CN107328941A - 一种可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片 - Google Patents
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Abstract
本发明具体公开了一种可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，包括抗体芯片，细胞粘附因子标准品，细胞粘附因子标准品混合物，生物素标记的细胞粘附因子检测抗体，生物素标记的细胞粘附因子检测抗体混合物；荧光素标记的链霉亲和素。本发明实现一次可以检测十个细胞粘附因子，并且所检测的细胞粘附因子灵敏度可达单因子的ELISA检测灵敏度。本发明的抗体芯片试剂盒克服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、灵敏度低等缺陷，具有廉价、便利、灵敏、准确、高通量、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片。
背景技术
细胞粘附因子(cell adhesion molecules,CAM)是位于细胞表面或细胞基质中的糖蛋白，并以受体和配体结合的形式发挥作用，是众多介导细胞间或细胞与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)间相互接触和结合分子的统称。细胞粘附因子包括免疫球蛋白超族、整合素族、选择素族和血管附着素族。粘附分子使细胞与细胞间，细胞与基质间发生粘附，参与细胞的识别，活化和信号传导，细胞增值与分化，细胞的伸展与运动，使免疫应答，炎症发生，凝血，肿瘤转移，创伤愈合等一系列重要生理和病理过程的分子基础。
检测细胞粘附因子常用的方法包括生物学检测法，免疫法，分子生物学及流式细胞术。生物学检测法比较敏感，又可直接测定生物学功能，是最可靠的方法，适用于各种实验目的，是科研部门最常用的技术，但需要长期培养依赖性细胞株，检测耗时长，步骤繁杂，影响因素多，不容易熟练掌握。免疫学检测法比较简单，迅速，重复性好，但假阳性率高，每次只能检测一个细胞粘附因子。分子生物学法只能检测基因表达情况，不能直接提供有关因子的浓度及活性等资料，主要用于机制探讨。流式细胞术是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或颗粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞进行定性或定量检测的一种细胞分析技术。由于流式细胞术需要昂贵的仪器和专业的操作人员，所以并没有得到广泛应用。
因此，急需开发一种新型的细胞粘附因子试剂盒，实现高通量，快速检测。
发明内容
针对现有技术的上述不足，本发明提供一种可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，以解决上述的技术问题。
本发明是通过以下技术方案实现：
一种可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，包括抗体芯片，细胞粘附因子标准品，细胞粘附因子标准品混合物，生物素标记的细胞粘附因子检测抗体，生物素标记的细胞粘附因子检测抗体混合物；荧光素标记的链霉亲和素；所述抗体芯片以含有烷基糖苷的亲水试剂处理的固相载体，且细胞粘附因子的特异性抗体或者抗体混合物在4～10℃、20～45％的湿度条件下点样到固相载体上。
附图说明
图1是本发明的抗体芯片的抗体和标志物的排列示意图。
具体实施方式
结合以下实施例对本发明作进一步描述。
一种可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，如图1所示，包括抗体芯片，细胞粘附因子标准品，细胞粘附因子标准品混合物，生物素标记的细胞粘附因子检测抗体，生物素标记的细胞粘附因子检测抗体混合物；荧光素标记的链霉亲和素；所述抗体芯片以含有烷基糖苷的亲水试剂处理的固相载体，且细胞粘附因子的特异性抗体或者抗体混合物在4～10℃、20～45％的湿度条件下点样到固相载体上。
优选地，所述固相载体包括硝酸纤维素膜、PVDF膜或者玻片。
优选地，所述细胞粘附因子检测抗体包括纤维连接蛋白受体(FN)，层粘连蛋白受体(LN)，淋巴细胞功能相关分子-1(LFA-1)，透明连接蛋白受体(LRP)，血小板蛋白(GpIb)，内皮性白细胞粘附因子-1(ELAM-1)，血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)，黏膜血管粘附素(HCAM)，外周淋巴结血管粘附素(LAM-1)，钙粘附蛋白E(E-Cadherin)特异抗体。
优选地，细胞粘附因子检测抗体混合物为纤维连接蛋白受体(FN)，层粘连蛋白受体(LN)，淋巴细胞功能相关分子-1(LFA-1)，透明连接蛋白受体(LRP)，血小板蛋白(GpIb)，内皮性白细胞粘附因子-1(ELAM-1)，血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)，黏膜血管粘附素(HCAM)，外周淋巴结血管粘附素(LAM-1)，钙粘附蛋白E(E-Cadherin)的特异性抗体混合物。
优选地，所述荧光素标记的链霉亲和素包括，荧光素Cy3标记的链霉亲和素和荧光素Cy5标记的链霉亲和素。
优选地，所述亲水试剂为质量分数为0.01～0.5％的烷基糖苷、0.01～0.5％的甘油，0.01～0.1％的聚乙二醇2000的去离子水溶液；亲水试剂处理玻片的方法为将玻片在亲水试剂中浸泡1-3分钟，4℃冷冻干燥即可。
优选地，所述细胞粘附因子检测抗体和细胞粘附因子检测抗体混合物在4℃、30％的湿度条件下点样到固相载体上。
优选地，所述亲水试剂为质量分数为0.09％的烷基糖苷、0.08％的甘油，0.1％的聚乙二醇2000的去离子水溶液；亲水试剂处理玻片的方法为将玻片在亲水试剂中浸泡1-3分钟，4℃冷冻干燥即可。
本发明实现一次可以检测十个细胞粘附因子，并且所检测的细胞粘附因子灵敏度可达单因子的ELISA检测灵敏度。本发明的抗体芯片试剂盒克服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、灵敏度低等缺陷，具有廉价、便利、灵敏、准确、高通量、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。
本发明的抗体芯片试剂盒尤其适用于纤维连接蛋白受体(FN)，层粘连蛋白受体(LN)，淋巴细胞功能相关分子-1(LFA-1)，透明连接蛋白受体(LRP)，血小板蛋白(GpIb)，内皮性白细胞粘附因子-1(ELAM-1)，血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)，黏膜血管粘附素(HCAM)，外周淋巴结血管粘附素(LAM-1)，钙粘附蛋白E(E-Cadherin)，这10种细胞粘附因子对应特异性抗体的组合方式。因为，不同的细胞粘附因子的特异性抗体在本发明所述芯片检测系统中的灵敏性是不同的，所以，如果将一些低灵敏性的细胞粘附因子抗体与一些高灵敏性的细胞粘附因子抗体组合，会造成低灵敏性的细胞粘附因子的漏检。
本发明通过分别使用单独的细胞粘附因子的抗体和多种细胞粘附因子的抗体混合物同时排列在同一个检测板上，且使用两种荧光素Cy3标记的链霉亲和素和荧光素Cy5标记的链霉亲和素。该检测板的矩阵排列，保证检测结果更加准确客观。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (8)
1.一种可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，其特征在于，包括抗体芯片，细胞粘附因子标准品，细胞粘附因子标准品混合物，生物素标记的细胞粘附因子检测抗体，生物素标记的细胞粘附因子检测抗体混合物；荧光素标记的链霉亲和素；所述抗体芯片以含有烷基糖苷的亲水试剂处理的固相载体，且细胞粘附因子的特异性抗体或者抗体混合物在4～10℃、20～45％的湿度条件下点样到固相载体上。
2.根据权利要求1所述的可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，其特征在于，所述固相载体包括硝酸纤维素膜、PVDF膜或者玻片。
3.根据权利要求2所述的可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，其特征在于，所述细胞粘附因子检测抗体包括纤维连接蛋白受体(FN)，层粘连蛋白受体(LN)，淋巴细胞功能相关分子-1(LFA-1)，透明连接蛋白受体(LRP)，血小板蛋白(GpIb)，内皮性白细胞粘附因子-1(ELAM-1)，血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)，黏膜血管粘附素(HCAM)，外周淋巴结血管粘附素(LAM-1)，钙粘附蛋白E(E-Cadherin)特异抗体。
4.根据权利要求3所述的可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，其特征在于，细胞粘附因子检测抗体混合物为纤维连接蛋白受体(FN)，层粘连蛋白受体(LN)，淋巴细胞功能相关分子-1(LFA-1)，透明连接蛋白受体(LRP)，血小板蛋白(GpIb)，内皮性白细胞粘附因子-1(ELAM-1)，血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)，黏膜血管粘附素(HCAM)，外周淋巴结血管粘附素(LAM-1)，钙粘附蛋白E(E-Cadherin)的特异性抗体混合物。
5.根据权利要求4所述的可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，其特征在于，所述荧光素标记的链霉亲和素包括，荧光素Cy3标记的链霉亲和素和荧光素Cy5标记的链霉亲和素。
6.根据权利要求5所述的可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，其特征在于，所述亲水试剂为质量分数为0.01～0.5％的烷基糖苷、0.01～0.5％的甘油，0.01～0.1％的聚乙二醇2000的去离子水溶液；亲水试剂处理玻片的方法为将玻片在亲水试剂中浸泡1-3分钟，4℃冷冻干燥即可。
7.根据权利要求6所述的可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，其特征在于，所述细胞粘附因子检测抗体和细胞粘附因子检测抗体混合物在4℃、30％的湿度条件下点样到固相载体上。
8.根据权利要求7所述的可同时检测多种细胞粘附因子的抗体芯片，其特征在于，所述亲水试剂为质量分数为0.09％的烷基糖苷、0.08％的甘油，0.1％的聚乙二醇2000的去离子水溶液；亲水试剂处理玻片的方法为将玻片在亲水试剂中浸泡1-3分钟，4℃冷冻干燥即可。
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