CN107362351A - Il‑36r的拮抗剂在制备镇痛药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及IL‑36R的拮抗剂在制备镇痛药物中的应用。本发明发现鞘内给予IL‑36R的拮抗剂能显著缓解炎性痛与神经痛小鼠的痛行为，包括机械性痛觉超敏和热痛觉过敏，起效快，缓解幅度大，维持时间长，因此IL‑36R的拮抗剂可作为药物有效成分，进一步制备镇痛药物，用于临床治疗疼痛，尤其是治疗炎性痛与神经痛。

Description

IL-36R的拮抗剂在制备镇痛药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及IL-36R的拮抗剂在制备镇痛药物中的应用。

背景技术

现代医学所谓的疼痛(pain)，是一种复杂的生理心理活动，它包括伤害性刺激作用于机体所引起的痛感觉，以及机体对伤害性刺激的痛反应(躯体运动性反应和/或内脏植物性反应，常伴随有强烈的情绪色彩)。

根据疼痛的持续时间以及损伤组织的可能愈合时间可以将疼痛分为急性疼痛和慢性疼痛。急性疼痛相对通用的定义为：与组织损伤、炎症或疾病过程相关的，持续的时间较短(通常短于3个月)的一种疼痛类型。如蜜蜂的蜇痛、刀刃的刺痛、分娩的产痛等。与急性疼痛相对应，慢性疼痛被定义为组织损伤痊愈后依然持续存在的、或者持续时间超过3～6个月的一种疼痛类型。如癌性疼痛、纤维肌痛、带状疱疹后遗神经痛等。基于疼痛产生的部位不同可将疼痛分为躯体痛、内脏痛和非特异性疼痛3种类型。躯体痛和内脏痛不仅产生的部位不同，产生的机制也不尽相同，因此治疗也有很大的差异，躯体痛是由体表(皮肤组织)或深部组织(骨骼肌肉组织)的痛觉感受器受到各种伤害性刺激所引起，前者又称为浅表躯体痛，后者称为深部躯体痛。躯体痛的常见原因有术后切口痛、肿瘤骨转移等。内脏痛是由于渗透、压迫、牵拉，或扭转胸、腹、盆腔脏器导致这些部位的痛觉感受器活化而引起的疼痛，常见原因包括肠梗阻、盆腔炎等。除躯体痛和内脏痛外，其他所有原因不明的疼痛皆可划归为非特异性疼痛，这种疼痛的产生与心理、社会因素的关系密切，随着现代社会生活节奏的加快，工作压力的增加，这种病例亦相应增多，其主诉症状明显但却常无阳性体征，多见于抑郁症或焦虑症患者。从疼痛产生的病理生理过程来看，疼痛可分为伤害性疼痛和神经病理性疼痛。伤害性疼痛是对组织损伤产生的一种病理生理过程，组织损伤产生的各种介质如H+、前列腺素、缓激肽、5-羟色胺、腺苷等，刺激感觉神经末梢，使各种末梢感受器敏化，导致沿着神经纤维传导各种痛信号，引起痛感觉。神经病理性疼痛与伤害性疼痛不同的是，神经病理性疼痛通常没有组织损伤，往往是中枢或外周神经系统神经损伤或损伤后功能紊乱引起的疼痛。如带状疱疹愈合后神经系统功能紊乱的存在，导致后遗神经痛的迁延不愈，脑卒中后导致中枢性疼痛的出现。与伤害性疼痛不同的是，神经病理性疼痛的治疗较之前者的治疗要困难得多，预后也不尽如人意。

疼痛是一个重要的临床问题，严重影响患者的生活质量。长期疼痛严重影响患者的生理与心理健康，还可以引起失眠、焦虑、抑郁等情绪障碍，降低患者的生活质量。因此，镇痛药物的研发一直是临床的迫切需求。现有的镇痛药物如非甾体类消炎镇痛药(NSAIDs)、阿片类药物虽然止痛作用显著，但使用它们的同时往往伴随很多副作用，很大程度上限制了其在镇痛方面的应用。

IL-36R，也称为IL-1受体相关蛋白2[IL-1receptor(IL-1R)-related protein2，IL-1Rrp2]，是IL-1受体家族的一员。其配体为在2000年模拟研究中被首次发现的IL-36α(IL-1F6)、IL-36β(IL-1F8)及IL-36γ(IL-1F9)。IL-36R的受体拮抗剂为IL-36Ra，IL-36Ra可以结合IL-36R，抑制IL-36R的下游信号通路及生理病理作用。

专利文献CN101589060A，公开日2009.11.25，公开了一种IL-31的拮抗剂用于在神经组织中通过抑制、防止、降低、最小化、限制或最小化刺激来治疗炎症和疼痛的用途，此类拮抗剂包括抗体和其片段、衍生物或变体，与神经病相关的疼痛、刺痛、敏感化、酥痒等症状可被改善。专利文献CN106661105A，公开日2017.05.10，公开了用IL-20拮抗剂减轻患有或易患炎性疼痛的对象的炎性疼痛，该拮抗剂可以是阻断由IL-20介导的信号转导通路的抗体，这些抗体包括特异性阻断IL-20信号转导通路的抗IL-20抗体和抗IL-20R抗体。

然而，目前还未见IL-36R的拮抗剂在镇痛中的相关报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种IL-36R的拮抗剂的新用途。

第一方面，本发明提供了IL-36R的拮抗剂在制备镇痛药物中的应用。

作为一种具体实施方式，所述的IL-36R的拮抗剂是蛋白或多肽片段。

更进一步地，所述的IL-36R的拮抗剂是IL-36Ra。

作为一种具体实施方式，所述的镇痛是针对炎性痛。

作为另一种具体实施方式，所述的镇痛是针对神经痛。

更进一步地，所述的神经痛是周围神经痛。

第二方面，本发明提供了IL-36R的拮抗剂在制备降低炎性痛患者机械性痛觉超敏或热痛觉过敏的药物中的应用。

第三方面，本发明提供了IL-36R的拮抗剂在制备降低神经痛患者机械性痛觉超敏或热痛觉过敏的药物中的应用。

第四方面，本发明提供了一种具有镇痛作用的药物组合物，所述的药物组合物包含IL-36R的拮抗剂，和药学上可接受的载体。

作为一种具体实施方式，所述的IL-36R的拮抗剂是蛋白或多肽片段。

更进一步地，所述的IL-36R的拮抗剂是IL-36Ra。

本文中，所述的“IL-36R的拮抗剂”是指阻断、抑制或降低IL-36R生物活性的分子，其中包括由IL-36R信号转导(例如受体结合和/或激发对IL-36R的细胞应答反应)介导的下游通路。例如，IL-36R拮抗剂包括但不限于：结合于IL-36R并抑制IL-36R介导的信号转导通路的蛋白或多肽片段、针对IL-36R的反义核酸(包括针对编码IL-36R的核酸的反义核酸)、针对IL-36R核酸的小干扰RNA(siRNA)、针对IL-36R核酸的微小RNA(microRNA)、IL-36R抑制性化合物。在本发明的具体实施方式中，IL-36R拮抗剂为一蛋白或多肽片段，其结合于IL-36R并抑制IL-36R的激活，从而抑制IL-36R信号转导通路。

所述的“炎性痛”与免疫细胞浸润引起的组织损伤有关。炎性疼痛包括但不限于：急性炎症或慢性炎症引起的肌肉疼痛，急性炎症或慢性炎症引起的缺血性疼痛，与关节炎相关的炎性疼痛。在本发明的具体实施方式中，所述的“炎性痛”更指代急性炎症或慢性炎症引起的肌肉疼痛，或急性炎症或慢性炎症引起的缺血性疼痛。

所述的“神经痛”指没有组织损伤，由中枢或外周神经系统神经损伤或损伤后功能紊乱引起的疼痛，所述的“周围神经痛”即指没有组织损伤，外周神经系统神经损伤或损伤后功能紊乱引起的疼痛。

所述的“痛觉超敏”或“痛觉过敏”指对于痛觉的感受高于正常值，非伤害性刺激(如机械性刺激)或很小的伤害性刺激(如热辐射刺激)也会产生很强烈的疼痛感。

所述的“药物组合物”包含作为活性成分的IL-36R的拮抗剂，以及药学上可接受的载体。“可接受的”是指载体必须与组合物的活性组分相容(优选地，能够稳定活性组分)并对于待治疗的对象无害。该药物组合物可被制成单位剂型，如片剂、丸剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、溶液或悬浮液、或栓剂，用于口服，肠胃外或直肠给药，或通过吸入或吹入施用。

本发明优点在于：

1、本发明发现鞘内给予IL-36R的拮抗剂能显著缓解炎性痛与神经痛小鼠的痛行为，包括机械性痛觉超敏和热痛觉过敏，表明IL-36R的拮抗剂可作为药物有效成分，进一步制备镇痛药物，用于临床治疗疼痛，尤其是治疗炎性痛与神经痛。

2、本发明证实IL-36Ra对炎性痛与神经痛小鼠疼痛的缓解作用均十分显著，起效快，缓解幅度大，维持时间长。

附图说明

图1.炎性痛小鼠模型建立，*P<0.05，与对照组比较。

图2.神经痛小鼠模型建立，*P<0.05，与假手术组比较。

图3.不同剂量IL-36Ra对炎性痛小鼠机械性痛觉超敏和热痛觉过敏的作用，*P<0.05，与模型+PBS组比较。

图4.IL-36Ra对神经痛小鼠机械性痛觉超敏和热痛觉过敏的作用，*P<0.05，与模型+PBS组比较。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1

一、实验材料：IL-36R拮抗剂IL-36Ra购自R&D公司(Recombinant Mouse IL-36Ra/IL-1F5Protein,2714-ML-025/CF)。

二、实验动物：SPF级BALB/C小鼠，雄性，8周，16-20g(斯莱克实验动物中心)。随机分组。

三、实验方法：

1、制作模型

1)小鼠足底注射CFA炎性痛模型(CFA模型)：固定小鼠右下肢，采用微量注射器注射30μl CFA至足底正中部，对照组足底注射同体积生理盐水。

2)小鼠坐骨神经慢性压迫性损伤神经痛模型(CCI模型)：小鼠腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后，于小鼠右后肢上缘切开皮肤，纵行分离肌肉，暴露坐骨神经主干，用线适度结扎坐骨神经。将肌肉、皮肤逐层缝合，然后腹腔注射抗生素作抗菌预防。假手术组动物除不进行神经结扎外，其余操作均与手术组相同。

2、痛行为评价

1)机械性痛觉超敏(mechanical allodynia)：根据Dixon介绍的up-and-down法，采用von Frey细丝(Stoelting,Wood Dale,Illinois,USA)刺激引起的缩脚反应作为机械性痛觉超敏指标。

2)热痛觉过敏(thermal hyperalgesia)：安静环境中，室温22±1℃，将小鼠置于底为玻璃平板的测试格内，适应30分钟。采用辐射热仪照射小鼠足底皮肤，记录其缩爪潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)，也就是从照射开始至出现抬脚或舔后爪的时间，作为热痛觉过敏指标。

3、给药方法

在炎性痛、神经痛小鼠造模后第7天鞘内给予IL-36Ra，观察给药后1，2，3，5，7，9，12h小鼠痛行为的变化。

4、统计方法

实验数据以均数±标准误(mean±SE)表示，应用SPSS16.0软件进行统计，采用单因素方差分析(one way ANOVA)。以P<0.05认为差异有显著性。

四、实验结果：

1)炎性痛小鼠模型建立：小鼠足底注射CFA后第1天即出现显著的机械性痛觉超敏和热痛觉过敏，并可以持续到第7天观察结束，而对照组痛行为没有显著变化(如图1所示)；

2)神经痛小鼠模型建立：小鼠坐骨神经结扎后第1天即出现显著的机械性痛觉超敏和热痛觉过敏，并可以持续到第7天观察结束，而假手术组痛行为没有显著变化(如图2所示)；

3)IL-36Ra对炎性痛小鼠的镇痛作用：在造模后第7天鞘内注射IL-36Ra 50ng，100ng，200ng，结果显示，200ng给药后1小时，小鼠的机械性痛阈与热痛阈均显著上升，该作用于3小时达高峰，5小时时仍有镇痛效果，第7小时作用消失；而100ng的IL-36Ra给药后2-5小时也呈现一定的镇痛作用；IL-36Ra呈现剂量依赖性镇痛作用(如图3所示)；

4)IL-36Ra对神经痛小鼠的镇痛作用：在造模后第7天鞘内注射IL-36Ra 200ng。结果显示，200ng的IL-36Ra给药后2小时，小鼠的机械性痛阈与热痛阈均显著上升，该作用于5小时达高峰，7小时时仍有镇痛效果，第9小时作用消失(如图4所示)。

实验结果表明，鞘内给予IL-36Ra能显著缓解炎性痛与神经痛小鼠的痛行为。本发明的IL-36Ra可作为药物有效成分，进一步制备镇痛药物，用于临床治疗疼痛，尤其是治疗炎性痛与神经痛。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.IL-36R的拮抗剂在制备镇痛药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的IL-36R的拮抗剂是蛋白或多肽片段。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的IL-36R的拮抗剂是IL-36Ra。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的镇痛是针对炎性痛。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的镇痛是针对神经痛。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的神经痛是周围神经痛。

7.IL-36R的拮抗剂在制备降低炎性痛患者机械性痛觉超敏或热痛觉过敏的药物中的应用。

8.IL-36R的拮抗剂在制备降低神经痛患者机械性痛觉超敏或热痛觉过敏的药物中的应用。

9.一种具有镇痛作用的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含IL-36R的拮抗剂，和药学上可接受的载体。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述的IL-36R的拮抗剂是蛋白或多肽片段。