPI或HK1过量表达的细胞中，AR活性显著性上升。迄今为止，没有报道糖酵解类的酶控制AR活性，这次初次明确了在皮脂腺细胞中几个糖酵解酶组控制AR活性。

[表2]

实施例3.HIF1α对于糖酵解酶组的表达的影响

研究了通过皮脂腺细胞中的HIF1α控制糖酵解酶组表达的可能性。

将SZ95细胞播种于96孔板，置换成含有5％木炭处理血清的培养基。使用Lipofectamine^TM RNAiMAX Transfection Reagent(Life technologies)，按照产品所附的说明书在该细胞中导入Control siRNA(Stealth RNAi^TM shiRNA Negative Controls，12935-400和12935-200，Life technologies)或HIF1α的siRNA(Stealth SelectRNAi^TMshiRNA，HSS104774和HSS104775和HSS179231，Life technologies)。将该细胞在低氧条件下(氧浓度约0.1％)培养24小时。按照参考例3的顺序，从细胞中回收RNA，用实时PCR将作为在实施例2中使AR活性提高的基因的ENO1、LDHA、PGK1、GPI及HK1的表达定量。

将结果示于图2及表3中。通过抑制HIF1α的表达，ENO1、LDHA、PGKl、GPI及HK1的表达显著地减少。

[表3]

实施例4.HIF1α对于皮脂腺细胞中的AR活性的影响

将SZ95细胞播种于96孔板，置换成含有5％木炭处理血清的培养基。使用Lipofectamine^TM RNAiMAX Transfection Reagent(Life technologies)，按照产品所附的说明书在该细胞中导入Control siRNA或HIF1α的siRNA(Life technologies)。将细胞培养24小时后，使用ViaFect(Promega)，按照产品所附的说明书导入参考例2(1)中制作的pcDNA3.1-AR、以及克隆有与实施例2中使用的相同的海肾荧光素酶基因的修饰pGL4.36。24小时后，将细胞置换为含有DHT(终浓度0.1、1、10nM)的培养基，在低氧条件下(氧浓度0.1％)下进行培养。作为对照，置换为含有100％乙醇的培养基，在低氧条件下(氧浓度0.1％)下进行培养。24小时后，以与实施例2同样的顺序算出相对发光值(Relative LightUnit，RLU)，作为各细胞的AR活性取得。

将结果示于图3及表4中。在抑制了HIF1α的表达的细胞中，在0.1～10nM的全部DHT浓度下，AR活性显著地降低。

[表4]

比较例1.HIF1α对于前列腺癌细胞中的AR活性的影响

报道有在前列腺癌细胞LNCaP中，在0.1nM以下的低DHT浓度范围中HIF1α控制AR的活性(J Steroid Biochem&Mol Bio1,123:58-64,2011)。但是，认为通常的生物体内的DHT及睾酮以更高的浓度存在(J Clin Endocrinol Metab,1994,79:703-706、J CIinEndocrinol Metab,1998,83:2266-2274)。本发明者们为了分析高DHT浓度下的LNCaP中的HIF1α对AR活性的贡献，进行了与实施例4同样的实验。其结果，在LNCaP中，与过去的报道同样地，0.1nM的DHT浓度下通过HIF1α的表达抑制而AR活性显著地降低，但在1～10nM的DHT浓度范围中，不能确认由HIF1α的表达抑制而产生的显著的AR活性的变化(图4及表5)。由这些结果可知：在皮脂腺细胞中表达的HIF1α与前列腺癌细胞相比，在较广的范围的DHT浓度范围中控制AR活性。另一方面，启示了在通常的DHT浓度范围下，HIF1α不控制前列腺癌的AR活性。

[表5]

实施例5.视黄酸对于皮脂腺细胞中的HIF1α活性的影响

在皮脂腺细胞中添加作为粉刺的改善药而已知的视黄酸(Br J Dermatol,107:583-590,1982)，研究了其对于HIF1α活性的影响。

在SZ95细胞中导入参考例2(3)中制作的HIF1α活性测定用的质粒DNApGL4.42(Rluc)。24小时后，在培养基中添加视黄酸，实施低氧条件下的培养。作为对照，使用添加有100％乙醇溶剂的培养基。15小时后，以与实施例2同样的顺序算出相对发光值(RLU)，作为细胞的HIF1α的活性取得。

将结果示于图5及表6中。与对照的细胞相比，在添加有视黄酸的细胞中浓度依赖性地抑制了HIF1α的活性。

[表6]

序列表

<110> 花王株式会社

<120> 评价或选择皮肤或毛囊中的皮脂腺特异性雄激素受体调节剂的方法

<130> KS1434

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2481

<212> DNA

<213> 智人

<400> 1

atggagggcg ccggcggcgc gaacgacaag aaaaagataa gttctgaacg tcgaaaagaa 60

aagtctcgag atgcagccag atctcggcga agtaaagaat ctgaagtttt ttatgagctt 120

gctcatcagt tgccacttcc acataatgtg agttcgcatc ttgataaggc ctctgtgatg 180

aggcttacca tcagctattt gcgtgtgagg aaacttctgg atgctggtga tttggatatt 240

aagatgaca tgaaagcaca gatgaattgc ttttatttga aagccttgga tggttttgtt 300

atggttctca cagatgatgg tgacatgatt tacatttctg ataatgtgaa caaatacatg 360

ggattaactc agtttgaact aactggacac agtgtgtttg attttactca tccatgtgac 420

catgaggaaa tgagagaaat gcttacacac agaaatggcc ttgtgaaaaa gggtaaagaa 480

caaaacacac agcgaagctt ttttctcaga atgaagtgta ccctaactag ccgaggaaga 540

actatgaaca taaagtctgc aacatggaag gtattgcact gcacaggcca cattcacgta 600

tatgatacca acagtaacca acctcagtgt gggtataaga aaccacctat gacctgcttg 660

gtgctgattt gtgaacccat tcctcaccca tcaaatattg aaattccttt agatagcaag 720

actttcctca gtcgacacag cctggatatg aaattttctt attgtgatga aagaattacc 780

gaattgatgg gatatgagcc agaagaactt ttaggccgct caatttatga atattatcat 840

gctttggact ctgatcatct gaccaaaact catcatgata tgtttactaa aggacaagtc 900

accacaggac agtacaggat gcttgccaaa agaggtggat atgtctgggt tgaaactcaa 960

gcaactgtca tatataacac caagaattct caaccacagt gcattgtatg tgtgaattac 1020

gttgtgagtg gtattattca gcacgacttg attttctccc ttcaacaaac agaatgtgtc 1080

cttaaaccgg ttgaatcttc agatatgaaa atgactcagc tattcaccaa agttgaatca 1140

gaagatacaa gtagcctctt tgacaaactt aagaaggaac ctgatgcttt aactttgctg 1200

gccccagccg ctggagacac aatcatatct ttagattttg gcagcaacga cacagaaact 1260

gatgaccagc aacttgagga agtaccatta tataatgatg taatgctccc ctcacccaac 1320

gaaaaattac agaatataaa tttggcaatg tctccattac ccaccgctga aacgccaaag 1380

ccacttcgaa gtagtgctga ccctgcactc aatcaagaag ttgcattaaa attagaacca 1440

aatccagagt cactggaact ttcttttacc atgccccaga ttcaggatca gacacctagt 1500

ccttccgatg gaagcactag acaaagttca cctgagccta atagtcccag tgaatattgt 1560

ttttatgtgg atagtgatat ggtcaatgaa ttcaagttgg aattggtaga aaaacttttt 1620

gctgaagaca cagaagcaaa gaacccattt tctactcagg acacagattt agacttggag 1680

atgttagctc cctatatccc aatggatgat gacttccagt tacgttcctt cgatcagttg 1740

tcaccattag aaagcagttc cgcaagccct gaaagcgcaa gtcctcaaag cacagttaca 1800

gtattccagc agactcaaat acaagaacct actgctaatg ccaccactac cactgccacc 1860

actgatgaat taaaaacagt gacaaaagac cgtatggaag acattaaaat attgattgca 1920

tctccatctc ctacccacat acataaagaa actactagtg ccacatcatc accatataga 1980

gatactcaaa gtcggacagc ctcaccaaac agagcaggaa aaggagtcat agaacagaca 2040

gaaaaatctc atccaagaag ccctaacgtg ttatctgtcg ctttgagtca aagaactaca 2100

gttcctgagg aagaactaaa tccaaagata ctagctttgc agaatgctca gagaaagcga 2160

aaaatggaac atgatggttc actttttcaa gcagtaggaa ttggaacatt attacagcag 2220

ccagacgatc atgcagctac tacatcactt tcttggaaac gtgtaaaagg atgcaaatct 2280

agtgaacaga atggaatgga gcaaaagaca attattttaa taccctctga tttagcatgt 2340

agactgctgg ggcaatcaat ggatgaaagt ggattaccac agctgaccag ttatgattgt 2400

gaagttaatg ctcctataca aggcagcaga aacctactgc agggtgaaga attactcaga 2460

gctttggatc aagttaactg a 2481

<210> 2

<211> 826

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Met Glu Gly Ala Gly Gly Ala Asn Asp Lys Lys Lys Ile Ser Ser Glu

1 5 10 15

Arg Arg Lys Glu Lys Ser Arg Asp Ala Ala Arg Ser Arg Arg Ser Lys

20 25 30

Glu Ser Glu Val Phe Tyr Glu Leu Ala His Gln Leu Pro Leu Pro His

35 40 45

Asn Val Ser Ser His Leu Asp Lys Ala Ser Val Met Arg Leu Thr Ile

50 55 60

Ser Tyr Leu Arg Val Arg Lys Leu Leu Asp Ala Gly Asp Leu Asp Ile

65 70 75 80

Glu Asp Asp Met Lys Ala Gln Met Asn Cys Phe Tyr Leu Lys Ala Leu

85 90 95

Asp Gly Phe Val Met Val Leu Thr Asp Asp Gly Asp Met Ile Tyr Ile

100 105 110

Ser Asp Asn Val Asn Lys Tyr Met Gly Leu Thr Gln Phe Glu Leu Thr

115 120 125

Gly His Ser Val Phe Asp Phe Thr His Pro Cys Asp His Glu Glu Met

130 135 140

Arg Glu Met Leu Thr His Arg Asn Gly Leu Val Lys Lys Gly Lys Glu

145 150 155 160

Gln Asn Thr Gln Arg Ser Phe Phe Leu Arg Met Lys Cys Thr Leu Thr

165 170 175

Ser Arg Gly Arg Thr Met Asn Ile Lys Ser Ala Thr Trp Lys Val Leu

180 185 190

His Cys Thr Gly His Ile His Val Tyr Asp Thr Asn Ser Asn Gln Pro

195 200 205

Gln Cys Gly Tyr Lys Lys Pro Pro Met Thr Cys Leu Val Leu Ile Cys

210 215 220

Glu Pro Ile Pro His Pro Ser Asn Ile Glu Ile Pro Leu Asp Ser Lys

225 230 235 240

Thr Phe Leu Ser Arg His Ser Leu Asp Met Lys Phe Ser Tyr Cys Asp

245 250 255

Glu Arg Ile Thr Glu Leu Met Gly Tyr Glu Pro Glu Glu Leu Leu Gly

260 265 270

Arg Ser Ile Tyr Glu Tyr Tyr His Ala Leu Asp Ser Asp His Leu Thr

275 280 285

Lys Thr His His Asp Met Phe Thr Lys Gly Gln Val Thr Thr Gly Gln

290 295 300

Tyr Arg Met Leu Ala Lys Arg Gly Gly Tyr Val Trp Val Glu Thr Gln

305 310 315 320

Ala Thr Val Ile Tyr Asn Thr Lys Asn Ser Gln Pro Gln Cys Ile Val

325 330 335

Cys Val Asn Tyr Val Val Ser Gly Ile Ile Gln His Asp Leu Ile Phe

340 345 350

Ser Leu Gln Gln Thr Glu Cys Val Leu Lys Pro Val Glu Ser Ser Asp

355 360 365

Met Lys Met Thr Gln Leu Phe Thr Lys Val Glu Ser Glu Asp Thr Ser

370 375 380

Ser Leu Phe Asp Lys Leu Lys Lys Glu Pro Asp Ala Leu Thr Leu Leu

385 390 395 400

Ala Pro Ala Ala Gly Asp Thr Ile Ile Ser Leu Asp Phe Gly Ser Asn

405 410 415

Asp Thr Glu Thr Asp Asp Gln Gln Leu Glu Glu Val Pro Leu Tyr Asn

420 425 430

Asp Val Met Leu Pro Ser Pro Asn Glu Lys Leu Gln Asn Ile Asn Leu

435 440 445

Ala Met Ser Pro Leu Pro Thr Ala Glu Thr Pro Lys Pro Leu Arg Ser

450 455 460

Ser Ala Asp Pro Ala Leu Asn Gln Glu Val Ala Leu Lys Leu Glu Pro

465 470 475 480

Asn Pro Glu Ser Leu Glu Leu Ser Phe Thr Met Pro Gln Ile Gln Asp

485 490 495

Gln Thr Pro Ser Pro Ser Asp Gly Ser Thr Arg Gln Ser Ser Pro Glu

500 505 510

Pro Asn Ser Pro Ser Glu Tyr Cys Phe Tyr Val Asp Ser Asp Met Val

515 520 525

Asn Glu Phe Lys Leu Glu Leu Val Glu Lys Leu Phe Ala Glu Asp Thr

530 535 540

Glu Ala Lys Asn Pro Phe Ser Thr Gln Asp Thr Asp Leu Asp Leu Glu

545 550 555 560

Met Leu Ala Pro Tyr Ile Pro Met Asp Asp Asp Phe Gln Leu Arg Ser

565 570 575

Phe Asp Gln Leu Ser Pro Leu Glu Ser Ser Ser Ala Ser Pro Glu Ser

580 585 590

Ala Ser Pro Gln Ser Thr Val Thr Val Phe Gln Gln Thr Gln Ile Gln

595 600 605

Glu Pro Thr Ala Asn Ala Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr Asp Glu Leu

610 615 620

Lys Thr Val Thr Lys Asp Arg Met Glu Asp Ile Lys Ile Leu Ile Ala

625 630 635 640

Ser Pro Ser Pro Thr His Ile His Lys Glu Thr Thr Ser Ala Thr Ser

645 650 655

Ser Pro Tyr Arg Asp Thr Gln Ser Arg Thr Ala Ser Pro Asn Arg Ala

660 665 670

Gly Lys Gly Val Ile Glu Gln Thr Glu Lys Ser His Pro Arg Ser Pro

675 680 685

Asn Val Leu Ser Val Ala Leu Ser Gln Arg Thr Thr Val Pro Glu Glu

690 695 700

Glu Leu Asn Pro Lys Ile Leu Ala Leu Gln Asn Ala Gln Arg Lys Arg

705 710 715 720

Lys Met Glu His Asp Gly Ser Leu Phe Gln Ala Val Gly Ile Gly Thr

725 730 735

Leu Leu Gln Gln Pro Asp Asp His Ala Ala Thr Thr Ser Leu Ser Trp

740 745 750

Lys Arg Val Lys Gly Cys Lys Ser Ser Glu Gln Asn Gly Met Glu Gln

755 760 765

Lys Thr Ile Ile Leu Ile Pro Ser Asp Leu Ala Cys Arg Leu Leu Gly

770 775 780

Gln Ser Met Asp Glu Ser Gly Leu Pro Gln Leu Thr Ser Tyr Asp Cys

785 790 795 800

Glu Val Asn Ala Pro Ile Gln Gly Ser Arg Asn Leu Leu Gln Gly Glu

805 810 815

Glu Leu Leu Arg Ala Leu Asp Gln Val Asn

820 825

<210> 3

<211> 1305

<212> DNA

<213> 智人

<400> 3

atgtctattc tcaagatcca tgccagggag atctttgact ctcgcgggaa tcccactgtt 60

gaggttgatc tcttcacctc aaaaggtctc ttcagagctg ctgtgcccag tggtgcttca 120

actggtatct atgaggccct agagctccgg gacaatgata agactcgcta tatggggaag 180

ggtgtctcaa aggctgttga gcacatcaat aaaactattg cgcctgccct ggttagcaag 240

aaactgaacg tcacagaaca agagaagatt gacaaactga tgatcgagat ggatggaaca 300

gaaaataaat ctaagtttgg tgcgaacgcc attctggggg tgtcccttgc cgtctgcaaa 360

gctggtgccg ttgagaaggg ggtccccctg taccgccaca tcgctgactt ggctggcaac 420

tctgaagtca tcctgccagt cccggcgttc aatgtcatca atggcggttc tcatgctggc 480

aacaagctgg ccatgcagga gttcatgatc ctcccagtcg gtgcagcaaa cttcagggaa 540

gccatgcgca ttggagcaga ggtttaccac aacctgaaga atgtcatcaa ggagaaatat 600

gggaaagatg ccaccaatgt gggggatgaa ggcgggtttg ctcccaacat cctggagaat 660

aaagaaggcc tggagctgct gaagactgct attgggaaag ctggctacac tgataaggtg 720

gtcatcggca tggacgtagc ggcctccgag ttcttcaggt ctgggaagta tgacctggac 780

ttcaagtctc ccgatgaccc cagcaggtac atctcgcctg accagctggc tgacctgtac 840

aagtccttca tcaaggacta cccagtggtg tctatcgaag atccctttga ccaggatgac 900

tggggagctt ggcagaagtt cacagccagt gcaggaatcc aggtagtggg ggatgatctc 960

acagtgacca acccaaagag gatcgccaag gccgtgaacg agaagtcctg caactgcctc 1020

ctgctcaaag tcaaccagat tggctccgtg accgagtctc ttcaggcgtg caagctggcc 1080

caggccaatg gttggggcgt catggtgtct catcgttcgg gggagactga agataccttc 1140

atcgctgacc tggttgtggg gctgtgcact gggcagatca agactggtgc cccttgccga 1200

tctgagcgct tggccaagta caaccagctc ctcagaattg aagaggagct gggcagcaag 1260

gctaagtttg ccggcaggaa cttcagaaac cccttggcca agtaa 1305

<210> 4

<211> 999

<212> DNA

<213> 智人

<400> 4

atggcaactc taaaggatca gctgatttat aatcttctaa aggaagaaca gaccccccag 60

aataagatta cagttgttgg ggttggtgct gttggcatgg cctgtgccat cagtatctta 120

atgaaggact tggcagatga acttgctctt gttgatgtca tcgaagacaa attgaaggga 180

gagatgatgg atctccaaca tggcagcctt ttccttagaa caccaaagat tgtctctggc 240

aaagactata atgtaactgc aaactccaag ctggtcatta tcacggctgg ggcacgtcag 300

caagagggag aaagccgtct taatttggtc cagcgtaacg tgaacatctt taaattcatc 360

attcctaatg ttgtaaaata cagcccgaac tgcaagttgc ttattgtttc aaatccagtg 420

gatatcttga cctacgtggc ttggaagata agtggttttc ccaaaaaccg tgttattgga 480

agcggttgca atctggattc agcccgattc cgttacctaa tgggggaaag gctgggagtt 540

cacccattaa gctgtcatgg gtgggtcctt ggggaacatg gagattccag tgtgcctgta 600

tggagtggaa tgaatgttgc tggtgtctct ctgaagactc tgcacccaga tttagggact 660

gataaagata aggaacagtg gaaagaggtt cacaagcagg tggttgagag tgcttatgag 720

gtgatcaaac tcaaaggcta cacatcctgg gctattggac tctctgtagc agatttggca 780

gagagtataa tgaagaatct taggcgggtg cacccagttt ccaccatgat taagggtctt 840

tacggaataa aggatgatgt cttccttagt gttccttgca ttttgggaca gaatggaatc 900

tcagaccttg tgaaggtgac tctgacttct gaggaagagg cccgtttgaa gaagagtgca 960

gatacacttt gggggatcca aaaggagctg caattttaa 999

<210> 5

<211> 1170

<212> DNA

<213> 智人

<400> 5

atgaagaaca accagataac aaacaaccag aggattaagg ctgctgtccc aagcatcaaa 60

ttctgcttgg acaatggagc caagtcggta gtccttatga gccacctagg ccggcctgat 120

ggtgtgccca tgcctgacaa gtactcctta gagccagttg ctgtagaact caaatctctg 180

ctgggcaagg atgttctgtt cttgaaggac tgtgtaggcc cagaagtgga gaaagcctgt 240

gccaacccag ctgctgggtc tgtcatcctg ctggagaacc tccgctttca tgtggaggaa 300

gaagggaagg gaaaagatgc ttctgggaac aaggttaaag ccgagccagc caaaatagaa 360

gctttccgag cttcactttc caagctaggg gatgtctatg tcaatgatgc ttttggcact 420

gctcacagag cccacagctc catggtagga gtcaatctgc cacagaaggc tggtgggttt 480

ttgatgaaga aggagctgaa ctactttgca aaggccttgg agagcccaga gcgacccttc 540

ctggccatcc tgggcggagc taaagttgca gacaagatcc agctcatcaa taatatgctg 600

gacaaagtca atgagatgat tattggtggt ggaatggctt ttaccttcct taaggtgctc 660

aacaacatgg agattggcac ttctctgttt gatgaagagg gagccaagat tgtcaaagac 720

ctaatgtcca aagctgagaa gaatggtgtg aagattacct tgcctgttga ctttgtcact 780

gctgacaagt ttgatgagaa tgccaagact ggccaagcca ctgtggcttc tggcatacct 840

gctggctgga tgggcttgga ctgtggtcct gaaagcagca agaagtatgc tgaggctgtc 900

actcgggcta agcagattgt gtggaatggt cctgtggggg tatttgaatg ggaagctttt 960

gcccggggaa ccaaagctct catggatgag gtggtgaaag ccacttctag gggctgcatc 1020

accatcatag gtggtggaga cactgccact tgctgtgcca aatggaacac ggaggataaa 1080

gtcagccatg tgagcactgg gggtggtgcc agtttggagc tcctggaagg taaagtcctt 1140

cctggggtgg atgctctcag caatatttag 1170

<210> 6

<211> 1710

<212> DNA

<213> 智人

<400> 6

atggtagctc tctgcagcct ccaacacctg ggctccagtg atccccgggc tctgcccacc 60

ctccccactg ccacttccgg gcagaggcca gcaaagcggc ggcgcaagag tcccgccatg 120

gccgctctca cccgggaccc ccagttccag aagctgcagc aatggtaccg cgagcaccgc 180

tccgagctga acctgcgccg cctcttcgat gccaacaagg accgcttcaa ccacttcagc 240

ttgaccctca acaccaacca tgggcatatc ctggtggatt actccaagaa cctggtgacg 300

gaggacgtga tgcggatgct ggtggacttg gccaagtcca ggggcgtgga ggccgcccgg 360

gagcggatgt tcaatggtga gaagatcaac tacaccgagg gtcgagccgt gctgcacgtg 420

gctctgcgga accggtcaaa cacacccatc ctggtagacg gcaaggatgt gatgccagag 480

gtcaacaagg ttctggacaa gatgaagtct ttctgccagg gacccctcat ggtgactgaa 540

gcccttaagc catactcttc aggaggtccc cgcgtctggt atgtctccaa cattgatgga 600

actcacattg ccaaaaccct ggcccagctg aaccccgagt cctccctgtt catcattgcc 660

tccaagacct ttactaccca ggagaccatc acgaatgcag agacggcgaa ggagtggttt 720

ctccaggcgg ccaaggatcc ttctgcagtg gcgaagcact ttgttgccct gtctactaac 780

acaaccaaag tgaaggagtt tggaattgac cctcaaaaca tgttcgagtt ctgggattgg 840

gtgggaggac gctactcgct gtggtcggcc atcggactct ccattgccct gcacgtgggt 900

tttgacaact tcgagcagct gctctcgggg gctcactgga tggaccagca cttccgcacg 960

acgcccctgg agaagaacgc ccccgtcttg ctggccctgc tgggtatctg gtacatcaac 1020

tgctttgggt gtgagacaca cgccatgctg ccctatgacc agtacctgca ccgctttgct 1080

gcgtacttcc agcagggcga catggagtcc aatgggaaat acatcaccaa atctggaacc 1140

cgtgtggacc accagacagg ccccattgtg tggggggagc cagggaccaa tggccagcat 1200

gctttttacc agctcatcca ccaaggcacc aagatgatac cctgtgactt cctcatcccg 1260

gtccagaccc agcaccccat acggaagggt ctgcatcaca agatcctcct ggccaacttc 1320

ttggcccaga cagaggccct gatgagggga aaatcgacgg aggaggcccg aaaggagctc 1380

caggctgcgg gcaagagtcc agaggacctt gagaggctgc tgccacataa ggtctttgaa 1440

ggaaatcgcc caaccaactc tattgtgttc accaagctca caccattcat gcttggagcc 1500

ttggtcgcca tgtatgagca caagatcttc gttcagggca tcatctggga catcaacagc 1560

tttgaccagt ggggagtgga gctgggaaag cagctggcta agaaaataga gcctgagctt 1620

gatggcagtg ctcaagtgac ctctcacgac gcttctacca atgggctcat caacttcatc 1680

aagcagcagc gcgaggccag agtccaataa 1710

<210> 7

<211> 2754

<212> DNA

<213> 智人

<400> 7

atgatcgccg cgcagctcct ggcctattac ttcacggagc tgaaggatga ccaggtcaaa 60

aagattgaca agtatctcta tgccatgcgg ctctccgatg aaactctcat agatatcatg 120

actcgcttca ggaaggagat gaagaatggc ctctcccggg attttaatcc aacagccaca 180

gtcaagatgt tgccaacatt cgtaaggtcc attcctgatg gctctgaaaa gggagatttc 240

attgccctgg atcttggtgg gtcttccttt cgaattctgc gggtgcaagt gaatcatgag 300

aaaaaccaga atgttcacat ggagtccgag gtttatgaca ccccagagaa catcgtgcac 360

ggcagtggaa gccagctttt tgatcatgtt gctgagtgcc tgggagattt catggagaaa 420

aggaagatca aggacaagaa gttacctgtg ggattcacgt tttcttttcc ttgccaacaa 480

tccaaaatag atgaggccat cctgatcacc tggacaaagc gatttaaagc gagcggagtg 540

gaaggagcag atgtggtcaa actgcttaac aaagccatca aaaagcgagg ggactatgat 600

gccaacatcg tagctgtggt gaatgacaca gtgggcacca tgatgacctg tggctatgac 660

gaccagcact gtgaagtcgg cctgatcatc ggcactggca ccaatgcttg ctacatggag 720

gaactgaggc acattgatct ggtggaagga gacgagggga ggatgtgtat caatacagaa 780

tggggagcct ttggagacga tggatcatta gaagacatcc ggacagagtt tgacagggag 840

atagaccggg gatccctcaa ccctggaaaa cagctgtttg agaagatggt cagtggcatg 900

tacttgggag agctggttcg actgatccta gtcaagatgg ccaaggaggg cctcttattt 960

gaagggcgga tcaccccgga gctgctcacc cgagggaagt ttaacaccag tgatgtgtca 1020

gccatcgaaa agaataagga aggcctccac aatgccaaag aaatcctgac ccgcctggga 1080

gtggagccgt ccgatgatga ctgtgtctca gtccagcacg tttgcaccat tgtctcattt 1140

cgctcagcca acttggtggc tgccacactg ggcgccatct tgaaccgcct gcgtgataac 1200

aagggcacac ccaggctgcg gaccacggtt ggtgtcgacg gatctcttta caagacgcac 1260

ccacagtatt cccggcgttt ccacaagact ctaaggcgct tggtgccaga ctccgatgtg 1320

cgcttcctcc tctcggagag tggcagcggc aagggggctg ccatggtgac ggcggtggcc 1380

taccgcttgg ccgagcagca ccggcagata gaggagaccc tggctcattt ccacctcacc 1440

aaggacatgc tgctggaggt gaagaagagg atgcgggccg agatggagct ggggctgagg 1500

aagcagacgc acaacaatgc cgtggttaag atgctgccct ccttcgtccg gagaactccc 1560

gacgggaccg agaatggtga cttcttggcc ctggatcttg gaggaaccaa tttccgtgtg 1620

ctgctggtga aaatccgtag tgggaaaaag agaacggtgg aaatgcacaa caagatctac 1680

gccattccta ttgaaatcat gcagggcact ggggaagagc tgtttgatca cattgtctcc 1740

tgcatctctg acttcttgga ctacatgggg atcaaaggcc ccaggatgcc tctgggcttc 1800

acgttctcat ttccctgcca gcagacgagt ctggacgcgg gaatcttgat cacgtggaca 1860

aagggtttta aggcaacaga ctgcgtgggc cacgatgtag tcaccttact aagggatgcg 1920

ataaaaagga gagaggaatt tgacctggac gtggtggctg tggtcaacga cacagtgggc 1980

accatgatga cctgtgctta tgaggagccc acctgtgagg ttggactcat tgttgggacc 2040

ggcagcaatg cctgctacat ggaggagatg aagaacgtgg agatggtgga gggggaccag 2100

gggcagatgt gcatcaacat ggagtggggg gcctttgggg acaacgggtg tctggatgat 2160

atcaggacac actacgacag actggtggac gaatattccc taaatgctgg gaaacaaagg 2220

tatgagaaga tgatcagtgg tatgtacctg ggtgaaatcg tccgcaacat cttaatcgac 2280

ttcaccaaga agggattcct cttccgaggg cagatctctg agacgctgaa gacccggggc 2340

atctttgaga ccaagtttct ctctcagatc gagagtgacc gattagcact gctccaggtc 2400

cgggctatcc tccagcagct aggtctgaat agcacctgcg atgacagtat cctcgtcaag 2460

acagtgtgcg gggtggtgtc caggagggcc gcacagctgt gtggcgcagg catggctgcg 2520

gttgtggata agatccgcga gaacagagga ctggaccgtc tgaatgtgac tgtgggagtg 2580

gacgggacac tctacaagct tcatccacac ttctccagaa tcatgcacca gacggtgaag 2640

gaactgtcac caaaatgtaa cgtgtccttc ctcctgtctg aggatggcag cggcaagggg 2700

gccgccctca tcacggccgt gggcgtgcgg ttacgcacag aggcaagcag ctaa 2754

<210> 8

<211> 25

<212> RNA

<213> 智人

<220>

<223> 用于HIF1-alpha基因的siRNA

<400> 8

ccagccgcug gagacacaau cauau 25

<210> 9

<211> 25

<212> RNA

<213> 智人

<220>

<223> 用于HIF1-alpha基因的siRNA

<400> 9

gggauuaacu caguuugaac uaacu 25

<210> 10

<211> 25

<212> RNA

<213> 智人

<220>

<223> 用于HIF1-alpha基因的siRNA

<400> 10

gaaauuccuu uagauagcaa gacuu 25

Claims

1.一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法，其中，

包括以下的(A)～(D)：

(B)测定该细胞中的HIF1α的活性；

2.根据权利要求1所述的方法，其中，

还包括(E)将在所述(D)中被评价为具有使HIF1α的活性减少的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂、皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，

还包括(E)将在所述(D)中被评价为具有使HIF1α的活性增加的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性促进剂、皮脂分泌促进剂、或者老年性干皮症预防或改善剂。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，

所述HIF1α的活性的测定为HIF1α对缺氧应答元件的结合水平的测定、HIF1α基因的表达水平的测定、或HIF1α的蛋白质表达水平的测定。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，

所述HIF1α为由序列号2所示的氨基酸序列、或与该序列具有至少90％的同一性的氨基酸序列构成的蛋白质。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，

所述源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞为源自人的细胞。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，

所述低氧条件为细胞培养气氛中的氧浓度为5％以下的条件。

8.一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性控制剂的评价或选择方法，其中，

包括以下的(A)～(D’)：

(B’)测定该细胞中的被HIF1α诱导的因子的活性；

9.根据权利要求8所述的方法，其中，

还包括(E’)将在所述(D’)中被评价为具有使被HIF1α诱导的因子的活性减少的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂、皮脂分泌抑制剂、粉刺预防或改善剂、脱发症预防或改善剂、或者多毛症预防或改善剂。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，

还包括(E’)将在所述(D’)中被评价为具有使被HIF1α诱导的因子的活性增加的效果的被检测物质选择作为皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性促进剂、皮脂分泌促进剂、或者老年性干皮症预防或改善剂。

11.根据权利要求8～10中任一项所述的方法，其中，

所述被HIF1α诱导的因子的活性的测定为选自ENO1、LDHA、PGK1、GPI及HK1中的至少1种基因的表达水平、或选自由这些基因所编码的酶中的至少1种酶的表达或酶活性的水平的测定。

12.根据权利要求8～11中任一项所述的方法，其中，

所述源自皮脂腺的细胞或源自毛囊的细胞为源自人的细胞。

13.根据权利要求8～12中任一项所述的方法，其中，

所述低氧条件为培养气氛中的氧浓度为5％以下的条件。

14.一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂，其中，

以选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种作为有效成分。

15.一种皮脂分泌抑制剂，其中，

16.一种粉刺预防或改善剂，其中，

17.一种脱发症预防或改善剂，其中，

18.一种多毛症预防或改善剂，其中，

19.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于制造皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制剂的用途。

20.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于制造皮脂分泌抑制剂的用途。

21.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于制造粉刺预防或改善剂的用途。

22.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于制造脱发症预防或改善剂的用途。

23.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于制造多毛症预防或改善剂的用途。

24.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于抑制皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性的非治疗性用途。

25.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于抑制皮脂分泌的非治疗性用途。

26.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于预防或改善粉刺的非治疗性用途。

27.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于预防或改善脱发症的非治疗性用途。

28.选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种的用于预防或改善多毛症的非治疗性用途。

29.用于在皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

30.用于在皮脂分泌抑制中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

31.用于在粉刺预防或改善中使用的，选自对于HIFlα基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

32.用于在脱发症预防或改善中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

33.用于在多毛症预防或改善中使用的，选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种。

34.一种皮脂腺或毛囊选择性雄激素受体活性抑制方法，其中，

包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的皮脂腺细胞或毛囊细胞给药。

35.一种皮脂分泌抑制方法，其中，

包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的皮脂腺细胞给药。

36.一种粉刺预防或改善方法，其中，

37.一种脱发症预防或改善方法，其中，

包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的头部的毛囊细胞给药。

38.一种多毛症预防或改善方法，其中，

包括将选自对于HIF1α基因、ENO1基因、LDHA基因、PGK1基因、GPI基因及HK1基因的各个的siRNA中的至少1种向对象的毛囊细胞给药。