CN107427543A - 菊科植物发酵组合物的制备方法和由此制备的菊科植物发酵组合物、及包含它的用于促进肝解毒的药物组合物和保健功能食品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种通过发酵工艺增加菊科植物的药效，从而可以减轻酒精导致的肝毒以及快速修复受损的肝组织的菊科植物发酵组合物的制备方法和由此制备的菊科植物发酵组合物、及包含所述菊科植物发酵组合物的用于促进肝解毒的药物组合物和保健功能食品。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2015年03月25日提交韩国知识产权局，申请号为10-2015-0041526的韩国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明涉及一种菊科植物发酵组合物的制备方法和由此制备的菊科植物发酵组合物、及包含它的用于促进肝解毒的药物组合物和保健功能食品。更具体地，本发明涉及一种通过简单的发酵工艺增加菊科植物的药效，从而可以减轻酒精导致的肝毒以及快速修复受损的肝组织的菊科植物发酵组合物的制备方法和由此制备的菊科植物发酵组合物、及包含所述菊科植物发酵组合物的用于促进肝解毒的药物组合物和保健功能食品。
背景技术
黄瓜假还阳参(Crepidiastrum denticulatum)是双子叶植物桔梗目菊科的一年生或二年生草本植物，假还阳参属(Crepidiastrum)在全世界约有29种。假还阳参属有少花假还阳参(Crepidiastrum chelidoniifolium)、黄瓜假还阳参、江华黄瓜假还阳参、黄鹌菜(黄花枝香草)、智异假还阳参,假还阳参(苦荬菜、抱茎苦荬菜、尖裂假还阳参)。
所述黄瓜假还阳参易生长在山间田野的干燥之处，高30cm～70cm，茎细长呈紫红色，枝杈伸展，折断会流出汁液。基生叶为勺子状在花期枯萎，茎生叶分裂且无叶柄。叶子长6cm至11cm、宽3cm至7cm、先端钝。基部耳状抱茎，边缘具不规则疏齿。8月～9月开黄色花，头状花序直径为15mm左右呈伞房花序，花开时直立花谢后下垂。总苞长得像狭筒，总苞片为长椭圆状披针形排列成两排。内苞片为线形共8片。果实为瘦果呈褐色或黑色，具有12条棱线。冠毛为白色，长约3.5mm。
将这种黄瓜假还阳参入药时，具有清热、解毒、排脓、止痛的功效，而且对阑尾炎、肠炎、痢疾、化脓性炎症、头痛、胸痛、痔疮具有疗效。
然而，所述黄瓜假还阳参等天然植物材料存在如下问题：即使经过提取和浓缩过程，药效还是不理想；或者虽然同时含有各种生理活性物质和抗氧化物质而显示出抗老化、抗癌、抗炎、免疫功能改善等各种效果，但有时不稳定以及具有刺激性，因而对人体有毒。
因此，需要研发出一种可以使黄瓜假还阳参等菊科植物或其提取物稳定或者减少毒性或者转换为稳定的衍生物以增加药效的技术。
发明内容
技术问题
本发明提供一种通过简单的发酵工艺增加菊科植物的药效，从而可以减轻酒精导致的肝毒以及快速修复受损的肝组织的菊科植物发酵组合物的制备方法。
另外，本发明提供一种通过所述菊科植物发酵组合物的制备方法来制备的菊科植物发酵组合物。
此外，本发明提供一种包含所述菊科植物发酵组合物的用于促进肝解毒的药物组合物和保健功能食品。
技术方案
本说明书中提供一种菊科植物发酵组合物的制备方法，该制备方法包含将选自米曲菌、杆菌、子囊菌及乳酸菌中的一种以上菌株加入选自黄瓜假还阳参、假还阳参、山莴苣、齿缘苦荬及蒲公英中的一种以上菊科植物中进行发酵的步骤。
本说明书中还提供一种菊科植物发酵组合物，该发酵组合物包含由选自米曲菌、杆菌、子囊菌及乳酸菌中的一种以上菌株制成的选自黄瓜假还阳参、假还阳参、山莴苣、齿缘苦荬及蒲公英中的一种以上菊科植物的发酵产物。
本说明书中还提供一种用于促进肝解毒的药物组合物，该药物组合物包含所述菊科植物发酵组合物或其提取物。
本说明书中还提供一种用于促进肝解毒的保健功能食品，该保健功能食品包含所述菊科植物发酵组合物。
下面更详细地说明根据本发明具体实施方案的菊科植物发酵组合物的制备方法和由此制备的菊科植物发酵组合物、及包含它的用于促进肝解毒的药物组合物和保健功能食品。
本发明的一个实施方案可提供一种菊科植物发酵组合物的制备方法，该制备方法包含将选自米曲菌、杆菌、子囊菌及乳酸菌中的一种以上菌株加入选自黄瓜假还阳参、假还阳参、山莴苣、齿缘苦荬及蒲公英中的一种以上菊科植物中进行发酵的步骤。
本发明人们通过实验确认，采用所述的菊科植物发酵组合物的制备方法时，对黄瓜假还阳参等天然植物使用制备酱块、大酱及酱油等传统发酵食品所使用的食用菌即米曲菌(Aspergillus oryzae)等菌株进行发酵，这与不发酵直接使用时相比，肝解毒的药效会显著增加，从而完成了本发明。
特别是，不同于糖分存在下接入菌株进行酒精发酵或乳酸发酵而生产酒精或乳酸的现有技术，在所述一个具体实施方案的菊科植物发酵组合物中可以实现独特的发酵特性，即将各种菌株直接接种于菊科植物，并在无糖分的条件下将菊科植物内部所含有的蛋白质、皂苷等高分子物质分解为低分子物质。
因此，菊科植物内部所含有的高分子物质(蛋白质、皂苷等)的体内吸收率得到提高，从而可以提高药效及功能性，而且不需要糖分，仅通过将菌株简单接入菊科植物的单一发酵工艺来进行发酵过程，使得整体工艺变得简单，从而可以提高工艺上的效率性。
另外，所述的黄瓜假还阳参等菊科植物可以显示出抑制肝炎病毒复制、减少血胆固醇、抑制肝损伤、抗糖尿病效果、抗癌活性等药效，从而在促进酒精导致的肝毒化解方面，可以实现卓越的功效。
具体地，所述菊科植物发酵组合物的制备方法可以包含将选自米曲菌、杆菌、子囊菌及乳酸菌中的一种以上菌株加入选自黄瓜假还阳参、假还阳参、山莴苣、齿缘苦荬及蒲公英中的一种以上菊科植物中进行发酵的步骤。
所述菌株可以包含选自米曲菌(Aspergillus oryzae)、杆菌(Bacillus)、子囊菌(Monascus)及乳酸菌(Lactobacillus)中的一种以上。也就是说，所述菌株可以使用米曲菌、杆菌、子囊菌、乳酸菌或它们的两种以上混合物。所述米曲菌是指作为曲霉菌的代表性菌种用于制备清酒、日式大酱、酱油等的制曲菌种。
另外，所述菊科植物还可以包含选自黄瓜假还阳参、假还阳参、山莴苣、齿缘苦荬及蒲公英中的一种以上。也就是说，所述菊科植物可以使用黄瓜假还阳参、假还阳参、山莴苣、齿缘苦荬、蒲公英或它们的两种以上混合物。
所述齿缘苦荬(Lxeris dentata)具有抗癌、抗应激、抗过敏、抗老化、解毒、预防肝硬化和成人病的效果，假还阳参(Youngia sonchifolia Max.)具有预防病毒性肝疾病和肝硬化的效果，山莴苣(Lactuca indica var.laciniata)不仅具有抗癌、解热、健胃效果，而且具有预防肝疾病和肝硬化的效果。黄瓜假还阳参(Youngia denticulata)具有与山莴苣类似的功效。
所述菊科植物可以显示出抑制肝炎病毒复制、减少血胆固醇、抑制肝损伤、抗糖尿病效果、抗癌活性等药效，从而在促进酒精导致的肝毒化解方面，可以实现卓越的功效。
对所述发酵方法的实例没有太大限制，例如所述发酵可以通过菌株和菊科植物的反应来进行。更具体地，可以将所述菊科植物和所述菌株进行混合，通过所述菊科植物和所述菌株的接触所引起的物理反应或化学反应来进行发酵。所述物理反应或化学反应例如为下列反应：菌株接触于所述菊科植物使菊科植物所含有的皂苷等高分子物质的一部分分解而还原成低分子物质，或者使所述高分子物质的部分化学结构发生变形而变成吸水性高的物质。
对为了所述发酵添加到菊科植物的菌株比例的实例没有太大限制。优选地，相对于所述菊科植物100重量份，所述菌株可以添加0.01重量份至0.5重量份、或者0.05重量份至0.3重量份、或者0.07重量份至0.2重量份。
基于所述菌株的所述菊科植物的发酵步骤可以在10℃至50℃的温度下进行10小时至500小时。为了有效的酶活性，优选将包含所述菌株和所述菊科植物的混合物的容器进行密封。
另外，所述菊科植物发酵组合物的制备方法在基于所述菌株的所述菊科植物的发酵步骤之后，还可以包含对所述植物发酵产物进行杀菌以提高所述植物发酵产物纯度的杀菌步骤、干燥步骤或者熟化步骤。
对所述杀菌方法的实例没有太大限制，例如可以采用在100℃至140℃的温度下热处理0.5小时至2小时的方法等。
对所述干燥方法的实例没有太大限制，可以采用制备药物组合物的相关技术领域中广泛使用的各种方法，对此没有限制。
对所述熟化方法的实例没有太大限制，例如可以采用对所述植物发酵产物在50℃至80℃或60℃至70℃的温度下熟化500小时至2000小时或600小时至1500小时的方法等。
另外，所述一个具体实施方案的菊科植物发酵组合物的制备方法在基于所述菌株的所述菊科植物的发酵步骤之后，还可以包含利用包含酒精的溶剂进行提取的步骤。
所述发酵产物提取可以采用普遍知晓的提取方法，作为提取溶剂可以使用水、碳原子数为1至3的酒精或其混合物。优选地，作为提取溶剂可以使用浓度为70％的乙醇水溶液。
在所述提取中，对提取条件没有特别限制，可以采用常规的热浴法。作为溶剂使用水进行提取时，对水的量没有特别限制，但是考虑到提取温度和时间，相对于药用植物的重量可以使用5倍至40倍的水，提取条件可以是在30℃至100℃、或者40℃至80℃、或者50℃至70℃的温度下提取5小时至20小时、或者7小时至15小时、或者8小时至12小时。
另外，所述利用包含酒精的溶剂进行提取的步骤可以反复实施1次至10次、或者1次至5次。由此，可以提高提取物的产率。
对于所述发酵产物的提取物，可以根据需要通过过滤装置进行过滤。
此外，所述一个具体实施方案的菊科植物发酵组合物的制备方法在所述利用包含酒精的溶剂进行提取的步骤之后，还可以包含所述提取物浓缩步骤或者干燥步骤。可以进一步仅包含所述浓缩步骤，也可以进一步仅包含所述干燥步骤，也可以进一步包含所述浓缩步骤和干燥步骤。因此，通过使发酵产物中包含的药性成分的含量最大化，可以增加药效。
对所述提取物的浓缩方法的实例没有太大限制，例如可以利用减压浓缩装置将发酵产物制备成固形物浓度为20Brix至100Brix、或者40Brix至100Brix、或者60Brix至100Brix的浓缩液。所述固形物是指对所述浓缩液进行加热使水分蒸发后残留的固态物质。
另外，对所述提取物的干燥方法的实例没有太大限制，可以采用喷雾干燥、真空干燥、冷冻干燥等方法，优选采用在-50℃至-100℃下快速冷冻干燥的方法等。所述冷冻干燥是将水溶液、其他含水物进行冷冻并减压至冷冻物的水蒸气压以下使水升华而被除去得到干燥物的方法，由此可以将所述提取物制备成粉末形式。
此外，所述菊科植物发酵组合物的制备方法在基于所述菌株的所述菊科植物的发酵步骤之前，还可以包含将菊科植物清洗后干燥成水分含量为1％至10％、或者3％至7％的步骤。
对所述将植物清洗后进行干燥的方法的具体实例没有太大限制，可以采用制备药物组合物的相关技术领域中广泛使用的各种方法，对此没有限制。
此外，所述将植物清洗后干燥成水分含量为1％至10％的步骤之后，还可以包含粉碎步骤。所述粉碎步骤是为了使基于菌株的发酵过程更容易进行的步骤，由粉碎步骤得到的植物粉碎物可以具有40筛目至80筛目或者50筛目至70筛目的平均粒径。
另外，根据本发明的另一个具体实施方案可以提供一种菊科植物发酵组合物，该发酵组合物包含由选自米曲菌、杆菌、子囊菌及乳酸菌中的一种以上菌株制成的选自黄瓜假还阳参、假还阳参、山莴苣、齿缘苦荬及蒲公英中的一种以上菊科植物的发酵产物。
所述菊科植物发酵组合物其抑制肝炎病毒复制、减少血胆固醇、抑制肝损伤、抗糖尿病效果、抗癌活性等优异，因此可以作为有效成分包含在具有肝解毒促进功效的各种药物组合物、化妆品组合物或食品组合物等中。
所述菊科植物发酵组合物可以通过所述一个具体实施方案的菊科植物发酵组合物的制备方法来制备。
另外，所述发酵产物中含有的酒精或乳酸的含量可以低于0.01重量％。所述含量“低于0.01重量％”表示实际测出的含量为零或者非常少。也就是说，所述发酵产物中几乎不包含酒精或乳酸。如上所述，所述菊科植物发酵组合物是在不存在糖分的情况下通过基于菌株的菊科植物的发酵来实现，因而难以进行糖分存在下进行的酒精发酵或乳酸发酵工艺。因此，在所述另一个具体实施方案的菊科植物发酵组合物中很难发现利用已知酒精发酵或乳酸发酵的发酵产物中作为发酵产物所含有的酒精或乳酸。
关于所述菊科植物和菌株的内容包含所述一个具体实施方案中所述的内容。
另外，根据本发明的又一个具体实施方案可以提供一种用于促进肝解毒的药物组合物，该药物组合物包含所述另一个具体实施方案的菊科植物发酵组合物或其提取物。
关于所述菊科植物发酵组合物的内容包含所述另一个具体实施方案中所述的内容。
所述菊科植物发酵组合物的提取物可以包含所述菊科植物发酵组合物的酒精提取物，关于所述提取的内容包含所述一个具体实施方案中所述的内容。
另外，所述用于促进肝解毒的药物组合物在不损害本发明要实现的主要效果的范围内，不仅可以进一步包含香料、颜料、杀菌剂、抗氧化剂、防腐剂、保湿剂、增稠剂、无机盐类、乳化剂、赋形剂、合成高分子物质等添加剂，还可以包含辅助成分和其他溶剂，如水溶性维生素、脂溶性维生素、多肽、多糖及海藻提取物等。
对所述添加剂、辅助成分和其他溶剂的具体实例没有太大限制，其添加量也在不损害本发明的目的及效果的范围内不会受到太大限制。
此外，对所述用于促进肝解毒的药物组合物的剂型没有太大限制，例如可以是溶液、乳剂、粘稠的混合物、片剂、粉末等各种形式，而且可以通过单纯的饮用、注射、喷洒或挤压等各种方式给药。
另外，根据本发明的再一个具体实施方案可以提供一种用于促进肝解毒的保健功能食品，该保健功能食品包含所述另一个具体实施方案的菊科植物发酵组合物。
关于所述菊科植物发酵组合物的内容包含所述另一个具体实施方案中所述的内容。
具体地，所述用于促进肝解毒的保健功能食品可以包含选自所述菊科植物发酵组合物的干燥物、所述菊科植物发酵组合物的提取物浓缩液和所述菊科植物发酵组合物的提取物干燥粉末中的一种以上。
所述用于促进肝解毒的保健功能食品可以包含菊科植物发酵组合物的干燥物，所述菊科植物发酵组合物的干燥物是通过菊科植物发酵组合物的制备方法来制备的，该制备方法在基于所述菌株的所述菊科植物的发酵步骤之后，还包含所述发酵产物的干燥步骤或熟化步骤。
此外，所述用于促进肝解毒的保健功能食品可以包含菊科植物发酵组合物的提取物浓缩液，所述菊科植物发酵组合物的提取物浓缩液是通过菊科植物发酵组合物的制备方法来制备的，该制备方法在基于所述菌株的所述菊科植物的发酵步骤之后，包含利用包含酒精的溶剂进行提取的步骤以及所述提取物浓缩步骤。
此外，所述用于促进肝解毒的保健功能食品可以包含菊科植物发酵组合物的提取物干燥粉末，所述菊科植物发酵组合物的提取物干燥粉末是通过菊科植物发酵组合物的制备方法来制备的，该制备方法在基于所述菌株的所述菊科植物的发酵步骤之后，包含利用包含酒精的溶剂进行提取的步骤以及所述提取物干燥步骤。
基于所述保健功能食品的每日推荐摄入量，可以包含所述菊科植物发酵组合物的干燥物0.1g至100g、或者0.5g至50g、或者1g至10g。
基于所述保健功能食品的每日推荐摄入量，可以包含所述菊科植物发酵组合物的提取物浓缩液10mg至2,000mg、或者100mg至1000mg、或者200mg至700mg。此时，所述菊科植物发酵组合物的提取物浓缩液的浓度可为20Brix至100Brix、或者40Brix至90Brix、或者60Brix至80Brix。
基于所述保健功能食品的每日推荐摄入量，可以包含所述菊科植物发酵组合物的提取物干燥粉末1mg至5000mg、或者100mg至2000mg、或者150mg至500mg。
对所述保健功能食品的剂型的实例没有太大限制，例如可以是溶液、乳剂、粘稠的混合物、片剂、粉末等各种形式，而且可以通过单纯的饮用、注射、喷洒或挤压等各种方式服用。所述保健功能食品的具体种类可以例举五谷禅食、液态产品、茶包、粉末产品、颗粒产品、丸剂产品等。对所述液态产品的实例没有太大限制，例如可包含饮料、混悬液、凝胶等。
发明效果
根据本发明，可以提供一种通过简单的发酵工艺增加药效，从而可以减轻酒精导致的肝毒以及快速修复受损的肝组织的用于促进肝解毒的发酵产物制备方法和由此制备的发酵产物、及包含所述发酵产物的组合物和保健功能食品。
具体实施方式
在下述实施例中更详细地说明本发明，但下述实施例仅用于例示本发明，本发明的内容不限于下述实施例。
<制备例：黄瓜假还阳参试样的制备>
采集生长在山间田野的野生黄瓜假还阳参(Youngia denticulata)的叶子和根用自来水清洗干净后，在50℃的干燥机中充分干燥成水分含量为5％。然后，利用粉碎机粉碎成粒度为60筛目并装入聚乙烯袋放置在4℃下，以制备黄瓜假还阳参试样。
<实施例1：发酵黄瓜假还阳参提取物的制备>
(1)发酵黄瓜假还阳参的制备
将所述制备例的黄瓜假还阳参试样1kg放入3L塑料容器(直径为60cm，高度为20cm)中，并将均匀地混合有用于制备酱块的米曲菌粉末1g的自来水700ml加入所述塑料容器进行混合。将所述塑料容器用聚乙烯膜盖上后，在25℃下发酵48小时，再装入聚丙烯袋且每袋装入500g，并在120℃下杀菌1小时，每100g制成块在75℃下熟化1个月～2个月，以制备发酵黄瓜假还阳参。
(2)发酵黄瓜假还阳参浓缩液的制备
所述发酵黄瓜假还阳参100g中加入70％乙醇1L并用安装有冷却管的提取装置在60℃下加热提取10小时。然后，用三重粗滤布(cheese cloth)进行过滤，其滤液利用减压浓缩装置制备成70Brix的浓缩液。
(3)发酵黄瓜假还阳参提取干燥物的制备
所述浓缩液中加入赋形剂并在-82℃下冷冻干燥，从而得到粉末形式的发酵黄瓜假还阳参提取干燥物240g。
<实施例2：发酵黄瓜假还阳参提取物的制备>
除了代替用于制备酱块的米曲菌粉末使用杆菌(Bacillus subtilis)之外，发酵黄瓜假还阳参及其提取物的制备与所述实施例1相同。
<实施例3：发酵黄瓜假还阳参提取物的制备>
除了代替用于制备酱块的米曲菌粉末使用乳酸菌(Lactobacillus)之外，发酵黄瓜假还阳参及其提取物的制备与所述实施例1相同。
<实施例4：发酵黄瓜假还阳参提取物的制备>
除了代替用于制备酱块的米曲菌粉末使用子囊菌(Monascus)之外，发酵黄瓜假还阳参及其提取物的制备与所述实施例1相同。
<实施例5：用于促进肝解毒的保健功能食品的制备>
利用所述实施例1的(1)中制备的发酵黄瓜假还阳参制备了胶囊、片剂、液态产品、茶包、五谷禅食。此时，所述发酵黄瓜假还阳参的含量以所述保健功能食品的每日推荐摄入量为准满足1.17g至2.5g。
<实施例6：用于促进肝解毒的保健功能食品的制备>
利用所述实施例1的(3)中制备的发酵黄瓜假还阳参提取物的冷冻干燥粉末制备了胶囊、片剂、饮料、茶包、五谷禅食。此时，所述发酵黄瓜假还阳参提取物的冷冻干燥粉末的含量以所述保健功能食品的每日推荐摄入量为准满足200mg至400mg。
<实施例7：用于促进肝解毒的保健功能食品的制备>
利用所述实施例1的(2)中制备的发酵黄瓜假还阳参浓缩液制备了胶囊、片剂、饮料、茶包、五谷禅食。此时，所述发酵黄瓜假还阳参提取物的浓缩液(70Brix)的含量以所述保健功能食品的每日推荐摄入量为准满足250mg至600mg。
<对比例1：非发酵黄瓜假还阳参提取物的制备>
(1)非发酵黄瓜假还阳参的制备
将所述制备例的黄瓜假还阳参试样1kg每100g制成块，并干燥及熟化1个月～2个月，以制备非发酵黄瓜假还阳参。
(2)非发酵黄瓜假还阳参提取物的制备
除了代替所述发酵黄瓜假还阳参使用非发酵黄瓜假还阳参之外，通过与实施例1相同的方法制备了非发酵黄瓜假还阳参提取物。
<实验例：实施例及对比例中得到的黄瓜假还阳参提取物的效果测定>
将6周龄、平均体重为150±10g的白鼠(Sprague-Dawly SPF/VAF outbred rats，Orient公司，韩国城南市)作为实验动物饲养一周适应环境，然后分成正常对照组(NC)、乙醇对照组(EC)、乙醇及所述对比例1的非发酵黄瓜假还阳参提取物0.5％添加饮食给予组(ENY)、乙醇及所述实施例1的发酵黄瓜假还阳参提取物0.5％添加饮食给予组(EFY)等4个组(6只/组)饲养4周。实验饮食的组分如下表1。
饲养4周的实验动物在空腹状态下每天一次口服给予50％乙醇溶液2天，每公斤体重给予5g，最终给予后经过12小时后处置。饲养场使用不锈钢笼具，温度和湿度调整为23±2℃、60±5％，明暗周期设定为间隔12小时，自由饮水和采食。
【表1】
动物实验的实验组及实验饮食组分(单位：重量％)
*固体饲料：含有粗蛋白18％、粗脂肪5％、粗纤维5％、粗灰分8％
通过下述方法测定了根据所述实验组饮食组分的效果，其结果分别示于表2至表7中。各自的结果表示6只实验动物的平均值和标准偏差，纵向不同的文字a～c表示具有Duncan多重检验结果类似性。
1.测定体重和肝重量
对于体重增加率，整个实验期间每天在特定时间测体重，并换算出在实验4周期间相对于初始体重所增加的体重。
另外，用实验饮食饲养4周的白鼠可自由饮水，禁食12小时后，乙醚麻醉下从腹主动脉采血，再使用冰冷的生理盐水灌流肝脏，摘取脏器后去湿并测定肝重量，其结果示于下表2。
【表2】
发酵黄瓜假还阳参提取物对给予酒精的白鼠的体重和肝重量的影响
如上表2所示，对于体重增加量，乙醇对照组(EC)与正常组(NC)相比减少了29.69％。然而，非发酵黄瓜假还阳参提取物添加组(ENY)和发酵黄瓜假还阳参提取物添加组(EFY)均比EC组增加，表示减轻了对乙醇的毒性。另外，对于给予非发酵黄瓜假还阳参提取物的ENY组，与乙醇对照组即EC组相比体重增加，但是不如正常组。给予发酵黄瓜假还阳参提取物的EFY组与ENY组相比平均值较高，但是没有显著性差异。然而，与正常组相比也没有显著性差异，结果可以确认给予发酵黄瓜假还阳参提取物的组减轻对乙醇的毒性的效果大于给予非发酵黄瓜假还阳参提取物的组。
另外，相对于体重的肝重量(％)而言，EC组比正常组增加了27.81％。此外，ENY组比正常组增加了19.53％，从增加率来看，估计ENY组具有缓解给予乙醇所导致的肝肥大现象的效果，但是没有显著性差异。EFY组与ENY组相比没有显著性差异，但是与乙醇对照组即EC相比有显著性差异，与正常组相比也没有差异，因此与非发酵组相比发酵组显示出有明显的效果。
2.GOT和GPT的测定
血清中的GOT(谷草转氨酶)和GPT(谷丙转氨酶)是在肝损伤时为了弥补肝损伤而合成蛋白质的酶，其活性越高表示肝损伤越严重。所述活性使用根据Reitman-Frankel法(Acolorimetric method for the determination of serum glutamic oxaloacetic andglutamic pyruvic transaminase.Am.J.Clin.Pathol.,28,56(1957))调制的KIT(盈东制药)进行测定，其结果示于下表3。
【表3】
发酵黄瓜假还阳参提取物对给予酒精的白鼠肝组织的GOT和GPT活性的影响
如上表3所示，GOT活性实验结果表明，乙醇对照组即EC组急剧增加，而ENY组与EC相比下降很多，但与正常组相比显示出较高的差异。发酵黄瓜假还阳参提取物添加组即EFY组下降到几乎接近于正常组。对于血清中的GPT活性，ENY与EFY没有显著性差异，而与EC相比两者都显著下降。由于与正常组相比没有显著性差异，ENY、EFY两组都具有效果。
3.LPO和GSH的含量测定
在组织受到损伤时，经过一定时间后，为了防止或减轻组织损伤，谷胱甘肽(glutathione：GSH)含量会迅速增加(Wang RS,Nakajima T and Honma T:Differentchange patterns of the isozymes of cytochrome p450and glutathioneStransferases in chemically induced liver damage in rat.Ind Health 37:440-448,2000)。谷胱甘肽在人体中起到使过氧化脂质(Lipid peroxide，LPO)无毒化的作用(Ohkawa H,Ohishi N and Yagi K:Assay for lipid peroxides in animal tissues bythiobarbituric acid reaction.Anal Biochem 95:248-25,1979)。
过氧化脂质(Lipid peroxide，LPO)的含量是通过根据Satho的方法(Satho K:Serum lipid peroxide in cerebrovascular disorders determined by a newcolorimetric method.Clin Chim Acta90(1):37-43 1978)在肝组织均浆中加入硫代巴比土酸(thiobarbituric acid，TBA)溶液进行反应后加入丁醇(n-butanol)来测定532nm下硫代巴比土酸反应物质(TBA-reactive substance)的吸光度，然后利用分子吸光系数、ε＝1.5X 105M-1㎝-1进行计算，并且每克肝组织用nmole表示。
肝组织谷胱甘肽(glutathione：GSH)的含量是根据Ellman的方法(Ellman GL:Tissue sulfhydryl group.Arch Biochem Biophys 82(1):70-77 1959)在摘取的动物肝的组织均浆中加入2-硝基苯甲酸(2-nitrobenzoic acid)而生成的苯硫酚(thiophenol)来测定，并且每克肝组织还原型谷胱甘肽用μmole表示，其结果示于下表4。
【表4】
发酵黄瓜假还阳参提取物对给予酒精的白鼠肝组织LPO和GSH含量的影响
如上表4所示，实验结果表明，EC组过氧化脂质急剧增加，而ENY组、EFY组与正常组没有显著性差异。另外，谷胱甘肽实验结果表明，受酒精危害的EC组的肝组织的谷胱甘肽减少，而ENY组与正常组没有显著性差异。因此，非发酵、发酵黄瓜假还阳参提取物在过氧化脂质实验和谷胱甘肽实验中显示出较好的效果。
4.黄嘌呤氧化酶(XO)的测定
黄嘌呤氧化还原酶的O型(Xanthine oxidoreductase(XOR)O type)酶在体内生成活性氧(ROS)，从而导致包括肝脏在内的体内组织受到损伤。
对于黄嘌呤氧化还原酶的活性，根据Stirpe F&Della Corte的方法(Stirpe F,Della Corte E:The regulation of rat liver xanthine oxidase.J Biol Chem 244:3855-3860,1969)对总类型(total type)活性在292nm波长下测定了烟酰胺的存在下生成的尿酸的含量，而对O型(O type)活性在292nm波长下测定了测定了没有添加烟酰胺的状态下生成的尿酸的含量，活性度是将每分钟由蛋白质1mg为基质的黄嘌呤生成的尿酸量用nmole表示，其结果示于下表5。
【表5】
发酵黄瓜假还阳参提取物对给予酒精的白鼠肝组织XO的活性的影响
| 实验组 | XO(nmole/mg portein) | 相对于正常组的％ |
| NC | 22.49±2.52b | 100 |
| EC | 38.42±3.22a | 170.83 |
| ENY | 22.92±2.50b | 101.91 |
| EFY | 18.75±2.01b | 83.37 |
如上表5所示，乙醇对照组与正常组相比XO的活性增加，但在ENY组、EFY组中减少。
5.肝组织中性脂质及总胆固醇的含量
给予酒精以及实验饮食4周后，测定了肝组织的中性脂质及总胆固醇的含量，其结果示于下表6。
【表6】
发酵黄瓜假还阳参提取物对给予酒精的白鼠肝组织中性脂质及总胆固醇含量的影响
如上表6所示，在仅急性口服给予乙醇的乙醇对照组EC中，与正常组NC相比肝组织中性脂肪的含量显著增加了77.5％左右，而非发酵黄瓜假还阳参提取物饮食组与乙醇对照组相比少量减少，但是与正常组相比增加了48％，发酵黄瓜假还阳参提取物饮食组与正常组相比增加了18％。
然而，ENY组和EFY组没有显著性差异，但EFY组与EC组相比显著减少，与正常组相比没有显著性差异。也就是说，发酵组与非发酵组相比具有减少肝的中性脂质的效果。对于总胆固醇含量，酒精对照组上升了18.6％，ENY组和EFY组均比酒精对照组显著减少且与正常组相比也没有显著性差异。
6.SOD及GST活性
给予酒精以及实验饮食4周后，测定了肝组织的SOD及GST活性，其结果示于下表7。
【表7】
发酵黄瓜假还阳参提取物对给予酒精的白鼠肝组织SOD及GST活性的影响
如上表7所示，在非发酵黄瓜假还阳参提取物添加组和发酵黄瓜假还阳参提取物添加组中，肝组织超氧化物歧化酶的活性与乙醇对照组相比显著增加。特别是，在发酵黄瓜假还阳参提取物添加组中，与正常组相比也显著增加。
谷胱甘肽S-转移酶(GST)在形成没来得及移除活性氧的过氧化脂质时，利用谷胱甘肽使其转换为毒性低的乙醇性脂肪以变得无毒化(Im MJ,Manson PN,Bulkley GB,Hoopes JE:Effects pf superoxide dismutase and allopurinol in survival ofacute island skin flaps.Ann Surgery 201:357-359,1985；Jacoby JB:Theglutathione S-transferase:a group of multifunctional detoxificationproteins.Adv Enzymol Relat Areas Mol Biol 46:383-414,1978)。
对于谷胱甘肽S-转移酶的活性，NC组、EC组、ENY组、EFY组中没有显著变化。
Claims (19)
1.一种菊科植物发酵组合物的制备方法，该制备方法包含将选自米曲菌、杆菌、子囊菌及乳酸菌中的一种以上菌株加入选自黄瓜假还阳参、假还阳参、山莴苣、齿缘苦荬及蒲公英中的一种以上菊科植物中进行发酵的步骤。
2.根据权利要求1所述的菊科植物发酵组合物的制备方法，其中，
所述菊科植物发酵组合物具有肝解毒促进效果。
3.根据权利要求1所述的菊科植物发酵组合物的制备方法，其中，
相对于所述菊科植物100重量份加入所述菌株0.01重量份至0.5重量份。
4.根据权利要求1所述的菊科植物发酵组合物的制备方法，其中，
所述发酵步骤在10℃至50℃的温度下进行10小时至500小时。
5.根据权利要求1所述的菊科植物发酵组合物的制备方法，其中，
所述发酵是通过菌株与菊科植物的反应来进行。
6.根据权利要求1所述的菊科植物发酵组合物的制备方法，其中，
在所述发酵步骤之后，
还包含利用包含酒精的溶剂进行提取的步骤。
7.根据权利要求6所述的菊科植物发酵组合物的制备方法，其中，
所述利用包含酒精的溶剂进行提取的步骤是在30℃至100℃的温度下进行5小时至20小时。
8.根据权利要求6所述的菊科植物发酵组合物的制备方法，其中，
在所述利用包含酒精的溶剂进行提取的步骤之后，
还包含所述提取物浓缩步骤或干燥步骤。
9.根据权利要求1所述的菊科植物发酵组合物的制备方法，其中，
在所述发酵步骤之前，
还包含将菊科植物清洗后干燥成水分含量为1％至10％的步骤。
10.一种菊科植物发酵组合物，该发酵组合物包含由选自米曲菌、杆菌、子囊菌及乳酸菌中的一种以上菌株制成的选自黄瓜假还阳参、假还阳参、山莴苣、齿缘苦荬及蒲公英中的一种以上菊科植物的发酵产物。
11.根据权利要求10所述的菊科植物发酵组合物，其中，
所述发酵产物中含有的酒精或乳酸的含量低于0.01重量％。
12.一种用于促进肝解毒的药物组合物，该药物组合物包含权利要求10所述的菊科植物发酵组合物或其提取物。
13.根据权利要求12所述的用于促进肝解毒的药物组合物，其中，
所述提取物包含所述菊科植物发酵组合物的酒精提取物。
14.一种用于促进肝解毒的保健功能食品，该保健功能食品包含权利要求10所述的菊科植物发酵组合物。
15.根据权利要求14所述的用于促进肝解毒的保健功能食品，其中，
所述用于促进肝解毒的保健功能食品包含选自所述菊科植物发酵组合物的干燥物、所述菊科植物发酵组合物的提取物浓缩液及所述菊科植物发酵组合物的提取物干燥粉末中的一种以上。
16.根据权利要求15所述的保健功能食品，其中，
基于所述保健功能食品的每日推荐摄入量，包含所述菊科植物发酵组合物的干燥物0.1g至100g。
17.根据权利要求15所述的保健功能食品，其中，
基于所述保健功能食品的每日推荐摄入量，包含所述菊科植物发酵组合物的提取物浓缩液10mg至2,000mg。
18.根据权利要求17所述的保健功能食品，其中，
所述菊科植物发酵组合物的提取物浓缩液的浓度为20Brix至100Brix。
19.根据权利要求15所述的保健功能食品，其中，
基于所述保健功能食品的每日推荐摄入量，包含所述菊科植物发酵组合物的提取物干燥粉末1mg至5,000mg。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20171201 |