CN107295938A - 红豆杉的种植方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了红豆杉的种植方法，包括：1)栽培环境选择；2)定植、造林：在6月至12月，以带状的方式对林地进行清理整地，深翻细耕，整成菜畦状，同时施充足的基肥，随深翻混均匀，种植红豆杉种苗，苗木不能倾斜，根系顺向水平展开，覆盖上土，避免窝根，然后在穴面上覆盖一些松土，让其微高于地面，防止雨季积水；3)抚育管理：定植1周后若发现死株及时补上，定植成活后第1年每周施1次营养液，以把树根浇透为准，定时施肥，及时的松土和除草，注重排水，防止幼树被积水浸泡，导致幼树被高温伤害或死亡；4)林业有害生物防治。本发明通过给红豆杉施加特别的营养液，可以增加红豆杉中的紫杉醇含量。

Description

红豆杉的种植方法
技术领域
本发明涉及林木栽培技术领域，尤其涉及红豆杉的种植方法。
背景技术
红豆杉属(Taxus L.)植物为红豆杉科常绿乔木或灌木，全世界共11种，分布于北半球的温带及亚热带地区。高山林等在1996年搜集了国内外7种紫杉醇含量较高的红豆杉种，如短叶红豆杉(T.brevifolia，加拿大温哥华)、曼地亚红豆杉(T.media，加拿大维多利亚大学校园)、欧洲红豆杉(T.baccata，朝鲜)、东北红豆杉(T.cuspida，中国东北)、朝鲜红豆杉(T.kereoensis，朝鲜)、云南红豆杉(T.wallichiana，中国云南省)、西藏红豆杉杉(Taxus wallichi-ann，中国西藏地区)，发现加拿大短叶红豆杉树皮中紫杉醇含量最高(短叶红豆杉是美国癌症研究所最早发现含紫杉醇的一个种)，也是迄今国内外报道的紫杉醇含量最高的一个种；曼地亚红豆杉树皮中紫杉醇含量较高，仅次于短叶红豆杉。谈锋等研究引种9个月后的2个北美红豆杉(4a生)和南方红豆杉(T.chinesensia var.Mairei)(20a生)的叶片，测定结果表明：4a生北美红豆杉叶片中紫杉醇含量为0.051％，高于云南红豆杉树皮中紫杉醇的含量(0.015-0.03％)；北美红豆杉叶片中紫杉醇含量为0.017％；而20a生南方红豆杉叶片中未测出紫杉醇。
我国红豆杉资源中，以东北红豆杉和云南红豆杉中的紫杉醇含量较高，其中东北红豆杉叶中10-脱乙酰巴卡丁Ⅲ的含量也较高，可加以提取作为半合成紫杉醇和多烯紫杉醇的前体。云南红豆杉树皮中含有较高的三尖杉宁碱。苏应娟等研究发现：南方红豆杉除枝条中紫杉醇含量稍低于东北红豆杉(T.cuspida)外，皮和叶中紫杉醇含量都稍高于东北红豆杉；其紫杉醇含量远远高于云南红豆杉。王达明认为，云南红豆杉中紫杉醇含量低于东北红豆杉。但郑德勇认为，云南红豆杉样品中紫杉醇含量最高，树木各部位的紫杉醇平均含量达1.49x10-4，其次是南方红豆杉和东北红豆杉。
国外文献报道，部分红豆杉样品中紫杉醇及其衍生物含量极低，甚至检测不到；而部分样品中紫杉醇含量高达0.05％，三尖杉宁碱含量达0.22％，巴卡丁含量达0.21％。同时，研究者发现紫杉醇含量最高的样品为一些罕见的品种，如佛罗里达红豆杉和墨西哥红豆杉(T.floridana).10-脱乙酰巴卡丁Ⅲ含量高的样品为佛罗里达红豆杉、墨西哥红豆杉、云南红豆杉、加拿大红豆杉(T.canadensis)，以及几个欧洲红豆杉的栽培种。Veronika etal检测了匈牙利各种红豆杉枝叶中紫杉醇的含量，结果表明欧洲红豆杉的枝叶中紫杉醇含量最高。欧洲红豆杉是欧洲最常见的红豆杉品种，其枝叶中10-脱酰基巴卡丁含量较髙。
程广有等研究了我国东北红豆杉天然群体紫杉醇含量的变化规律，结果表明：东北红豆杉群体之间紫杉醇含量存在显著差异；群体内单株间紫杉醇含量的变化幅度与群体间的相当，在同一群体内单株紫杉醇最高含量是最低含量的4.3倍。项伟等研究了不同产地云南红豆杉紫杉醇的含量，结果表明：云南红豆杉的树皮中紫杉醇含量个体间差异为9.4倍。从上述结果我们不难发现，红豆杉紫杉醇含量波动很大，因此难以进行大面积规范化种植。程广有等认为群体选择或单株选择红豆杉可望获得较大遗传增益。
针对如何提高红豆杉中紫杉醇的含量的种植研究，很有必要。
发明内容
本发明的目的是提供红豆杉的种植方法，通过在种植的过程中持续施加营养液，以达到提高红豆杉中紫杉醇含量的目的。
本发明所述技术方案，是通过如下技术步骤来实现的：
红豆杉的种植方法，包括如下步骤：
1)栽培环境：选择广西桂林海拔600-1000m，地形平缓、坡度小于35°、土层疏松、深厚、排水便利、湿润、富含有机质和酸性土壤的土地或者山地；
2)定植、造林：在6月至12月，以带状的方式对林地进行清理整地，深翻细耕，整成菜畦状，同时施充足的基肥，随深翻混均匀，种植红豆杉种苗，苗木不能倾斜，根系顺向水平展开，覆盖上土，避免窝根，然后在穴面上覆盖一些松土，让其微高于地面，防止雨季积水；
3)抚育管理：定植1周后若发现死株及时补上，定植成活后第1年每周施1次营养液，以把树根浇透为准，定时施肥，及时的松土和除草，注重排水，防止幼树被积水浸泡，导致幼树被高温伤害或死亡；
4)林业有害生物防治；
步骤3)所述的营养液，通过如下制备方法得到：
①原料处理：将红豆杉鲜全株或鲜枝叶清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，用10mm网孔粉碎机粉碎，粉碎粒度为2-10mm，然后放入高压罐中，加入0.3倍重量份的纯净水，加压至4kgf/cm2，使其压力均匀，并保持15min，瞬间恢复常压；
②提取：将步骤①得到的粉碎原料加入2倍重量的甲醇加热提取，45℃提取2次，每次2h，过滤，合并浓缩液，浓缩，温度控制≤50℃，真空控制在-0.08±0.01MPa，浓缩至0.95-1.05g/ml，得到浓缩提取液，检测紫杉醇含量；
③双水相萃取：对步骤②得到浸膏进行双水相萃取，浸膏和双水相萃取液按照1:1.25的体积比，获得萃取上相和萃取下相，双水相萃取所使用的双水相体系由聚乙二醇、氯化钠和水构成，聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百分比为15％，氯化钠在所述双水相体系中的质量百分比为15％，余量为水，所述聚乙二醇的重均分子量为8000；
④将步骤③获得的萃取水相，采用截留分子量为1000-100000的超滤膜脱盐，得到。
本发明步骤2)所述的红豆杉种苗，优选人工培育的2.5年生云南红豆杉扦插苗，地径在0.3cm以上，苗高在50cm以上的一级苗，或者是人工培育的南方红豆杉1.5年生苗，平均苗高为25cm、平均地径为0.08cm的营养袋苗。
步骤2)所述的整成菜畦状，优选规格为40cmx40cmx30cm；所述的种植，优选株行距离为0.4mx1.5m，密度1.65万株/hm2。
步骤3)所述的定时施肥，优选定植成活后第1年每周施1次清粪水，施清粪水以把树根浇透为准，第2年每两周施1次清粪水，施清粪水以把树根浇透为准，每月施1次复合肥，每株施200g，环施。
步骤3)所述的营养液，优选稀释80-100倍使用。
步骤3)所述的抚育管理，是指刚种植的幼苗小，苗木不高，生长缓慢，必须要加强培育管理，促使其茁长成长，一是要注意及时的松土和除草，在8月至10月，为最佳的松土、除草时间，注意不要伤害幼树，二是要注重排水，防止幼树被积水浸泡，导致幼树被高温伤害或死亡。
步骤4)所述的林业有害生物防治，是指红豆杉在雨季时容易发生根茎腐病以及烂根，按时的喷洒70％敌克松500-800倍液进行防御和治疗；而在旱季容易发生叶桔病、赤桔病等，用1％的波尔多液进行喷洒预防；针对蝗虫食叶的现象，及时的喷洒敌百虫500-800倍液防御；针对蜗牛的危害，用蜗克星诱集触杀和喂杀，禁止使用滴滴涕等具有高残留、致癌、剧毒、慢性毒药的农药来进行病虫害防治。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、我国红豆杉资源中，以东北红豆杉和云南红豆杉中的紫杉醇含量较高，南方红豆杉中的紫杉醇含量较低，大约为0.01-0.07％，平均0.015％(质量分数)。不同红豆杉中紫杉醇的含量和树龄、温度、湿度、光照、种植地海拔等都有关系。本发明通过给红豆杉施加特别的营养液，可以增加红豆杉中的紫杉醇含量。
2、现有技术中，工业上粗提紫杉醇多采用粉碎的红豆杉枝叶经甲醇反复提取后，浓缩成浸膏，以二氯甲烷、三氯甲烷、醋酸乙酯、石油醚、乙酸乙酯等萃取，经过这样的萃取，得到的有机相送去分离紫杉醇，而得到的另外一相含有甲醇，无法作为营养液用于红豆杉栽培。本发明的营养液来源于申请人提取紫杉醇后的工艺废弃物，申请人提取紫杉醇，采用双水相萃取后，得到的有机相，进入柱层析分离紫杉醇的步骤，而双水相萃取后，得到的水相，原来是处理后排放掉，后面申请人尝试着用于紫杉醇的种植，结果效果很好，不仅可以提高红豆杉中紫杉醇的含量，还可以减少污水排放，一举两得。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例：
红豆杉的种植方法，包括如下步骤：
1)栽培环境：选择广西桂林海拔600-1000m，地形平缓、坡度小于35°、土层疏松、深厚、排水便利、湿润、富含有机质和酸性土壤的土地或者山地；
2)定植、造林：在6月至12月，以带状的方式对林地进行清理整地，深翻细耕，整成菜畦状，规格为40cmx40cmx30cm，株行距离为0.4mx1.5m，密度1.65万株/hm2；同时施充足的基肥，随深翻混均匀，种植红豆杉种苗，人工培育的2.5年生云南红豆杉扦插苗，地径在0.3cm以上，苗高在50cm以上的一级苗，或者是人工培育的南方红豆杉1.5年生苗，平均苗高为25cm、平均地径为0.08cm的营养袋苗，苗木不能倾斜，根系顺向水平展开，覆盖上土，避免窝根，然后在穴面上覆盖一些松土，让其微高于地面，防止雨季积水；
3)抚育管理：定植1周后若发现死株及时补上，定植成活后第1年每周施1次营养液，以把树根浇透为准，定时施肥，定植成活后第1年每周施1次清粪水，施清粪水以把树根浇透为准，第2年每两周施1次清粪水，施清粪水以把树根浇透为准，每月施1次复合肥，每株施200g，环施，及时的松土和除草，注重排水，防止幼树被积水浸泡，导致幼树被高温伤害或死亡；
4)林业有害生物防治：红豆杉在雨季时容易发生根茎腐病以及烂根，按时的喷洒70％敌克松500-800倍液进行防御和治疗；而在旱季容易发生叶桔病、赤桔病等，用1％的波尔多液进行喷洒预防；针对蝗虫食叶的现象，及时的喷洒敌百虫500-800倍液防御；针对蜗牛的危害，用蜗克星诱集触杀和喂杀，禁止使用滴滴涕等具有高残留、致癌、剧毒、慢性毒药的农药来进行病虫害防治；
步骤3)所述的营养液，通过如下制备方法得到：
①原料处理：将红豆杉鲜全株或鲜枝叶清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，用10mm网孔粉碎机粉碎，粉碎粒度为2-10mm，然后放入高压罐中，加入0.3倍重量份的纯净水，加压至4kgf/cm2，使其压力均匀，并保持15min，瞬间恢复常压；
②提取：将步骤①得到的粉碎原料加入2倍重量的甲醇加热提取，45℃提取2次，每次2h，过滤，合并浓缩液，浓缩，温度控制≤50℃，真空控制在-0.08±0.01MPa，浓缩至0.95-1.05g/ml，得到浓缩提取液，检测紫杉醇含量；
③双水相萃取：对步骤②得到浸膏进行双水相萃取，浸膏和双水相萃取液按照1:1.25的体积比，获得萃取上相和萃取下相，双水相萃取所使用的双水相体系由聚乙二醇、氯化钠和水构成，聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百分比为15％，氯化钠在所述双水相体系中的质量百分比为15％，余量为水，所述聚乙二醇的重均分子量为8000；
④将步骤③获得的萃取水相，采用截留分子量为1000-100000的超滤膜脱盐，得到，稀释80-100倍使用。
对比例：
种植方法同实施例，没有使用营养液。
实验例：
紫杉醇的检测：将红豆杉鲜枝叶清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，用10mm网孔粉碎机粉碎，粉碎粒度为2-10mm，检测紫杉醇含量。取适量样品，精密称定，用甲醇(色谱纯)溶解于10ml或25ml容量瓶中，于超声波超声3-5min完全溶解，定容至刻度。取一定量溶解后的样品，于高速离心机10000rpm离心5min。取离心后的上清液适量，用注射器通过0.45μm滤膜滤过，注入样品瓶中，待检测。利用高效液相色谱仪对待检测样品进行测定。检测条件：进样量为5μl，C18柱(250X4.6mm)，柱温25℃，乙腈－水(34：69)等度洗脱10min，再以每分钟1.75％的速度提高乙腈比例至乙腈－水(45：55)，洗脱至目标物质完全出峰，得峰面积。利用外标法进行定量，按干燥品计，紫杉醇含量不得小于0.3％。
地点：桂林兴安山区，海拔800-1000m
当年的6-7月定植，第二年的11-12月取鲜枝叶检测。

Claims (5)

1.红豆杉的种植方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)栽培环境：选择广西桂林海拔600-1000m，地形平缓、坡度小于35°、土层疏松、深厚、排水便利、湿润、富含有机质和酸性土壤的土地或者山地；
2)定植、造林：在6月至12月，以带状的方式对林地进行清理整地，深翻细耕，整成菜畦状，同时施充足的基肥，随深翻混均匀，种植红豆杉种苗，苗木不能倾斜，根系顺向水平展开，覆盖上土，避免窝根，然后在穴面上覆盖一些松土，让其微高于地面，防止雨季积水；
3)抚育管理：定植1周后若发现死株及时补上，定植成活后第1年每周施1次营养液，以把树根浇透为准，定时施肥，及时的松土和除草，注重排水，防止幼树被积水浸泡，导致幼树被高温伤害或死亡；
4)林业有害生物防治；
步骤3)所述的营养液，通过如下制备方法得到：
①原料处理：将红豆杉鲜全株或鲜枝叶清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，用10mm网孔粉碎机粉碎，粉碎粒度为2-10mm，然后放入高压罐中，加入0.3倍重量份的纯净水，加压至4kgf/cm2，使其压力均匀，并保持15min，瞬间恢复常压；
②提取：将步骤①得到的粉碎原料加入2倍重量的甲醇加热提取，45℃提取2次，每次2h，过滤，合并浓缩液，浓缩，温度控制≤50℃，真空控制在-0.08±0.01MPa，浓缩至0.95-1.05g/ml，得到浓缩提取液，检测紫杉醇含量；
③双水相萃取：对步骤②得到浸膏进行双水相萃取，浸膏和双水相萃取液按照1:1.25的体积比，获得萃取上相和萃取下相，双水相萃取所使用的双水相体系由聚乙二醇、氯化钠和水构成，聚乙二醇在所述双水相体系中的质量百分比为15％，氯化钠在所述双水相体系中的质量百分比为15％，余量为水，所述聚乙二醇的重均分子量为8000；
④将步骤③获得的萃取水相，采用截留分子量为1000-100000的超滤膜脱盐，得到。
2.根据权利要求1所述的红豆杉的种植方法，其特征在于：步骤2)所述的红豆杉种苗，为人工培育的2.5年生云南红豆杉扦插苗、地径在0.3cm以上、苗高在50cm以上的一级苗，或者是人工培育的南方红豆杉1.5年生苗、平均苗高为25cm、平均地径为0.08cm的营养袋苗。
3.根据权利要求1所述的红豆杉的种植方法，其特征在于：步骤2)所述的整成菜畦状，规格为40cmx40cmx30cm，所述的种植，株行距离为0.4mx1.5m，密度1.65万株/hm2。
4.根据权利要求1所述的红豆杉的种植方法，其特征在于：步骤3)所述的定时施肥，是指定植成活后第1年每周施1次清粪水，施清粪水以把树根浇透为准，第2年每两周施1次清粪水，施清粪水以把树根浇透为准，每月施1次复合肥，每株施200g，环施。
5.根据权利要求1所述的红豆杉的种植方法，其特征在于：步骤3)所述的营养液，稀释80-100倍使用。
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