CN107382986B - 4-羟基-1-甲基异喹啉衍生物及其在增加内源性促红细胞生成素中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及4‑羟基‑1‑甲基异喹啉衍生物及其在增加内源性促红细胞生成素中的用途。

Description

4-羟基-1-甲基异喹啉衍生物及其在增加内源性促红细胞生 成素中的用途
技术领域
本发明涉及能够调节低氧诱导因子HIF-α的稳定性和增加体外以及体内内源性促红细胞生成素的方法和化合物
背景技术
低氧诱导因子(hypoxia inducible factor，HIF)是一种广泛存在于哺乳动物和人体细胞中的转录调节因子。HIF是由HIF-α和HIF-β共同组成异二聚体，两者同属于碱基-螺旋-环-螺旋(bHLH)-PAS蛋白家族。主要有3个家族成员：HIF-1、HIF-2和HIF-3，但在细胞中几乎只存在HIF-1和HIF-2。HIF有不同的α亚基(HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α)、相同的β亚基。HIF-α是一种功能性亚基，其蛋白质的稳定性、亚细胞定位和转录效力受氧气水平影响，而HIF-β是在细胞核中表达的结构型亚基，其活性并不受低氧影响。
HIF-1α受到氧气浓度水平密切影响。在常氧条件下，脯氨酸羟化域酶(PHD)羟基化HIF-α亚基，被羟基化的HIF-α亚基随后被蛋白酶体降解。HIF-1α半衰期大概仅1-2min，很难检测到HIF-1α；在低氧条件下，HIF-1α降解受阻，在胞质内的浓度增加，并转位到细胞核，与HIF-β结合形成HIF-1。目前已经证实的受到HIF调控的基因大约有150个，包括促红细胞生成素(erythropoietin，EPO)、血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1，HO-1)、诱导型一氧化氮合酶(induciblenitric oxide synthase，iNOS)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporters1，GluT-1)、胰岛素样生长因子-2(insulin-like growth factor 2，IGF-2)、内皮素1、转铁蛋白等。
HIF-α的降解受其被羟基化的调节，HIF-α羟基化主要受Fe2+、2-酮戊二酸依赖的双加氧酶家族-PHDs(脯氨酸羟化域酶)类及FIH(天冬酰胺酰羟化酶)的调节。
促红细胞生成素(EPO)是随HIF-α而产生的一种自然存在的激素，其剌激运载氧气贯穿全身的红细胞(红血球)的产生。EPO通常由肾分泌，且内源性EPO在氧减少(缺氧)的条件下增加。所有类型贫血的特征在于血液运载氧的能力减少，并因而伴有类似体征与症状，包括皮肤及粘膜苍白、虚弱、头晕、易疲劳和嗜睡，导致生活质量的下降。具有严重贫血情况的受试者表现出难以呼吸及心脏畸形。贫血通常与红细胞中或血红蛋白中血液缺乏的病况有关。
除了在肾中产生以外，促红细胞生成素还通过星形细胞和神经元在中央神经系统(CNS)中产生，并且EPO和EPO受体在脑外围界面的毛细管上表达。此外，全身投药的EPO穿越血脑屏障并减少随脑和脊髓局部缺血、机械性创伤、癫痛、兴奋性毒素和神经炎症而产生的神经细胞损失。
在近来的80年代，Amgen提出一种用于治疗慢性肾衰竭患者的贫血的遗传工程EPO。也将EPO投予经历放射和/或化学疗法的癌症患者，以减少其对于输血的需要。将EPO用于治疗与HIV感染或叠氮胸昔(AZT)疗法相关的贫血。尽管EPO疗法的市场渐增，但此产品的高成本不利地影响未来的销售。另外，重组EPO疗法需要静脉内EPO投药每周1至3次，多达12周，治疗方案限制自行投药且对患者造成不便。另一方面，由于广泛及变化的糖基化作用在任何重组人类EPO中不再产生，故人类血清EPO显示大小不均匀性。
由于当前治疗中及生产和使用重组EPO中的不足，所以依然需要有效治疗以下疾病的化合物：促红细胞生成素相关病况，例如贫血，包括与糖尿病、贫血、溃窃、肾衰竭、癌症、感染、透析、手术和化学疗法相关的贫血和涉及局部缺血和缺氧的病况，例如动脉闭塞性疾病、心绞痛、肠梗塞、肺梗塞、脑局部缺血和心肌梗塞。也需要有效预防由局部缺血引起的组织损坏的化合物，所述局部缺血由于例如动脉粥样硬化、糖尿病和例如肺栓塞及其类似病症的肺部病症而发生。总之，在此项技术中需要调节HIF和/或内源性促红细胞生成素，且可用于治疗和预防HIF相关和EPO相关病症的方法和化合物，所述病症包括涉及贫血、局部缺血和缺氧的病况。
发明内容
本发明涉及可调节低氧诱导因子(HIF)和/或内源性促红细胞生成素(EPO)的新颖化合物和方法。
一种由下式表示的化合物：
Figure BDA0001367771620000031
其中
R1选自下列芳环以及芳杂环取代基：噻吩、吡啶、苯；以及
R2选自下列各基团组成的群组：羧基、四氮唑、异羟肟酸、3-羟基异恶唑、3-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-巯基苯酚；
或其医药上可接收的盐。
其中R1是芳环具体为苯基时，R2选自下列各基团组成的群组：四氮唑、异羟肟酸、3-羟基异恶唑、3-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-巯基苯酚中的任一基团或其医药上可接受的盐。
其中R1是芳杂环，具体为噻吩时，R2选自下列各基团组成的群组：羧基、四氮唑、异羟肟酸、3-羟基异恶唑、3-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-巯基苯酚中的任一基团或其医药上可接受的盐。
其中R1是芳杂环，具体为吡啶时，R2选自下列各基团组成的群组：羧基、四氮唑、异羟肟酸、3-羟基异恶唑、3-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-巯基苯酚中的任一基团或其医药上可接受的盐。
其中R1是芳杂环，具体为噻吩时，噻吩环的取代位置可以为2-位，也可以为3-位；优选为2-位
其中R1是芳杂环，具体为吡啶时，吡啶环的取代位置可以为2-位、3-位也可以是4-位；优选为2-位或3-位，更优选为2-位
详细的化合物如表A所示
Figure BDA0001367771620000041
表A
Figure BDA0001367771620000042
Figure BDA0001367771620000051
Figure BDA0001367771620000061
Figure BDA0001367771620000071
具体实施方式
具体化合物的制备方案：
本发明中的系列化合物可以通过以下合成策略获得。
化合物Ⅱ被芳醇或芳杂醇亲电取代生成化合物Ⅲ，化合物Ⅲ经水解生成化合物Ⅳ，化合物Ⅳ经环合生成化合物Ⅴ，化合物Ⅴ开环缩合形成化合物Ⅵ，化合物Ⅵ重新环合成化合物Ⅶ，化合物Ⅶ经氯代成化合物Ⅷ，化合物Ⅷ甲基化成化合物Ⅸ，化合物Ⅸ水解成化合物Ⅹ，化合物Ⅹ与被R2取代的甲胺成酰胺得到目标物Ⅰ。
Figure BDA0001367771620000081
以制备表A中化合物1为例来阐述详细的制备过程。
4-(噻吩-2-基氧基)酞腈(化合物Ⅲ-1)的合成
Figure BDA0001367771620000082
氮气保护，在100ml三口瓶中加入10.00g 4-硝基邻苯二甲腈(化合物Ⅱ)、6.36g2-羟基噻吩、7.98g碳酸钾和50ml DMSO，在室温下搅拌反应48小时，然后升温至60℃反应2小时。冷却至室温，往反应体系倒入150ml水中，搅拌均匀后过滤，干燥得到4-(噻吩-2-基氧基)酞腈(化合物Ⅲ-1)12.78g。
用制备化合物Ⅲ-1方法可以制备化合物Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅲ-4、Ⅲ-5、Ⅲ-6，如表B所示
Figure BDA0001367771620000091
表B
Figure BDA0001367771620000092
4-(噻吩-2-基氧基)邻苯二甲酸(化合物Ⅳ-1)的合成
Figure BDA0001367771620000093
100ml单口瓶中，将12.5g 4-(噻吩-2-基氧基)酞腈(化合物Ⅲ-1)溶于甲醇中，加入25ml50％氢氧化钠溶液。溶液加热回流48小时直到反应完成。加入浓盐酸调pH＝3。过滤，干燥，得到4-(噻吩-2-基氧基)邻苯二甲酸(化合物Ⅳ-1)11.68g。
用制备化合物Ⅳ-1方法可以制备化合物Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅳ-4、Ⅳ-5、Ⅳ-6，如表C所示
Figure BDA0001367771620000101
表C
Figure BDA0001367771620000102
5-(噻吩-2-基氧基)异苯并呋喃-1,3-二酮(化合物Ⅴ-1)的合成
Figure BDA0001367771620000103
250ml单口瓶中，将11.00g 4-(噻吩-2-基氧基)邻苯二甲酸(化合物Ⅳ-1)溶于80ml冰醋酸和80ml乙酸酐中，加热回流4小时。减压旋蒸除去溶剂后得到12.67g 5-(噻吩-2-基氧基)异苯并呋喃-1,3-二酮(化合物Ⅴ-1)。
用制备化合物Ⅴ-1方法可以制备化合物Ⅴ-2、Ⅴ-3、Ⅴ-4、Ⅴ-5、Ⅴ-6，如表D所示
Figure BDA0001367771620000111
表D
Figure BDA0001367771620000112
2-[4-(甲氧基羰基)恶唑-5-基]-5-(噻吩-2-基氧基)苯甲酸(化合物Ⅵ-1)的合成
Figure BDA0001367771620000113
将9.50g 5-(噻吩-2-基氧基)异苯并呋喃-1,3-二酮(化合物Ⅴ-1)和3.82g异氰乙酸甲酯溶于60ml四氢呋喃中，在室温下滴加4.84g 1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(DBU)，滴加完毕后室温搅拌1小时。碱性条件下用乙酸乙酯萃取除去杂质后，水相用稀盐酸调pH＝3。乙酸乙酯萃取，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋蒸得到12.86g，2-[4-(甲氧基羰基)恶唑-5-基]-5-(噻吩-2-基氧基)苯甲酸(化合物Ⅵ-1)。
用制备化合物Ⅵ-1方法可以制备化合物Ⅵ-2、Ⅵ-3、Ⅵ-4、Ⅵ-5、Ⅵ-6，如表E所示
Figure BDA0001367771620000121
表E
Figure BDA0001367771620000122
Figure BDA0001367771620000131
4-羟基-1-氧代-7-(噻吩-2-基氧基)-1,2-二氢异喹啉-3-羧酸甲酯(化合物Ⅶ-1)的合成
Figure BDA0001367771620000132
将12.50g 2-[4-(甲氧基羰基)恶唑-5-基]-5-(噻吩-2-基氧基)苯甲酸(化合物Ⅵ-1)溶于甲醇中，加入浓盐酸并加热至60℃反应4小时。最终的沉淀过滤得到7.99g粗品。粗品柱层析进一步纯化得到2.59g 4-羟基-1-氧代-7-(噻吩-2-基氧基)-1,2-二氢异喹啉-3-羧酸甲酯(化合物Ⅶ-1)。
用制备化合物Ⅶ-1方法可以制备化合物Ⅶ-2、Ⅶ-3、Ⅶ-4、Ⅶ-5、Ⅶ-6，如表F所示
Figure BDA0001367771620000133
表F
Figure BDA0001367771620000134
Figure BDA0001367771620000141
Figure BDA0001367771620000142
1-氯-4-羟基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羧酸甲脂(化合物Ⅷ-1)的合成
将2.50g 4-羟基-1-氧代-7-(噻吩-2-基氧基)-1,2-二氢异喹啉-3-羧酸甲酯(化合物Ⅶ-1与15ml三氯氧磷加热至70℃反应3小时，冷却后导入冰中。三氯氧磷完全分解后，过滤最终的沉淀，水洗得到2.03g 1-氯-4-羟基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羧酸甲脂(化合物Ⅷ-1)。
用制备化合物Ⅷ-1方法可以制备化合物Ⅷ-2、Ⅷ-3、Ⅷ-4、Ⅷ-5、Ⅷ-6，如表G所示
Figure BDA0001367771620000151
表G
Figure BDA0001367771620000152
4-羟基-1-甲基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羧酸甲酯(化合物Ⅸ-1)的合成
Figure BDA0001367771620000153
在氮气保护下，加入2.00g 1-氯-4-羟基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羧酸甲脂(化合物Ⅷ-1)、30ml二氧六环、0.69g四(三苯基膦)钯、2.52g碳酸钾、0.77g三甲基硼烷搅拌混合并加热回流3小时，然后室温搅拌48小时。浓缩后，所得混合物用乙酸乙酯萃取，水洗，干燥并过滤，然后在旋转蒸发仪上蒸馏，接着通过柱层析进一步纯化后得到0.60g 4-羟基-1-甲基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羧酸甲酯(化合物Ⅸ-1)。
用制备化合物Ⅸ-1方法可以制备化合物Ⅸ-2、Ⅸ-3、Ⅸ-4、Ⅸ-5、Ⅸ-6，如表H所示
Figure BDA0001367771620000161
表H
Figure BDA0001367771620000162
4-羟基-1-甲基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羧酸(化合物Ⅹ-1)
Figure BDA0001367771620000171
将1.02g 4-羟基-1-甲基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羧酸甲酯(化合物Ⅸ-1)加入10ml乙醇与10ml 2N氢氧化钠的混合物中，回流1.5小时。过滤除掉杂质后，所得混合物在旋转蒸发仪上蒸馏除去乙醇。过滤得到浅黄色固体，水洗，干燥后得到0.52g 4-羟基-1-甲基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羧酸(化合物Ⅹ-1)。
用制备化合物Ⅹ-1方法可以制备化合物Ⅹ-2、Ⅹ-3、Ⅹ-4、Ⅹ-5、Ⅹ-6，如表I所示
Figure BDA0001367771620000172
表I
Figure BDA0001367771620000173
Figure BDA0001367771620000181
Figure BDA0001367771620000182
2-[4-羟基-1-甲基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羰基氨基]乙酸(化合物Ⅰ-1)的合成
将0.37g 4-羟基-1-甲基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羧酸(化合物Ⅹ-1)、0.40g甘氨酸、1.00g PyBOP(CAS:128625-52-5)加入15ml二氯甲烷中，然后加入0.74ml三乙胺，1.0ml二(异丙基)乙胺，室温下搅拌反应3小时。过滤后，有机相水洗，干燥并过滤，减压旋除溶剂，并进一步用柱层析纯化后得到0.29g 2-[4-羟基-1-甲基-7-(噻吩-2-基氧基)异喹啉-3-羰基氨基]乙酸(化合物Ⅰ-1)，即表A中的化合物1。
用表I中的化合物Ⅹ-2、Ⅹ-4、Ⅹ-5、Ⅹ-6分别与甘氨酸按照上述合成方法分别得到表A中的化合物2、21、22、23。
化合物Ⅹ-1分别与5-氨基甲基-2H-四唑、4-氨基甲基异恶唑-3-醇、5-氨基甲基异恶唑-3-醇、甘氨酸异羟肟酸、3-氨基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-氨基硫基苯酚按照上述合成方法分别得到表A中的化合物3、5、6、9、11、13。
化合物Ⅹ-2分别与5-氨基甲基-2H-四唑、4-氨基甲基异恶唑-3-醇、5-氨基甲基异恶唑-3-醇、甘氨酸异羟肟酸、3-氨基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-氨基硫基苯酚按照上述合成方法分别得到表A中的化合物4、7、8、10、12、14。
化合物Ⅹ-3分别与5-氨基甲基-2H-四唑、4-氨基甲基异恶唑-3-醇、5-氨基甲基异恶唑-3-醇、甘氨酸异羟肟酸、3-氨基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-氨基硫基苯酚按照上述合成方法分别得到表A中的化合物15、16、17、18、19、20。
化合物Ⅹ-4分别与5-氨基甲基-2H-四唑、4-氨基甲基异恶唑-3-醇、5-氨基甲基异恶唑-3-醇、甘氨酸异羟肟酸、3-氨基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-氨基硫基苯酚按照上述合成方法分别得到表A中的化合物24、27、28、33、36、39。
化合物Ⅹ-5分别与5-氨基甲基-2H-四唑、4-氨基甲基异恶唑-3-醇、5-氨基甲基异恶唑-3-醇、甘氨酸异羟肟酸、3-氨基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-氨基硫基苯酚按照上述合成方法分别得到表A中的化合物25、29、30、34、37、40。
化合物Ⅹ-6分别与5-氨基甲基-2H-四唑、4-氨基甲基异恶唑-3-醇、5-氨基甲基异恶唑-3-醇、甘氨酸异羟肟酸、3-氨基-5-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-氨基硫基苯酚按照上述合成方法分别得到表A中的化合物26、31、32、35、38、41。
生物活性测试以及制剂
测试和投药生物学测试
本发明化合物的生物学活性可通过使用任何常规的己知方法来评价。合适的分析方法在此项技术中为我们所熟知。提出下列分析仅作为实例而并非意在限制。本发明的化合物在至少一种以下分析中是活性的。
基于细胞的HIF-α稳定性分析
源自多种组织的人类细胞在35mm的培养碟中分别接种并于37℃、20％O2、5％CO2下成长于标准培养皿中，例如DMEM、10％FBS。当细胞层达到汇合时，以OPTI-MEM培养基CInvitrogen Life Technologies,Car lsbad CA)代替此培养基且将细胞层于37℃下在20％O2、5％CO2中培育大约24小时。接着将化合物或0.013％DMSO添加至现有的培养基并继续培育整夜。
培育之后，将培养基移除、离心并储存以用于分析(见以下的VEGF和EPO分析)。将细胞在冷磷酸盐缓冲盐水(PBS)中清洗两次并接着在冰上于1ml的10mM三羟甲基氨基甲烷(pH 7.4)，lmM EDTA、150mM NaCl，0.5％IGEPAL(Sigma-Aldrich，St.LouisMO)和蛋白酶抑制剂混合物(Roche Molecular Biochemicals)中细胞溶解15分钟。细胞溶解产物于4℃在3000xg下离心5分钟，并收集细胞溶质片断(上清液)。再悬浮细胞核(小球状)并细胞溶解于100微升的20mM HEPES(pH 7.2)、400mM NaCl，l mM EDTA，lmM二硫苏糖醇和蛋白酶抑制剂混合物(Roche Molecular Biochemicals)中，于4℃在13000xg下离心5分钟，并收集细胞核蛋白片断(上清液)。
使用QUANTIKINE免疫分析(R&D Systems,Inc.,Minneapolis MN)并根据制造厂商的指示来分析细胞核片断的HIF-1α。
基于细胞的VEGF和EPO的ELISA分析
使用适合的QUANTIKINE免疫分析(R&D Systems,Inc.,Minneapolis MN)并根据制造厂商的指示来分析收集自上述细胞培养的经调节培养基的血管内皮细胞生长因子(VEGF)和/或促红细胞生成素(EPO)的表达。
耗氧分析
氧传感器细胞培养板(BD Biosciences)含有在缺氧时更具荧光性的钌络合物。因此，板中存在耗氧细胞时，其将平衡改变为更低的氧饱和度和更高的荧光性，从而增加荧光读取。我们预计：通过抑制是基化作用来稳定HIF的化合物可通过降低羟基化作用自身对氧的消耗和/或通过将细胞代谢由需氧产能转变厌氧产能来降低氧消耗。
在37℃，10％CO2下使源自腺病毒转化的胎儿肾上皮(293A)或子宫颈上皮腺癌(HeLa)(American Type Culture Collection,Manassas VA)的人类细胞在培养基(高葡萄糖DMEM(Mediatech，Inc.,Herndon VA)、1％青霉素(penicillin)/链霉素(streptomycin)混合物(Mediatech)、1％牛胎儿血清)中成长至汇合。收集细胞并在培养基中以500000细胞/ml的密度再悬浮。将细胞悬浮液以0.2ml/孔分布于氧生物传感器96孔细胞培养板(BDBiosciences,Bedford MA)的每一个孔中。将10μl体积的下列处理物添加至三组孔中：(1)0.5％DMSO；(2)200μM十二院基硫酸钠；或(3)1、10或50μM化合物。于37℃、10％CO2下培育培养物72小时并接着在FL600荧光流量表氟量表(Biotek Instruments,Inc.,Winooski VT)中，于485nm的激发波长和590nm的发射波长下读取培养板。以折叠改变的功能相对于DMSO控制(O2消耗)或在450nm波长下的吸收率(WST-1)将数据作图并使用EXCEL软件(MicrosoftCorporation)进行描述统计学分析。
HIF-PH2(PHD2)分析
物质
HIF-PH2(EGLN 1)自Hi5细胞表达并通过SP离子交换色谱柱部分纯化。酮戊二酸μ-[1-14C]-钠盐得自Perkin-Elmero。α-酮戊二酸钠盐购自SIGMA。HPLC纯化过的DLD 19肽(乙酰基-DLDLEMLAPYIPMDDDFQL-CONH2)由Synpep制得。
HIF-PH2(EGLN2)自昆虫Hi5细胞表达并通过SP离子交换色谱柱部分纯化。通过使用由Kivirikko和Myllyla 0982，<<方法酶学>>(Methods Enzymol)82:245-304)描述的分析捕获气O2来测定酶活性。分析反应含有50mM HEPES(pH 7.4)、100μMα-酮戊二酸钠盐、0.30μC i/ml酮戊二酸μ-[1-14C]-钠盐(Perkin Elmer,Wellesley MA)、40μM FeSO4、1mM抗坏血酸盐、1541.8单位/ml过氧化氢酶、具有或不具有50μM肽基质(乙酰基DLDLEMLAPYIPMDDDFQL-CONH2)和不同浓度的本发明的化合物。反应通过添加HIF-PH2酶开始。
通过从存在基质肽时的转换百分数中减去缺乏肽时的转换百分数来计算肽依赖性转换百分数。使用在给定抑制剂浓度下的肽依赖性转换百分数来计算抑制百分数和IC50。使用GraFit软件(Erithacus Software Ltd.,Surrey UK)计算每一种抑制剂的IC50值。
医药配方和投药途径
本发明的组合物可直接输送或连同此项技术中熟知的合适载剂或赋形剂在医药组合物中输送。现有的治疗方法可包含将有效量的本发明化合物投药给由于例如慢性肾衰竭、糖尿病、癌症、AIDS、放射疗法、化学疗法、肾透析或手术丽患有贫血或有贫血危险的受试者。在一个较佳的实施例中，受试者为哺乳动物受试者，并且在一个最佳的实施例中，受试者为人类受试者。
所述药剂的有效量可通过常规实验轻易地测定，同样最有效和最便利投药途径和最适合配方也可通过常规实验轻易地测定。在此项技术中可利用多种配方和药物输送系统。见例如上述Gennaro，A.R.编辑的1995年出版的《雷氏药学大全》。
合适的投药途径可包括，例如口服、经直肠、经粘膜、鼻或肠内投药和肠胃外输送，包括肌内、皮下、髓内注射以及胸内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。药剂或其组合物可用局部丽非全身的方式投予。例如，一种合适的药剂可经由注射或在一种靶向药物输送系统巾输送，所述革巴向药物输送系统为例如长效或持续释放配方。
本发明的医药组合物可由此项技术中所熟知的任何方法来制造，例如通过常规的混合、溶解、粒化、包衣、粉碎、乳化、封入胶囊、包封或冻干方法。如上所述，本发明的组合物可包括一种或一种以上的生理学可接受的载剂，例如便于将活性分子加工至医药用途的制剂中的赋形剂和助剂。
合适的配方取决于所选.的投药途径。例如对于注射，可在水溶液中调配所述组合物，较佳在生理学相容的缓冲液中调配。对于经粘膜或鼻投药，将适于渗透屏障的渗透剂用于配方中。所述渗透剂在此项技术中一般己知。在本发明的一个较佳实施例中，本发明的化合物在用以口服的配方中制备。对于口服，可通过将活性化合物和此项技术中熟知的医药上可接受的载剂组合来轻易调配所述化合物。所述载剂可将本发明的化合物调配为用于受试者口服摄取的片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、软膏、悬浮液等。所述化合物也可调配为直肠组合物，例如含有常规栓剂基剂(例如可可油或其它甘油田旨类)的栓剂或保留灌肠剂。
作为固态赋形剂，在必要时添加合适助剂之后，视情况研磨所得的混合物并加工颗粒混合物以获得片剂或糖衣丸的核心，可获得用于口服使用的医药制剂。合适的赋形剂特别为填充剂，例如槽，包括乳糖、黑糖、甘露醇或山梨糖醇:纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、水稻淀粉、土豆淀粉、明胶、黄曹胶、甲基纤维素、是丙基甲基纤维素、竣甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。必要时可添加崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或褐藻酸或其盐，例如褐藻酸钠。也包括润湿剂，例如十二烷基硫酸钠。
糖衣丸核心具有合适的包衣。为此可使用浓缩的糖溶液，其视情况含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡巴浦尔凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或色素可添加至片剂或糖衣丸包衣，用以识别或特征化活性化合物剂量的不同组合。
用于口服的医药制剂包括由明胶制得的推合式胶囊，以及由明胶和增塑剂(例如甘油或山梨糖醇)制得的软密封胶囊。推合式胶囊可含有与填充剂(例如乳糖)、粘合剂(例如淀粉)和/或润滑剂(例如滑石或硬脂酸馍)和视情况加入的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可溶解或悬浮于合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外，可添加稳定剂。所有口服配方的剂量应适于所述投药。
在一个实施例中，本发明的化合物可经皮给予(例如通过皮肤贴)或局部给予。在一个方面，本发明的经皮或局部配方可另外包含一种或多种渗透增强剂或其它效应物，包括增强所输送化合物迁移的药剂。例如在需要定位输送的情况下，优边的是经皮或局部投药。
对于吸入投药，根据本发明所使用的化合物可使用合适的推进剂从加压包装或喷雾器中以气雾剂喷雾的形式便利地输送，所述推进剂例如二氯二氟代甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或任何其它合适的气体。在加压气雾剂的情况下，适合的剂量单位可通过提供一个阀以输送计量的量来确定。可调配在吸入器或吹入器中使用的例如明胶的胶囊和药筒。这些胶囊和药筒通常含有化合物的粉末混合物和合适的粉末基质，例如乳糖或淀粉。
经过调配以用于通过注射，例如通过弹丸注射或持续输注来肠胃外投药的组合物可以单位剂量形式存在，例如和添加的防腐剂一起存在于安顿中或在多剂量容器中。所述组合物可采取如悬浮液、溶液或油或水媒剂中的乳液的形式，并可含有例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的调配剂。用于肠胃外投药的配方包括水溶液或其它水溶性形式的组合物。
活性化合物的悬浮液也可制备为适当的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒剂包括脂肪油类，例如芝麻油和合成脂肪酸酷类，例如油酸乙醋或甘油兰酸醋或脂质体类。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液粘性的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或右旋糖酐。所述悬浮液视情况也可含有合适的稳定剂或增加化合物溶解度的试剂用以制备高度浓缩的溶液。或者，活性成分可为粉末形式，用以在使用前与合适的媒剂，例如灭菌无热原水组合。
如上所述，也可将本发明的化合物调配为长效制剂。所述长期作用的配方可通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射来投予。因而，例如本发明的化合物可与合适的聚合或疏水性物质(例如在可接受油中呈乳液状)或离子交换树脂一起调配，或调配为微溶衍生物，例如微溶盐。
用于本发明的疏水性分子的合适载剂在此项技术中为我们所熟知并且包括共溶剂系统，其包含例如苯甲醇、一种非极性表面活性剂、一种可与水混溶的有机聚合物和水相。共溶剂系统可为VPD共溶剂系统。VPD是3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨酸酯80和65％w/v聚乙二醇300在无水乙醇中定容的溶液。VPD共溶剂系统(VPD:5W)由5％的葡萄糖水溶液1:1稀释的VPD组成。此共溶剂系统可有效溶解疏水性化合物并在全身给药时产生低毒性。共溶剂系统的比例自然可大大变化而不破坏其溶解度和毒性特征。此外，共溶剂组分本身可变化。例如，可使用其它低毒性非极性表面活性剂来代替聚山梨酸酯80；聚乙二醇的片段大小可变化；其它生物相容聚合物可代替聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮；且其它糖类或多糖类可取代葡萄糖。
或者，可使用其它用于疏水性分子的输送系统。脂质体和乳液是用于疏水性药物的输送媒剂或载剂的熟知实例。在以上关于基因输送系统的内容中讨论了脂质体输送系统。尽管常以更大的毒性为代价，但也可使用某些有机溶剂，例如二甲亚砜。另外，可使用持续释放系统来输送所述化合物，例如含有有效量待投予组合物的固体疏水性聚合物的半渗透基质。己确定多种持续释放物质并可为所属领域的技术人员所利用。取决于其化学特性，持续释放胶囊可释放化合物几周直至100天以上。取决于治疗剂的化学特性和生物学稳定性，可使用对于蛋白稳定性的其它策略。
对于任何用于本治疗方法的组合物，最初可使用多种此项技术中熟知的技术估计治疗有效剂量。例如，在细胞培养分析中，可在动物模型中设计剂量以达到循环浓度范围，其包括在细胞培养中所测定的IC50。适于人类受试者的剂量范围可例如使用从细胞培养和其它动物研究中获得的数据来确定。
一种药剂的治疗有效剂量指导致症状改善或受试者存活时间延长的药剂量。所述分子的毒性和治疗效力可在细胞培养中或实验动物中通过标准医药程序来测定，例如通过测定LD50(总体的50％的致死剂量)和ED50(总体的50％的治疗有效剂量)。毒性效果对治疗效果的剂量比是治疗指数，其可表达为LD50/ED50比。
剂量较佳处于包括ED50并具有很少毒性或无毒性的循环浓度范围内。取决于所使用的剂量形式和所利用的投药途径，剂量可在此范围内变化。考虑到受试者病况的详细情况，应根据此项技术中己知的方法选择确切的配方、投药途径和剂量。
可个别调整剂量和间隔用以提供足以按所需调节内源性促红细胞生成素血浆含量的活性部分的血浆含量，即最小有效浓度(MEC)。对于每一化合物，MEC可变化但可从例如体外数据来估计。达到MEC所必需的剂量取决于个体特征和投药途径。药剂或其组合物应使用在约10-90％的治疗持续时间、较佳约30-90％的治疗持续时间且最佳50-90％之间的治疗持续时间内可维持血浆含量在MEC以上的方案来投予。在局部投药或选择性吸收的情况下，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。或者，剌激内源性促红细胞生成素可通过以下步骤达到:1)投予负荷剂量，继而投予维持剂量，2)投予诱导剂量以在目标范围内迅速达到促红细胞生成素含量，继而投予较低的维持剂量以在所需的目标范围内维持血细胞比容，或3)重复间断性给药。
毫无疑问，所投予的药剂或组合物的量取决于多种因素，包括正在治疗的受试者的性别、年龄和体重、痛苦的严重性、投药方式和处方医师的判断。
必要时，本发明的组合物可存在于含有活性成分的一个或多个单位剂量形式的包装或分配器设备中。例如，所述包装或设备可包含金属或塑料筒，例如泡罩包装。所述包装或分配器设备可附有投药指示。也可制备包含调配于相容的医药载体中的本发明化合物的组合物，将其置于适当的容器中并贴上标签用以治疗所指示的病况。标签上所指示的合适病况可包括贫血为主要迹象的病况、病症或疾病的治疗。
鉴于本文的揭示内容，本发明的这些和其它实施例对所属领域的技术人员而言将容易了解并且是可以预期的。

Claims (10)

1.一种由下式表示的化合物：
Figure FDA0003765325440000011
其中
R1选自下列芳环以及芳杂环取代基：噻吩、吡啶、苯；以及
R2选自下列各基团组成的群组：羧基、四氮唑、异羟肟酸、3-羟基异恶唑、3-羟基-4H-吡喃-4-酮、2-巯基苯酚；
或其医药上可接收的盐；
并且，当R1是苯时，R2不是羧基；当R2是羧基时，R1不是苯。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是苯基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中R1是芳杂环，具体为噻吩或吡啶。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中R2是羧基或四氮唑或其医药上可接受的盐。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中R2是异羟肟酸或3-羟基异恶唑或其医药上可接受的盐。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中R2是3-羟基-4H-吡喃-4-酮或2-巯基苯酚或其医药上可接受的盐。
7.一种医药组合物，其包含根据权利要求1～6任一所述的化合物和医药上可接受的载剂或赋形剂。
8.权利要求1～6任一所述的化合物用于制备用于治疗、预防或预先治疗至少部分由低氧诱导因子和/或促红细胞生成素调节的病况的药物的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其中所述的病况选自由以下病症组成的群组：贫血病症、神经学病症和/或损伤；周围血管病症、溃疡、烧伤和慢性伤口；肺栓塞；和缺血-再灌注损伤。
10.权利要求1～6任一所述的化合物用于制备用于抑制调节低氧诱导因子α亚单位的羟化酶活性的药物的用途。
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