CN101665783A - 一种基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌降解十四烷烃降解剂的制备方法。本发明通过配制常规的无机盐培养基对威尼斯不动杆菌进行扩大培养,利用甘蔗渣为固定化载体,制备出能够高效降解废水废液中十四烷烃降解剂。其过程是:对甘蔗渣进行洗净烘干后、粉碎、过筛、高压灭菌预处理;在无机盐培养基中接入威尼斯不动杆菌和甘蔗渣末,搅拌混匀,进行液体摇床震荡初培养,初培养6小时~12小时后,再加入甘蔗渣末,拌匀再培养;将培养物装填于双层纱布网袋中,扎口后吊挂于需要降解的废水中。采用本方法,对50.0mg/L十四烷的降解率可达89%,对相同浓度十四烷的降解率保持在96-98%,且柴油中烷烃的降解同样具有极好的效果。
Description
技术领域
本发明涉及废水治理技术,具体说涉及一种基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)降解废水中十四烷烃降解剂的制备方法。
技术背景
随着社会经济的高速发展及人们生活水平的不断提高,生产与生活污水的排放量急剧增加,全球性水体污染日趋严重,威胁着社会经济乃至人类自身的可持续发展。在废水的各种方法中,生物法因具有成本低,占地少,不会带来二次污染等优点,而倍受青睐。虽然传统的生物法与其他处理方法相比具有独特的优越性,但是在传统的废水处理工艺中,微生物一般是以悬浮态在水中生长,生物量低,易于从反应器中流失,而且从流出的废水中回收微生物重复利用较为困难。此外易被原生动物捕食,受到菌种间的竞争等环境因素的影响,使其降解效率难以保持长久。威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)属于海洋微生物,革兰阴性,球杆菌,无鞭毛,不产芽孢,接触酶阳性,氧化酶阴性,专性需氧;不产生聚-B-羟基丁酸盐细胞内含物降解烷烃,是一种专门降解十四烷烃的微生物。目前,中国海洋微生物菌种保藏管理中心保藏有该菌种,公众可通过该中心获取。
固定化微生物技术及其在水处理领域的应用逐渐成为国内外研究者的热点之一。与传统的废水生物处理技术相比,固定化微生物技术处理废水时可较大幅度地提高生物量,具有反应启动快、处理效率高、操作稳定、产污泥量少、固液分离容易、能纯化和保持优势菌群,以及基建占地少等优点而倍受关注。固定化被定义为固定的生物催化剂、酶制剂、微生物和细胞器以不溶性固体支持。固定化还可以防止细胞的机械或化学损伤。微生物经固定化后能长期保持活性,固定化细胞颗粒的微环境有利于屏蔽土著菌、噬菌体和毒性物质对微生物体的恶性竞争、吞噬和毒害,使其在复杂环境中也可稳定地发挥高效能。微生物的固定化方法,目前在国内外尚无一个统一的分类标准。固定化方法多种多样,但主要的有表面吸附(结合)固定技术、交联(键联)固定化、包埋(多聚体)固定化和自身固定化(微生物细胞间自交联固定化)等几种方法。其中,植物载体具有吸附性能较好、来源广泛、价格低廉的特点,在菌的固定化技术的研究及利用其进行废水处理的实际应用方面,具有潜在的价值和重要的意义,引起人们的关注。威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)属于海洋微生物,革兰阴性,球杆菌,无鞭毛,不产芽孢,接触酶阳性,氧化酶阴性,专性需氧;不产生聚-B-羟基丁酸盐细胞内含物降解烷烃,是一种专门降解十四烷烃的微生物。目前,中国海洋微生物菌种保藏管理中心保藏有该菌种,公众可通过该中心获取。
甘蔗渣作为制糖工业的主要副产品,是榨糖后所剩的主要部分,属于农业固体废弃物中的一种,在我国不仅数量巨大而且资源非常集中。据报道,2005全世界甘蔗渣的产出量约为2970万吨,中国的产出量为2040万吨。甘蔗渣具有多种用途,用其生产的高密度复合材料甚至适用于建筑、船舶、车厢、包装箱等制作行业。由于蔗渣比重小,纤维质量好、吸附性能强,是一种能高效降解烷烃类物质的菌威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)进行固定化的良好载体。
发明内容
本发明的目的就是要通过对威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)的扩大培养,利用甘蔗渣为固定化载体,制备出能够高效降解废水废液中十四烷烃降解剂。
为实现本发明目的采用的技术方案是:
1、配制常规的无机盐培养基(pH值为7.0):
K2HPO4 1g
KH2PO4 1g
NH4NO3 1g
MgSO4 0.3g
CaCl2 0.03g
FeSO4 0.005g
ZnSO4 0.002g
MnSO4 0.0002g
蒸馏水 500mL
按照上述配方配制后的培养基,经高压灭菌后备用。
2、甘蔗渣的预处理
将甘蔗渣用自来水洗净,在60℃下烘干后,用粉碎机粉碎,过筛,取目数为40~60目甘蔗渣末,121℃高压灭菌备用。
3、降解剂的制备
取预制备的培养基,接入培养基体积5%的威尼斯不动杆菌(Acinetobactervenetianus),和培养基体积15%~30%的甘蔗渣末,搅拌混匀,移入35℃无菌室内进行液体摇床震荡初培养,摇床摇速150r/min。培养6小时~12小时后,保持温度不变,再加入培养基体积10%~25%的甘蔗渣,拌匀,形成半干湿状进行再培养,培养时间3小时~6小时,即制成基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂。
4、装袋吊挂
将制备的威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂装填于双层纱布网袋中,扎口后吊挂于需要降解的废水中。4天后取回倒出晒干焚烧,也可采用高压灭菌方式重复使用。
采用本发明所述的方法,在培养8小时后对50.0mg/L十四烷的降解率可达89%,且甘蔗渣末重复利用后固定化菌体更加稳定,对相同浓度十四烷的降解率保持在96-98%。且本发明制备的固定化菌体对不同浓度柴油中烷烃的降解同样具有记号的效果。
具体实施方式
实施例1
1、分别取下属配方中的组分,按照配制常规的配制方法,配制出pH值为7.0的无机盐培养基:
K2HPO4 10g
KH2PO4 10g
NH4NO3 10g
MgSO4 3g
CaCl2 0.3g
FeSO4 0.05g
ZnSO4 0.02g
MnSO4 0.002g
蒸馏水 5000mL
按照上述配方配制后的培养基,经高压灭菌后备用。
2、甘蔗渣的预处理
将1kg的甘蔗渣用自来水洗净,在60℃下烘干后,用粉碎机粉碎,过筛,取目数为40~60目甘蔗渣末,利用DSX-28013型不锈钢手提式灭菌器(上海申溢医疗器械厂),经121℃高压灭菌后备用。
3、降解剂的制备
取预制备的培养基1000ml,置于SPX-250B-Z生化培养箱内(上海博迅实业有限公司医疗设备厂),接入50ml威尼斯不动杆菌的菌液(Acinetobacter venetianus),以及培养基体积150g的40~60目的甘蔗渣末,搅拌混匀,控制温度在35℃,进行液体摇床震荡培养,摇床摇速150r/min。培养6小时后,保持温度不变,再加入250g的40~60目的甘蔗渣,拌匀,形成半干湿状进行静止培养,培养时间6小时,即制成基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂。
4、装袋吊挂
将制备的威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂装填于双层纱布网袋中,扎口后吊挂于浓度为50mg.L-1的十四烷的模拟废水中。2天后取出纱布网袋。十四烷的模拟废水,测定十四烷的浓度,结果表明,十四烷的浓度为4.6mg.L-1,降解率为90.8mg.L-1。
实施例2
步骤1、2与实施例1相同
3、降解剂的制备
取预制备的培养基1000ml,置于SPX-250B-Z生化培养箱内(上海博迅实业有限公司医疗设备厂),接入50ml威尼斯不动杆菌的菌液(Acinetobacter venetianus),以及培养基体积200g的40~60目的甘蔗渣末,搅拌混匀,控制温度在35℃,进行液体摇床震荡培养,摇床摇速150r/min。培养8小时后,保持温度不变,再加入150g的40~60目的甘蔗渣,拌匀,形成半干湿状进行静止培养,培养时间8小时,即制成基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂。
4、装袋吊挂
将制备的威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂装填于双层纱布网袋中,扎口后吊挂于浓度为35mg.L-1的十四烷的模拟废水中。2天后取出纱布网袋。十四烷的模拟废水,测定十四烷的浓度,结果表明,十四烷的浓度为3.7mg.L-1,降解率为89.4mg.L-1。
Claims (4)
1、一种基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂的方法,通过配制常规的无机盐培养基对威尼斯不动杆菌进行扩大培养,利用甘蔗渣为固定化载体,制备出能够高效降解废水废液中十四烷烃降解剂,其特征是:
1)对甘蔗渣进行洗净烘干后、粉碎、过筛、121℃高压灭菌预处理;
2)在无机盐培养基中接入威尼斯不动杆菌,和培养基体积分数15%~30%的甘蔗渣末,搅拌混匀,移入35℃无菌室内进行液体摇床震荡初培养,摇床摇速150r/min,初培养6小时~12小时;
3)保持温度不变,再加入甘蔗渣末,拌匀,形成半干湿状进行再培养;
4)将步骤3)的培养物装填于双层纱布网袋中,扎口后吊挂于需要降解的废水中。
2、根据权利要求1所述的基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂的方法,其特征是所述的除培养时接入威尼斯不动杆菌的量为培养基体积分数5%。
3、根据权利要求1所述的基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂的方法,其特征是所述的初培养时加入的甘蔗渣末是培养基体积分数15%~30%。
4、根据权利要求1所述的基于甘蔗渣为固定化载体的半固体发酵法制备威尼斯不动杆菌十四烷烃降解剂的方法,其特征是所述的再培养时加入的甘蔗渣末是培养基体积分数10%~25%,再培养时间3小时~6小时。
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