CN107383014B - 一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种1H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶类化合物及其制备方法和应用。一种1H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶类化合物，其结构通式为：

Description

一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
恶性肿瘤的治疗长期以来是一个世界性的难题。以往对肿瘤的治疗是通过发现肿瘤并破坏来实现，现在随着对细胞信号传导途径研究的不断深入，人们对肿瘤细胞内部的癌基因及抗癌基因的作用了解得越来越深入，使得针对肿瘤的特异性分子靶点设计新的抗肿瘤药物成为可能。现在已知，促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与肿瘤细胞的增殖、分化、迁移和凋亡有关，而且它是一组能被多种不同的细胞外因素刺激，包括细胞因子、激素、神经递质、细胞黏附及细胞应激等激活的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。其中细胞外信号调控蛋白激酶(ERK1/2)信号转导通路，即RAS/RAF/MEK/ERK信号转导通路，是第一个被阐释的MAPK 信号转导通路。BRAF是RAF三个亚型之一，是MAPK通路重要的转导因子，且BRAF在3个亚型中突变频率最高，大约7％～8％的人类肿瘤发生BRAF突变，ARAF和CRAF则较少发生突变。黑色素瘤中BRAF突变率最高，约40％～68％恶性(转移性)黑色素瘤发生BRAF 突变。该突变是第一个在黑色素瘤中被发现的高频率突变基因，目前已经成为黑色素瘤的治疗靶标。
血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及其受体VEGFR(VEGF receptor)所介导的“出芽式血管生成(sprouting angiogenesis)”，在生理及病理性血管生成中均扮演着重要的角色，尤其在肿瘤血管生成方面起到关键的作用。靶向VEGF以及VEGFR 的药物正在不断被开发出来，如bevacizumab、sorafenib、aflibercept等，这些药物以不同的方式抑制VEGF/VEGFR信号通路，在临床上已被证明能有效抑制多种肿瘤的生长，成功实现了相关药物的临床转化。研究认为，VEGF的信号转导途径很有可能是VEGFR-2通过活化PLC (磷脂酶C)，水解产生第二信使DAG(二酰甘油)，进而激活PKC(蛋白激酶)，PKC再激活RAF，RAF通过活化MEK最终激活MAPK。表明了BRAFV600E和VEGFR-2两个靶点在肿瘤的发生发展过程中具有一定的协同作用。
国内外研究现状及分析：Sorafenib是第1个报道的Ⅱ型BRAF激酶抑制剂。但是在转移性黑色素瘤的Ⅲ期临床试验中，Sorafenib并没有显著疗效。一种可能是，黑色素瘤依赖周围的新生血管进行转移，另一种可能是，在黑色素瘤中，Sorafenib对RAF激酶没有特异性的作用。而2011年BRAFV600E抑制剂Vemurafenib的上市成为一个重要突破。约有一半的晚期黑色素瘤有变异，在这个人群中Vemurafenib的应答率达到50％，比化疗延长3个月生存期。这个产品当时被认为是黑色素瘤治疗的重要进展，也是个体化治疗的一个成功典范。但不幸的是，在半年左右开始出现耐药。而另一种RAF抑制剂RAF265也被报道为RAF/VEGFR 激酶双靶点抑制剂，抑制VEGF诱导的血管生成和突变BRAF，作用于A375(BRAFV600E) 人黑色素瘤细胞系，能够有效的降低肿瘤糖代谢和FDG累积。因此，以BRAFV600E和VEGFR- 2为靶点，设计合成BRAFV600E/VEGFR-2激酶的双靶点抑制剂，通过使BRAFV600E和VEGFR- 2表达减少，阻断其信号转导通路或耗竭肿瘤细胞产生的血管内皮生长因子而抑制肿瘤血管的生成，切断肿瘤血供，则有望达到抑制肿瘤生长、发展和转移的目的。
综上所述，本领域迫切需要开发出结构新颖，活性强的BRAFV600E/VEGFR-2激酶的双靶点抑制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物及其制备方法和应用。
本发明所采取的技术方案是：
一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，结构通式为：
X＝O，S或NH；Y＝NH，NMe，O或S；
R1为-H、C1～C6的烷基、或取代的6-10元芳环，取代芳环的取代基为-H、卤素或C1～C6的烷基；
R2为-H、卤素、C2～C3或C6烷基、C2～C3或C6烷氧基、C2～C3或C6烷硫基或-NO2；
R3为取代的4～12元芳杂环基、取代芳杂环上的取代基为-H、 C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O、S或N；
R4为-H、卤素、烷基、-OCH3、-OCF3、-NMe2、-CF3、-NO2或-CN；R5为-H或烷基。
优选的，上述结构通式中，X为O；Y＝NH，NMe，O或S；
R1为-H、C1～C6的烷基、或取代的6-10元芳环，取代芳环的取代基为-H、卤素或C1～C6的烷基；
R2为-H、卤素、C2～C3或C6烷基、C2～C3或C6烷氧基、C2～C3或C6烷硫基或-NO2；
R3为取代的4～12元芳杂环基、取代芳杂环上的取代基为-H、 C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O、S或N；
R4为-H、卤素、烷基、-OCH3、-OCF3、-NMe2、-CF3、-NO2或-CN；
R5为-H或烷基；
R4、R5所含的氢原子各自独立地被一个或多个相同或不同的G1或G2取代；
G1或G2各自独立地选自H、-OH、-NH2、-CN、-CF3、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6芳基、5-6元杂环芳基、C3-6杂脂环基、C1-6烷氧基、C3-6环烷氧基、C6芳氧基、5-7元杂芳氧基、C3-6杂脂环氧基、C1-6烷氨基、C3-6环烷氨基、C6芳氨基、5-7元杂环芳氨基、C3-6杂脂环氨基、C1-6烷氧基-CO-、C3-6环烷氧基-CO-、C6芳氧基-CO-、5-7元杂环芳氧基-CO-、C3-6杂脂环氧基-CO-、C1-6烷氨基-CO-、C3-6环烷氨基-CO-、C6芳氨基-CO-、 5-7元杂环芳氨基-CO-或C3-6杂脂环氨基-CO-。
上述的化合物具体选自下列化合物中的任一种：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1- 甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1- 甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并 [3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d] 嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氰基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4- 氧基]-N-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)- 4-氧基]-N-(4-叔丁基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4- 氧基]-N-(2-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N- (3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-溴苯基)-1H- 苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺； 1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3,4-二氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-溴-5-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基 -5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-二甲氨基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基- 5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基- 5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基- 5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5- [(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基-4-氯-苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺。
一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物的制备方法：
当通式中Y＝O、S或NH时，将4,6-二氯-5-嘧啶甲醛进行环合生成4-氯-1H-吡唑并[3,4- d]嘧啶，再与卤代烷烃发生亲核取代，取代产物与取代的硝基化合物反应，然后经还原得到邻苯二胺中间体A，最后邻苯二胺中间体A与异硫氰酸酯反应得到通式所示的产物；
当通式中Y＝NMe时，将4,6-二氯-5-嘧啶甲醛进行环合生成4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，再与卤代烷烃发生亲核取代，取代产物与取代的硝基化合物反应，所得产物依次与三氟乙酸酐和硫酸二甲酯反应，然后经还原得到邻苯二胺中间体B，最后邻苯二胺中间体B与异硫氰酸酯反应得到通式所示的产物。
一种药物组合物，包括下列成分中的至少一种：a)化合物、b)该化合物在药学上可接受的盐、c)该化合物的水合物、d)该化合物的溶剂合物、e)该化合物的多晶型物、f)该化合物的互变异构体、g)该化合物的前药；其中，化合物为上述结构通式的化合物。
进一步的，上述的药物组合物，还包括药物辅料。
上述的一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物在制备蛋白激酶活性异常相关疾病的药物中的应用。
蛋白激酶活性异常相关疾病为癌症。
进一步的，蛋白激酶活性异常相关疾病为黑色素瘤、肝癌、肾癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、膀胱癌、肾或输尿管癌、脊柱轴肿瘤、垂体腺瘤、胃肠间质肿瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肥大细胞增多症、胶质瘤、肉瘤、淋巴瘤中的至少一种。
本发明的有益效果是：
本发明开发出一种结构新颖，具有显著抗肿瘤活性的1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，该化合物可以作为BRAF/VEGFR-2激酶的双靶点抑制剂，在治疗因蛋白激酶活性异常所引起的疾病方面有良好的效果和广阔的应用前景。
具体实施方式
一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，结构通式为：
X＝O，S或NH；Y＝NH，NMe，O或S；
R1为-H、C1～C6的烷基、或取代的6-10元芳环，取代芳环的取代基为-H、卤素或C1～C6的烷基；
R2为-H、卤素、C2～C3或C6烷基、C2～C3或C6烷氧基、C2～C3或C6烷硫基或-NO2；
R3为取代的4～12元芳杂环基、取代芳杂环上的取代基为-H、 C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O、S或N；
R4为-H、卤素、烷基、-OCH3、-OCF3、-NMe2、-CF3、-NO2或-CN；R5为-H或烷基。
优选的，上述结构通式中，X为O；Y＝NH，NMe，O或S；
R1为-H、C1～C6的烷基、或取代的6-10元芳环，取代芳环的取代基为-H、卤素或C1～C6的烷基；
R2为-H、卤素、C2～C3或C6烷基、C2～C3或C6烷氧基、C2～C3或C6烷硫基或-NO2；
R3为取代的4～12元芳杂环基、取代芳杂环上的取代基为-H、 C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O、S或N；
R4为-H、卤素、烷基、-OCH3、-OCF3、-NMe2、-CF3、-NO2或-CN；
R5为-H或烷基；
R4、R5所含的氢原子各自独立地被一个或多个相同或不同的G1或G2取代；
G1或G2各自独立地选自H、-OH、-NH2、-CN、-CF3、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6芳基、5-6元杂环芳基、C3-6杂脂环基、C1-6烷氧基、C3-6环烷氧基、C6芳氧基、5-7元杂芳氧基、C3-6杂脂环氧基、C1-6烷氨基、C3-6环烷氨基、C6芳氨基、5-7元杂环芳氨基、C3-6杂脂环氨基、C1-6烷氧基-CO-、C3-6环烷氧基-CO-、C6芳氧基-CO-、5-7元杂环芳氧基-CO-、C3-6杂脂环氧基-CO-、C1-6烷氨基-CO-、C3-6环烷氨基-CO-、C6芳氨基-CO-、 5-7元杂环芳氨基-CO-或C3-6杂脂环氨基-CO-。
上述的化合物具体选自下列化合物中的任一种：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；5-[(1- 甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1- 甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并 [3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d] 嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氰基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4- 氧基]-N-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)- 4-氧基]-N-(4-叔丁基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4- 氧基]-N-(2-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N- (3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-溴苯基)-1H- 苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺； 1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3,4-二氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-溴-5-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基 -5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-二甲氨基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基- 5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基- 5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基- 5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5- [(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基-4-氯-苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺。
一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物的制备方法：
当通式中Y＝O、S或NH时，将4,6-二氯-5-嘧啶甲醛进行环合生成4-氯-1H-吡唑并[3,4- d]嘧啶，再与卤代烷烃发生亲核取代，取代产物与取代的硝基化合物反应，然后经还原得到邻苯二胺中间体A，最后邻苯二胺中间体A与异硫氰酸酯反应得到通式所示的产物；
当通式中Y＝NMe时，将4,6-二氯-5-嘧啶甲醛进行环合生成4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，再与卤代烷烃发生亲核取代，取代产物与取代的硝基化合物反应，所得产物依次与三氟乙酸酐和硫酸二甲酯反应，然后经还原得到邻苯二胺中间体B，最后邻苯二胺中间体B与异硫氰酸酯反应得到通式所示的产物。
进一步的，当通式中Y＝O，S，NH时，制备方法为：将起始原料4,6-二氯-5-嘧啶甲醛(1) 与一水合肼进行环合生成4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(2)；在碳酸铯存在下与卤代烷烃发生亲核取代得到3，然后在N2保护下，3与取代的硝基化合物(4)反应得到5；在10％铂碳催化下经水合肼还原得到邻苯二胺中间体6(即上述的邻苯二胺中间体A)；最后与异硫氰酸酯反应得到目标化合物I。
当通式中Y＝NMe时，制备方法为：将起始原料4,6-二氯-5-嘧啶甲醛(1)与一水合肼进行环合生成4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(2)；在碳酸铯存在下与卤代烷烃发生亲核取代得到 3，然后在N2保护下，3与取代的硝基化合物(4)反应得到5；在二氯甲烷中先与三氟乙酸酐反应，然后在碱性和相转移催化剂存在下与硫酸二甲酯作用得到7；7在10％铂碳催化下经水合肼还原得到关键的邻苯二胺中间体8(即上述的邻苯二胺中间体B)；最后，邻苯二胺中间体8与异硫氰酸酯反应得到目标化合物I。
具体合成路线如下：
试剂和反应条件(a)NH2NH2·H2O，Et3N，MeOH；(b)卤代化合物R1X1，Cs2CO3，DMF；(c)Cs2CO3，DMF，N2保护；(d)TFAA，CTMAB，50％NaOH，DCM；(e)10％Pt/C，NH2NH2·H2O，无水乙醇；(f)异硫氰酸酯，DIC，CH3CN。
合成线路中最后的产物Ⅰ即通式所示的化合物。
一种药物组合物，包括下列成分中的至少一种：a)化合物、b)该化合物在药学上可接受的盐、c)该化合物的水合物、d)该化合物的溶剂合物、e)该化合物的多晶型物、f)该化合物的互变异构体、g)该化合物的前药；其中，化合物为上述结构通式的化合物。
进一步的，上述的药物组合物，还包括药物辅料；优选的，所述的辅料包括下列物质中的至少一种：溶剂、抛射剂、增溶剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂。
本发明的药物组合物可制成各种剂型：
按照剂型的分散系统进行分类，具体来说，可以制成以下剂型：溶液型、胶体溶液型、乳剂型、混悬型、气体分散型、微粒分散型、固体分散型；
按照形态分类，具体来说，可以制成以下剂型：液体剂型(如芳香水剂、溶液剂、注射剂、合剂、洗剂、搽剂等)，气体剂型(如气雾剂、喷雾剂等)，固体剂型(如散剂、丸剂、片剂、膜剂等)，半固体剂型(如软膏剂、栓剂、糊剂等)；
按照给药途径分类，具体来说，可以制成以下剂型：经胃肠道给药的剂型、不经胃肠道给药的剂型。
上述的一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物在制备蛋白激酶活性异常相关疾病的药物中的应用。
蛋白激酶活性异常相关疾病为癌症。
进一步的，蛋白激酶活性异常相关疾病为黑色素瘤、肝癌、肾癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、膀胱癌、肾或输尿管癌、脊柱轴肿瘤、垂体腺瘤、胃肠间质肿瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肥大细胞增多症、胶质瘤、肉瘤、淋巴瘤中的至少一种。
一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药在制备BRAF/VEGFR-2激酶抑制剂中的应用。
优选的，一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药在制备治疗和/或预防和/或延缓和/或辅助治疗和/或处理与 BRAFV600E/VEGFR-2激酶活性过高相关的疾病的药物中的应用；进一步优选的，一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药在制备抗肿瘤药物中的应用；再进一步优选的，一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药在制备抗前列腺癌药物或制备抗黑色素瘤药物中的应用。
本发明中“药学上可接受的盐”是指把母体化合物中的碱性基团转换成盐的形式。药学上可接受的盐包括，但不仅限于，碱性基团例如胺(氨)基的无机或有机酸盐类。本发明药学上可接受的盐可以由母体化合物合成，即母体化合物中的碱性基团与1-4当量的酸在一个溶剂系统中反应。合适的盐列举在Remington’s Pharmaceutical Sciences,17thed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,1418和Journal of PharmaceuticalScience,66,2,1977中。
药学上可接受的酸加成盐可以由无机和有机酸制备如下：由衍生酸加成盐的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。由衍生酸加成盐的有机酸包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、苯磺酸等。衍生酸加成盐的无机酸和有机酸尤其选自盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、高氯酸、氢溴酸、乙酸、苯甲酸和对甲苯磺酸。
以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。
实施例1：
4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶的合成
在100mL三口烧瓶中，加入4,6-二氯-5-嘧啶甲醛(1.0g，5.68mmol)，甲醇(20mL)，搅拌溶解，降温至-65℃，滴加三乙胺(0.97mL，6.81mmol)。一水合肼(0.274mL，5.68mmol)用甲醇(10mL)稀释，用滴液漏斗缓慢滴下。滴毕恢复至室温，反应2～3h，TLC监测。反应结束，蒸干溶剂，干燥。用乙酸乙酯溶解固体(30mL×3)，过滤，合并后用饱和NaCl溶液洗涤(60mL×3)。无水MgSO4干燥、蒸除溶剂、干燥，得到淡黄色固体(0.60g，收率为68.9％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.51(s,1H),8.84(s,1H),8.45(s,1H).ESI-MS m/z:153.4[M- H]-.
实施例2：
4-氯-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶的合成
在250mL三口烧瓶中，依次加入4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(2.0g，12.98mmol)，DMF (50mL)和碳酸铯(5.06g，15.57mmol)，冰浴冷却至0℃，碘甲烷(0.97mL，15.57mmol) 用DMF(5mL)稀释，用滴液漏斗缓慢滴入。滴毕移至室温，过夜，TLC监测。反应结束，用乙酸乙酯(100mL)稀释反应液，分别用水(60mL×1)、饱和NaCl溶液(50mL×2)洗涤混合物。无水MgSO4干燥、蒸除溶剂，干燥得白色固体(1.67g，收率为38.5％)。1H NMR (400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,1H),8.41(s,1H),4.06(s,3H).ESI-MS,m/z:169.3[M+H]+.
实施例3：
4-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-2-硝基苯胺的合成
在100mL三口烧瓶中，加入3-硝基-4-氨基苯酚(0.92g，6.96mmol)，Cs2CO3(2.90g，8.92mmol)粉末，N2保护下滴入DMF(40mL)，室温搅拌1.5-2h。将溶于适量DMF(10 mL)中的4-氯-1-(2-甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(1.0g，5.95mmol)滴入，反应22-24h，TLC 监测。反应结束，用乙酸乙酯(50mL)稀释后，依次用水(80mL×1)、饱和NaCl溶液(50 mL×2)洗涤，无水MgSO4干燥、蒸除溶剂、干燥得黄色固体(1.40g，收率为82.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d6)δ8.55(s,1H),8.09(s,1H),8.07(d,J＝2.4Hz,1H),7.32-7.35(m,1H), 6.94(d,J＝8.8Hz,1H),6.20(s,2H),4.16(s,3H).ESI-MS,m/z:287.5[M+H]+.
实施例4：
4-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-1,2-苯二胺的合成
在100mL单口烧瓶中，将N-甲基-4-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-2-硝基苯胺(0.68g，2.37mmol)和10％Pt/C(0.15g)混合于无水乙醇(30mL)中，把水合肼(0.17 mL，4.7mmol)用无水乙醇(20mL)稀释，缓慢滴入。滴毕，室温下反应2-3h，TLC监测。反应完全后，过滤，滤液经减压蒸馏浓缩后加入乙酸乙酯(100mL)和水(80mL)萃取，饱和NaCl溶液(80mL×2)洗涤。无水MgSO4干燥、蒸除溶剂，梯度色谱柱纯化得棕色固体 (0.46g，产率为76.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),7.42(s,1H),6.57(d,J＝ 8.4Hz,1H),6.42(d,J＝2.4Hz,1H),6.30(dd,J＝2.4,8.4Hz,1H),4.75(s,2H),4.56(s,2H),4.00(s, 3H).ESI-MS,m/z:257.3[M+H]+.
实施例5：
N-甲基-4-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-2-硝基苯胺的合成
在100mL单口烧瓶中，将4-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-2-硝基苯胺(0.68 g，2.37mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，冰浴至0℃，缓慢滴入三氟乙酸酐(0.60mL， 4.26mmol)，反应45min，TLC监测，反应结束后，0℃下依次加入十六烷基三甲基溴化铵 (0.42g，1.17mmol),硫酸二甲酯(0.45mL，4.70mmol)和50％氢氧化钠(12mL)。加毕移至室温，搅拌16-20h，TLC监测。反应完全后，加入二氯甲烷(100mL)稀释，水(80 mL×2)洗涤混合物。无水MgSO4干燥、蒸除溶剂、干燥得棕红色固体产物(0.60g，产率为 84.3％)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d6)δ8.56(s,1H),8.13(d,J＝2.8Hz,2H),8.09(s,1H),7.46(dd, J＝9.2,2.8Hz,1H),6.98(d,J＝9.2Hz,1H),4.16(s,3H),3.10(s,3H).ESI-MS m/z:301.5[M+H]+.
实施例6：
N1-甲基-4-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-1,2-苯二胺的合成
参照实施例4的制备方法，收率为产率74.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),7.45(s,1H),6.40-6.48(m,3H),4.82(s,3H),3.99(s,3H),2.76(s,3H).ESI-MS,m/z:271.6 [M+H]+.
实施例7：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
在50mL单口烧瓶中，将4-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-1,2-苯二胺(0.20g， 0.78mmol)溶于乙腈(20mL)中，将硫代异氰酸苯酯(0.106g，0.78mmol)用乙腈(10mL) 溶解稀释，缓慢滴入稀释液，室温下反应18-20h，TLC监测。反应完全后，加入N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)(0.195g，1.1mmol)，升温至120℃，反应6-8h。TLC监测，反应完全后，降至室温，减压浓缩，加入乙酸乙酯(80mL)和水(50mL)萃取，饱和NaCl溶液(50 mL×2)洗涤。无水NaSO4干燥、蒸除溶剂，梯度色谱柱(乙酸乙酯/石油醚)分离纯化得目标化合物(0.086g，产率为31.2％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),9.53(s,1H), 8.55(s,1H),7.70-7.77(m,3H),7.24-7.40(m,4H),6.93-6.96(m,2H),4.03(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.5,155.5,155.3,140.9,131.4,129.2,121.3,117.6,102.1,34.4.ESI-MS m/z:358.6 [M+H]+.
实施例8：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例7的制备方法，收率为35.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.00(s,1H),8.47-8.54(m,2H),8.11-8.23(m,1H),7.69-7.72(m,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,1H),7.21-7.22(m,3H), 6.90-6.98(m,2H),4.03(s,3H),2.31(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.5,155.5,155.2, 138.6,131.4,130.8,126.9,123.0,120.6,102.1,34.4,18.2.ESI-MS m/z:372.5[M+H]+.
实施例9：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例7的制备方法，收率为34.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),9.44(s,1H),8.55(s,1H),7.71-7.76(m,1H),7.55-7.58(m,2H),7.18-7.42(m,3H),6.92(s,1H),6.77(d, J＝7.2Hz,1H),4.03(s,3H),2.32(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3, 152.1,146.6,140.8,138.4,131.4,129.1,122.2,118.3,115.1,114.1,102.1,34.4,21.7.ESI-MS m/z:372.5[M+H]+.
实施例10：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例7的制备方法，收率为37.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.01(s,1H),9.39(d,J＝20Hz,1H),8.54(s,1H),7.62-7.6(m,3H),7.12-7.40(m,4H),6.87-6.94(m,1H),4.03(s, 3H),2.26(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ155.5,155.3,131.4,129.6,117.7,102.1,34.4, 20.7.ESI-MS m/z:372.5[M+H]+.
实施例11：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例7的制备方法，收率为37.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.2(s,1H),9.76-9.80(m,1H),8.55(s,1H),8.07(s,1H),7.75-7.81(m,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.26-7.48(m, 3H),6.97-6.99(m,3H),4.03(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.3,155.4,155.2,151.2, 146.9,141.9,133.8,131.3,130.9,121.4,117.4,116.6,114.8,102.1,34.4.ESI-MS m/z:392.5[M+H]+.
实施例12:
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例7的制备方法，收率为36.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.16(s,1H),9.71(s,1H),8.54(s,1H),7.73-7.83(m,3H),7.25-7.42(m,4H),6.94(s,1H),4.03(s,3H).13C NMR (100MHz,DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3,140.0,131.4,129.0,124.6,119.1,102.1,34.4.ESI-MS m/z:392.5[M+H]+.
实施例13：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例7的制备方法，收率为35.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.16(s,1H),9.71(d,J＝18.00Hz,1H),8.54(s,1H),7.74-7.80(m,3H),7.24-7.50(m,4H),6.92-6.97(m,1H),4.03(s, 3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ155.5,155.3,144.0,140.5,131.9,131.4,119.5,116.6,114.7, 113.9,112.4,110.1,109.7,102.1,34.4.ESI-MS,m/z:437.4[M+H]+.
实施例14：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例7的制备方法，收率为31.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.3(s,1H),9.95(d,J＝16.8Hz,1H),8.55(s,1H),8.27(s,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(d,J＝20.8Hz,1H), 7.54(t,J＝8.0Hz,1H),7.26-7.48(m,3H),6.97(d,J＝7.6Hz,1H),4.04(s,3H).13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ155.5,155.3,141.9,131.4,130.3,130.1,129.8,121.1,117.2,102.2,34.4,ESI- MS,m/z:426.6[M+H]+.
实施例15：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
在50mL单口烧瓶中，将N1-甲基-4-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-1,2-苯二胺(0.15g，0.55mmol)溶于乙腈(20mL)中，将硫代异氰酸苯酯(0.075g，0.55mmol)用乙腈(10mL)溶解稀释，缓慢滴入稀释液，室温下反应18-20h，TLC监测。反应完全后，加入N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)(0.138g，1.1mmol)，升温至120℃，反应6-8h。TLC监测，反应完全后，降至室温，减压浓缩，加入乙酸乙酯(80mL)和水(50mL)萃取，饱和NaCl溶液(50mL×2)洗涤。无水NaSO4干燥、蒸除溶剂，梯度色谱柱(乙酸乙酯/石油醚)分离纯化得目标化合物(0.061g，产率为29.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.02(s, 1H),8.54(s,1H),7.87(d,J＝8.4,2.0Hz),7.74(s,1H),7.39(d,J＝8.8Hz,1H),7.33(t,J＝8.0Hz, 3H),6.94-7.00(m,2H),4.03(s,3H),3.77(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3,152.1,147.2,142.7,141.1,132.9,131.4,129.0,121.6,118.5,113.6,109.8,108.7,102.1,34.4, 29.6；ESI-MS,m/z:372.4[M+H]+.
实施例16：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例15的制备方法，收率为35.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(s,1H),8.27(s,1H),7.73(s,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.4Hz,1H),7.18-7.25(m,3H),7.06(t, J＝7.6Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),4.02(s,3H),3.74(s,3H),2.27(s,3H).13C NMR(100MHz, DMSO-d6)δ164.5,155.5,155.3,153.9,147.2,143.0,139.1,133.5,131.7,131.46,130.8,126.7, 124.5,124.2,113.3,109.6,108.6,102.2,34.4,29.6,18.4.ESI-MS m/z:386.5[M+H]+.
实施例17：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例15的制备方法，收率为33.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(s,1H),8.53(s,1H),7.73(s,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(s,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.32(s,1H), 7.2(t,J＝7.6Hz,1H),6.99(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(d,J＝7.2Hz,1H),4.03(s,3H),3.75(s,3H), 2.50(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.5,155.5,155.3,152.2,147.2,142.8,141.0,138.1, 132.9,131.4,128.9,122.4,118.9,115.7,113.6,109.8,108.7,102.1,34.4,29.6,21.7.ESI-MS, m/z:386[M+H]+.
实施例18：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺的合成
参照实施例15的制备方法，收率为38.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(s,1H),8.53(s,1H),7.73-7.74(m,3H),7.36-7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(s,1H),7.12-7.14(m,2H),6.97- 6.99(m,1H),4.02(s,3H),3.75(s,3H),2.26(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.5,155.5, 155.3,152.3,147.2,138.4,132.9,131.4,130.6,129.4,118.8,113.6,109.6,108.6,102.1,34.4,29.6, 20.8.ESI-MS,m/z:386.5[M+H]+.
实施例19：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氰基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为31.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.61(s,1H),8.54(s,1H),8.07(d,J＝8.8Hz,2H),7.82(s,1H),7.78(d,J＝8.8Hz,2H),7.47(d,J＝8.4Hz,1H), 7.41(d,J＝2.0Hz,1H),7.07(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.04(s,3H),3.81(s,3H).13C NMR(100MHz, DMSO-d6)δ164.3,155.5,155.3,150.7,147.4,145.4,142.2,133.6,132.7,131.4,120.0,118.1,114.6, 110.4,109.4,102.7,102.2,34.3,29.9；ESI-MS,m/z:395.4[M+H]+.
实施例20：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为30.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(s,1H),8.53(s,1H),7.76(s,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(s,3H),7.29(d,J＝2.4Hz,1H),6.99(dd,J＝ 8.4,2.0Hz,1H),4.03(s,3H),3.79(s,6H),3.75(s,3H),3.64(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6) δ164.5,155.5,155.3,153.2,152.2,147.2,142.8,137.2,132.8,132.6,131.4,113.6,109.9,108.6, 102.2,96.7,60.6,56.2,34.4,29.6.ESI-MS,m/z:462.5[M+H]+.
实施例21：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-叔丁基苯基)-1H-苯并咪唑-2- 胺
参照实施例15的制备方法，收率为31.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,1H),8.54(s,1H),7.74-7.76(m,3H),7.33-7.38(m,3H),7.28(d,J＝2.0Hz,1H),6.97(dd,J＝8.4,2.4Hz, 1H),4.03(s,3H),3.75(s,3H),1.28(s,9H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.5,155.5,155.3, 152.5,147.2,144.0,142.9,138.5,133.0,131.4,125.6,118.5,113.4,109.7,108.6,102.2,34.4,34.3, 31.7,29.6.ESI-MS,m/z:428.7[M+H]+.
实施例22：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为32.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),8.45(s,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(s,1H),7.51(d,J＝7.6Hz,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,1H), 7.36(t,J＝7.6Hz,1H),7.30(d,J＝1.6Hz,1H),7.12(t,J＝8.4Hz,1H),7.02(dd,J＝8.8,2.4Hz, 1H),4.03(s,3H),3.78(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3,152.5,147.3, 142.4,137.7,133.2,131.4,129.9,128.1,125.4,124.7,123.8,114.1,110.2,109.2,102.2,34.4,29.7. ESI-MS m/z:406.6[M+H]+.
实施例23：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为38.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),8.54(s,1H),8.13(s,1H),7.76-7.77(m,2H),7.33-7.43(m,3H),6.99-7.03(m,2H),4.03(s,3H),3.78(s, 3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3,151.5,147.3,142.6,142.4,133.5,132.8, 131.4,130.6,121.1,117.6,116.8,114.1,110.1,109.0,102.2,34.4,29.7.ESI-MS,m/z:406.4[M+H]+.
实施例24：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为38.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),8.54(s,1H),8.13(s,1H),7.76-7.77(m,2H),7.33-7.43(m,3H),6.995-7.037(m,2H),4.03(s,3H), 3.78(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3,151.5,147.3,142.6,142.4,133.5, 132.8,131.4,130.6,121.1,117.6,116.8,114.1,110.1,109.0,102.2,34.4,29.7；ESI-MS,m/z:406.4 [M+H]+.
实施例25：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为36.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),8.54(s,1H),8.26(s,1H),7.85(d,J＝9.2Hz,1H),7.77(s,1H),7.38-7.43(m,2H),7.29(t,J＝8.0Hz, 1H),7.13(d,J＝8,0Hz,1H),7.02(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),4.03(s,3H),3.79(s,3H).13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3,151.5,147.3,142.8,142.5,132.8,131.4,130.9,124.0,122.0, 120.4,117.2,114.1,110.1,109.0,102.2,34.4,29.7.ESI-MS,m/z:448.3[M+H]+.
实施例26：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为33.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.20(s,1H),9.53(s,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,2H),7.76(s,1H),7.50(d,J＝8.8Hz,2H),7.41(d,J＝8.8Hz,1H), 7.34(d,J＝1.6Hz,1H),7.01(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.03(s,3H),3.77(s,3H).13C NMR(100MHz, DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3,151.7,147.3,142.6,140.5,132.8,131.7,131.4,120.3,113.9,112.9, 109.9,108.9,102.2,34.4,29.7.ESI-MS,m/z:448.3[M+H]+.
实施例27：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为37.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(s,1H),8.53(s,1H),7.87-7.91(m,2H),7.74(s,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(s,1H),7.17(t,J＝8.6Hz, 2H),6.99(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),4.03(s,3H),3.76(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.5, 155.5,155.3,152.3,147.3,142.7,137.5,132.9,131.4,120.1,115.6,115.4,113.7,109.8,108.7,102.1, 34.4,29.6；ESI-MS,m/z:390.4[M+H]+.
实施例28：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3,4-二氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为38.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(s,1H),8.53(s,1H),8.33(d,J＝2.4Hz,1H),7.85(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),7.78(s,1H),7.57(d,J＝8.0Hz, 1H),7.40—7.44(m,2H),7.04(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),4.03(s,3H),3.78(s,3H).13CNMR(100MHz, DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.30,151.2,147.4,142.3,141.2,132.7,131.4,131.3,130.9,122.7, 119.2,118.4,114.3,110.2,109.1,102.1,34.41,29.7.ESI-MS,m/z:438.4[M+H]+.
实施例29：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-溴-5-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2- 胺
参照实施例15的制备方法，收率为34.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3-d6)δ8.58(s,1H), 8.42(d,J＝10.4Hz,1H),7.75(s,1H),7.52-7.55(m,2H),7.31(s,1H),7.12(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H), 6.70(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),4.14(s,3H),3.77(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3-d6)δ164.3, 163.8,161.4,155.3,149.3,147.8,132.9,132.8,131.9,131.3,115.2,111.1,110.5,110.2,108.4,107.0, 106.7,102.5,34.2,29.1.ESI-MS,m/z:468.3[M-H]-.
实施例30：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-二甲氨基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为31.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),8.54(s,1H),7.68(s,1H),7.64(d,J＝9.2Hz,2H),7.32(d,J＝8.4Hz,1H),7.23(d,J＝2.4Hz,1H), 6.93(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),6.76(d,J＝9.2Hz,2H),4.02(s,3H),3.72(s,3H),2.85(s,6H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.5,155.5,155.3,153.2,147.1,146.6,143.2,133.2,131.4,131.1, 120.7,113.5,112.9,109.3,108.2,102.1,41.2,34.4,29.4.ESI-MS,m/z:415.5[M+H]+.
实施例31:
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑- 2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为35.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(s,1H),8.54(s,1H),8.31(s,1H),8.22(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(s,1H),7.57(t,J＝8.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.4 Hz,1H),7.38(d,J＝1.2Hz,1H),7.30(d,J＝7.6Hz,1H),7.04(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),4.03(s,3H), 3.80(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3,151.5,147.4,142.4,141.9,132.8, 131.4,130.2,121.7,117.7,114.2,110.2,109.1,102.2,34.4,29.7.ESI-MS,m/z:440.4[M+H]+.
实施例32：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑- 2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为38.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.48(s,1H),8.54(s,1H),8.08(d,J＝8.8Hz,2H),7.80(s,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,2H),7.45(d,J＝8.8Hz,1H), 7.39(d,J＝2.0Hz,1H),7.05(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),4.03(s,3H),3.81(s,3H).13C NMR(100MHz, DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3,151.2,147.4,144.7,142.3,132.8,131.4,126.3,117.9,114.4,110.2, 109.2,102.2,34.4,29.8.ESI-MS,m/z:440.4[M+H]+.
实施例33：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2- 胺
参照实施例15的制备方法，收率为39.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.85(s,1H),8.53(s,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,2H),7.71(s,1H),7.35(d,J＝8.4Hz,1H),7.26(s,1H),6.91-6.97(m, 3H),4.02(s,3H),3.73(s,6H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.5,155.5,155.3,154.6,152.8, 147.2,143.0,134.2,133.1,131.4,120.4,114.3,113.2,109.5,108.4,102.1,55.6,34.4,29.5,26.7. ESI-MS,m/z:402.5[M+H]+.
实施例34：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基-4-氯-苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为37.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(s,1H),8.42(s,1H),8.31(d,J＝9.2Hz,1H),7.79(s,1H),7.68(d,J＝8.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H), 7.38(s,1H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),4.03(s,3H),3.79(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ 164.4,155.5,155.3,151.1,147.4,142.2,140.6,132.7,132.3,131.4,126.8,122.7,121.7,116.9,114.4, 110.3,109.2,102.2,34.4,29.7.ESI-MS,m/z:474.4[M+H]+.
实施例35：
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑 -2-胺
参照实施例15的制备方法，收率为39.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25(s,1H),8.53(s,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,2H),7.77(s,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.33-7.35(m,3H),7.01(dd, J＝8.4,2.0Hz,1H),4.03(s,3H),3.78(s,3H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ164.4,155.5,155.3, 151.8,147.3,142.5,140.4,132.9,131.4,122.0,119.5,114.0,110.0,108.9,102.2,34.4,29.7.ESI- MS,m/z:456.5[M+H]+.
目标化合物对BRAFV600E激酶和VEGFR-2激酶单点抑制率的测定：
1)配制1.33×激酶缓冲溶液；
2)配制确定浓度的BRAFV600E/VEGFR-2激酶与9肽底物溶液；
3)配制4×ATP的溶液；
4)配制磷酸化肽溶液；
5)配制特异蛋白水解酶溶液；
6)用4％的DMSO溶液分别配制浓度为1μM的待测化合物，在384微孔板内分别依次加入2.5μL的待测化合物，每个浓度重复5孔；
7)将2.5μL的4％DMSO溶液分别加入到0％抑制对照孔，100％抑制对照孔及100％磷酸化对照孔中；
8)分别依次加入5μL确定浓度的BRAFV600E/VEGFR-2激酶与9肽底物溶液；
9)将5μL的磷酸化肽溶液加入到100％的磷酸化对照孔中，然后将2.5μL的4×ATP的溶液加入到0％的抑制对照孔和实验孔中；在100％的抑制对照孔及100％的磷酸化对照孔中加入2.5μL的1.33×激酶缓冲溶液，震荡30秒，室温下孵育1小时；
10)加5μL配制特异蛋白水解酶，震荡30秒，在室温下孵育1小时，然后用TECANM1000Pro全波长多功能酶标仪在激发光波长(400nm)的条件下，检测波长(445nm)和波长(520nm)的发射光强度。
所选目标化合物对BRAFV600E激酶IC50值的测定：
所选目标化合物对BRAFV600E/VEGFR-2激酶IC50值的测定是测试化合物10个不同浓度的单点抑制率。起始浓度为1μM，以3倍稀释方法得每个浓度(1000nM、333nM、111nM、37.0nM、12.3nM、4.12nM、1.37nM、0.457nM、0.152nM、0.0495nM)。
体外激酶活性测试的结果见表1。
表1 化合物对BRAFV600E和VEGFR-2激酶的抑制活性
a表格内数值为两次实验的平均值
b N.T：未测试。
体外细胞株抑制活性(IC50)测试：
采用标准的MTT法测定化合物对高表达VEGFR-2的人脐静脉内皮细胞HUVEC的体外抗增殖活性，对高表达BRAFV600E的人恶性黑色素瘤细胞A375、人黑色素瘤细胞HSC1，人结肠癌细胞HT-29，以及高表达BRAF的人肺癌细胞A549四种肿瘤细胞株增殖的抑制活性，并测定化合物对正常细胞人表皮永生化细胞HaCaT的细胞毒性。
体外培养细胞株，把对数生长期的六种细胞株细胞消化后，吹打成单细胞悬液，分别接种于96孔培养板；每孔5×103个细胞，每孔加入培养基200μL，37℃、5％CO2培养箱中培养过夜。待细胞贴壁后，分别加入不同剂量的受试化合物和阳性对照药索拉菲尼，配置不同浓度的样品，以空白组为阴性对照组，以索拉菲尼为阳性对照组，在培养箱中再培养48h。然后，每孔加入20μL质量浓度为5mg/mL的MTT液，连续培养4h。吸去上清液，每孔加入 150μL二甲亚砜，将培养板置于微孔板振荡器上振荡10min，使结晶物溶解。在570nm波长处用酶标仪测吸光度OD值，计算抑制率；按Bliss法计算IC50。
采用分析软件GraphPad Prism 5，计算达到50％抑制作用时化合物的浓度(IC50)。IC50值为三次实验测试的平均值。
体外细胞活性测试的结果见表2。
表2 化合物体外抗细胞增殖活性(IC50,μM)a
a表格内数值为三次实验的平均值
b N.T：未测试。
体外激酶活性和细胞活性测试表明，化合物对VEGFR-2和BRAFV600E两种激酶具有较强的抑制活性，化合物对高表达VEGFR-2和BRAFV600E的细胞增殖具有较强的抑制活性，可用于预防或治疗与VEGFR-2和BRAFV600E有关的临床疾病，这些疾病可以是黑色素瘤、肝癌、肾癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、膀胱癌、肾或输尿管癌、脊柱轴肿瘤、垂体腺瘤、胃肠间质肿瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肥大细胞增多症、胶质瘤、肉瘤、淋巴瘤等。

Claims (7)

1.一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，其特征在于：所述的化合物具体选自下列化合物中的任一种：
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺；
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氰基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-叔丁基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3,4-二氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-溴-5-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-二甲氨基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基-4-氯-苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺；
1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺。
2.权利要求1所述的一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于：
1)将起始原料4,6-二氯-5-嘧啶甲醛与一水合肼进行环合生成4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶在碳酸铯存在下与卤代烷烃发生亲核取代得到然后在N2保护下，与取代的硝基化合物反应得到在10％铂碳催化下经水合肼还原得到苯胺中间体最后与异硫氰酸酯反应得到目标化合物X为O；Y＝NH，O或S；R1为-H、C1～C6的烷基、 或取代的6-10元芳环，取代芳环的取代基为-H、卤素或C1～C6的烷基；R2为-H、卤素、C2～C3或C6烷基、C2～C3或C6烷氧基、C2～C3或C6烷硫基或-NO2；R3为取代的4～12元芳杂环基、取代芳杂环上的取代基为-H、C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O、S或N；R4为-H、卤素、烷基、-OCH3、-OCF3、-NMe2、-CF3、-NO2或-CN；R5为-H或烷基；R4、R5所含的氢原子各自独立地被一个或多个相同或不同的G1或G2取代；G1或G2各自独立地选自H、-OH、-NH2、-CN、-CF3、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6芳基、5-6元杂环芳基、C3-6杂脂环基、C1-6烷氧基、C3-6环烷氧基、C6芳氧基、5-7元杂芳氧基、C3-6杂脂环氧基、C1-6烷氨基、C3-6环烷氨基、C6芳氨基、5-7元杂环芳氨基、C3-6杂脂环氨基、C1-6烷氧基-CO-、C3-6环烷氧基-CO-、C6芳氧基-CO-、5-7元杂环芳氧基-CO-、C3-6杂脂环氧基-CO-、C1-6烷氨基-CO-、C3-6环烷氨基-CO-、C6芳氨基-CO-、5-7元杂环芳氨基-CO-或C3-6杂脂环氨基-CO-；所得的目标化合物具体为5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺、5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺中的任一种；
2)或者是将起始原料4,6-二氯-5-嘧啶甲醛与一水合肼进行环合生成4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶在碳酸铯存在下与卤代烷烃发生亲核取代得到然后在N2保护下，与取代的硝基化合物反应得到在二氯甲烷中先与三氟乙酸酐反应，然后在碱性和相转移催化剂存在下与硫酸二甲酯作用得到在10％铂碳催化下经水合肼还原得到邻苯二胺中间体最后，邻苯二胺中间体与异硫氰酸酯反应得到目标化合物X为O；R1为-H、C1～C6的烷基、 或取代的6-10元芳环，取代芳环的取代基为-H、卤素或C1～C6的烷基；R2为-H、卤素、C2～C3或C6烷基、C2～C3或C6烷氧基、C2～C3或C6烷硫基或-NO2；R3为取代的4～12元芳杂环基、取代芳杂环上的取代基为-H、C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O、S或N；R4为-H、卤素、烷基、-OCH3、-OCF3、-NMe2、-CF3、-NO2或-CN；R5为-H或烷基；R4、R5所含的氢原子各自独立地被一个或多个相同或不同的G1或G2取代；G1或G2各自独立地选自H、-OH、-NH2、-CN、-CF3、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6芳基、5-6元杂环芳基、C3-6杂脂环基、C1-6烷氧基、C3-6环烷氧基、C6芳氧基、5-7元杂芳氧基、C3-6杂脂环氧基、C1-6烷氨基、C3-6环烷氨基、C6芳氨基、5-7元杂环芳氨基、C3-6杂脂环氨基、C1-6烷氧基-CO-、C3-6环烷氧基-CO-、C6芳氧基-CO-、5-7元杂环芳氧基-CO-、C3-6杂脂环氧基-CO-、C1-6烷氨基-CO-、C3-6环烷氨基-CO-、C6芳氨基-CO-、5-7元杂环芳氨基-CO-或C3-6杂脂环氨基-CO-；所得的目标化合物具体为1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-苯基-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氰基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-叔丁基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-溴苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3,4-二氯苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(2-溴-5-氟苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-二甲氨基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(3-三氟甲基-4-氯-苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺、1-甲基-5-[(1-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基)-4-氧基]-N-(4-三氟甲氧基苯基)-1H-苯并咪唑-2-胺中的任一种。
3.一种药物组合物，其特征在于：包括下列成分中的至少一种：a)化合物、b)该化合物在药学上可接受的盐；其中，化合物为权利要求1所述的化合物。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于：还包括药物辅料。
5.权利要求1所述的一种1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物在制备蛋白激酶活性异常相关疾病的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：蛋白激酶活性异常相关疾病为癌症。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：蛋白激酶活性异常相关疾病为黑色素瘤、肝癌、肾癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、宫颈癌、阴道癌、阴户癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或急性白血病、膀胱癌、输尿管癌、脊柱轴肿瘤、垂体腺瘤、胃肠间质肿瘤、肥大细胞增多症、胶质瘤、肉瘤、淋巴瘤中的至少一种。
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