CN107334735A - 一种眼靶向药物递送系统、眼靶向药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种眼靶向药物递送系统、眼靶向药物组合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种眼靶向药物递送系统、眼靶向药物组合物及其制备方法和应用，所述眼靶向药物递送系统包括双亲性嵌段共聚物和含RGD序列的环状多肽分子，两者之间由共价键连接，所述含RGD序列的环状多肽分子为c(XCRGDCXXX)、c(XRGDCXX)或c(XRGDXXXC)中的任意一种，其中X为任意氨基酸或者不存在，本发明制备得到的眼靶向药物递送系统能够特异性地靶向眼角膜部位，而且能够促进药物渗透角膜进入眼内，提高药物的生物利用度，提高药物的治疗效果。

Description

一种眼靶向药物递送系统、眼靶向药物组合物及其制备方法 和应用
技术领域
本发明属于药物化学技术领域，涉及一种眼靶向药物递送系统、眼靶向药物组合物及其制备方法和应用。
背景技术
眼科疾病所用药物剂型有60％以上的是滴眼液，在眼前段疾病(包括角膜炎、结膜炎、白内障等)的治疗中，滴眼液所占比重更大。由于眼具有的特殊结构特征造成眼球表面及结膜的容留药物量有限，加之角膜的屏障作用和眨眼、流泪等频繁动作，造成了渗透眼内的药物量不足5％，大大降低了滴眼液中药物的生物利用度。因此，眼前段疾病给药的难点在于延长药物在眼球表面的滞留时间和促进药物渗透角膜。
申请号为CN106668860A的中国专利公开了一种靶向眼后段的递药系统及其制剂和制备方法，所述系统包括药物与树枝状聚合物、聚乙二醇、RGD肽和CPP肽的聚合物，可将药物送至眼后段病变部位，但仍存在制备工艺复杂，后处理繁琐等问题，并且眼后段疾病的治疗与眼前段疾病的治疗仍存在较大差距。
因此，有必要开发一种可以靶向治疗眼前段疾病的靶向药物递送系统和药物组合物。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可以延长药物在眼球表面的黏附时间，并且促进药物渗透角膜的眼靶向药物递送系统、眼靶向药物组合物及其制备方法和应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供一种眼靶向药物递送系统，所述眼靶向药物递送系统包括双亲性嵌段共聚物和含RGD序列的环状多肽分子，两者之间由共价键连接，所述含RGD序列的环状多肽分子为c(XCRGDCXXX)、c(XRGDCXX)或c(XRGDXXXC)中的任意一种，其中X为任意氨基酸或者不存在，c表示环状。
本发明所述的眼靶向药物递送系统中含有的RGD序列可以特异性识别眼角膜上皮细胞分泌的整合素蛋白integrinβ1，因此，本发明所述的眼靶向药物递送系统可以提高药物在角膜处的停留时间，并且能够促进药物渗透角膜进入眼内，提高药物的生物利用度，提高药物的治疗效果。
优选地，所述含RGD序列的环状多肽分子为c(GRGDSPKC)。
在本发明所述的环状多肽分子CRGDC、RGDC、RGD、GRGDSPKC表示氨基酸序列。
在本发明中，所述双亲性嵌段共聚物为含有马来酰胺基团的双亲性嵌段共聚物。
优选地，所述双亲性嵌段共聚物为含有马来酰胺基团的如下聚合物中的至少一种：聚己内酯-聚乙二醇(PCL-PEG)、乳酸羟基乙酸共聚物-聚乙二醇(PLGA-PEG)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)或聚乳酸-聚乙二醇(PLA-PEG)；优选含有马来酰胺基团的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)。
在本发明中，所述含RGD序列的多肽与双亲性嵌段共聚物中马来酰胺基团的摩尔比为(1-7):1，例如1:1、1.5:1、2:1、3.4:1、4:1、4.7:1、5:1、6.9:1、7:1等，所述多肽相对过量的情况下能够保证所述双亲性嵌段共聚物均与所述多肽连接。
第二方面，本发明提供了一种如上所述眼靶向药物递送系统的制备方法，所述方法为：将含RGD序列的环状多肽分子和双亲性嵌段共聚物置于缓冲液中，搅拌，得到所述眼靶向药物递送系统。
在本发明中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液(PBS)、羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris-HCl)缓冲液中的一种或至少两种的组合。
优选地，所述缓冲液的pH值为6.5-7.5，例如6.5、6.9、7.0、7.2、7.4、7.5等。
进一步地，所述缓冲溶液中所添加的多肽和双亲性嵌段共聚物的量没有特别的要求，只要能够保证上述两种物质的优选比例即可，优选地，本发明所述多肽和双亲性嵌段共聚物的添加量为1-10mg/mL，例如1mg/mL、1.8mg/mL、2mg/mL、3.6mg/mL、6mg/mL、8.3mg/mL、9mg/mL、10mg/mL等。
在本发明中，所述搅拌为机械搅拌或磁力搅拌，优选为磁力搅拌。
进一步地，所述搅拌的速度为每分钟300-1000转，例如300转、370转、400转、700转、900转、950转、1000转等。
进一步地，所述搅拌在4-25℃下进行，例如4℃、5℃、8℃、9.7℃、11℃、15℃、19℃、20℃、21.5℃、23℃、25℃等。
优选地，所述搅拌的时间为24-60小时，例如24小时、27小时、31小时、32.4小时、37小时、43小时、54.6小时、58小时、60小时等。
本发明中，所述多肽与双亲性嵌段共聚物反应后，应将未连接的多肽除去，并将除去多肽后的溶液进行干燥得到眼角膜靶向的药物递送系统粉末。所述除去多肽的方法和干燥方法为本领域人员公知。例如，所述除去多肽的方法可以为透析法，所述干燥方法可以为冷冻干燥法。
所述透析法是指将所述完成所述接触后的液体置于含有透析膜的管内，并在去离子水中透析，使未连接的多肽从透析膜内分离。所述透析膜可以是截留分子量2000Da以上的产品，例如购自millipore公司，型号为Amicon Ultra-0.5的产品。
本发明所述眼靶向药物递送系统的制备方法工艺简单，易行。
第三方面，本发明提供一种眼靶向药物组合物，所述眼靶向药物组合物包括疏水性眼科药物和如上所述的眼靶向药物递送系统。
优选地，所述疏水性眼科药物选自氟比洛芬、双氯芬酸或曲安奈德中的任意一种或至少两种的组合。
第四方面，本发明提供所述眼靶向药物组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)在有机溶剂中，将含有眼靶向药物递送系统的物质与去离子水接触，形成纳米胶束溶液；
(2)将疏水性眼科药物溶解于有机溶剂，得到疏水性眼科药物溶液；
(3)将步骤(1)得到的纳米胶束溶液与步骤(2)得到的疏水性眼科药物溶液接触，除去有机溶剂，得到所述眼靶向药物组合物的纳米胶束。
优选地，步骤(1)中，相对于每10mg的含有眼靶向药物递送系统的物质，有机溶剂的用量为0.01-0.05mL，例如0.01mL、0.02mL、0.03mL、0.04mL、0.05mL等，去离子水的用量为1-5mL，例如1mL、2mL、3mL、4mL、5mL等。
优选地，所述有机溶剂为甲醇、丙酮或四氢呋喃中的任意一种或至少两种的组合，优选为四氢呋喃。
优选地，所述含有眼靶向药物递送系统的物质中眼靶向药物递送系统的重量百分比含量为10-100％，例如10％、24％、37％、52％、80％、91％、100％等。
优选地，步骤(1)所述接触的条件为：在温度15-40℃(例如15℃、18℃、29℃、30℃、33℃、40℃等)下搅拌40-120分钟(例如40分钟、60分钟、80分钟、90分钟、120分钟等)。
进一步地，所述搅拌的方式为超声波震荡或磁力搅拌。
在本发明中，步骤(2)所述有机溶剂为甲醇、丙酮或四氢呋喃中的任意一种或至少两种的组合，优选四氢呋喃。
优选地，步骤(2)所述疏水性眼科药物与步骤(1)所述含有眼靶向药物递送系统的物质的质量比为1:(8-20)，例如1:8、1:8.5、1:9、1:9.5、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19或1:20。即相对于每1mg的疏水眼科药物，含有眼靶向药物递送系统的物质的用量为8-20mg。
优选地，步骤(2)中相对于每1mg的疏水性眼科药物，所述有机溶剂的用量为0.01-0.05mL，例如0.01mL、0.02mL、0.03mL、0.04mL、0.05mL等。
优选地，步骤(3)所述接触的条件中温度为15-40℃，例如15℃、17℃、22℃、30℃、34℃、40℃等；在所述温度下搅拌16-48小时，例如16小时、19小时、20小时、22小时、27小时、32小时、40小时、48小时等。
进一步地，所述搅拌为机械搅拌或磁力搅拌。
进一步地，所述搅拌的速度为每分钟300-1000转，例如每分钟300转、376转、400转、700转、900转、950转、1000转等。
进一步地，所述除去有机溶剂的方法为真空旋转蒸发，所述旋转蒸发的温度为25-40℃(例如25℃、30℃、32℃、37℃、40℃等)；时间为10-30分钟，例如10分钟、15分钟、20分钟、30分钟等。
在本发明中，所述眼靶向药物组合物的纳米胶束的粒径为15-60nm，例如15nm、20nm、29nm、35nm、41nm、50nm、58nm、60nm。
在本发明中，眼靶向药物组合物的制备方法还包括将有机溶剂挥发后混合液中的游离疏水性眼科药物除去，所述除去游离药物的方法为本领域技术人员所公知，例如，使用0.22μm孔径的滤膜进行过滤分离。
第五方面，本发明所述的眼靶向药物组合物可以应用于制备治疗眼前段疾病的药物中。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明的眼靶向药物递送系统能够特异性地靶向眼角膜部位，并在眼角膜处黏附和富集，能够降低因结膜吸收、眨眼等造成的药物损失；而且能够促进药物渗透角膜进入眼内，提高药物的生物利用度，提高药物的治疗效果，因此是一种能够用于眼部疾病治疗的良好的药物载体系统。本发明提供的眼靶向药物递送系统制备方法工艺简单、易于操作。
本发明的眼靶向药物组合物能够有效地在角膜处富集，并且能够促进疏水性眼科药物穿过角膜进入眼内，有效的作用于病变部位，提高眼部疾病康复率。本发明提供的眼靶向药物组合物的制备方法简单易行。
附图说明
图1为本发明实施例1制备的眼靶向药物组合物的粒径分布图。
图2为本发明实施例1制备的眼靶向药物组合物的电位分布图。
图3为对比例1制备的药物组合物的粒径分布图。
图4为对比例1制备的药物组合物的电位分布图。
图5为本发明实施例1和对比例1制备的药物组合物的流式试验结果图。
图6为本发明实施例1和对比例1制备的药物组合物的细胞摄取试验结果图。
图7为本发明实施例1和对比例1的药物组合物的细胞毒性试验结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
以下实施例中，多肽由上海淘普公司进行合成；DSPE-PEG2000-MAL和DSPE-PEG2000均购自avanti公司，货号分别为880126P和880120P。氟比洛芬、双氯芬酸和曲安奈德购自百灵威科技有限公司，货号为916054、588527、T2308，香豆素6购自sigma公司，货号546283。粒径分布和电位图谱通过Malvern公司的动态光散射激光粒度仪(Zetasizer NanoZS)测定。细胞摄取实验通过流式细胞仪(Life Technology)进行荧光的测定，细胞毒性试验数据通过连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M200)检测后得到。人源角膜上皮细胞株HCEC购自American Type Culture Collection(ATCC)。
以下实施例用于说明本发明提供的眼靶向药物递送系统及眼靶向药物组合物及其制备方法；其中还包含对实施例中眼靶向药物组合物的测试分析。
实施例1
(1)分别称取2mg的c(GRGDSPKC)多肽和8mg的DSPE-PEG2000-MAL(多肽与聚合物中的马来酰胺基的摩尔比为1:1)并将其溶于10mL浓度为10mM的磷酸盐(PBS)缓冲液(pH6.5)中进行接触，接触条件为：4℃下磁力搅拌24小时，搅拌转速300转每分钟，接触结束后的溶液放于载留分子量为2000的透析管中进行透析24小时，除去游离的多肽和盐，透析结束后将溶液冷冻干燥，得到本发明眼靶向药物递送系统的冻干粉。
(2)在试剂瓶中将2mg步骤(1)中制备得到的含有眼靶向药物递送系统的干粉，连同18mg普通药物载体DSPE-PEG2000用20μL四氢呋喃溶解，之后加入含有2mL的去离子水中，在15℃超声波震荡40分钟，得到纳米胶束溶液。
(3)称取2.5mg氟比洛芬药物，溶解于25μL四氢呋喃中，将溶解药物的四氢呋喃溶液逐滴加入步骤(2)获得的纳米胶束溶液中进行接触，接触条件为：15℃磁力搅拌16小时，搅拌速度300转每分钟。得到的溶液在25℃真空旋转蒸发10分钟除尽有机溶剂，并使用0.22μm的滤膜过滤，以除去游离的氟比洛芬药物，得到眼靶向药物组合物的纳米胶束溶液。
将实施例1制备得到的眼靶向药物组合物纳米胶束分别用于粒径分布和电位的测定。
粒径分布测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行粒径分布的测定，得到纳米胶束的平均粒径为21.2nm，如图1所示。小粒径的纳米胶束比表面积更大，有利于使药物均匀地在眼角膜部分分散。
电位测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行电位的测定，如图2所示，其表面电位结果为-14.3mV。药物组合物的表面电位与各组成成分之间的比例有关，一般认为负电荷纳米粒子比正电荷纳米粒子对眼组织相容性更高，所带电荷越高越容易对眼部组织产生毒性。
实施例2
(1)分别称取4mg的c(GRGDSPKC)多肽和8mg的DSPE-PEG2000-MAL(多肽与所述聚合物中的马来酰胺基的摩尔比为2:1)并将其溶于3mL浓度为50mM的羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液(pH 6.5)中进行接触，接触条件为：25℃下磁力搅拌60小时，搅拌转速700转每分钟，接触结束后的溶液放于载留分子量为2000的透析管中进行透析24小时，除去游离的多肽和盐，透析结束后将溶液冷冻干燥，得到本发明眼靶向药物递送系统的冻干粉。
(2)在试剂瓶中将10mg步骤(1)中制备得到的含有眼靶向药物递送系统的干粉用30μL丙酮溶解，之后加入3mL去离子水中，在40℃下以1000转每分钟的速度磁力搅拌60分钟，得到纳米胶束溶液。
(3)称取1mg双氯芬酸药物，溶解于20μL丙酮中，将所述溶解药物的丙酮溶液逐滴加入步骤(2)获得的纳米胶束溶液中进行接触，接触条件为：40℃下磁力搅拌48小时，搅拌速度1000转每分钟。将得到的溶液在30℃真空旋转蒸发15分钟除尽有机溶剂，并使用0.22μm的滤膜过滤，以除去游离的双氯芬酸药物，得到眼靶向药物组合物的纳米胶束溶液。
将实施例2制备得到的眼靶向药物组合物纳米胶束分别用于粒径分布和电位的测定。
粒径分布测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行粒径分布的测定，得到纳米胶束的平均粒径为48.3nm。
电位测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行电位的测定，其表面电位为-6.9mV。
实施例3
(1)分别称取15mg的c(CRGDC)多肽和15mg的DSPE-PEG2000-MAL(多肽与所述聚合物中的马来酰胺基的摩尔比为5:1)并将其溶于6mL浓度为50mM的Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)中进行接触，接触条件为：10℃下机械搅拌60小时，搅拌转速600转每分钟，接触结束后的溶液放于载留分子量为2000的透析管中进行透析24小时，除去游离的多肽和盐，透析结束后将溶液冷冻干燥，得到本发明眼靶向药物递送系统的冻干粉。
(2)将7mg步骤(1)中制备得到的含有眼靶向药物递送系统，连同3mg普通药物载体PCL-PEG2000的干粉一起溶解于40μL甲醇，之后加入3mL的去离子水中在20℃下超声波震荡90分钟，得到纳米胶束溶液。
(3)称取0.5mg曲安奈德药物，溶解于10μL甲醇中，将所述溶解药物的甲醇溶液逐滴加入步骤(2)获得的纳米胶束溶液中进行接触，接触条件为：15℃机械搅拌48小时，搅拌速度1000转每分钟。将得到的溶液在37℃真空旋转蒸发20分钟除尽有机溶剂，并使用0.22μm的滤膜过滤，以除去游离的曲安奈德药物，得到眼靶向药物组合物的纳米胶束溶液。
将实施例3制备得到的眼靶向药物组合物纳米胶束分别用于粒径分布和电位的测定。
粒径分布测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行粒径分布的测定，得到纳米胶束的平均粒径为52.8nm。
电位测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行电位的测定-15.4mV。
实施例4
(1)分别称取21mg的c(RGDC)多肽和15mg的DSPE-PEG2000-MAL(多肽与所述聚合物中的马来酰胺基的摩尔比为7:1)并将其溶于3.6mL浓度为50mM的羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液(pH 7.0)中进行接触，接触条件为：20℃下磁力搅拌40小时，搅拌转速500转每分钟，接触结束后的溶液放于载留分子量为2000的透析管中进行透析24小时，除去游离的多肽和盐，透析结束后将溶液冷冻干燥，得到本发明眼靶向药物递送系统的冻干粉。
(2)将4mg步骤(1)中制备得到的含有眼靶向药物递送系统，连同6mg普通药物载体PLGA-PEG的干粉一起溶解于50μL四氢呋喃，之后加入5mL去离子水中，在30℃下以700转每分钟的速度磁力搅拌100分钟，得到纳米胶束溶液。
(3)称取1mg氟比洛芬药物，溶解于50μL丙酮中，将所述溶解药物的丙酮溶液逐滴加入步骤(2)获得的纳米胶束溶液中进行接触，接触条件为：30℃下磁力搅拌30小时，搅拌速度600转每分钟。将得到的溶液在40℃真空旋转蒸发30分钟除尽有机溶剂，并使用0.22μm的滤膜过滤，以除去游离的氟比洛芬药物，得到眼靶向药物组合物的纳米胶束溶液。
将实施例4制备得到的眼靶向药物组合物纳米胶束分别用于粒径分布和电位的测定。
粒径分布测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行粒径分布的测定，得到纳米胶束的平均粒径为18.1nm。
电位测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行电位的测定，结果为-14.9mV。
实施例5
(1)分别称取6mg的c(GRGDSPKC)多肽和8mg的DSPE-PEG2000-MAL(多肽与所述聚合物中的马来酰胺基的摩尔比为3:1)并将其溶于10mL浓度为10mM的磷酸盐(PBS)缓冲液(pH7.0)中进行接触，接触条件为：15℃下机械搅拌30小时，搅拌转速1000转每分钟，接触结束后的溶液放于载留分子量为2000的透析管中进行透析24小时，除去游离的多肽和盐，透析结束后将溶液冷冻干燥，得到本发明眼靶向药物递送系统的冻干粉。
(2)将5mg步骤(1)中制备得到的含有眼靶向药物递送系统的干粉，连同5mg普通药物载体DSPE-PEG2000一起溶解于20μL甲醇中，之后加入4mL去离子水中在15℃磁力搅拌120分钟，搅拌转速300转每分钟，得到纳米胶束溶液。
(3)称取1.25mg氟比洛芬药物，溶解于50μL四氢呋喃中，将溶解药物的四氢呋喃溶液逐滴加入步骤(2)获得的纳米胶束溶液中进行接触，接触条件为：15℃下机械搅拌20小时，搅拌速度500转每分钟。将得到的溶液在27℃真空旋转蒸发20分钟除尽有机溶剂，并使用0.22μm的滤膜过滤，以除去游离的氟比洛芬药物，得到眼靶向药物组合物的纳米胶束溶液。
将实施例5制备得到的眼靶向药物组合物纳米胶束分别用于粒径分布和电位的测定。
粒径分布测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行粒径分布的测定，得到纳米胶束的平均粒径为30.5nm。
电位测定：使用动态光散射激光粒度仪对实施例中的药物组合物进行电位的测定，结果为-13.7mV。
对比例1
本对比例用于说明使用CN103936829A专利所公开的CRGDK多肽所得到的药物递送系统及药物组合物的制备。
按照实施例1的方法进行药物递送系统的制备以及药物组合物的制备，其中不同之处在于，步骤(1)中，将c(GRGDSPKC)多肽替换为c(CRGDK)多肽。
将对比例1制备得到的药物组合物纳米胶束分别用于粒径分布和电位的测定。
粒径分布测定：使用动态光散射激光粒度仪对对比例1中的药物组合物进行粒径分布的测定，得到对比例1纳米胶束的平均粒径为14.82nm，如图3。
电位测定：使用动态光散射激光粒度仪对对比例1中的药物组合物进行电位的测定，结果为-3.3mV，如图4。
对比例1制备的药物组合物与实施例1制备的药物组合物的粒径分布和电位测定结果的对比可以看出，对比例1药物组合物的粒径较实施例1药物组合物偏小，但电位偏高。
实施例6
本实施例将对实施例1和对比例1进行药物组合物细胞摄取分析，具体步骤如下：
分别按照实施例1和对比例1的步骤制备各组药物组合物，荧光分子香豆素6替代现有药物制备荷载香豆素6的药物组合物。选用人源角膜上皮细胞HCEC用于实施例1和对比例1的药物组合物细胞摄取实验，按照文献(细胞培养，司徒镇强，世界图书出版公司，1996年)中的方法培养HCEC细胞，将HCEC接种于六孔细胞板，每孔内接种2×105个细胞，培养24小时后，各孔中分别加入香豆素6终浓度为1μg/mL的实施例1和对比例1制备的药物组合物纳米胶束，与细胞共同培养0.5小时，之后消化处理过的细胞，制成单细胞悬液，根据文献(Functionalized nanoscale micelles improve drug delivery for cancer therapyin vitro and in vivo,nano letters,2013年出版)中的方法，分别使用流式细胞仪进行荧光强度的检测、激光共聚焦显微镜对细胞进行拍照，设未加任何纳米胶束处理的细胞为阴性对照组。
流式细胞仪进行荧光强度的定量检测结果如图5所示，实施例1制备的眼靶向纳米胶束与角膜上皮细胞孵育短时间(0.5小时)后细胞荧光强度值远高于对比例1制备的药物组合物被细胞摄取后的荧光强度值，说明实施例1被角膜细胞摄取更多，具有细胞靶向优势。
激光共聚焦显微镜测试结果如图6所示，结果表明，实施例1制备的眼靶向纳米胶束与角膜上皮细胞孵育短时间(0.5小时)内即能被细胞大量摄取，细胞质及核内均可见纳米胶束的强绿色荧光；对比例1制备的药物组合物与角膜细胞孵育0.5h后也有部分被角膜细胞摄取，但摄取的量远不如实施例制备的药物组合物，且荧光较弱，可能与CRGDK和RGDSPKC所识别的细胞表面配体不同有关，前者主要为神经菌毛素-1受体，后者为整合素-β1受体，而角膜细胞广泛表达整合素-β1受体，神经菌毛素-1受体则多在肿瘤细胞表达过量。
实施例7
本实施例将对实施例1和对比例1进行药物组合物细胞毒性测试分析，具体步骤如下：
选用人源角膜上皮细胞HCEC实施药物组合物的细胞毒性测试实验。按照文献(细胞培养，司徒镇强，世界图书出版公司，1996年)中的方法培养HCEC细胞，将细胞接种于96孔细胞板，而后，分别加入实施例1和对比例1制备的药物组合物与细胞共同培养，游离药物氟比洛芬组为对照组，培养48小时后按照文献(细胞培养，司徒镇强，世界图书出版公司，1996年)中的方法(MTT法)检测细胞存活率(阴性对照组未加任何药物处理，细胞存活率按100％计算)。
测试结果如图7，结果表明，氟比洛芬药物浓度在0-15μg/mL范围内时，游离氟比洛芬组和眼靶向氟比洛芬纳米胶束组的细胞存活率均在80％以上，说明本发明制备的眼靶向药物组合物对角膜细胞的生物相容性良好，不会引起眼部的刺激和毒性；而对比例制备的药物组合物在氟比洛芬浓度为0-15μg/mL范围内时，对细胞毒性大，说明对比例1制备的药物组合物对角膜细胞的生物相容性欠佳，可能会引起眼部刺激和毒性。
对实施例2-5同样进行药物组合物细胞摄取试验和药物组合物细胞毒性测试，均得到类似实施例1的结果。
由实施例的测试结果可以看出，本发明提供的眼靶向药物递送系统和眼靶向药物组合物属于纳米胶束范畴，眼靶向药物组合物相较于非靶向药物而言，可以很好地与角膜细胞结合，并且相比于非靶向药物，眼靶向药物组合物能够被角膜上皮细胞摄取更多。因此，本发明提供的眼靶向药物组合物能够特异性地靶向眼角膜部位，并在眼角膜处黏附和富集，降低因结膜吸收、眨眼等造成的药物损失；而且能够促进药物渗透角膜进入眼内，提高药物的生物利用度，提高药物的治疗效果。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种眼靶向药物递送系统，其特征在于，所述系统包括双亲性嵌段共聚物和含RGD序列的环状多肽分子，两者之间由共价键连接，所述含RGD序列的环状多肽分子为c(XCRGDCXXX)、c(XRGDCXX)或c(XRGDXXXC)中的任意一种，其中X为任意氨基酸或者不存在，c表示环状。
2.根据权利要求1所述的眼靶向药物递送系统，其特征在于，所述含RGD序列的环状多肽分子为c(GRGDSPKC)。
3.根据权利要求1或2所述的眼靶向药物递送系统，其特征在于，所述双亲性嵌段共聚物为含有马来酰胺基团的双亲性嵌段共聚物；
优选地，所述双亲性嵌段共聚物为含有马来酰胺基团的如下聚合物中的至少一种：聚己内酯-聚乙二醇、乳酸羟基乙酸共聚物-聚乙二醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇或聚乳酸-聚乙二醇；优选为含有马来酰胺基团的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的眼靶向药物递送系统，其特征在于，所述含RGD序列的环状多肽分子与双亲性嵌段共聚物中马来酰胺基团的摩尔比为(1-7):1。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的眼靶向药物递送系统的制备方法，其特征在于，所述方法为：将含RGD序列的环状多肽分子和双亲性嵌段共聚物置于缓冲液中，搅拌，得到所述眼靶向药物递送系统。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液、三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液中的一种或至少两种的组合；
优选地，相对于每毫升所述缓冲液，所述含RGD序列的环状多肽分子与双亲性嵌段共聚物的添加总量为1-10mg；
优选地，所述缓冲液的pH值为6.5-7.5；
优选地，所述搅拌为机械搅拌或磁力搅拌，优选为磁力搅拌；
优选地，所述搅拌的速度为每分钟300-1000转；
优选地，所述搅拌在4-25℃下进行；
优选地，所述搅拌的时间为24-60小时。
7.一种眼靶向药物组合物，其特征在于，所述眼靶向药物组合物包括疏水性眼科药物和如上所述的眼靶向药物递送系统；
优选地，所述疏水性眼科药物选自氟比洛芬、双氯芬酸或曲安奈德中的任意一种或至少两种的组合。
8.根据权利要求7所述的眼靶向药物组合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)在有机溶剂中，将含有眼靶向药物递送系统的物质与去离子水接触，形成纳米胶束溶液；
(2)将疏水性眼科药物溶解于有机溶剂，得到疏水性眼科药物溶液；
(3)将步骤(1)得到的纳米胶束溶液与步骤(2)得到的疏水性眼科药物溶液接触，除去有机溶剂，得到所述眼靶向药物组合物的纳米胶束。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，相对于每10mg的含有眼靶向药物递送系统的物质，所述有机溶剂的用量为0.01-0.05mL；去离子水的用量为1-5mL；
优选地，所述有机溶剂为甲醇、丙酮或四氢呋喃中的任意一种或至少两种的组合，优选为四氢呋喃；
优选地，所述含有眼靶向药物递送系统的物质中眼靶向药物递送系统的重量百分比含量为10-100％；
优选地，步骤(1)所述接触的条件为：在温度15-40℃下搅拌40-120分钟；
优选地，所述搅拌的方式为超声波震荡或磁力搅拌；
优选地，步骤(2)所述疏水性眼科药物与步骤(1)所述含有眼靶向药物递送系统的物质的质量比为1:(8-20)；
优选地，步骤(2)所述有机溶剂为甲醇、丙酮或四氢呋喃中的任意一种或至少两种的组合，优选四氢呋喃；
优选地，步骤(2)中相对于每1mg的疏水性眼科药物，所述有机溶剂的用量为0.01-0.05mL；
优选地，步骤(3)所述接触的条件为：在温度15-40℃下搅拌16-48小时；优选地，所述搅拌为机械搅拌或磁力搅拌；
优选地，所述搅拌的速度为每分钟300-1000转；
优选地，所述除去有机溶剂的方法为真空旋转蒸发，所述真空旋转蒸发的温度为25-40℃，时间为10-30分钟；
优选地，所述眼靶向药物组合物的纳米胶束的粒径为15-60nm。
10.根据权利要求7所述的眼靶向药物组合物在制备治疗眼前段疾病的药物中的应用。
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