CN107365717A - 一种光合细菌的制备方法 - Google Patents

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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate

Abstract

本发明提供一种光合细菌的制备方法，涉及一种污水处理微生物制剂技术领域。该发明包括以下步骤：沼泽红假单胞菌生产培养基；一级菌种制备；二级菌种制备；三级菌种制备；沼泽红假单胞菌制剂生产；沼泽红假单胞菌包埋固定。本发明采用了海藻酸钠包埋法固定化光合细菌，克服了光合细菌与水溶液难分离易造成菌体的流失的缺点，还能够使处理系统维持相对稳定的细菌数量提高处理负荷，能够明显提高光合细菌去除城市污水中氮磷的效果固定化光合细菌对城市污水中的氮磷营养物质有着较好的处理效果。

Description

一种光合细菌的制备方法
技术领域
本发明涉及一种污水处理微生物制剂技术领域，特别是涉及一种光合细菌的制备方法。
背景技术
光合细菌，是一类以光作为能源的原核微生物，能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用，广泛存在于水田、湖泊、江河、海洋、活性污泥及土壤中。
光合细菌均为革兰氏阴性菌，不形成芽孢，细胞形态多样，有球状、杆状、半环状、螺旋状，还有突柄状，有单细胞亦有多细胞者，除去可变细菌属，之外都以极生鞭毛运动，光合细菌在自然界的碳、氮、硫循环中发挥着重要作用。因而，在不同的自然环境下，表现出不同的生理功能，如固氮、固碳、脱氢、硫化物氧化等。
光合细菌的细胞中存在特殊的结构，诸如PHB、糖原等，使得菌体能够利用低浓度的有机酸、氨、硫化物等作为供氢体和碳源，达到去除水中有机污染物的目的。另外，光合细菌还能吸收重金属，对含重金属的水域或土壤均有很强的修复能力。
传统的微生物治理修复技术是利用特定的优势菌种降解废水中的污染物质，但该技术存在菌种易流失、微生物密度低、抗负荷冲击力度差、反应启动慢等缺点。微生物固定化技术利用物理或者化学的方法将游离的活性微生物固定于有限的空间载体上，凭借微生物的活性和自身新陈代谢功能将环境介质中的污染物吸附和降解去除，提高了微生物菌种的生物密度、生化启动快、耐毒性和适应性强、固液分离容易。
发明内容
针对上述问题中存在的不足之处，本发明提供一种光合细菌的制备方法，使其采用了海藻酸钠包埋法固定化光合细菌，克服了光合细菌与水溶液难分离易造成菌体的流失的缺点，还能够使处理系统维持相对稳定的细菌数量提高处理负荷，能够明显提高光合细菌去除城市污水中氮磷的效果固定化光合细菌对城市污水中的氮磷营养物质有着较好的处理效果。
为了解决上述问题，本发明提供一种光合细菌的制备方法，其中，包括以下步骤：
S10、沼泽红假单胞菌生产培养基；
S20、一级菌种制备；
S30、二级菌种制备；
S40、三级菌种制备；
S50、沼泽红假单胞菌制剂生产；
S60、沼泽红假单胞菌包埋固定。
优选的，在所述步骤S20中，还包括以下步骤：
S201、将配制好的培养基装入到三角瓶中，瓶口采用8层纱布和封口膜包扎，121℃下灭菌20min；
S202、灭菌后，按照5％的接种量接种沼泽红假单胞菌液体菌种，置于恒温水浴振荡器中，光照采用白炽灯照射，光强为2000lux，培养60小时；
优选的，在所述步骤S30中，还包括以下步骤：
S301、将配制好的培养基装入到三角瓶中，瓶口采用8层纱布和封口膜包扎，121℃下灭菌20min；
S302、灭菌后，按照10％的接种量接种一级菌种，置于多层液体菌种摇床中，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养48小时；
优选的，在所述步骤S40中，还包括以下步骤：
S401、将配制好的培养基装入玻璃瓶中，瓶口采用8层纱布包扎；
S402、按照10％的接种量接种二级菌种，温度30℃，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养48小时；
优选的，在所述步骤S50中，还包括以下步骤：
S501、将配制好的培养基装入透明的广口塑料桶中，瓶口采用8层纱布包扎；
S502、按照20％的接种量接种三级菌种，温度30℃，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养48小时；
优选的，在所述步骤S60中，还包括以下步骤：
S601、配置3％的海藻酸钠溶液，加热彻底溶解，冷却至40℃后，取等量的海藻酸钠溶液与等量的湿菌体混合搅匀；
S602、在搅匀的混合液上方滴入搅拌下的2％氯化钙溶液，海藻酸钠与Ca2+离子交联而成球，在4℃冰箱中固化交联24h后即得海藻酸钠固定化小球。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明所述的光合细菌培养基具有价格低廉、培养效果好等特点；采用了海藻酸钠包埋法固定化光合细菌，克服了光合细菌与水溶液难分离易造成菌体的流失的缺点，还能够使处理系统维持相对稳定的细菌数量提高处理负荷，能够明显提高光合细菌去除城市污水中氮磷的效果固定化光合细菌对城市污水中的氮磷营养物质有着较好的处理效果，海藻酸钠包埋法固定光合细菌，操作简单，结合好，可以长期反复使用。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合实例对本发明作进一步详细说明，但所举实例不作为对本发明的限定。
本发明的实施例包括以下步骤：
S10、沼泽红假单胞菌生产培养基；
沼泽红假单胞菌生产培养基中包含的成分如下：乙酸钠(3.0g/L)、硫酸镁(0.12g/L)、氯化铵(1g/L)、氯化钙(0.075g/L)、磷酸二氢钾(0.5g/L)、磷酸氢二钾(0.3g/L)、Na2EDTA(0.020g/L)、酵母膏(100mg/L)，微量元素：Fe3+(0.0025mol/L)，Mn2+(0.009mol/L)，Zn2+(0.0033mol/L)，Co2+(0.0024mol/L)，Cu2+(0.0024mol/L)，pH＝7.5。
S20、一级菌种制备；
将配制好的培养基装入到500ml三角瓶中，每瓶装入300ml，瓶口采用8层纱布和封口膜包扎，121℃下灭菌20min，灭菌后，按照5％的接种量接种本研究所保存的沼泽红假单胞菌液体菌种，置于恒温水浴振荡器中，30℃，120r/min，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养60h，即为一级菌种。
S30、二级菌种制备；
将配制好的培养基装入到500ml三角瓶中，每瓶装入300ml，瓶口采用8层纱布和封口膜包扎，121℃下灭菌20min，灭菌后，按照10％的接种量接种一级菌种，置于本研究所自制的多层液体菌种摇床中，30℃，120r/min，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养48h，即为二级菌种。
S40、三级菌种制备；
将配制好的培养基装入到容积为5L的玻璃瓶中，每瓶装入3L，瓶口采用8层纱布包扎，按照10％的接种量接种二级菌种，30℃，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养48h，即为三级菌种。
S50、沼泽红假单胞菌制剂生产；
将配制好的培养基装入到容积为25L的透明的广口塑料桶中，每桶装入20L，瓶口采用8层纱布包扎，按照20％的接种量接种三级菌种，30℃，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养48h，即为沼泽红假单胞菌制剂。
S60、沼泽红假单胞菌包埋固定；
配置3％的海藻酸钠溶液，加热彻底溶解，冷却至40℃后，取25L海藻酸钠溶液与25L湿菌体混合，搅匀，在混合后溶液上方20cm的高处滴入搅拌下的2％氯化钙溶液，海藻酸钠与Ca2+离子交联而成球，于4℃冰箱中固化交联24h即得海藻酸钠固定化小球。
本实施例中，所用的光合细菌为从养猪场粪便处理池中分离获得，为沼泽红假单胞菌。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (6)

1.一种光合细菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S10、沼泽红假单胞菌生产培养基；
S20、一级菌种制备；
S30、二级菌种制备；
S40、三级菌种制备；
S50、沼泽红假单胞菌制剂生产；
S60、沼泽红假单胞菌包埋固定。
2.如权利要求1所述的光合细菌的制备方法，其特征在于，在所述步骤S20中，还包括以下步骤：
S201、将配制好的培养基装入到三角瓶中，瓶口采用8层纱布和封口膜包扎，121℃下灭菌20min；
S202、灭菌后，按照5％的接种量接种沼泽红假单胞菌液体菌种，置于恒温水浴振荡器中，光照采用白炽灯照射，光强为2000lux，培养60小时。
3.如权利要求1所述的光合细菌的制备方法，其特征在于，在所述步骤S30中，还包括以下步骤：
S301、将配制好的培养基装入到三角瓶中，瓶口采用8层纱布和封口膜包扎，121℃下灭菌20min；
S302、灭菌后，按照10％的接种量接种一级菌种，置于多层液体菌种摇床中，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养48小时。
4.如权利要求1所述的光合细菌的制备方法，其特征在于，在所述步骤S40中，还包括以下步骤：
S401、将配制好的培养基装入玻璃瓶中，瓶口采用8层纱布包扎；
S402、按照10％的接种量接种二级菌种，温度30℃，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养48小时。
5.如权利要求1所述的光合细菌的制备方法，其特征在于，在所述 步骤S50中，还包括以下步骤：
S501、将配制好的培养基装入透明的广口塑料桶中，瓶口采用8层纱布包扎；
S502、按照20％的接种量接种三级菌种，温度30℃，光照采用白炽灯照射，光强＝2000lux，培养48小时。
6.如权利要求1所述的光合细菌的制备方法，其特征在于，在所述步骤S60中，还包括以下步骤：
S601、配置3％的海藻酸钠溶液，加热彻底溶解，冷却至40℃后，取等量的海藻酸钠溶液与等量的湿菌体混合搅匀；
S602、在搅匀的混合液上方滴入搅拌下的2％氯化钙溶液，海藻酸钠与Ca2+离子交联而成球，在4℃冰箱中固化交联24h后即得海藻酸钠固定化小球。
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