CN107337720B

CN107337720B - 一种植物谷蛋白转运储藏相关蛋白OsNHX5及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN107337720B
Application number: CN201710692150.7A
Authority: CN
Inventors: 万建民; 朱建平; 王益华; 江玲; 鲍依群; 刘喜; 刘世家; 田云录; 陈亮明
Original assignee: Nanjing Agricultural University
Current assignee: Nanjing Agricultural University
Priority date: 2017-08-14
Filing date: 2017-08-14
Publication date: 2020-01-31
Anticipated expiration: 2037-08-14
Also published as: CN107337720A

Abstract

本发明属于基因工程领域，涉及一种植物谷蛋白转运储藏相关蛋白OsNHX5及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物谷蛋白转运储藏相关的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。本发明的植物谷蛋白转运储藏相关蛋白影响植物胚乳中谷蛋白前体的转运储藏。将所述蛋白的编码基因导入谷蛋白转运储藏异常的植物中，可以培育谷蛋白转运储藏正常的转基因植物。所述蛋白及其编码基因可以应用于植物遗传改良。

Description

一种植物谷蛋白转运储藏相关蛋白OsNHX5及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种植物谷蛋白转运储藏相关蛋白OsNHX5及其编码基因与应用。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一。杂交稻的成功应用在很大程度上解决了世界人口剧增带来的吃饭问题，但随着人们生活水平的不断提高，培育高品质、高营养以及各类功能性水稻正在成为迫在眉睫的问题。水稻种子贮藏蛋白作为稻米中的第二大营养物质，在很大程度上决定了稻米的营养价值。因此对其合成转运途径的深入研究，将有助于我们通过基因工程的手段对稻米进行改良。

水稻谷蛋白首先以57kDa前体的形式，在内质网中合成，在分子伴侣的协助下正确折叠，之后输出内质网，进入高尔基体后，经过翻译后修饰，出芽形成囊泡，这些电子致密的囊泡会与水稻胚乳中的蛋白贮藏液泡融合，形成。水稻谷蛋白进入蛋白贮藏液泡之后，经过液泡加工酶的切割形成成熟的酸碱亚基，最终以这种成熟形式贮存其中。蛋白体II中的谷蛋白可以被人体消化吸收，为稻米中主要的蛋白质来源。

上述谷蛋白分选加工的过程是一个极其复杂的生物学过程。水稻谷蛋白57H突变体无疑是研究水稻贮藏蛋白分选的优良材料，目前已报道了几个57H突变体，但其中大多数尚未被克隆，因此，贮藏蛋白分选的确切机理尚不明确。

NHX类蛋白在生物体中发挥重要功能，目前尚无报道关于NHX蛋白参与水稻贮藏蛋白分选的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种谷蛋白转运储藏相关蛋白及其编码基因与应用。

本发明提供的谷蛋白转运储藏相关蛋白(OsNHX5)，来源于稻属水稻(Oryzasativa var.N22)，是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与谷蛋白转运储藏相关的由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。

序列表中的SEQ ID NO.1由535个氨基酸残基组成，自N端第30至460位为Na⁺/H⁺转运结构域。

为了使(a)中的OsNHX5便于纯化，可在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
FLAG	8	DYKDDDDK

上述(b)中的OsNHX5可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的OsNHX5的编码基因可通过将SEQ ID NO.2序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

编码上述贮藏蛋白转运储藏相关蛋白的基因(OsNHX5)也属于本发明的保护范围。

所述基因OsNHX5可为如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：

1)SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

2)SEQ ID NO.3所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)或3)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码谷蛋白转运储藏相关蛋白的DNA分子。

SEQ ID NO.2由1608个核苷酸组成。

所述严格条件可为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下杂交并洗膜。

含有以上任一所述基因的重组表达载体也属于本发明的保护范围。

可用现有的植物表达载体构建含有所述基因的重组表达载体。

所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域，即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端，如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3’端转录的非翻译区均具有类似功能。

使用所述基因构建重组植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子或组成型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、玉米的泛素启动子(Ubiquitin)，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用；此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。

所述重组表达载体优选为在pCAMBIA1305载体的酶切位点SmaI之间插入所述基因OsNHX5得到的重组质粒，命名为pCAMBIA1305-OsNHX5。

含有以上任一所述基因(OsNHX5)的表达盒、转基因细胞系及重组菌。

扩增所述基因(OsNHX5)全长或任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。

本发明还提供了一种培育成熟谷蛋白含量增加的植物的方法。

本发明提供的培育成熟谷蛋白含量增加的植物的方法，是将所述基因导入成熟谷蛋白含量降低的植物中，得到成熟谷蛋白含量正常的转基因植物；所述谷蛋白含量降低植物为籽粒中成熟谷蛋白含量显著低于正常型的植物；所述谷蛋白含量正常的转基因植物为籽粒中成熟谷蛋白的含量与正常型相当的转基因植物。具体来说，所述基因通过所述重组表达载体导入成熟谷蛋白含量降低的植物中；所述成熟谷蛋白含量降低的植物可为K67。

所述蛋白、所述基因、所述重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌或所述方法均可应用于水稻育种。

利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体，将编码所述蛋白的基因导入植物细胞，可获转基因细胞系及转基因植株。携带有所述基因的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物，如：烟草、百脉根、拟南芥、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草、苜宿等。

有益效果：

本发明首次发现、定位并克隆得到一个新的植物谷蛋白运输储藏相关蛋白的基因OsNHX5。本发明的植物谷蛋白转运储藏相关蛋白影响植物的囊泡运输过程。抑制该蛋白编码基因的表达可导致植物种子中谷蛋白的囊泡运输过程的障碍，并影响其剪切成熟，从而可以培育囊泡运输变异的转基因植物和植物成熟谷蛋白含量降低的转基因植物。将所述蛋白的编码基因导入成熟谷蛋白含量降低的植物中，可以培育成熟谷蛋白含量正常的植物。所述蛋白及其编码基因可以应用于植物遗传改良。

附图说明

图1为野生型日本晴和突变体K67蛋白质电泳图比较。

图2为野生型日本晴和突变体K67的成熟种子外观比较。

图3为野生型日本晴和突变体K67的发育中胚乳细胞中超细微结构的比较。

图4为野生型日本晴和突变体K67的发育中胚乳细胞中谷蛋白分布的比较(免疫荧光)。

图5为精细定位示意图。

图6为转基因植株进行PCR分子检测结果。

图7为转pCAMBIA1305-OsNHX5的植株的成熟种子外观。

图8为转pCAMBIA1305-OsNHX5的植株的成熟种子的蛋白质电泳图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

实施例1、植物种子谷蛋白转运储藏相关蛋白及其编码基因的发现

一、水稻成熟谷蛋白降低突变体K67的成熟谷蛋白含量分布分析及遗传分析

在籼稻品种N22突变体库中，利用蛋白质电泳分析，筛选得到了一个种子中成熟谷蛋白含量降低的株系，同时其谷蛋白前体相比正常型显著的增加，命名为K67。

与N22比较，K67的主要特征是：种子中成熟谷蛋白含量下降(见图1)，伴随谷蛋白前体大量积累，同时具有种子不透明的表型，见图2。

对发育中胚乳进行的透射电镜观察发现K67中储存成熟谷蛋白的二型蛋白体相对N22(图3A)的大小显著的变小，并且二型蛋白体的外形也发生了变化，具有高度不规则的外形(图3B)。同时，K67的胚乳细胞中还出现了很多来源未知的聚集体PMB(图3B)。利用免疫荧光技术，观察到K67(图4B)中的二型蛋白体的显著的变小，谷蛋白除了存在于二型蛋白体中还沿着细胞壁分布，聚集体中也分布了大量的谷蛋白(图4B)。所以，微观观察数据表明在K67突变体胚乳细胞中谷蛋白的存储形式发生了大幅度的改变，部分谷蛋白没有被正确的运送到蛋白质储藏型液泡中。谷蛋白的剪切成熟须在蛋白质储藏型液泡/二型蛋白体中完成，因此，推断K67中因为囊泡运输过程的障碍，谷蛋白不能全部成功运输到二型蛋白体中，而以前体形式存在于细胞壁附近和聚集体中，因此，成熟的谷蛋白的含量大幅的下降。

二、突变基因定位

1、突变基因初步定位

用N22的花粉给K67进行了人工辅助授粉，所得种子中成熟谷蛋白含量正常，用K67的花粉给N22进行人工辅助授粉，所得种子中成熟谷蛋白含量也表现正常。所得F1自交后，后代中正常型和突变型的种子符合3:1的分离比例，因此，N22中成熟谷蛋白降低的表型是由单个隐性核基因控制的。

用突变体k67与粳稻品种日本晴杂交，在K67/Nip的F2种子中利用蛋白质电泳分析挑选出10个具有成熟谷蛋白含量下降的单株，提取各株的叶片中的基因组DNA，利用覆盖水稻全基因组的565对SSR引物对10单株进行连锁分析，将谷蛋白运输储藏蛋白相关基因OsNHX5定位在第9染色体上标记NJ9-4和NJ9-5之间。

上述SSR标记分析的方法如下所述：

(1)提取上述选取单株的总DNA作为模板，具体方法如下：

①取0.2克左右的水稻幼嫩叶片，置于Eppendorf管中，管中放置一粒钢珠，把装好样品的Eppendorf管在液氮中冷冻5min，置于2000型GENO/GRINDER仪器上粉碎样品1min。

②加入660μl提取液(含100mM Tris-Hcl(pH 8.0)，20mM EDTA(pH 8.0)，1.4MNaCl,0.2g/ml CTAB的溶液)，漩涡器上剧烈涡旋混匀，冰浴30min。

③加入40μL 20％SDS，65℃温浴10min，每隔两分钟轻轻上下颠倒混匀。

④加入100μL 5M NaCl，温和混匀。

⑤加入100μL10×CTAB，65℃温浴10min，间断轻轻上下颠倒混匀。

⑥加入900μL氯仿，充分混匀，12000rpm离心3min。

⑦转移上清液至1.5mL Eppendorf管中，加入600μl异丙醇，混匀，12000rpm离心5min。

⑧弃上清液，沉淀用70％(体积百分含量)乙醇漂洗一次，室温凉干。

⑨加入100μL 1×TE(121克Tris溶于1升水中，用盐酸调pH值至8.0得到的溶液)溶解DNA。

⑩取2μL电泳检测DNA质量，并用DU800分光光度仪测定浓度(Bechman InstrumentInc.U.S.A)。

(2)将上述提取的DNA稀释成约20ng/μl，作为模板进行PCR扩增；

PCR反应体系(10μl)：DNA(20ng/μl)1μl，上游引物(2pmol/μl)1μl，下游引物(2pmol/μl)1μl，10xBuffer(MgCl₂free)1μl，dNTP(10mM)0.2μl，MgCl₂(25mM)0.6μl，rTaq(5u/μl)0.1μl，ddH₂O 5.1μl，共10μl。

PCR反应程序：94.0℃变性5min；94.0℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min，共循环35次；72℃延伸7min；10℃保存。PCR反应在MJ Research PTC-225热循环仪中进行。

(3)SSR标记的PCR产物检测

扩增产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。以50bp的DNA Ladder为对照比较扩增产物的分子量大小，银染显色。

2、突变基因精细定位

根据初步定位的结果，在突变基因所在区域附近寻找公共图谱上的分子标记，并自行开发SSR标记。用F2群体中的成熟谷蛋白含量下降的单株验证，在该染色体的相关区段筛选更多标记进一步定位突变体基因。从K67/Nip衍生的F2分离群体中挑出确认为成熟谷蛋白含量下降的单株208株(用于突变基因精细定位。利用公共图谱上的分子标记和基于水稻基因组序列数据自行开发的SSR分子标记对突变基因进行了精细定位，并根据定位结果初步确定突变基因，具体方法如下：

SSR标记开发：

将公共图谱的SSR标记与水稻基因组序列进行整合，下载突变位点附近的BAC/PAC克隆序列。用SSRHunter(李强等，遗传，2005，27(5):808-810)或SSRIT软件搜索克隆中潜在的SSR序列(重复次数≥6)；将这些SSR及其邻近400～500bp的序列在NCBI通过BLAST程序在线与相应的籼稻序列进行比较，如果两者的SSR重复次数有差异，初步推断该SSR引物的PCR产物在籼、粳间存在多态性；再利用Primer Premier 5.0软件设计SSR引物,并由上海英俊生物技术有限公司合成。将自行设计的SSR成对引物等比例混合，检测其在k67和Nip之间的多态性，表现多态者用作精细定位k67基因的分子标记。用于精细定位的分子标记见表2。

表2用于精细定位的分子标记

引物	前引物	后引物	所属BAC
				NJ9-4	GCATACTGCTTTTACGACAA	CTGCCACTGGGATTAGAA	OSJNBa0009H03
K67-3	TCATCATGCCTGCAATGCC	GGCGCCACAAATCTAGCAAT	OJ1190_B07
				K67-6	AGGATTTAAGTCACTATGCTCCTT	CATATGTGTTGGGTGCGACA	OJ1190_B07
NJ9-5	GAATCGTATTGCCAGCG	AAATCAGAGAAGTAGAGAGCGT	P0663H05

最终把K67基因精细定位在标记K67-3和K67-6之间，这两个标记位于同一BAC克隆OJ1190_B07上，物理距离约为98kb(图7)。

(3)突变基因的获得

经过对98kb区间内的测序，发现了K67基因的第六个外显子缺失7bp(图5)，

根据网上公布的序列设计引物，序列如下所述：

primer1：5'ATGGCGCTGGAGCTGAGCCTGG 3'(SEQ ID NO.4)；

primer2：5'CTATTGGTCATAGAATCCGCGTC 3'(SEQ ID NO.5)。

以primer1和primer2为引物，以N22的发育中胚乳cDNA为模板，进行PCR扩增获得目的基因。扩增反应在PTC-200(MJ Research Inc.)PCR仪上进行：94℃3min；94℃30sec，60℃45sec，72℃10min，35个循环；72℃5min。将PCR产物回收纯化后连接到pMD18-T(日本Takara公司上)，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(北京Tiangen公司CB101)，挑选阳性克隆后，进行测序。

序列测定结果表明，PCR反应获得的片段具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，编码535个氨基酸残基组成的蛋白质(见序列表的SEQ ID NO.1)。将SEQ ID NO.1所示的蛋白命名为OsNHX5，将SEQ ID NO.1所示的蛋白的编码基因命名OsNHX5。

实施例2、转基因植物的获得和鉴定

一、重组表达载体构建

以日本晴(来自南京农业大学水稻所种质资源库)的基因组DNA为模板，进行PCR扩增获得OsVps9a基因，PCR引物序列如下：

primer3：

5'AATTCGAGCTCGGTACCCGGGACCCACCTGAAAAAAAAAAAAAT 3'

(SEQ ID NO.6)；

primer4：

5'CGACTCTAGAGGATCCCCGGGCTCGAGGGTGTAGTGCCCCTGCTGG 3'

(SEQ ID NO.7)。

上述引物位于SEQ ID NO.2所示基因的上游2.2kb和下游1.2kb，扩增产物包含了该基因的启动子部分，将PCR产物回收纯化。采用INFUSION重组试剂盒(日本Takara公司)将PCR产物克隆到载体pCAMBIA1305中。

INFUSION重组反应体系(10μL)：PCR产物1.0μL，pCAMBIA1305 6.0μL，5×infusionbuffer 2.0μL，infusion enzyme mix 1μL。短暂离心后将混合体系37℃水浴15分钟，而后50℃水浴15分钟，取2.5μL反应体系用热激法转化大肠杆菌DH5α感受态细胞(北京Tiangen公司；CB101)。将全部转化细胞均匀涂布在含50mg/L卡那霉素的LB固体培养基上。37℃培养16h后，挑取克隆阳性克隆，进行测序。测序结果表明，得到了含有SEQ ID NO.3所示基因的重组表达载体，将含有OsNHX5的pCAMBIA1305命名为pCAMBIA1305-OsNHX5,OsNHX5基因片段利用INFUSION重组试剂盒(日本Takara公司)插入到该载体的SamI酶切位点之间。

二、重组农杆菌的获得

用电击法将pCAMBIA1305-OsNHX5转化农杆菌EHA105菌株(购自美国英俊公司)，得到重组菌株，提取质粒进行PCR及酶切鉴定。将PCR及酶切鉴定正确的重组菌株命名为EH-pCAMBIA1305-OsNHX5。

用pCAMBIA1305作为对照载体转化农杆菌EHA105菌株，方法同上，得到转空载体对照菌株。

三、转基因植物的获得

分别将EH-pCAMBIA1305-OsNHX5和转空载体对照菌株转化水稻成熟谷蛋白含量降低突变体K67，具体方法为：

(1)28℃培养EH-pCAMBIA1305-OsNHX5(或转空载体对照菌株)16小时，收集菌体，并稀释到N6液体培养基(Sigma公司，C1416)中至浓度为OD600≈0.5，获得菌液；

(2)将培养至一个月的T5390水稻成熟胚胚性愈伤组织与步骤(1)的菌液混合侵染30min，滤纸吸干菌液后转入共培养培养基(N6固体共培养培养基，Sigma公司)中，24℃共培养3天；

(3)将步骤(2)的愈伤接种在含有100mg/L潮霉素的N6固体筛选培养基上第一次筛选(16天)；

(4)挑取健康愈伤转入含有100mg/L潮霉素的N6固体筛选培养基上第二次筛选，每15天继代一次；

(5)挑取健康愈伤转入含有50mg/L潮霉素的N6固体筛选培养基上第三次筛选，每15天继代一次；

(6)挑取抗性愈伤转入分化培养基上分化；得到分化成苗的T0代阳性植株。

四、转基因植株的鉴定

1、PCR分子鉴定

将步骤三获得的T0代植株提取基因组DNA,以基因组DNA为模板，利用Primer5和Primer6为引物对进行扩增：

Primer5：ATGGCGCTGGAGCTGAGCCTG(SEQ ID NO.8)

Primer6：CTATTGGTCATAGAATCCGCGT(SEQ ID NO.9)。

PCR反应体系：DNA(20ng/μl)2μl，Primer1(10pmol/μl)2μl，Primer2(10pmol/μl)2μl，10xBuffer(MgCl₂free)2μl，dNTP(10mM)0.4μl，MgCl₂(25mM)1.2μl，rTaq(5u/μl)0.4μl，ddH₂O 10μl，总体积20μl。扩增反应在PTC-200(MJ Research Inc.)PCR仪上进行：94℃3min；94℃30sec，55℃45sec，72℃1min，35个循环；72℃5min。

用试剂盒(北京Tiangen公司)纯化回收PCR产物。PCR产物用1％的琼脂糖电泳检测,图6中泳道2为K67突变体基因组DNA，作为阴性对照；泳道1为pCAMBIA1305.1-OsNHX5质粒，作为阳性对照；泳道3-5为转基因阳性株系。

2、表型鉴定

分别将T₀代转pCAMBIA1305.1-OsNHX5植株，N22和K67种植在南京农业大学牌楼试验网室内。种子成熟后，收取各材料种子，观察到pCAMBIA1305-OsNHX5植株的种子中出现了透明的种子(图7，其中L1、L2、L3是三个不同的转基因株系)，进一步的蛋白质电泳分析显示，转入pCAMBIA1305-OsNHX5的K67种子的成熟谷蛋白的含量上升至正常水平(图8，其中L1、L2、L3是三个不同的转基因株系)。因此证明K67中的突变表型是由OsNHX5的突变造成的。pCAMBIA1305-OsNHX5可以使K67株系的成熟谷蛋白增加至正常水平。

序列表

<110> 南京农业大学

<120> 一个植物谷蛋白转运储藏相关蛋白 OsNHX5 及其编码基因与应用

<160> 9

<210> 1

<211> 535

<212> PRT

<213> 水稻（N22）

<220>

<223> 谷蛋白转运储藏相关蛋白 OsNHX5 氨基酸序列

<400> 1

Met Ala Leu Glu Leu Ser Leu Val Ser Ala Ser Pro Pro Gly Gly Leu

1 5 10 15

Ala Ala Ser Pro Pro Pro Pro Ala Ala Ile Pro Gly Lys Glu Gln Gln

20 25 30

Val Ala Gly Val Gly Ile Leu Leu Gln Ile Ser Met Leu Val Leu Ser

35 40 45

Phe Val Leu Gly His Val Leu Arg Arg His Arg Phe Tyr Tyr Leu Pro

50 55 60

Glu Ala Ser Ala Ser Leu Leu Ile Gly Leu Val Val Gly Gly Leu Ala

65 70 75 80

Asn Ile Ser Asn Thr Glu Thr Asn Thr Arg Met Trp Phe Asn Phe His

85 90 95

Asp Glu Phe Phe Phe Leu Phe Leu Leu Pro Pro Ile Ile Thr Gln Ser

100 105 110

Gly Phe Ser Leu Ser Pro Lys Pro Phe Phe Ala Asn Phe Gly Ala Ile

115 120 125

Val Thr Phe Ala Ile Leu Gly Thr Phe Ile Ala Ser Val Val Thr Gly

130 135 140

Val Leu Val Tyr Leu Gly Gly Leu Thr Phe Leu Met Tyr Lys Leu Pro

145 150 155 160

Phe Val Glu Cys Leu Met Phe Gly Ala Leu Ile Ser Ala Thr Asp Pro

165 170 175

Val Thr Val Leu Ser Ile Phe Gln Glu Leu Gly Thr Asp Val Asn Leu

180 185 190

Tyr Ala Leu Val Phe Gly Glu Ser Val Leu Asn Asp Ala Met Ala Ile

195 200 205

Ser Leu Tyr Arg Thr Met Ser Leu Val Arg Ser Gln Ala Ala Ala Gly

210 215 220

Glu Asn Phe Phe Met Met Val Phe Gln Phe Leu Glu Thr Phe Val Gly

225 230 235 240

Ser Leu Ser Ser Gly Val Gly Val Gly Phe Ile Ser Ala Leu Leu Phe

245 250 255

Lys Tyr Ala Gly Leu Asp Ile Asp Asn Leu Gln Asn Leu Glu Cys Cys

260 265 270

Leu Phe Val Leu Phe Pro Tyr Phe Ser Tyr Met Leu Ala Glu Gly Leu

275 280 285

Gly Leu Ser Gly Ile Val Ser Ile Leu Phe Thr Gly Met Val Met Lys

290 295 300

His Tyr Thr Phe Ser Asn Leu Ser Asn Asn Ser Gln Arg Phe Val Ser

305 310 315 320

Ala Phe Phe His Leu Leu Ser Ser Leu Ala Glu Thr Phe Val Phe Ile

325 330 335

Tyr Met Gly Phe Asp Ile Ala Met Glu Glu His Ser Trp Ser His Val

340 345 350

Gly Phe Ile Phe Phe Ser Ile Ile Phe Ile Ile Ile Ala Arg Ala Val

355 360 365

Asn Val Phe Ser Cys Ala Tyr Leu Val Asn Met Ser Arg Pro Glu His

370 375 380

Arg Arg Ile Pro Leu Lys His Gln Lys Ala Leu Trp Phe Ser Gly Leu

385 390 395 400

Arg Gly Ala Met Ala Phe Ala Leu Ala Leu Gln Ser Ala Asn Glu Leu

405 410 415

Pro Gly Gly His Gly Lys Thr Ile Phe Thr Thr Thr Thr Ala Ile Val

420 425 430

Val Leu Thr Val Leu Leu Ile Gly Gly Ser Thr Gly Thr Met Leu Glu

435 440 445

Ala Leu Asp Val Ile Gly Asp Glu Asn Arg Ser Ile Glu Asn Tyr Asp

450 455 460

Asp Asn Asn Gly Tyr Ile Pro Pro Thr Tyr Glu Glu Gly Ser Ser Ser

465 470 475 480

Gly Gly Gly Leu Arg Met Lys Leu Lys Glu Phe His Lys Ser Thr Thr

485 490 495

Ser Phe Thr Ala Leu Asp Arg Asn Tyr Leu Thr Pro Phe Phe Thr Ser

500 505 510

Gln Thr Asp Glu Asp Asp Asp Val Phe Gly Glu Gln Pro Gln Asn Gln

515 520 525

Arg Arg Gly Phe Tyr Asp Gln

530 535

<210> 2

<211> 1608

<212> DNA

<213> 水稻（N22）

<220>

<223> OsNHX5 基因 CDS

<400> 2

atggcgctgg agctgagcct ggtgtccgct tcgccccctg gtgggctggc ggcgagcccg 60

cccccgcccg ccgccatccc ggggaaggag cagcaggtgg ccggggtggg gatcctgctg 120

cagatctcca tgctcgtgct ctccttcgtg ctcgggcacg tcctccgccg ccaccggttc 180

tactacctcc ccgaggccag cgcgtctctc ctcatcggtc tagttgtcgg tgggcttgct 240

aatatttcaa atacagagac caacactagg atgtggttca acttccatga cgaatttttc 300

ttcttgttct tattgcctcc aataatattc caatcaggat tcagtctatc cccaaaacca 360

ttctttgcaa attttggggc tattgtaact tttgccatcc ttgggacatt cattgcttct 420

gttgtaacag gagttctcgt ctatcttggt gggttgacat ttctaatgta caaacttcca 480

tttgttgagt gcctcatgtt cggtgctctt atatctgcaa ctgatcctgt cactgtgtta 540

tcaatattcc aggagctggg cactgatgtt aacttgtatg ctcttgtgtt tggagaatct 600

gttctaaatg atgcgatggc gatttcgctt tacaggacaa tgtcattggt cagaagtcaa 660

gcagcagctg gggagaactt ctttatgatg gttttccagt tccttgagac ctttgttggt 720

tcattgtcat caggtgttgg agttggattt atctctgctc ttctgtttaa gtatgctgga 780

ctggatattg acaatcttca aaacttggag tgctgccttt ttgttctctt cccatacttc 840

tcgtatatgt tagcagaagg acttgggttg tcaggaattg tttccatact attcacagga 900

atggttatga agcactatac attttccaat ctctcaaaca actctcagcg cttcgtttct 960

gccttctttc acttgctgtc atctttagca gaaacatttg tgttcattta tatgggcttt 1020

gatattgcca tggaagaaca tagctggtct catgtgggct tcatattctt ctcaattata 1080

tttataatca ttgcaagggc agtaaatgtc ttttcttgtg catatttggt taacatgtca 1140

cggccagaac atcgacgcat acctctaaag catcagaaag cactttggtt tagtgggctt 1200

agaggggcca tggcttttgc acttgctctc caatctgcca atgaacttcc tggaggacat 1260

ggaaaaacaa tattcacaac caccacagct attgttgttt taacggtact tcttatcgga 1320

ggatcgacgg gcaccatgct ggaagctttg gatgtaattg gtgatgaaaa cagatcaata 1380

gaaaattatg acgacaacaa tggttacatc cccccaacgt atgaggaagg ttcatcatct 1440

ggaggaggat taagaatgaa actgaaggaa ttccacaaaa gcacgacatc gttcactgcc 1500

cttgacagga actatctgac tccatttttc accagtcaaa ctgatgagga tgatgatgtc 1560

ttcggtgaac aaccccaaaa ccagagacgc ggattctatg accaatag 1608

<210> 3

<211> 10377

<212> DNA

<213> 稻属水稻（N22）

<220>

<223> 谷蛋白分选相关蛋白 OsNHX5 的基因序列

<400> 3

acccacctga aaaaaaaaaa aattctccgc ccgaaatcgc gaccccacca aagtccaaac 60

cccgcattcc ccccacgctt tcccccccgc gagccttctg gaagaagcac gcatcgattg 120

accgcgaccg acctcgccgc cggcgaccgt acggattccg cccctccccg ccgcggcggc 180

ggcaccaccg gggcgcgcgc gccgggatgg cgctggagct gagcctggtg tccgcttcgc 240

cccctggtgg gctggcggcg agcccgcccc cgcccgccgc catcccgggg aaggagcagc 300

aggtggccgg ggtggggatc ctgctgcaga tctccatgct cgtgctctcc ttcgtgctcg 360

gccacgtcct ccgccgccac cggttctact acctccccga ggccagcgcg tctctcctca 420

tcggtacgta cgcgcgctac gaattgatcg tgcgagtcgc aaaccctagc tgtcaaggat 480

cgtttcgttt atagagtttg gattagtttg ttgaggtgat tattggtttg tgggatttag 540

aaattagaag tgggatgttc agatggagat ggtatgggga ttgatgcatg tttccgatgc 600

cctgcaaata ctgtgaaggg ttggaattca gtgccattct aggtgaaatg cgaaaatgag 660

ccgggatcat gctaataatg tagataattc attttgtctg cctttgcctc tgtggtagct 720

tttctacaag aaacttaatt ctagatgaaa ttttcagcga aatgagaagg gatcatacta 780

ttaatgcaga tgattcattt aggagatgct gcatggtagc acttaatttg tctacctttg 840

taccccattt attgggatac acaattcttt cgagccatgg catcataata ttaggtcccg 900

tttgtttcca ctacaaagag tggataaagt tttggatatt cgtggcacgc ttttcaaact 960

gctaaacggt gcgtttcgtg cgaaaacttt ctatatgaag gttgctctaa aatattagat 1020

taatatattt ttcaagtttg taataattaa aacttaatta atcatacgtt aataccacct 1080

cgttttgggt aaaatactta gtcttcatct ttatctttat cttgaggaga aaagaacacc 1140

accttactaa agttaacact aactagctag attctatggc atagggcgtc acagcatgag 1200

taatttttta aagaaaaaga tcaccgataa tatgttctga gtttatcaca gaaacaagtt 1260

gatgatatga taattttata ttaaaaaata gagctgtatc aatgagaccg tggaaagata 1320

gaacctcaag taaaaaggga acgtaaagaa tggatcaaca ccatttcctt gtatggtcat 1380

aagctggtag aaggaataga agaaatggat aaatcatacg tttcgactag aataatggca 1440

gttttttgtt ggcttatttc tgttttttgg ttgagtttaa tgccatttaa gtaatgccat 1500

gaatgggaat gcaaattata tataaaaaat aaaaatcaat acatagattt aaggacctcc 1560

cctcaaatgt acatggcgct gtaagttttc ctttgcttga tttttttatg tagttaattt 1620

ggggtaggaa ctagttccat ggtttctgtt ttaccttgtt cccctcatat ggagaaattg 1680

catgacctgt catccatttg tgttaccctg caagtttcaa gtctggaaaa gagaaattta 1740

aatgaaaatt tgttgaattt tcttattccg cttgccttgt tgttactcat gggaaactca 1800

acagtagggt caatattaaa gtcataaatg atacatgagt aaaaacatat gttcttaata 1860

acaaaccatt ttcaagtata aatgctcgat ttgcatgcct tgattagtag tagctatcct 1920

ttgatcaagg tgaacaacta caatccatgt tctgcttgca tagaagctga gctgatgcaa 1980

atcaagctca gttacatgag taaaaacttc atcatgaaaa taagttgagt tctctagttc 2040

ttttgtattt tcttaaattt gtcatatgat ttcctttatg acagactcgc gatatcaata 2100

tcattttgat catgcatatt gtggacaccc tttatgtatg gaactttaat gattctgtta 2160

caggtctagt tgtcggtggg cttgctaata tttcaaatac agagaccaac actaggtttg 2220

tgttgtttta ttaacattta tacacaatgc aagagtattt ttcacatgat gtagacatat 2280

gctatgcaag atttgggagt tatttcattc ccgtatcatg cttattatta tcaggaattc 2340

aggatcttat gcatgctgta tgtatgcttt ccattgattc tatcttgttt ccttcaatgt 2400

gcaggatgtg gttcaacttc catgacgaat ttttcttctt gttcttattg cctccaataa 2460

tattatatcc ttttgatttt caaattcaaa cttaatttct tatactgttc taaaagatgc 2520

ttcataatat ctgaatacgt tttccttgac ttcatagaac ccaatcagga ttcagtctat 2580

ccccagtaag tacctcatga tggcaataat tcaaattgtc tagacttctt tccttgaaat 2640

aataatatat ttttttacag aaaccattct ttgcaaattt tggggctatt gtaacttttg 2700

ccatccttgg gacattcatt gcttctgttg taacaggagt tctcgtgtaa gaatttcaca 2760

aactttttgt tctaattctg tctgaagtat tttatcttac tagtcaacct ctatcatact 2820

gcagctatct tggtgggttg acatttctaa tgtacaaact tccatttgtt gagtgcctca 2880

tgttcggtgc tcttatatct gcaactgatc ctgtcactgt gttatcaata ttccaggtgc 2940

ttattttttt cacgtatctc gttcttggac atgtgtactt ataattcacg taactgcctt 3000

gcatggctag aaggtgatta ggatatcata tagatataga ttgggaagaa aactttgtat 3060

gagatgctta aatttttcat gcacgaaact gcacacatac acatacacac tttaccaata 3120

tgagtaaacc tcttatctca ggaaacctat cctaaaccat gtactacatc tatagggaaa 3180

catgcctaac tagcaagatg actaaggtac cgtttgaatt agcaaatcca tcatttgatt 3240

ttcagcttat aataagccac tgctaaattt gatttttaaa acttaatttt ggagttgatt 3300

ttggggtttc ttcatcatgt tttatttttg agcattggct tttaaactac gaataacaca 3360

gatataaacg gtttacacat aatttctttt gggttgcttc tatgccgttt tatggcttat 3420

cagatatagg ccaaacaata agactgtaga tgattggtgg atgaaagctg ctggatgatt 3480

tacttgaata tagggataaa ataaatatta tatatcgtaa actgaacaaa tagcttataa 3540

caagtggtcc aaggaagcaa tgcagtagaa gatttttttt ttttttgaga aaacatagtt 3600

ttagaagcgt ggagcaaata atccggtgga tagtctgaaa agaacagggc ctaagtatta 3660

atgcaccagc agggctagga aacagcacat attgatacac tcttgtgaac agatttttgt 3720

ttgaacttcg ctgttgcatt atgatttcta tattacatga tgttgtctaa tacaaaaaga 3780

aaattttaat gaggttgtaa gcagtcaata aatcagaagt tgtctctgtt gtttgatgtt 3840

ttaaaattgt tgtgttctca ttcttgaaag acgcatcatc ttcatttctt tatattgcta 3900

ctagtgaagc ataccataga ctctcagtac tatacatgga accccacttt tagaggcaaa 3960

tgattgttta tgtaagtaaa tgtaaaatag aaacctggtt gcaatgctaa atgaatatga 4020

aacattctga aagcaaatat tatcctaatg cccaggtaat tgataaaaaa tgtgctaaac 4080

tcgtaacact gttttgttgt agtttcagtg ttgtaccata tttttggtag catttggctt 4140

gaacttgaaa acagatcatt actactagat tttgatgcac catcagaatt tacaacagaa 4200

gtttgtggtg gtaaagttac tgtatattta gtgtaacata ctgaatcagt gcatgcagcc 4260

attattatta ttttttatgt actttgatat atgtccttag ccaatgtttt ttttaaagat 4320

gttccattgt ttaaatatgg catattaaaa aatgttggag gattagtggc catatggatg 4380

ttgggaatct gaactaatga tgcatctcct gaaattattc catgcaggag ctgggcactg 4440

atgttaactt gtatgctctt gtgtttggag aatctgttct aaatgatgcg gtttgttttt 4500

acttctttcg agtgcatgca atagtagtaa ttacttttgt ttatgactaa catgcatatc 4560

ttatttggat agtgcagatg gcgatttcgc tttacaggtc tgtctctttc aattacatat 4620

aattcttttg acatatgcat ttcttgctta tatctatcct tttgttcagg acaatgtcat 4680

tggtcagaag tcaagcagca gctggggaga acttctttat gatggttttc cagttccttg 4740

agacctttgt tggttcattg tcatcaggtt gcatcacagc tcagaatatt ctcaactatt 4800

tcaaagggac ctttggcatt gtggttgcct tctaaaattg gttctgtttg atgcaagcta 4860

atgaacatca tatattttag agcaatataa gaattatttt actagaatag gtaaaaacaa 4920

tgttttaatg tatggtacat aacagcacag cagggcacag tattaatggc tggatcttat 4980

ataatatgct accccttcat gttagcaaaa atgctctagc aagtttagtc ataaacgttc 5040

tcccttttga ggaactagac tctgatgatc aaataccaaa atttagtttt ataccgtaga 5100

tgcccggaaa atatgtacct gcttttactc ggggttgaaa ttttctggac aacgatatat 5160

tctccatcac taattcgaac tgatctagtc cctttcatag tcattgtcaa ttcattagct 5220

catgtaacca ttccatttgt cggattgcag gtgttggagt tggatttatc tctgctctta 5280

tatccttttc ctaagttcta catggaaact ctgtttgcaa aacatgaaag actatgcatg 5340

cttagtattg accagtgtgt gtttaatctt atcttcatat accaattcaa aatcttcctc 5400

tttaaacaac tttcacaaga aatgttcttc tcttagatta gcagcaacaa agaaaacatg 5460

gtagaatcta aattgcaata ttcattttct tcttatggtc atgttttcca ttgctcttat 5520

tgaatgttag ctaaatcttc atatgctttt tagtggcagt tgtgttatca gtccttggct 5580

ccttatagct ttgtgtaaaa tgcattattt ttttctttgt aatagtgtta aattgcaata 5640

tttatgtatt actatttacc atttactcat tgcttgtttt acggtaaatt attttattta 5700

ctacttgatc ttgtgcaacc ttgaccactc tgtgtacctg tttaagtatg ctggactgga 5760

tattgacaag taagtcatat catgctacct gcttttagtt catagacttt ttcatgattt 5820

catacgaaat atgttgccag tctaagcctg ctgaattgtt aacggtttca gtcttcaaaa 5880

cttggagtgc tgcctttttg ttctcttccc atacttctcg taaggacact taaatacttc 5940

actctaccct tcttctatac tttttttatt aaaatatttc gtatcaattc taggtatatg 6000

ttagcagaag gacttgggtt gtcaggaatt gtttccatac tattcacagg aatggtaagt 6060

acaatatgca atattgcaaa atagcatatt atatgaaaaa ccatatctgc acaccatggc 6120

tatgtctctt ggaatcatac ttgctatttt tttttctcag gttatgaagc actatacatt 6180

ttccaatctc tcaaacaact ctcagcgctt cgtttctgcc ttctttcact tgctgtcatc 6240

tttagcagaa acatttgtgt aagctcagga gctttgtttg agtaatataa aaacaaccat 6300

tcccttttgc tcttaatgga caattcctga attcattttt caggttcatt tatatgggct 6360

ttgatattgc catggaagaa catagctggt ctcatgtggg cttcatattc ttctcaattg 6420

tatccttaat tttgtttttc attttcctaa atcgccagtt ttggcctttt ctctgtttgg 6480

tagaaaattg gttccttgac ttactgaaca acacagatat ttataatcat tgcaaggtac 6540

tgtcatgact tatgagccct ctatgcaaat ataatactta attggcagcc aaagccacag 6600

ttttgtcctg atttgcaaaa ttatgtcttc tctatagtaa aagcatgtag tagtgggatg 6660

tatatgaaag atctatccct tatttatgtg catctatgac cattcaatac agtttagact 6720

ttagagaaat gatagatgtc gcgagagctt atatcattta tctacatgct tgaatatatg 6780

actgcaataa tgttagacca gatgtagaaa atctgtccca agtgtcaaat tgatcagttc 6840

caagttaagc ctcagtgtag gaacagaatt ttcacaattt ttcacttgca tttatgatgt 6900

aatttatatg tactccctcc tattttaaat tacttgtggt tctaggtttt tcctaagtca 6960

aacattctaa gctttgatcg tccatttcta tacacttgta tagtttaaca tcataagctt 7020

tactccctcc atcccaaaat atgttgactt ttagctggca agaagttgct atattttggg 7080

acggcggtag tatattttta gattcaccct gagaaatata cggatttcta aaaattaatg 7140

gtcaaagatt gacatgtttg acttaggaca aacctagaac gataattaat ttgaaacaga 7200

gggagtattc agttttacat tggttgtttc tcatcttggc ggtggtgttt aactttatac 7260

attatttact ctgcagggca gtaaatgtct tttcttgtgc atatttggtt aacatgtcac 7320

ggccagaaca tcgacgcata cctctaaagc atcagaaagc actttggttt agtggtgagg 7380

gcagatcgcc attacagctg gtagtttata tgattcacat ttcattcaag ataattgttc 7440

ttatttgtac aaacagggct tagaggggcc atggcttttg cacttgctct ccaatctgcc 7500

aatgaacttc ctggaggaca tggaaaaaca atattcacaa ccaccacagc tattgttgtt 7560

ttaacggtac ctgcacgttt tccattttct attactttga cttcaataaa tggtgacact 7620

attgattgga atgctattgt ttattcttac ggccgtcctt cagatggcat gtcatgcttg 7680

cacatatact ctactagttg ggtaacttct ctgtgcatat ggtactttca aataggcaat 7740

ttattgttga tgtggctgcc ttacaaaatt agttccatag accaaccaaa attttccaaa 7800

ccattaggaa aatacaaggc atggaaattc aaattgctac atgcattctg tgcatttttt 7860

ttcctggtgt tgcacgtatg ggagtcctga atcattgaac taacaatgag ataatgcatc 7920

agtaggagta ggactagtgc aatattaatt gaaagtaaac tgaacagttc taatcaatca 7980

cctgaaacct cacaggtact tcttatcgga ggatcgacgg gcaccatgct ggaagctttg 8040

gatgtaattg gtgatgaaaa cagatcaata gaagtaagcg tcgttttttt tttcataatt 8100

ctgaatggct tgtcactact ctctttaaga cttaagatgg acctgggcta cagaatactg 8160

ttccaatttc tagaagcaaa aatattatca tcaaaggtgg ctgatttggt tatcttgttt 8220

ccattgccca tctggttcat ccaatgagac tacggttgat taactgtgtt attggtcatt 8280

gcacgattta ggttatttgg tcttgtataa tttgcttgtt tcttatactt taaagacaat 8340

taggagttag gactaaagac ttctgtgtga caccacttgc agaattatga cgacaacaat 8400

ggttacatcc ccccaacgta tgaggaaggt tcatcatctg gaggaggatt aagaatgaaa 8460

ctgaaggaat tccacaaaag gtactacctg tcttatgttt ccattcgcta cacgtcataa 8520

catgaaaaaa ggaaatgctt atcgccttgt aatgatcatg cagcacgaca tcgttcactg 8580

cccttgacag gaactatctg actccatttt tcaccagtca aactgatgag gatgatgatg 8640

tcttcggtaa gtagcttatt cttttacatg gtagctagca tacaagagtc cgcatgatac 8700

tgcaaaatga tcttatttgc ctagtctgaa atgtgttgta tcgtaattgt attatcaact 8760

taatttttac tgcatgggct gcagtttttt ttgatctttt cccctcaatt gctgagactg 8820

ttcattgttg tcttcttgtt ttgtgatata ggtgaacaac cccaaaacca gagacgcgga 8880

ttctatgacc aatagcttgg atgagttgcc acctgacagc cacatacacg atacttagca 8940

tggtagcatg tgatgagatt ggaagcgatc gtaagtatac aacttctcat agttgaatag 9000

catatgaaag agcataccgt aggatagata tcataacaca acttgattcg tcggcgatga 9060

cgaaagcatg ctgcttcatg tatatatttt aggcctcgat tagtacgtgg tggagctgta 9120

atgagacaaa aatgattgta agggaaaaaa aactgagccc aagcccatgt catgagttag 9180

aatgattgca ataacccaga gctgatcatt ggcagcttac tgtcaagttg gaaaagcatg 9240

ttaaccaaat caccagctgt gtcattggct ggtcttgaag ttactgatca tcattggggc 9300

ttaaatcatt catgtttgaa aacttgtcga atttccgatg acacttgttg gctgttgcat 9360

tcaatatgat agtggtacta gtactagtag taccatattg tccttggatg tgccgtgttg 9420

atgacactca aaatatctgc cgttgtccgg ctactgaata gaaattggcc attatgccac 9480

tcccaagagt gggtttcgcc aaaatgccat tctgccgaat ggattcgtta aaatgccatg 9540

tacaagagat accaaacatt tgttttgcca tttgcgccaa ttctctccat ttttacctaa 9600

ttttgcatct gggctgacca aaatacccct tcgggctggt tcaagaccag tactccgcaa 9660

cacctcctcc ggctgtgccg ccgccgccgc ctgcgcggac cagtactccg ccgcgacgcc 9720

cgataactcc tccgtcacgt tcggtgacga cgaggccgac aacgagtcgc atagcagcga 9780

aggctacgag cccgaagcca agtgctggta agccatcatc actcaatcag caatcaaaac 9840

gtaaatctcc acgtgtgtgc atgtgttctt gggtctcatg gatgtcatgg ctgtgtggtt 9900

ttaggaagga ggatgctgac aatgagggta gctccggcgg catgggcggc ggcgctggcg 9960

ggaagccggt gcgcaagccg aggcttgtgg tgcacacgct gagcgacatc gacgtcaaca 10020

tcgacatcct cgacgccggc ttccggtgga ggaagtacgg ccagaaggtc gtcaagggca 10080

accccaaccc aaggtaatca atcaatcaat ctcctcacta atcaaagaat taaccagata 10140

aaattccgtc gataagtcga tcaatctctg ttcttgtatg catctctcta ataatcaatc 10200

tgttcttgaa tggcaggagc tactacaagt gcacgacggt gggttgcccg gtgcggtagc 10260

acgtggagcg ggcgttgcac gacacgcgtg ccgtgatcac cacatacgcc ggcgccgtcg 10320

tccagcgcga tccggccgtc ggctgtctcc ggccagcagg ggcactacac cctcgag 10377

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer1

<400> 4

atggcgctgg agctgagcct gg 22

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer2

<400> 5

ctattggtca tagaatccgc gtc 23

<210> 6

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer3

<400> 6

aattcgagct cggtacccgg gacccacctg aaaaaaaaaa aaat 44

<210> 7

<211> 46

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer4

<400> 7

cgactctaga ggatccccgg gctcgagggt gtagtgcccc tgctgg 46

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer5

<400> 8

atggcgctgg agctgagcct g 21

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> Primer6

<400> 9

ctattggtca tagaatccgc gt 22

Claims

1.SEQ ID NO.1所示的蛋白质、 SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的基因、包含SEQ IDNO.2或SEQ ID NO.3所示的基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌中的至少一种在培育成熟谷蛋白含量正常或含量降低的水稻育种中的应用。

2.一种培育成熟谷蛋白含量正常转基因水稻的方法，其特征在于将SEQ ID NO.2或SEQID NO.3所述基因导入成熟谷蛋白含量降低的水稻中，得到成熟谷蛋白含量正常转基因水稻；所述成熟谷蛋白含量降低的水稻是种子中成熟谷蛋白含量降低，并伴随谷蛋白前体增加的水稻；所述成熟谷蛋白含量正常的转基因水稻为成熟谷蛋白和谷蛋白前体含量均正常的转基因水稻。

3.一种培育成熟谷蛋白含量降低的转基因水稻的方法，其特征在于抑制目的水稻中SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所述基因的表达，得到成熟谷蛋白含量降低的转基因水稻；所述目的水稻为携带SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所述基因的水稻；所述成熟谷蛋白含量降低的水稻是种子中成熟谷蛋白含量降低。