CN107407680A - 用于检测疾病的包括含汞试剂的制剂 - Google Patents

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Abstract

本文中公开了用于检测患者中指示疾病的物质的制剂。制剂包括含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式表明所述流体样品是否含有所述物质。含汞试剂包含在不流动的载体中，所述不流动的载体在暴露于流体样品时导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合。

Description

用于检测疾病的包括含汞试剂的制剂
技术领域
本发明涉及用于检测患者中指示疾病的物质(检测指示患者的疾病的物质)的制剂(配制物)、试剂盒和方法。在具体实施方式中，本发明涉及用于检测在患者的尿中的酪氨酸或其代谢物的制剂、试剂盒和方法。
背景技术
人的体液中的某些物质的存在可经常指示该人患有疾病或病情。疾病或病情的早期诊断可显著地提高任何治疗方案成功的可能性，并且开发早期诊断测试是在医疗领域中的正在进行的挑战。这样的早期诊断测试优选实施相对简单并且相对快速地提供可靠的结果。
用于测试结肠直肠癌的测试比如粪便隐血(FOB)测试例如为可用的。然而，FOB测试依赖于患者的含有血(来自出血息肉)的粪便，这并不会总是发生并且这因此容易出现假阴性。事实上，一些报道已经表明FOB测试用于检测结肠直肠癌的灵敏度最好为25％。FOB测试还需要收集粪便样品，其中许多测试由于患者不愿(难以)获得粪便样品而无法完成(小于20％的免费提供给年纪50-75的澳大利亚人的FOB试剂盒被返回)。而且，一旦获得，粪便样品需要在实验室中分析，这使得程序复杂化并且提高其成本。
酚类化合物比如酪氨酸和其代谢物在患者的尿中的存在可指示患者患有癌症、例如结肠直肠癌。使用米隆试剂(Millon’s Reagent)或其变体用于酪氨酸和其代谢物的测试是已知的。通过在硝酸中溶解金属汞并且用水稀释获得米隆试剂。当米隆试剂暴露于含有酚类化合物(例如酪氨酸和其代谢物)的流体样品时，形成红棕色的沉淀物。在患者的尿暴露于米隆试剂之后存在这样的红棕色的沉淀物将促使患者经历进一步测试。
由于米隆试剂含有汞，其需要被非常小心地处理。典型地，米隆试剂提供在具有易碎部分的玻璃安瓿中。在使用之前立即打破安瓿并且向米隆试剂加入尿样。然而，打破的玻璃安瓿具有尖锐的边缘并且带来健康危险，并且存在使用者可暴露于汞(例如由于溢出)的风险。而且，如果安瓿不是用合适锐利的敲击打破，其可粉碎。出于至少这些原因，现有的涉及米隆试剂的测试并不真正地适合非专业的使用。
US 5,094,836公开了使用改进形式的米隆试剂用于筛分患者的癌症的存在。改进形式的米隆试剂主要涉及提供混合的Hg-Ni组合物，其改进在酪氨酸的存在下形成的有色的沉淀物的稳定性。US 5,094,836还公开了，所述组合物可与材料混合以形成凝胶，其中所得的胶状物相有利地降低由含汞溶液造成的危险状况。然而，承认与溶液相比胶状物的反应性灵敏度趋于下降，和在提供的实施例中，注意到沉淀物仅在胶状物相和尿相的边界形成。
发明内容
在第一方面，本发明提供用于检测患者中指示疾病的物质的制剂。制剂包括含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式(以变色的方式，色度学地)表明所述流体样品是否含有所述物质。含汞试剂包含在不流动的载体中，所述不流动的载体在暴露于流体样品时导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合。
在一些实施方式中，不流动的载体可例如为(或包括)凝胶载体，其在暴露于流体样品时快速分解(瓦解)以释放基本上所有的含汞试剂。在替换的实施方式中，不流动的载体可例如为(或包括)吸收(吸收剂)材料，其在暴露于流体样品时快速吸收流体样品。
发明人认识到，将含汞试剂提供在不流动的载体比如凝胶载体或吸收材料中具有许多优点、特别地使用者的安全性，但这些优点必须不以防止在暴露于流体样品时基本上所有的含汞试剂能与流体样品快速混合为代价。实验已经显示，例如，仅在胶状物相和尿相的边界发生的反应更加容易出现假(阳性或阴性)结果。发明人认识到，除非含汞试剂和流体样品能够相对快速地密切混合，那么假或不确定的结果的风险是值得关注的(有意义的)。本发明的实施方式提供用于在来自患者的流体样品中指示疾病的物质的存在的非常选择性且和可靠的测试。
如将被理解的，凝胶载体的快速分解非常快速地导致大多数的含汞试剂可用于与患者的流体样品中的任何物质反应物质，从而提供几乎与当以液体形式提供含汞试剂时发生的那样的快速和精确的分析。发明人意识到，如果凝胶载体不快速分解，那么存在如下显著的风险：发生的且以比色的方式指示物质的存在的反应将不发生至足以在视觉上可检测的程度或它们仅将在混合物的分散的部分中发生，进一步阻碍颜色变化的视觉检测。
类似地，流体样品被吸收材料的快速吸收非常快速地导致大多数的含汞试剂可用于与患者的流体样品中的任何物质反应，从而提供几乎与当以液体形式提供含汞试剂时发生的那样的快速和精确的分析。
在一些实施方式中，流体样品是来自患者的尿样(样品)。尿样相对容易获得，特别地通过患者自己，这从后勤的观点来看使得检测指示疾病的物质更容易。患者还倾向于更接受收集尿样而不是粪便样品，因此预期尿测试因而导致更大程度的患者依从和由此完成的测试。患者可甚至能够自己测试在他们的尿中指示疾病的物质的存在。
在一些实施方式中，患者中指示疾病的物质为酪氨酸(或其代谢物的一种或多种)。如上所述，已经发现酪氨酸和其代谢物在患有肿瘤、特别地与胃肠癌(比如结肠直肠癌)相关联的肿瘤的患者的尿中升高(虽然其他恶性肿瘤也可导致酪氨酸和其代谢物或色氨酸的代谢物在患者的尿中升高，如下文讨论的)。使用本发明的实施方式的阳性测试将促使患者寻求更专业的医疗指导。
在一些实施方式中，凝胶载体在暴露于流体样品之后小于约1分钟内快速分解以释放基本上所有的含汞试剂。在一些实施方式中，吸收材料在暴露于流体样品之后小于约1分钟内吸收流体样品。
在一些实施方式中，凝胶载体为当暴露于流体样品时可混溶(可混合)于其中、溶解于其中或快速分散的物质。在一些实施方式中，例如，凝胶载体可为(或可包括)水凝胶。在一些实施方式中，凝胶载体可由下面的任一种形成：聚丙烯酰胺、羧甲基纤维素、聚乙烯醇、聚(丙烯酰胺-共-马来酸)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、藻酸盐、卡波姆、聚肟、天然和合成树胶、和它们的混合物。在其中凝胶载体包括物质的混合物的实施方式中，可对物质进行选择以向所得凝胶载体提供改进的性质(例如改进的分解性质，与特定的含汞试剂降低的相互作用，在高度酸性的条件下更好的稳定性等)。
在一些实施方式中，吸收材料可为(或可包括)纤维(状)材料。在一些实施方式中，吸收材料可由下面的任一种形成：纸浆、原棉(棉絮)、纤维素纤维、合成纤维、超吸收性聚合物(super absorbent polymer)和聚乙烯醇纤维。在一些实施方式中，可使用材料的组合以提供具有改进性质的吸收材料。
在一些实施方式中，含汞试剂包括溶解在酸溶液(例如包括一种或多种无机酸)中的汞盐。这样的试剂被称为米隆试剂，其如上所述已经被用于检测酚类化合物比如酪氨酸和其代谢物。当本发明的制剂和来自患者的流体样品混合时产生红棕色的颜色或沉淀物指示在样品中存在酪氨酸(和/或其代谢物)。如上文讨论的，在患者的尿中存在显著量的酪氨酸(和/或其代谢物)可指示癌症，并且使用本发明的实施方式的阳性测试应促使患者寻求更专业的健康服务。
在一些实施方式中，含汞试剂可含有额外的组分。将在下文进一步详细地讨论这样的额外的组分、以及它们赋予所得制剂的有利性质。
在一些实施方式中，制剂可进一步包括比如分散剂、增溶剂、湿润剂或乳化剂的试剂以改进(或有利地改变)凝胶载体的性质(例如其分解性质)或吸收材料的性质(例如其吸收性质)。任何这样的额外的试剂也携带(承载)在不流动的载体中。将在下文进一步详细地讨论它们赋予所得制剂的有利性质。
在第二方面，本发明提供用于检测患者中指示疾病的物质的制剂。制剂包括含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式表明所述流体样品是否含有所述物质。制剂还包括凝胶载体，含汞试剂包含于其中，但其在暴露于流体样品时快速分解以释放基本上所有的含汞试剂。
在第三方面，本发明提供用于检测患者中指示疾病的物质的吸收垫。所述垫包括适于快速吸收来自患者的流体样品的吸收材料。吸收材料含有含汞试剂，所述含汞试剂在与流体样品接触时能够以比色的方式表明来自患者的流体样品是否含有所述物质。在所述垫暴露于流体样品时，吸收材料快速吸收流体样品，从而导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合。
本发明的第二和第三方面的实施方式可如在本文中关于其中不流动的载体分别为凝胶载体和吸收材料的本发明的第一方面所述的。
在第四方面，本发明提供用于检测患者中指示疾病的物质的试剂盒。试剂盒包括：含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式表明所述流体样品是否含有所述物质；和不流动的载体，含汞试剂包含与其中，但其在暴露于流体样品时导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合。试剂盒还包括不流动的载体和含汞试剂包含于其中的的容器。
本发明的第四方面的试剂盒中的含汞试剂和不流动的载体的实施方式可如本文中关于本发明的第一方面所述的。
在一些实施方式中，容器可适于接收来自患者的流体样品。在一些实施方式中，容器可适于接收预定体积的来自患者的流体样品。
有利地，本发明的试剂盒的实施方式可以对患者在家使用(例如用尿样)足够简单、安全和可靠的形式提供，具有与试剂盒一起提供的说明强调在试剂盒显示阳性结果的情况下患者寻求专业的医疗指导的重要性。
在一些实施方式中，容器可包括多个单元(腔室，cell)，其中多个单元的至少一个含有不流动的载体和含汞试剂；且多个腔室的至少另一个含有不包含含汞试剂的不流动的载体的对照样品。将多个单元配置为容许视觉比较在多个单元的每一个中的颜色。
在这样的实施方式中，直接的视觉比较可在容器的单元的至少两个之间进行以提供甚至更可靠的结果，因为考虑到比如患者的尿的颜色(例如)或患者(或评估结果的人)的潜在的色盲的因素。
在第五方面，本发明提供检测患者中指示疾病的物质的方法。方法包括：使来自患者的流体样品暴露于根据本发明第一或第二方面的制剂、本发明第三方面的吸收垫或本发明第四方面的试剂盒以形成混合物；和观察混合物的颜色以确定所述流体样品是否含有所述物质。
在第六方面，本发明提供用于检测患者中指示疾病的物质的试剂盒。试剂盒包括含有根据本发明第一或第二方面的制剂并且适于接收来自患者的流体样品的容器。在一些实施方式中，试剂盒可还包括用于评估所述流体样品是否含有所述物质的比色图表。
在第七方面，本发明提供根据本发明第一或第二方面的制剂或本发明第三或第五方面的试剂盒在用于检测患者中指示疾病的物质的用途。
附图说明
将关于附图在下文描述本发明的具体实施方式，其中：
图1示出根据本发明的实施方式的用于检测患者中指示疾病的物质的试剂盒。
具体实施方式
如上所述，本发明提供用于检测患者中指示疾病的物质的制剂。
在第一方面，制剂包括含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式表明所述流体样品是否含有所述物质。含汞试剂包含在不流动的载体中，所述不流动的载体在暴露于流体样品时导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合。
在第二方面，制剂包括含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式表明所述流体样品是否含有所述物质。制剂还包括凝胶载体，含汞试剂包含与其中，但其在暴露于流体样品时快速分解以释放基本上所有的含汞试剂。
本发明还提供用于检测患者中指示疾病的物质的吸收垫(或毡(mat))。所述垫包括适于快速吸收来自患者的流体样品的吸收材料。吸收材料含有含汞试剂，所述含汞试剂在与流体样品接触时能够以比色的方式表明来自患者的流体样品是否含有所述物质。在所述垫暴露于流体样品时，吸收材料快速吸收流体样品，从而导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合。
可使用本发明的制剂和吸收垫来检测患者中指示疾病的物质。使用本发明的制剂可检测可通过暴露于含汞试剂而以比色的方式被检测的任何物质。
在一类实施方式中，患者中指示疾病的物质为酪氨酸(4-羟基苯基丙氨酸)和/或其代谢物。从患者获得的流体样品中存在升高量的酪氨酸(和/或其代谢物)可指示患者患有肿瘤，特别地与胃肠癌(比如结肠直肠癌)相关的肿瘤。酪氨酸被细胞用来合成蛋白质，并且患者的流体样品中升高水平的的酪氨酸(和/或其代谢物)可指示他们的身体产生大于通常数量的细胞，对于快速生长的肿瘤通常是这样。其他可引起患者的流体样品中升高量的酪氨酸的肿瘤包括前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫颈癌、胃癌、肺癌、喉癌、食管癌、胆癌(胆系癌症)、肝癌、十二指肠癌、支气管癌和骨髓癌。在一些实施方式中，患者中指示疾病的物质可还包括色氨酸的代谢物，比如5-羟色胺(血清素)和5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)。癌细胞代谢大量的色氨酸并且患者的流体样品中存在升高水平的色氨酸代谢物可指示癌症。
将在下文进一步详细地描述该类实施方式，但重要的是认识到，本发明不限于检测仅酪氨酸或其代谢物和在在一些实施方式中色氨酸的代谢物。例如，设想本发明的实施方式还可用来检测升高水平的尿核苷比如假尿苷、2-吡啶酮-5-羧酰胺-N1-呋喃核糖苷、N2,N2-二甲基鸟嘌呤、1-甲基鸟苷、2-甲基鸟苷和1-甲基腺苷，它们在来自患者的流体样品中的存在可用于癌症的早期检测和临床诊断，所述癌症比如结肠直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌和乳腺癌。
在一类实施方式中，流体样品为来自患者的尿样。如上所述，尿样相对容易获得和经常含有指示患者中疾病的物质。典型地，尿样从患者在早晨第一次排尿(其含有最高浓度的标记物)的中流(任何潜在的污染物一般存在于患者的初始尿流中)获得。将在下文进一步详细描述该类实施方式，但重要的是认识到，本发明不限于检测仅在尿中的物质。例如，设想本发明的实施方式可用来检测在唾液、血以及(尽管有上述的收集问题的)粪便物中的物质。
制剂包括含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式表明所述流体样品是否含有所述物质。即，当流体样品与含汞试剂混合时，发生导致颜色变化的反应。所述反应可例如导致有色的沉淀物的形成。替代地(或另外地)，所述反应可导致混合物的颜色变化。
在一些实施方式中，含汞试剂可包括溶解在酸溶液中的汞。这样的试剂被称为米隆试剂，其如上所述已经可靠地被用来在流体样品中检测酚类化合物(比如酪氨酸)多年。酸溶液典型地为无机酸(优选强无机酸)，比如硝酸、硫酸或它们的组合。
在一些实施方式中，含汞试剂可包括不同形式的汞(例如具有不同氧化态如Hg+和Hg2+的盐)或额外的组分，所述额外的组分赋予所述试剂有利的性质或使其更适合用于检测特定的物质。例如，含汞试剂可包括Hg+离子的源和Hg2+离子的源(例如硫酸汞(II)和硝酸亚汞)，典型地在酸溶液中。这样的试剂为改进形式的米隆试剂，且具有对酪氨酸和其代谢物更高的灵敏度。任何形成的沉淀物还可比仅含有Hg+的试剂的情况更稳定。
在一些实施方式中，例如，含汞试剂可包括约10-90重量％的汞，例如，约20-80重量％，约30-70重量％，约40-60重量％的汞。在一些实施方式中，例如，含汞试剂可包括约10重量％，20重量％，30重量％，40重量％，50重量％，60重量％，70重量％，80重量％或90重量％的汞。在其中含汞试剂包括Hg+和Hg2+的实施方式中，Hg+：Hg2+的比例可为0.1-1：0.1-1.0。
含汞试剂可还包括Ni2+离子的源，例如镍盐比如硫酸镍，以改进在所述物质的存在下形成的沉淀物的稳定性，并且从而改进测试的可靠性(具有增强的稳定性的沉淀物更可能可靠地形式，且一旦形成，持续时间更长，因此使它们更容易视觉检测)。如果存在，含汞试剂可包括对1重量份汞的约0.1-0.5重量份的量的镍。
含汞试剂可还包括Cd2+离子的源，例如镉盐比如硫酸镉，以改进在所述物质的存在下形成的沉淀物的稳定性，并且从而改进测试的可靠性。如果存在，含汞试剂可包括对1重量份的汞的约0.05-0.5重量份的量的镉。
在其中检测的物质包括酪氨酸或其代谢物和任选地色氨酸的代谢物的实施方式中，含汞试剂还可包括比如1-亚硝基-2-萘酚的化合物。1-亚硝基-2-萘酚与4-羟基化的酚酸(比如酪氨酸和色氨酸代谢物血清素和5-HIAA)络合以形成具有红色颜色的产物(所述产物为与当指示疾病的物质与含汞试剂反应时形成的产物的不同产物)。患者的流体样品(特别地尿样)中升高水平的5-HIAA在胃肠肿瘤中是被良好证明的(well documented)，并且含汞试剂中存在1-亚硝基-2-萘酚可因此帮助增强制剂检测指示疾病的物质的灵敏度。如果存在，含汞试剂可包括对于1重量份的汞的约0.05-0.5重量份的量的1-亚硝基-2-萘酚。
含汞试剂可还包括重氮(重氮盐)化合物，比如氯化重氮苯、2,4-二氯苯胺重氮盐、2,6-二氯苯-重氮四氟硼酸盐和对硝基苯-重氮对甲苯磺酸盐，其可与酪氨酸和其代谢物络合(甚至在高度酸性的条件下)以提高试剂的灵敏度。
含汞试剂可还包括四唑鎓盐，比如四唑鎓二氨基二苯基胺。这样的盐可在酪氨酸和色氨酸的存在下形成荧光红色染料。
含汞试剂的准确(精确)组成将取决于例如如下的因素：流体样品、不流动的载体和待检测的物质的性质。制备用于本发明中的合适的含汞试剂在本领域技术人员的能力范围内。
制剂或吸收垫中含有的含汞试剂的量或比例将取决于例如如下的因素：物质在样品中的预期浓度、样品的体积、不流动的载体的形式等。以下在本领域技术人员的能力范围内：估计对于任何给定的制剂或吸收垫所需的含汞试剂的量或比例，和如有必要，进行常规测试以确定估计的比例是否合适。
在其中不流动的载体为凝胶的实施方式中，例如，制剂可包括约20-约80体积％，例如约30-约70体积％，约40-约60体积％，约30-约80体积％，约50-约80体积％的含汞试剂。在一些实施方式中，制剂可包括约20体积％，约30体积％，约40体积％，约50体积％，约60体积％，约70体积％或约80体积％的含汞试剂。
在一些实施方式中，例如，制剂或吸收垫可包括约0.01-约5mL，约0.5-约3mL，约1-约2mL或约0.5-约1.5mL(例如约1mL)的含汞试剂。
凝胶载体
在本发明的一些实施方式中，含汞试剂包含在凝胶载体中。在正常的储存和操作条件下，含汞试剂安全地包含在凝胶载体中。然而，在暴露于流体样品时，凝胶载体适于快速分解和释放基本上所有的含汞试剂。凝胶载体可分解，例如，因为其可混溶于流体样品中。凝胶载体可分解，例如，因为其溶解于流体样品中。凝胶载体可分解，例如，因为其分散到流体样品中。
凝胶载体必须快速分解以快速释放基本上所有的含汞试剂，使得其可然后与患者的流体样品中的物质(如果存在)反应。在一些实施方式中，例如，设想确定所述样品是否含有所述物质将花费约5分钟。因此，为了让含汞试剂有时间与所述物质(如果存在)反应以产生其比色响应，必须在显著地小于5分钟内从凝胶释放大部分的含汞试剂(因此其可与所述物质反应)。凝胶载体分解所花费的时间将取决于例如如下的因素：流体样品和凝胶载体的相对体积、流体样品的性质、含汞试剂的酸性等。然而，设想在暴露于流体样品之后小于约1-3分钟(例如1-2min)内将理想地释放基本上所有的含汞试剂。在一些实施方式中，在暴露于流体样品之后凝胶载体分解所花费的时间为约180秒，约150秒，约120秒，约90秒，约60秒或约30秒。
虽然取决于许多因素，但是在本发明的范围中，“基本上所有的含汞试剂”意指包含在凝胶载体中含汞试剂的大于约80％、85％、90％或95％在规定的时间内被释放。
凝胶载体可由任何物质或物质的组合形成，条件是其能够形成可携带(承载)含汞试剂(注意，在一些实施方式中，这可为高度酸性的)合适的储存时间的半固体的固定的(基本上不流动的)凝胶，但其在暴露于流体样品时经快速分解以释放基本上所有的含汞试剂。尽管必须在暴露于流体样品时快速分解，但是凝胶载体必须在正常的操作和使用中容许非常少的(如果有的话)汞漏出。以下在本领域技术人员的能力范围内：使用本发明提供的教导和常规实验确定具体的凝胶载体是否适合用于本发明。
虽然凝胶不需要是固体并且可具有一定的流动能力，但是其必须是足够粘的(粘性的)，使得在正常使用中预期遇到的温度下、甚至在含有所述制剂的容器被意外打翻的情况下，其不能够容易地流动。例如，在一些实施方式中，凝胶载体可具有在环境温度下约50,000-约1,000,000cp的粘度。凝胶载体的粘度可例如为约50,000cp，约100,000cp，约150,000cp，约200,000cp，约250,000cp，约300,000cp，约350,000cp，约400,000cp，约450,000cp，约500,000cp，约550,000cp，约600,000cp，约650,000cp，约700,000cp，约750,000cp，约800,000cp，约850,000cp，约900,000cp，约950,000cp或约1,000,000cp。
凝胶载体可为当暴露于水溶液时快速分解(例如分散)的物质。一类合适的物质为水凝胶，其为亲水性的聚合物的链的网络，并且是高度吸收性的(吸水性的)(它们可含有超过90％的水)天然或合成的聚合物网络。含汞试剂可被携带在聚合物链之间限定的间隙空间中。
发明人已经发现，并非所有凝胶都能够在本发明中使用(即，将满足凝胶载体的功能性要求)。事实上，本发明至少部分地涉及发明人挑战传统知识：在凝胶中携带米隆试剂无法工作(不起作用)(例如，如在US 5,094,836中注意到的)，且令人惊奇地并且预料不到地发现实际上含汞试剂(比如米隆试剂)可通过凝胶携带。发明人意识到，物质比如明胶和琼脂凝胶一般不适合在本发明中使用，因为它们在低pH不稳定或在暴露于患者的流体样品时不快速分解。然而，本文中具体公开的凝胶适合在本发明中使用，并且本领域技术人员鉴于本发明的教导而实施的常规测试将指示任何给定的凝胶载体在本发明中使用的适合性。
在一些实施方式中，凝胶载体由以下的任一种或组合形成：聚丙烯酰胺，羧甲基纤维素，聚乙烯醇，聚(丙烯酰胺-共-马来酸)，聚(乙烯基吡咯烷酮)，藻酸盐，卡波姆，聚肟，天然和合成树胶。在其中凝胶载体包括物质的组合的实施方式中，可对那些物质进行选择以向所得凝胶载体提供改进的分解性质、降低的与特定的含汞试剂相互作用的可能性、提高的在酸性条件下的稳定性等。形成凝胶的物质的混合物可还使得能够将相互作用的组分更好地分散在制剂和患者的流体样品中，潜在地改进特定的目标标记物的检测。
可用于形成凝胶载体的物质的具体实例包括PVP K30(合成的聚乙烯基吡咯酮聚合物)，PLURONIC F88(以伯羟基基团封端的双官能的嵌段共聚物表面活性剂)，PVPP(聚乙烯基吡咯烷酮–PVP的高度交联型式)，PAM SAP(聚丙烯酰胺超吸收性聚合物)和CMC HV(高粘度、工业级羧甲基纤维素钠)。
制剂中凝胶载体对含汞试剂的比例将取决于例如如下的因素：待含有的含汞试剂的量、所述物质在样品中的预期浓度、样品的体积等。以下在本领域技术人员的能力范围内：估计对于任何给定的制剂所需的凝胶载体的比例，和如有必要，进行常规测试以确定估计的比例是否合适。
在一些实施方式中，例如，制剂可包括约0.5mL-约2.0mL的凝胶载体。在一些实施方式中，例如，制剂可包括约20-约80体积％，例如约30-约70体积％，约40-约60体积％，约30-约80体积％，约50-约80体积％的凝胶载体。在一些实施方式中，制剂可包括约20体积％，约30体积％，约40体积％，约50体积％，约60体积％，约70体积％或约80体积％的凝胶载体。
典型地，在与含汞试剂(或含汞试剂的前体)混合后不久(马上)形成凝胶载体，使得在剧烈搅拌时，获得在凝胶载体中的含汞试剂的基本上均匀分散(分散体)。实质上(ineffect)，含汞试剂与凝胶载体掺和(混合，admix)。然而,理解，任何导致含汞试剂安全地包含在凝胶载体中方法将是合适的。
吸收材料
在一些实施方式中，含汞试剂包含在吸收材料中，所述吸收材料当暴露于流体样品时适于快速吸收流体样品。可使用如下的任何吸收材料：其在储存期间以安全的方式(即基本上无泄漏)携带(潜在地高度酸性的)含汞试剂的同时能够保持稳定，但一旦暴露于流体样品就快速吸收流体样品。理想地，基本上在制剂的整个保存期(贮藏寿命)期间，吸收材料不应化学或物理地变化。暴露后的混合物的颜色的任何变化(例如当红色的沉淀物形成时)还必须对使用者是清楚可见的，尽管有可剩余的任何吸收材料。
吸收材料可利用任何合适的机理来吸收流体样品(例如毛细管作用或溶胀(膨胀))，条件是其在流体样品和含汞试剂变得混合良好时导致流体样品的快速吸收。在一些实施方式中，例如，吸收材料可将流体样品吸收到其基体中，其中反应发生并且任何所得的颜色变化在材料自身中是可见的。在一些实施方式中，例如，吸收流体样品可导致吸收材料释放含汞试剂，其中任何所得的颜色变化在上清液中是可见的(并且可与任何剩余的吸收材料相对比)。在一些实施方式中，例如，吸收流体样品可导致吸收材料溶胀、溶解或分解，其中任何所得颜色变化在所得的液体中是可见的。
吸收材料必须快速吸收流体样品。在一些实施方式中，例如，设想确定所述样品是否含有所述物质将花费约5分钟。因此，为了让含汞试剂有时间与所述物质(如果存在)反应以产生其比色响应，大部分的流体样品必须在显著地小于5分钟内被吸收材料吸收(因此样品中的任何物质可与含汞试剂反应)。吸收材料吸收流体样品所花费的时间将取决于例如如下的因素：流体样品的相对体积和吸收材料的尺寸、流体样品的性质、含汞试剂的酸性等。然而，设想流体样品(或至少其适当的体积)在吸收材料暴露于流体样品之后，理想地在小于约1-3分钟(例如1-2分钟)内被吸收。在一些实施方式中，吸收材料吸收流体样品所花费的时间为约180秒，约150秒，约120秒，约90秒，约60秒或约30秒。
吸收材料可例如为纤维材料(例如作为垫或毡提供)或紧密粉末(压型粉末，compact powder)(例如作为片提供)。吸收材料可由例如下面材料的任一种形成：纸浆、原棉、纤维素纤维(例如漂白的大麻和竹纤维)、合成纤维(例如，以微纤维的形式使得它们通过毛细管作用吸收)、超吸收性纤维或聚合物(例如基于丙烯酸的衍生物)聚乙烯醇(PVA)纤维、以及含有超吸收性聚合物(SAP)的合成或天然纤维。还可使用包括这些材料的两种或更多种的吸收材料。
可以任何合适的物理形式提供吸收材料，例如纤维形式(例如对于织物材料)、紧密形式(例如对于由压制粉末制得的片或毡)、片材形式(例如对于纤维素材料)或绒毛(絮，flock)形式。例如，在其中吸收材料为原棉的实施方式中，原棉可为片材、编织和/或绒毛形式。例如，在其中吸收材料为纸浆的实施方式中，纸浆可为片材或绒毛浆形式。例如，在其中吸收材料为PVA的实施方式中，PVA可为片材或纤维形式。可将超吸收性聚合物纺成纱、絮或编织的，并且可与丙烯酸钠、丙烯酸或丙烯酸甲酯交联。
吸收材料可为任何方便的尺寸。例如，在一些实施方式中，选择吸收材料的尺寸以与测试容器的单元(腔室)的尺寸匹配，使得其可合身地(snugly)配合在其中(如下所述)。
由吸收材料携带的含汞试剂的量将取决于例如如下的因素：所述物质在样品中的预期浓度、样品的体积等。以下在本领域技术人员的能力范围内：估计对于任何给出的制剂所需的含汞试剂的量以及适于具体应用的吸收材料的相应的形式、尺寸、密度和种类。在一些实施方式中，例如，可选择这些参数使得吸收材料可合身地配合到测试试剂盒(以下所述)的单元中，快速吸收基本上所有预期待引入单元中的尿并且清楚地示出任何所得颜色变化。
在一些实施方式中，例如，制剂包括约10-30体积％(例如约15-25体积％，约15-20体积％或约20体积％)的吸收材料的总体积。在一些实施方式中，吸收材料携带约0.01-约5mL，约0.5-约3mL，约1-约2mL或约0.5-约1.5mL(例如约1mL)的含汞试剂。
可以任何合适的方式将含汞试剂引入吸收材料中，条件是，一旦如此引入，基本上没有含汞试剂的泄露。理想地，吸收材料基本上是干的，其中含汞试剂安全地保持在所述材料中。
在一些实施方式中，例如，可将吸收材料浸到含有含汞试剂的溶液中足以让其吸收有效量的含汞试剂的时间。然后可容许吸收材料干燥，在空气中或通过加热(条件是含汞试剂是热稳定的)。
其它组分
本发明的含汞试剂或制剂可还包括其它组分。例如，一些实施方式还可包括比如分散剂、增溶剂、湿润剂或乳化剂的试剂以改进(或有利地改变)凝胶载体的性质(例如其分解性质)或吸收材料的性质(例如其吸收性质)。例如:
·分散剂可帮助将含汞试剂快速地分散在整个患者的流体样品中，或帮助凝胶-载体快速地分散；
·增溶剂可帮助使组分在制剂和患者的流体样品中溶解(增溶)，这可增强其间的任何反应；
·湿润剂可帮助使组分在制剂和患者的流体样品中混合，这可增强其间的任何反应；和
·乳化剂可帮助稍微不混溶的组分在制剂和患者的流体样品中变得更紧密地混合(且因此增强其间任何的反应)。
可以任何方便的形式提供本发明的制剂。然而，鉴于汞的毒性，即使试剂可以本体形式(散装形式，bulk form)提供，其典型地也以单位形式(单元形式，unit form)提供以使操作减到最少。例如，可以单位形式提供合适量(例如体积，在其中凝胶载体中携带含汞试剂的实施方式中)的制剂。类似地，可以单位尺寸块的(unit sized piece)吸收材料可提供合适量(例如体积或重量)的含汞试剂。该单位形式可例如提供在其本身的容器(例如小瓶或安瓿)中用于随后由执行测试的患者或医师的使用。在一些实施方式中，容器可适于在其中接收一(一定)体积的流体样品(例如，使得适当体积的尿样可简单地加入容器中，密封容器和然后摇动以分解凝胶并且使得含汞试剂能够与尿中的物质反应)。
检测所述流体样品是否含有所述物质需要的流体样品的体积可取决于如下变化：待检测的物质的性质、其在患者的流体样品中可能的浓度和本领域技术人员已知的或使用常规实验容易确定的其它因素。在一些实施方式中，检测所述流体样品是否含有所述物质需要的流体样品的体积可在制剂体积的约50-150％变化(例如，流体样品的体积为制剂体积的约50％，60％，70％，80％，90％，100％，110％，120％，130％，140％或150％)。如果使用的流体样品的体积太低，那么存在的物质的量对检测可为太低的和/或凝胶载体可无法全部分解。如果使用的流体样品的体积太高，那么可无法形成所得的沉淀物或所得的沉淀物对于检测可为太分散的。
例如，在一些实施方式中，2-20mL的患者的流体样品可与等体积的制剂混合。
试剂盒
本发明还提供用于检测患者中指示疾病的物质的试剂盒。试剂盒包括：含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式指示所述流体样品是否含有所述物质；和不流动的载体，所述含汞试剂包含于其中，但其在暴露于流体样品时导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合。试剂盒还包括不流动的载体和含汞试剂包含于其中的容器。该试剂盒中的含汞试剂和不流动的载体可为如上所述的。
任何容器可用于所述试剂盒，条件是不流动的载体和含汞试剂对于其保存期可稳定地保持在其中(例如，容器可需要对高度酸性的物质是稳定的)。容器可简单地用于容纳含汞试剂和不流动的载体直到所述试剂盒准备好使用，于是它们被转移到另一位置。在一些实施方式中，例如，容器可为小瓶或安瓿，如上所述。然而。这样的小瓶或安瓿更适于专业医务人员使用，且在替换的实施方式中，容器可适于更加的“使用者友好的”，甚至到适合由患者自己使用的程度，如下文进一步详细讨论的。
容器可适于接收来自患者的流体样品(例如通过患者直接或间接尿到容器上)。在一些实施方式中，例如，容器可适于接收预定体积的来自患者的流体样品。如将理解的，这将帮助改进测试结果的准确性和一致性。
如本文中所述的，提供患者自己使用的可靠的测试将是有利的。如此，本发明试剂盒的实施方式可以对患者在家使用(例如用尿样)足够简单的形式提供，具有与试剂盒一起提供的说明强调在阳性结果的情况下患者寻求专业的医疗指导的重要性。
在一些实施方式中，容器可包括多个单元，其中多个单元的至少一个含有不流动的载体和含汞试剂；并且多个腔室的至少另一个含有不含有含汞试剂的不流动的载体的对照样品。将多个单元配置为容许视觉比较多个单元的每一个中的颜色。
在这样的实施方式中，直接的视觉比较可在容器的单元的至少两个之间进行以提供甚至更可靠的结果，因为考虑到比如患者的尿的颜色(例如)或患者(或评估结果的人)的潜在的色盲的因素。
在一些实施方式中，在含有不流动的载体和含汞试剂的多个单元的每一个可含有不同量的含汞试剂。在暴露于患者的流体样品之后，跨越这些单元的颜色的渐变(层次，gradation)可提供指示在样品中的待检测的物质(例如酪氨酸)的量的结果，其可为与疾病的严重性可相关的。
现在将参照图1描述用于本发明的试剂盒的容器的具体实施方式。图1中所示的是测试装置(器件)10，其具有拥有限定握持(gripping)部分的相反侧12、14的大致矩形的形状。装置10的中心部分包括凹槽16，即包括五个分开的单元(体积约5mL)，一般示为18，其被一般示为20的壁分割。含汞试剂已经吸收到其中的吸收材料的矩形垫22位于三个单元18的底部。其它两个单元18含有相同的吸收材料的矩形垫24，但其不含有含汞试剂。使每个垫22、24成型以合身地接收在其相应的接收单元18中，使得其不太可能从装置10掉出，即使是在装置10翻倒的情况下。出于下文描述的原因，壁20略低于凹槽16的轮缘26。
在使用中，患者将打开装置并将其置于稳定的平面上。然后患者将尿到单独的杯(未示出)中，使其装至规定的水平(例如，如容器上的水平指示器所示的)。然后，患者可通过握持相反侧12、14将装置10保持在他们的手中，然后将尿从杯倒入到凹槽16中，如果规定量的尿在杯中这将填充(充满)凹槽16。优选地，出于下述原因，引入装置10中的尿应来自患者一天首次排尿的中流。由于壁20稍低于凹槽16的轮缘26，尿在其达到轮缘26的水平之前将趋于从一个单元18流进相邻的单元18中。以这种方式，在尿达到轮缘26之前，所有的五个单元18将被尿装满，此时装置10是满的。
一旦装满患者的尿，应将装置10放置(set aside)规定的时间(例如1-5分钟)，在此期间吸收垫22、24将快速吸收尿。一旦规定的时间届满，患者简单地将剩余的尿从装置10倒出并且视觉检查吸收垫22、24的颜色。吸收垫22的所得颜色指示患者的尿是否含有相关的物质(例如，在其中使用装置10检测结肠直肠癌的实施方式中，如果患者的尿中存在酪氨酸，所述垫将变为红色颜色)。在患者为色盲或患者的尿高度有色的情况下(例如，如果例如患者脱水可为这样的情况)，吸收垫24的所得颜色可与垫22的所得颜色视觉对比。
在一些实施方式中，垫22中的含汞试剂的量可不同，以提供对于阳性结果的颜色的渐变，这可提供指示在患者的尿中的待检测的物质(例如酪氨酸)的量的结果。在一些实施方式中，还可提供比色图表(未示出)以提供在评估结果中对患者的进一步辅助。
如上所述，本发明还提供检测患者中指示疾病的物质的方法。所述方法包括：使来自患者的流体样品暴露于本发明的制剂、吸收垫或试剂盒，并且观察所得混合物的颜色以确定所述流体样品是否含有所述物质。
可使用任何适合的技术使来自患者的流体样品暴露于制剂，但最通常地涉及向制剂加入流体样品并摇动所得混合物(例如在含有凝胶载体的实施方式中)或容许所得混合物静置(放置)(例如在含有吸收材料的实施方式中)适当的时间(例如1-2分钟)。然后可让混合物静置适当的时间(例如1-5分钟)，在此期间形成有色的产物(例如红色的沉淀物)指示所述物质的存在。在一些实施方式中，设想整个过程可花费只不过约2，3，4，5，6或7分钟，且可通过患者自己实施。
如上讨论的，流体样品典型地来自患者的尿样。如果这样，尿样优选得自患者第一次排尿的中流。可利用专业的尿收集装置收集来自患者的尿样。
本文中还公开了用于检测患者中指示疾病的物质的试剂盒。试剂盒包括容器，所述容器适于接收来自患者的流体样品，并且已经含有(合适量的)本发明的制剂。在一些实施方式中，试剂盒还可包括用于评估所述流体样品是否含有所述物质(即，对于患者中指示疾病的物质的水平，流体样品是阳性的还是阴性的)的比色图表。在一些实施方式中，试剂盒还可包括尿收集装置(比如由本申请人开发的)用于收集来自患者的中流尿样。
本发明提供根据本发明第一方面的制剂用于检测患者中指示疾病的物质的用途。
实施例
实施例1A
通过混合2mL的组分(1)，2.4mL的(2)，0.6mL的(3)和0.1mL的(4)制备根据本发明实施方式的制剂，其中所述组分如下：
1)在6M硫酸中的硫酸汞的18％溶液
2)在12M硝酸中的硝酸汞的65％溶液
3)在蒸馏水中的硫酸镍的3％溶液
4)在6M硝酸中的1-亚硝基-2-萘酚的4％溶液
将1mL的该混合物移液到具有1mL插入盖的7mL试管中。然后加入1g的PVP K30，并且摇动混合物直到形成凝胶。盖上试管，其中制剂准备好使用。
使用本领域公知的加速的稳定性测试发现制剂是稳定的(即未发生液化)，其中制剂的温度在50℃和-50℃之间按小时基准循环2周(这等价于在环境温度下约2年的储存稳定性)。当将老化的制剂加入至含水样品时，其在小于60秒内完全溶解。
实施例1B
将1mL的实施例1A的混合物移液到具有1mL插入盖的7mL试管中。然后加入1g的Pluronic F88，并且摇动混合物直到形成凝胶。盖上试管，其中制剂准备好使用。
对制剂进行与以上实施例1A中所讨论的那些类似的(一样的)稳定性测试，其中获得类似的(一样的)结果(即稳定性和溶解时间)。
实施例2A
通过混合2mL的组分(1)，2.0mL的(2)，1.0mL的(3)和0.1mL的(4)制备根据本发明的另一实施方式的制剂，其中所述组分如下:
(1)在6mol硫酸中的硫酸汞的18％溶液
(2)在12mol硝酸中的硝酸汞的65％溶液
(3)在蒸馏水中的硫酸镍的3％溶液
(4)在6mol硝酸中的硫酸镉的10％溶液
将1mL的该混合物移液到具有1mL插入盖的7mL试管中。然后加入1g的PVP K30，并且摇动混合物直到形成凝胶。盖上试管，其中制剂准备好使用。
对制剂进行与以上实施例1A中所讨论的那些类似的稳定性测试，其中获得类似的结果(即稳定性和溶解时间)。。
实施例2B
将1mL的实施例2A的混合物移液到具有1mL插入盖的7mL试管中。然后加入1g的Pluronic F88，并且摇动混合物直到形成凝胶。盖上试管，其中制剂准备好使用。
对制剂进行与以上实施例1A中所讨论的那些类似的稳定性测试，其中获得类似的结果(即稳定性和溶解时间)。。
实施例3
进行实验以确认根据本发明的制剂在储存条件下的稳定性、以及在暴露于尿样时它们快速分解的能力。在这些实验中，视觉评估凝胶的稳定性和溶解时间，其中当在-50℃和50℃之间的温度按小时基准循环2周时通过确认凝胶不液化(即在与尿样混合之前)而评估稳定性。将完全溶解定义为自将制剂/尿样混合并摇动至在混合物中不存在可见的凝胶的块所花费的时间。
制备含有相同的含汞试剂但不同的凝胶载体的制剂，并且评估它们的溶解时间和稳定性。结果示于下表1中。
凝胶载体 溶解时间(秒) 稳定性(液化)
PVP K30 45 无
PLURONIC F88 60 无
PVPP 90 无
PAM SAP 40 无
CMC HV 60 无
表1
实施例4
在临床研究中，将实施例1A的制剂与下文讨论的来自患者的第一次中流尿样混合，摇动并参照表2评估所得混合物的颜色。已经使用传统技术(例如用于结肠直肠癌的结肠镜检查)对于规定的状况对患者进行了独立地(单独地)诊断，并且进行该临床研究来评估根据本发明的制剂的可靠性。
在100个已经通过已知方法被诊断出患有结肠直肠癌的患者中，99个患者显示出对制剂的强阳性结果，同时一个患者显示出弱阳性结果。这等价于100％检测率。
在36个已经通过已知方法被诊断出患有乳腺癌的患者中，33个患者显示出对制剂的强阳性结果，同时两个患者具有弱阳性结果且一个为阴性。这等价于>97％检测率。
在40个已经通过已知方法被诊断出患有膀胱癌的患者中，所有患者都显示出对制剂的强阳性结果。这等价于100％检测率。
在这些实验中，将结果分成四类：阴性，弱阳性，阳性和强阳性。如表2中所示，基于在与患者的流体样品混合之后的制剂改变至的颜色确定相关种类。发明人已经进行大量的实验以确认表2中所列的颜色与所列举的酪氨酸的量相关联。还可提供比色图表以帮助在浅红色、红色和鲜红色进行区分(虽然任何形式的阳性结果应当促使患者寻求注册医师的建议进行进一步的测试)。
颜色 酪氨酸mg/ml 标准
浅黄色 <3 阴性
浅红色 5±1 弱阳性
红色 10±2 阳性
鲜红色 15±2 强阳性
表2
通过比较，在常规健康检查期间，测试了118正常的健康人，并且发现假阳性率低于2.54％。
实施例5
以下文描述的方式测试多种吸收材料吸收和携带含汞试剂、且然后随后吸收尿的能力。首先，评估在自由溶胀条件下多种吸收材料吸收试剂和尿溶液的能力。其次，评估当随后置于压力下它们保留试剂和尿的能力。
材料:
吸收材料(见表3)
含汞试剂(1mL)–按照实施例1A
尿样(5mL)–通过HPLC独立地分析并且显示含有约2mg/mL的酪氨酸，这是成年男性的尿中正常量的酪氨酸。
设备:
具有33mm高度和25mm外径的Pyrex Vists 10mL Griffin Low Form GlassBeaker
具有Sintaglass盘的(50微米孔)的Pyrex布氏漏斗20mm直径
配合漏斗的活塞(100g，19mm直径)。使密封橡胶圈配合活塞以避免液体的泄漏。该活塞被设计为对漏斗中保持的测试材料施加0.5psi的压力。
天平(能够测量0.001g)
秒表
钢铲
外科手套(以阻止水分转移)
程序：
A)含汞试剂
1.用蒸馏水预湿润漏斗并且彻底排干
2.将1.0g的吸收材料放置到样品管中并记录重量为W1
3.加入1ml含汞试剂并记录重量为W2
4.静置经湿润的吸收材料直到试剂已经被吸收(1分钟)
5.将样品管的内容物转移至Sintaglass漏斗
6.容许未吸收的含汞试剂排到预称重的管(W3)中五分钟并记录总重量为W4。使用钢铲确保所有的吸收材料已转移
7.将活塞放置在剩余的吸收材料上(不施加压力)
8.在活塞加载下排到预称重的管中再五分钟
9.测量预称重的管中的含汞试剂和任何已经渗出通过活塞的含汞试剂的总重量并记作W5。
10.记录吸收材料上的含汞试剂的可视外观
B)在含有1mL含汞试剂的吸收材料(即按照方法A制备的)上的尿
1.用蒸馏水预湿润漏斗并彻底排干
2.将其中有试剂的材料放置到样品管中并记作R1
3.加入5ml尿并记作R2
4.使经湿润的材料静置直到尿已经被吸收(2分钟)
5.将样品管的内容物转移至Sintaglass漏斗
6.容许未吸收的尿排到预称重的管(R3)中五分钟并将总重量记作R4。使用钢铲确保所有的材料已转移
7.将活塞放置在剩余的材料上(不施加压力)
8.在活塞加载下排到预称重的管中再五分钟
9.测量预称重的管中的尿和任何已渗出通过活塞的尿的总重量并记作R5。
10.记录吸收材料上的尿的可视外观
计算：
试剂：
自由溶胀(g/g)计算为：(W2–[W4–W3])/W1
保留(g/g)计算为：(W2–[W5–W3])/W1
尿:
自由溶胀(g/g)计算为：(R2–[R4–R3])/R1
保留(g/g)计算为：(R2–[R5–R3])/R1
表3
这些结果显示示例种类的吸收材料全部都以非常小的溶胀非常快速地吸收试剂和并将试剂保留在其中，甚至当经历显著量的压力时也是如此。吸收材料还快速(小于1分钟)吸收尿。吸收材料在其吸收尿之后的颜色为典型的淡黄色的尿颜色，如所预期的，因为尿不含有升高水平的酪氨酸。
实施例6
进行多次临床实验以确认本文中描述的吸收垫为对于含汞试剂且用于本发明中的合适载体。在这些临床实验中，将来自多个患者的尿加入包括4-6个单元的容器中，其中每个单元中存在包括超吸收性聚合物的吸收垫。一些吸收垫为空白对照剂，如上所述，其它吸收垫携带实施例1A的含汞试剂。
88岁的女性呈现出轻微铁缺乏但正常的血红蛋白水平。FOBT(粪便潜血测试)也返回阳性结果。她的尿样被分析并返回阳性(同位，appositive)结果(在单元之一中的阳性颜色变化)，指示高的恶性肿瘤的风险并且因此启动更紧急的研究。结肠镜检查显示患者患有1期结肠癌(腺癌)。
57岁患者呈现出缺铁性贫血。他们的CEA为正常且他们的腹部/骨盆的CT扫描显示无急性不适(acute distress)。然而，使用本发明的测试返回轻微阳性结果，指示进一步研究的紧急性。随后的结肠镜检查显示大的接近横断8x3cm的息肉，其以内窥镜方式移除。组织学显示中度分化腺癌的小病灶，所以建议手术清理区域。随后的右部分结肠切除术显示小的残余1期癌。
患有3B期结肠癌的75岁男性患者返回阳性的FOB测试以及使用本发明的测试的阳性结果。进行紧急的结肠镜检查，其显示溃疡乙状结肠(sigmoid)癌，需要左部分结肠切除术。他们的CEA也升高11(0-5)且CT扫描显示乙状结肠癌和怀疑的肝结节(nodule)，可能转移。
85岁男性呈现出腹泻和体重降低。CT扫描显示具有怀疑的肝转移的乙状结肠增厚(thickening)。他的尿被分析并返回阳性结果(在单元之一中的阳性颜色变化)。随后的手术证实转移性腹膜腺癌(4期)。
73岁男性呈现出贫血和黑粪症，同时对于AF服用Xarelto(on Xarelto for AF)。他返回阴性PET和CT扫描。然而，他的尿被分析并返回阳性结果(在单元之一中的阳性颜色变化)。随后的胃镜检查显示5cm的胃腺癌并在未来手术之前将经历新的辅助化疗。
69岁女性呈现出急性体重降低和缺铁性贫血。CT扫描显示带有网膜转移的转移性肝病和右结肠壁增厚以及可能的肾细胞癌。她的尿被分析并返回阳性结果(在单元之一中的阳性颜色变化)。随后的结肠镜检查显示右结肠癌–腺癌。
患有转移性胆囊癌的85岁男性具有通过由于新发作的便秘而实施的CT扫描发现的伴随的(附带的)肿瘤。然而，后续的胆囊息肉–结肠镜检查是正常的。息肉的尺寸在18个月从4mm长到25mm，但是无症状。然而，他的尿被分析并返回阳性结果(在单元之一中的阳性颜色变化)。手术随后证实胆囊腺癌。
58岁男性的尿返回阳性结果(在单元之一中的阳性颜色变化)。随后的结肠镜检查显示看来恶性的直肠息肉，其以内窥镜方式完全移除，具有仅腺癌的病灶。他的CEA是正常的，并且他的腹部/骨盆CT扫描和他的直肠的MRI全部正常。他的PSA升高6.0(0-3.5)。进一步研究待决。
将理解本发明提供许多新的且有用的结果以及相对于现有诊断测试的优点。例如，本发明的具体实施方式可提供以下优点的一个或多个:
·含汞试剂安全地包含在凝胶或吸收材料中；
·由于含汞试剂和流体样品的快速混合可获得可靠的结果(没有第二猜测)；
·容器不必需要为玻璃–可使用塑料容器(即使含汞试剂是高度酸性的)；
·可以尿收集装置的形式提供容器，使其甚至更容易使用；
·可能较容易获得监管审批，因为所述测试仅指示潜在的疾病或病情，患者需要在阳性结果的情况下寻求专业医疗指导；和
·测试可由具有相对少(或没有)医学训练的人实施–例如患者自己。
本发明的领域的技术人员将理解，可对上述具体描述的本发明的实施方式进行许多改变而不脱离本发明的精神和范围。所有这样的改变都意在落入所附权利要求的范围内。
还将理解，虽然上述描述涉及特定的装置和设备的部件以及方法步骤的顺序，这些仅提供用于说明的目的并不意在以任何方式限制本发明的范围。
将理解，本文中涉及的对任何现有技术出版物的引用都不构成承认所述出版物在澳大利亚或任何其他国家中形成现有技术的公知常识的一部分。
在所附权利要求中和在本发明的上述描述中，除了因为表述语言或必要的暗示上下文所要求的以外，词语“包括”或其变体比如“包含”或“含有”以包容性的意义使用，即表明在本发明的各种实施方式中的所陈述的特征的存在但不排除存在或增加进一步的特征。

Claims (30)

1.用于检测患者中指示疾病的物质的制剂，所述制剂包括:
含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式指示所述流体样品是否含有所述物质,
其中所述含汞试剂包含在不流动的载体中，所述不流动的载体在暴露于所述流体样品时导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合。
2.权利要求1所述的制剂，其中不流动的载体为凝胶载体，其在暴露于流体样品时快速分解以释放基本上所有的含汞试剂。
3.权利要求2所述的制剂，其中凝胶载体在暴露于流体样品之后小于约1分钟内分解以释放基本上所有的含汞试剂。
4.权利要求2或权利要求3所述的制剂，其中凝胶载体具有约50,000-约1,000,000cp的粘度。
5.权利要求2-4中任一项所述的制剂，其中凝胶载体为水凝胶。
6.权利要求2-4中任一项所述的制剂，其中凝胶载体由下面的任一种形成：聚丙烯酰胺、羧甲基纤维素、聚乙烯醇、聚(丙烯酰胺-共-马来酸)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、藻酸盐、卡波姆、聚肟、天然和合成树胶、和它们的混合物。
7.权利要求2-6中任一项所述的制剂，其中所述制剂包括约20-80体积％的凝胶载体。
8.权利要求1所述的制剂，其中不流动的载体为吸收材料，其在暴露于流体样品时快速吸收流体样品。
9.权利要求8所述的制剂，其中吸收材料在暴露于流体样品之后小于约1分钟内吸收流体样品。
10.权利要求8或权利要求9所述的制剂，其中吸收材料为纤维材料。
11.权利要求8-10中任一项所述的制剂，其中吸收材料由以下的任一种或多种形成：纸浆、原棉、纤维素纤维、合成纤维、超吸收性聚合物和聚乙烯醇纤维。
12.权利要求8-11中任一项所述的制剂，其中所述制剂包括约10-30体积％的吸收材料的总体积。
13.权利要求1-12中任一项所述的制剂，其中含汞试剂包括溶解在酸溶液中的汞。
14.权利要求1-13中任一项所述的制剂，其中含汞试剂包括溶解在酸溶液中的Hg+离子的源和Hg2+离子的源。
15.权利要求14所述的制剂，其中含汞试剂进一步包括以下的一种或多种：Ni2+离子的源、Cd2+离子的源、1-亚硝基-2-萘酚、重氮化合物和偶氮化合物。
16.权利要求1-15中任一项所述的制剂，其中所述制剂进一步包括包含在不流动的载体中的以下试剂的一种或多种：分散剂、增溶剂、湿润剂、乳化剂和它们的组合。
17.权利要求1-16中任一项所述的制剂，其中一体积的所述制剂以单位形式提供。
18.权利要求1-17中任一项所述的制剂，其中流体样品为来自患者的尿样。
19.权利要求1-18中任一项所述的制剂，其中患者中指示疾病的物质为酪氨酸。
20.权利要求19所述的制剂，其中疾病为癌症。
21.用于检测患者中指示疾病的物质的制剂，所述制剂包括:
含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式指示所述流体样品是否含有所述物质；和
凝胶载体，所述含汞试剂包含于其中，但其在暴露于流体样品时快速分解以释放基本上所有的含汞试剂。
22.用于检测患者中指示疾病的物质的吸收垫，所述垫包括:
适于快速吸收来自患者的流体样品的吸收材料；
包含在所述吸收材料中的含汞试剂，所述含汞试剂能够在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式指示所述流体样品是否含有所述物质,
由此，在所述垫暴露于所述流体样品时，吸收材料快速吸收流体样品从而导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合。
23.用于检测患者中指示疾病的物质的试剂盒，所述试剂盒包括:
含汞试剂，其在与来自患者的流体样品接触时以比色的方式指示所述流体样品是否含有所述物质；
不流动的载体，所述含汞试剂包含于其中，但其在暴露于流体样品时导致基本上所有的含汞试剂和流体样品的快速混合；以及
所述不流动的载体和含汞试剂包含于其中的容器。
24.权利要求23所述的试剂盒，其中所述容器适于接收来自患者的流体样品。
25.权利要求24所述的试剂盒，其中所述容器适于接收预定体积的来自患者的流体样品。
26.权利要求23-25中任一项所述的试剂盒，其中所述容器包括多个单元，
其中所述多个单元的至少一个含有不流动的载体和含汞试剂；和
所述多个单元的至少另一个含有不含有含汞试剂的不流动的载体的对照样品，
由此所述多个单元配置为容许视觉比较在所述多个单元的每一个中的颜色。
27.检测患者中指示疾病的物质的方法，所述方法包括:
使来自患者的流体样品暴露于根据权利要求1-21中任一项所述的制剂、权利要求22所述的吸收垫或权利要求23-26中任一项所述的试剂盒以形成混合物；和
观察混合物的颜色以确定所述流体样品是否含有所述物质。
28.权利要求27的方法，其中使来自患者的流体样品暴露于制剂包括将流体样品加入制剂或试剂盒并摇动。
29.权利要求28的方法，其中摇动流体样品和制剂或试剂盒的混合物约1分钟。
30.权利要求27-29中任一项所述的方法，其中流体样品为来自患者的尿样，其由来自患者的第一次排尿的中流获得。
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