CN107286170A - 一种吡喃并吲哚类化合物及其制备方法和在制备抗艾滋病的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种吡喃并吲哚类化合物及其制备方法和在制备抗艾滋病的药物中的应用，所述吡喃并吲哚类化合物具有如式I所示的结构，本发明的吡喃并吲哚类化合物、或其药学上可接受的盐、异构体、外消旋体、前体药物共结晶复合物、水合物或溶剂合物可有效激活HIV病毒储存库，可用于治疗艾滋病，且制备方法简单、易于工业化生产，应用前景广阔。

Description

一种吡喃并吲哚类化合物及其制备方法和在制备抗艾滋病的 药物中的应用
技术领域
本发明属于生物化学与医药领域，涉及一种吡喃并吲哚类化合物及其制备方法和在制备抗艾滋病的药物中的应用。
背景技术
根据联合国艾滋病规划署最新报道，至2015年底，全世界有3670万人口感染了HIV，每年还会新增感染者210万人，每年因HIV死亡人数有110万人。从发现艾滋病病毒已超过三十年，却仍找不到方法治能愈这种疾病。目前对HIV感染者是通过抗逆转录病毒疗法(ART)进行治疗，通过两种或多种高效抗逆转录病毒药物的组合可使HIV病毒的复制得到有效抑制，但ART治疗不能彻底清除感染者体内的HIV病毒，从而导致ART停药后体内的潜伏病毒就会迅速反弹，所以HIV感染者需要终身服用ART药物，这种治疗方式让各国政府和患者背付了沉重的经济负担。同时，由于HIV病毒的高变异性，长期服药带来的HIV耐药情况和不良副反应等问题，给当前的ART疗法带来了诸多挑战。针对上述严峻的艾滋病防控形势，以及给社会带来的沉重负担，亟需研制出更为有效的防治和根除艾滋病的新技术。
迄今为止，有关艾滋病功能治愈的策略还未取得令人满意的效果，通往艾滋病功能治愈道路上面临的最大障碍是HIV病毒储存库的存在，这也是ART无法根除HIV感染且需要终身治疗的根本原因。HIV病毒一旦感染机体，就会整合到宿主基因组中，并形成潜伏感染。在特定细胞因子的刺激下，病毒感染静息CD4+T细胞可以建立潜伏模型，或将活化的T细胞转换为静息状态。研究学者称这种整合并潜伏感染的细胞为HIV的病毒储存库(Viralreservoirs)。HIV感病毒储存库通常处于“沉默状态”——不产生病毒蛋白，也不能被免疫系统识别。潜伏的病毒储存库通常存在于中央和外周记忆CD4+T细胞中，也存在于在单核巨噬细胞和星形胶质细胞中，以及NK细胞、CD4+CD8+双阳性T细胞等。因此，如何有效激活并清除病毒储存库是根治艾滋病感染的关键难题。
激活技术方面，国际上已探索了一些可激活潜伏感染的病毒储存库的激活剂，例如抗IL-2单抗，抗CD3单抗、短杆菌肽(Gramicidine)大分子以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDAC)[异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid，SAHA)]、组蛋白甲基转移酶抑制剂(HMTIs)、白藜芦醇(resveratrol)、酪氨酸激酶抑制剂(prostratin)、bryostratin等小分子化合物。这些化合物在体外实验中均表现出了一定的激活效果，但其体内效果均不理想，且一些如激活PKC通路的LRA能够引起免疫系统的T细胞激活，这反而有可能促进HIV的感染。因而，寻找更加安全有效激活剂药物和研发高效特异激活HIV-1储存库的新技术非常必要。一个理想的储存库激活剂在能高效的激活HIV病毒储存库的同时不引起免疫系统的非特异性免疫激活。目前并没有一个有效的激活剂能完全符合上述指标。
吡喃并吲哚(Pyranoindole)骨架在药物研发中是一个被较多研究的可能具有药理学活性的结构核心。前期研究表明，有一些吡喃并吲哚衍生物类显示出了抗炎、抗癌和抗细菌感染的活性。最近，我们研发了一种二氢吡喃并吲哚(dihydropyranoindole)衍生物的有机催化不对称合成的有效方法。使用该技术，我们合成了一系列新型化合物(含有三氟甲基的手性季碳)，产率高达99％，并具有优良的对映选择性(高达98％的ee值)。
然而，这些具有全新结构的小分子化合物的潜在的生物活性还不清楚。本专利中，我们验证了这些具有全新结构的小分子化合物在治疗艾滋病中的应用；利用猕猴艾滋病感染细胞和HIV患者的CD4淋巴细胞，我们验证了该类化合物对潜伏感染病毒的激活效果，证明了它们可有效激活艾滋病毒潜伏感染储存库，从而可用于治疗艾滋病。基于这些数据，我们认为这类新化合物可在HIV治疗领域产生重要影响，将有助于艾滋病患者摆脱或减少对传统药物的依赖性，将为最终实现治愈艾滋病积累重要经验。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种吡喃并吲哚类化合物及其制备方法和应用，尤其是提供一种吡喃并吲哚类化合物及其制备方法和在制备抗艾滋病的药物中的应用。本发明提供的吡喃并吲哚类化合物可有效激活HIV病毒储存库，可开发为抗艾滋病的感染的候选药物。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供一种吡喃并吲哚类化合物，所述吡喃并吲哚类化合物具有如式I所示的结构：
其中，R1选自H、低级烷基、-COOR7、酰基、卤素、苯基或杂环基；R2选自H、-COOR7、酰基、卤素、低级烷基、烷氧基、苯基或杂环基；R3和R4独立地选自H、-COOR7、低级烷基、卤素、烷氧基、苯基或芳杂环基；R5选自H、低级烷烃、氰基，-COOR7、卤素、烷氧基、苯基或芳杂环基；R6选自H、低级烷烃、氨基，-COOR7、卤素、烷氧基、苯基或芳杂环基；其中R7选自低级烷基，苄基、苯基或芳杂环基；A选自C3～C10环烷基、苯基或芳杂环基。优选地，在式I中，所述R1选自H、低级烷基、酰基、-COOR7。
优选地，在式I中，所述R2选自H、-COOR7、低级烷烃、苯基或芳杂环基，其中R7选自低级烷基。
优选地，在式I中，所述R3和R4独立地选自H、低级烷烃、卤素、烷氧基、基苯基或芳杂环基。
优选地，在式I中，所述R5选自H、低级烷烃、氰基，-COOR7、苯基或芳杂环基。
优选地，在式I中，所述R6选自：低级烷烃、氰基，-COOR7、苯基或芳杂环基。
优选地，在式I中，所述A选自苯基或芳杂环基。
更优选地，在式I中，所述R1选自H、甲基、乙基、环丙基、乙酰基、-COOR7或苄基，其中R7选自低级烷基或苄基。
更优选地，在式I中，所述R2选自H或-COOR7，其中R7选自低级烷基。
更优选地，在式I中，所述R3和R4独立地选自H、甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基或卤素。
更优选地，在式I中，所述R5选自H、低级烷烃或氰基。
更优选地，在式I中，所述R6选自H、低级烷烃或氨基。
更优选地，在式I中，所述A选自苯基、呋喃基、吡啶基或噻吩基。
本发明所述的烷基指由碳和氢原子组成的直链或支链的饱和脂肪族原子团，优选含有1到6个碳原子的烷基。所述的低级烷基是指由1-4个碳原子组成的直链或支链的饱和烷基，具体的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基等。
本发明所述的烷氧基表示具有进一步的烷基取代基的含氧部分，即-O-烷基基团。低级烷氧基是指具有低级烷基取代基的含氧基团，即-O-低级烷基基团，具体的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基等。
“氨基”表示具有两个取代基的含氮部分，其中氢或碳原子与氮连接。氨基的具体例子包括但不限于-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC1-3烷基、-N(C1-3烷基)2等。
本发明所述的“芳基”是指含有5-10个碳原子的全碳单环或稠合多环(即，多个环共有相邻的碳原子对)基团，具有完全共轭的π电子体系，芳基的非限制性实例如苯基、萘基等。芳基可以是取代的或未取代的。
“卤素”表示氟、氯、溴或碘。“卤烷基”表示被一个或多个“卤素”原子取代的“烷基”，包括一卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基、全卤代烷基等，具体的例子包括但不限于氯甲基、二氯甲基、二氟甲基、三氟甲基、全氟乙基或2,2,2-三氟乙基等。
本发明所述的“杂芳基”是指有5-10个原子的单环或双环芳族基团，其中至少含有1个选自N、O或S的杂原子，其余的原子是C，此外，还有完全共轭的π电子体系。杂芳基的例子包括但不限于哒嗪、吲哚、喹唑啉、吡咯、噻吩、吲唑、吡唑、喹啉、吡啶、呋喃、咪唑、吡嗪、嘧啶、噻唑、异喹啉、苯并噻唑或二氮杂萘等。杂芳基可以是取代的或未取代的。
最优选地，所述吡喃并吲哚类化合物为选自如下表1中所示化合物1-21以及化合物1-a～21-a中的任意一种或至少两种的组合：
表1
另一方面，本发明提供上述吡喃并吲哚类化合物的制备方法，所述制备方法包括：
(I)当式I所示吡喃并吲哚类化合物中R2为-COOR7时，以三氟丙酮酸酯和取代的2-吲哚酮为原料，制备方法包括以下步骤：
a、式II所示的取代的2-吲哚酮与式III所示三氟丙酮酸酯反应得到式IV所示化合物，反应式如下：
b、步骤a得到的式IV所示化合物与氯化物R1Cl反应，得到式V所示化合物，反应式如下：
c、步骤b得到的式V所示化合物与丙二腈反应，得到式I'所示吡喃并吲哚类化合物，反应式如下：
(II)当式I所示吡喃并吲哚类化合物中R2为H时，制备方法包括以下步骤：
A、式II所示的取代的2-吲哚酮与式iii所示的化合物反应得到式iv所示化合物，反应式如下：
B、步骤A得到的式iv所示化合物与氯化物R1Cl反应，得到式v所示化合物，反应式如下：
C、步骤B得到的式v所示化合物与丙二腈反应，得到式I”所示吡喃并吲哚类化合物，反应式如下：
优选地，步骤a所述式II所示的取代的2-吲哚酮与式III所示三氟丙酮酸酯的摩尔比为1:(1-2)，例如1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9或1:2。
优选地，步骤a所述反应在弱碱性物质存在下进行。
优选地，所述弱碱性物质为吡啶、哌啶、三乙胺或4-二甲氨基吡啶中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，步骤a所述反应的溶剂为甲苯、二甲苯、二氯甲烷或四氢呋喃中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，步骤a所述反应的温度为100-130℃，例如100℃、105℃、108℃、110℃、115℃、118℃、120℃、125℃、128℃或130℃。
优选地，步骤a所述反应的时间为1-8小时，例如1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时或8小时。
优选地，步骤b所述式IV所示合物与氯化物R1Cl的摩尔比为1:(1-2)，例如1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9或1:2。
优选地，步骤b所述反应在碱性物质存在下进行；
优选地，所述碱性物质为三乙胺、吡啶或4-二甲氨基吡啶中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，步骤b所述反应的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃。
优选地，步骤b所述反应的温度为室温。
优选地，步骤b所述反应的时间为1-8小时，例如1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时或8小时。
优选地，步骤c所述式V所示化合物与丙二腈的摩尔比为1:(1-2)，例如1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9或1:2。
优选地，步骤c所述反应在催化剂存在下进行，所述催化剂优选如下式A或式B所示的化合物：
优选地，所述催化剂的用量为步骤c所述式V所示化合物摩尔量的5％-20％，例如5％、7％、9％、10％、12％、15％、18％或20％，优选10-15％，更优选10％。
优选地，步骤c所述反应的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或三氯甲烷中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，步骤c所述反应的温度为0℃～-30℃，例如0℃、-4℃、-8℃、-10℃、-12℃、-15℃、-18℃、-20℃、-22℃、-25℃、-28℃或-30℃。
优选地，步骤c所述反应的时间为8-72小时，例如8小时、10小时、13小时、15小时、18小时、20小时、24小时、28小时、30小时、36小时、42小时、48小时、52小时、55小时、60小时、64小时、70小时或72小时。
优选地，步骤A所述式II所示的取代的2-吲哚酮与式iii所示的化合物的摩尔比为1:(1-2)，例如1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9或1:2。
优选地，步骤A所述反应在碱性物质存在下进行。
优选地，所述弱碱性物质为叔丁醇钾(t-BuOK)。
优选地，步骤A所述反应的溶剂为四氢呋喃。
优选地，步骤A所述反应的温度为60-130℃，例如60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、110℃、120℃或130℃。
优选地，步骤A所述反应的时间为8-72小时，例如8小时、10小时、13小时、15小时、18小时、20小时、24小时、28小时、30小时、36小时、42小时、48小时、52小时、55小时、60小时、64小时、70小时或72小时。
优选地，步骤B所述式iv所示化合物与氯化物R1Cl的摩尔比为1:(1-2)，例如1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9或1:2。
优选地，步骤B所述反应在碱性物质存在下进行；
优选地，所述碱性物质为三乙胺、吡啶或4-二甲氨基吡啶中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，步骤B所述反应的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃。
优选地，步骤B所述反应的温度为室温。
优选地，步骤B所述反应的时间为1-8小时，例如1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时或8小时。
优选地，步骤C所述式V所示化合物与丙二腈的摩尔比为1:(1-2)，例如1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9或1:2。
优选地，步骤C所述反应在催化剂存在下进行，所述催化剂优选如下式A或式B所示的化合物：
优选地，所述催化剂的用量为步骤C所述式v所示化合物摩尔量的5％-20％，例如5％、7％、9％、10％、12％、15％、18％或20％，优选10-15％，更优选10％。
优选地，步骤C所述反应的溶剂为为N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或三氯甲烷中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，步骤C所述反应的温度为0℃～-30℃，例如0℃、-4℃、-8℃、-10℃、-12℃、-15℃、-18℃、-20℃、-22℃、-25℃、-28℃或-30℃。
优选地，步骤C所述反应的时间为8-72小时，例如8小时、10小时、13小时、15小时、18小时、20小时、24小时、28小时、30小时、36小时、42小时、48小时、52小时、55小时、60小时、64小时、70小时或72小时。
在本发明中，所述式A或式B所示的催化剂中，式A所示催化剂具有优良的对映选择性；式B所示催化剂不具有对映选择性。
本发明提供的上述吡喃并吲哚类化合物可以以其盐、水合物的形式存在，它们在体内转化为本发明所述化合物。例如，在本发明的范围内，按照本领域熟知的工艺，将本发明化合物转化为药学上可接受的盐的形式，并且以盐形式使用它们。
当本发明化合物具备游离碱的形式时，使化合物的游离碱形式与药学上可接受的无机或有机酸反应，可以制备本发明化合物的酸加成盐，这些盐包括但不限于：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、丙二酸盐、己二酸盐、己酸盐、精氨酸盐、富马酸盐、烟酸盐、邻苯二甲酸盐或草酸盐等。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的如上所述的吡喃并吲哚类化合物、或其药学上可接受的盐、异构体、外消旋体、前体药物共结晶复合物、水合物或溶剂合物以及药用辅料。
本发明所提供的药物组合物可以激活HIV病毒储存库，作为用于治疗艾滋病的药物。
本发明所述的组合物可以是液体、半液体或固体形式，按照适合于所用的给药途径的方式配制。本发明所述的组合物可以按照下列给药方式给药：口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、口腔、鼻内、脂质体等方式。
口服组合物可以是固体、凝胶或液体。固体制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂和散装粉剂。这些制剂可以选择地含有粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂和矫味剂等。粘合剂的实例包括但不限于微晶纤维素、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊；润滑剂的实例包括但不限于滑石、淀粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸；稀释剂的实例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、磷酸二钙；助流剂的实例包括但不限于二氧化硅；崩解剂的实例包括但不限于交联羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素。
以肠胃外给予本发明组合物，一般以注射为主，包括皮下、肌内或静脉内注射。注射剂可以被制成任何常规形式，如液体溶液或悬液、适合于在注射之前溶解或悬浮在液体中的固体形式或者乳剂。可用于本发明注射剂的药学上可接收的载体的实例包括但不限于水性载体、非水性载体、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧剂、悬浮与分散剂、乳化剂、螯合剂和其它药学上可接受的物质。水性载体的实例包括氯化钠注射液、林格式注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖与乳酸化林格氏注射液；非水性载体的实例包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油；抗微生物剂的实例包括间甲酚、苄醇、氯丁醇、苯扎氯铵等；等渗剂的实例包括氯化钠和葡萄糖；缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。
本发明组合物还可以制备成无菌的冻干粉针剂，将化合物溶于磷酸钠缓冲溶液，其中含有葡萄糖或其他适合的赋形剂，随后在本领域技术人员已知的标准条件下将溶液无菌过滤，继之以冷冻干燥，得到所需的制剂。
另一方面，本发明提供了如上所述的吡喃并吲哚类化合物或所述药物组合物在制备激活HIV潜伏感染病毒储存库的药物中的应用。
本发明利用体外HIV储存库模型和体内SIV感染猕猴感染模型以及HIV病人的CD4T细胞对该类化合物的有效性进行了评估，发现其能有效激活上述细胞的胞内病毒RNA。同时对其安全性和有效性进行了评估，发现了该类化合物可有效激活HIV储存库，并且不会导致广泛的T细胞激活和炎症应答，因而该类化合物可以作为一种全新的激活剂应用于治疗艾滋病。
另一方面，本发明提供了如上所述的吡喃并吲哚类化合物或所述药物组合物在制备用于与其他抗HIV病毒药物联合用于治疗艾滋病的药物中的应用。
本发明所述的吡喃吲哚类化合物或其药学上可接受的盐、异构体、外消旋体、前体药物共结晶复合物、水合物或溶剂合物可与其他已知抗HIV病毒药物联合组成联合治疗艾滋病的药物，以取得更加优异的治疗效果。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的吡喃并吲哚类化合物可有效激活HIV病毒储存库，可开发为抗艾滋病的感染的候选药物。并且该化合物的制备方法简单、易于工业化生产，应用前景广阔。
附图说明
图1A为本发明用于筛选化合物的细胞系J-Lat通过表达GFP(绿色萤光蛋白)显示药物的激活效果图；
图1B为不同化合物对细胞系J-Lat表达GFP(绿色萤光蛋白)的激活效果图；
图1C为化合物4(GIBH-LRA002)对J-Lat表达的绿色荧光蛋白(GFP)的影响结果图；
图2A为对携带有SIV储存库的艾滋病猴CD4+T细胞进行激活检测的流程图；
图2B为选用前病毒转录出来的胞内RNA中的msRNA作为检测指标对化合物4(GIBH-LRA002)能有效激活SIV感染猴的CD4+T细胞的验证结果图；
图2C为选用前病毒转录出来的胞内RNA中的usRNA作为检测指标对化合物4(GIBH-LRA002)能有效激活SIV感染猴的CD4+T细胞的验证结果图；
图3A为对携带有HIV储存库的艾滋病人CD4+T细胞进行激活检测的流程
图3B为选用前病毒转录出来的胞内RNA中的msRNA作为检测指标对化合物4(GIBH-LRA002)能有效激活HIV感染者的CD4+T细胞的验证结果图；
图3C为选用前病毒转录出来的胞内RNA中的usRNA作为检测指标对化合物4(GIBH-LRA002)能有效激活HIV感染者的CD4+T细胞的验证结果图；
图4为通过CCK8方法检测化合物4(GIBH-LRA002)对猕猴细胞细胞活性的影响结果图；
图5A为通过流式检测CD4+T细胞的激活标志物CD25的表达情况结果图；
图5B为通过流式检测CD3+T细胞的激活标志物CD25的表达情况结果图；
图5C为通过流式检测CD4+T细胞的激活标志物CD69的表达情况结果图；
图5D为通过流式检测CD3+T细胞的激活标志物CD69的表达情况结果图；
图5E为通过流式检测CD4+T细胞的激活标志物CCR5的表达情况结果图；
图5F为通过流式检测CD3+T细胞的激活标志物CCR5的表达情况结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
本发明提供的化合物可以通过多种制备方法来合成，实施例中仅提供了合成这些化合物的代表性方法。这里要说明的是，不管以何种方式开发的本发明化合物的异构体形式，游离酸和/或碱形式，还是盐的形式，均属于本发明的范围。具体实施例的目的是进一步说明本发明内容但不意味着对本发明进行限制。
本发明具体实施例中所使用的初始原料、反应试剂等若无特殊说明均为市售产品。
实施例1(S)-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物1)和2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物1-a)的制备
制备方法包括以下步骤：
(1)
在50mL反应瓶中，将吲哚酮(1.33g,10mmol)溶于甲苯(20mL)中，加入三氟丙酮酸乙酯(1.98mL,15mmol)和哌啶(0.27mL,3mmol)。在110℃条件下反应4小时。反应完毕，浓缩，柱层析得2.28g产物，产率70％。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.89(br,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.37-7.40(m,1H),7.07-7.10(m,1H),6.90(d,J＝7.5Hz,1H),4.46(q,J＝9.0Hz,2H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ166.8,162.9(d,J＝2.9Hz),143.3,133.3,132.8(d,J＝4Hz),127.1,126.9(d,J＝5.5Hz),123.2,118.0(q,J＝273Hz),117.9,110.8,62.8,13.7ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-60.37(s,3F)ppm；HRMS-EI(m/z):calcdfor C13H11F3NO3 +[M+H+]:286.0686；found:286.0693.
(2)
在100mL反应瓶中，将上步产物(2.85g,10mmol)溶于40mL二氯甲烷，加入Boc酸酐(2.75mL,12mmol)DMAP(122mg,1mmol)，室温反应1小时，浓缩，柱层析得产物3.63g，产率94％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(d,J＝7.6Hz,1H),7.44-7.48(m,1H),7.18-7.22(m,1H),4.46(q,J＝7.2Hz,2H),1.62(s,9H),1.38(t,J＝7.2Hz,3H)ppm；13CNMR(125MHz,CDCl3)δ163.5,163.0,148.6,142.3,133.7,131.5,127.5,126.5,125.4(q,J＝273.4Hz),125.2,117.7,115.8,85.6,63.3,28.3,14.0ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-60.30(s,3F)ppm；HRMS-EI(m/z):calcd for C18H19F3NO5 +[M+H+]:386.1210；found:386.1213.
(3)
-20℃条件下，于0.5mL反应瓶中加入丙二腈(0.1mmol,6.6mg)，搅拌30分钟，再加入催化剂1a或1b(0.1mmol)。-20℃反应48小时，TLC监测反应完全，浓缩，柱层析。得白色粉末状固体。化合物1产率99％，ee值95％。1-a产率98％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.49(d,J＝7.6Hz,1H),7.24-7.32(m,2H),5.57(s,2H),4.25-4.40(m,2H),1.69(s,9H),1.26(t,J＝7.2Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.8,161.6,147.9,142.8,131.5,124.5,124.2(q,J＝283.8Hz),124.1,123.6,119.7(d,J＝1.9Hz),117.2,115.2,63.3,55.7,52.4(q,J＝29.4Hz),28.2,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-66.00(s,3F)ppm；The enantiomeric excess is determined by HPLC with a Chiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝14.21min(major),tR＝16.62min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd for C21H21F3N3O5 +[M+Na+]:474.1247；found:474.1252；[α]D 25＝-7.6(c＝1.0,CHCl3).
实施例2(S)-9-乙酰基-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物2)和9-乙酰基-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物2-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物2和2-a。产率73％，ee值47％。2-a产率98％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝8.1Hz,1H),7.48(d,J＝7.7Hz,1H),7.32(td,J＝22.1,7.5,1.1Hz,2H),7.26(s,1H),5.48(s,2H),4.69–3.96(m,2H),2.72(s,3H),1.27(dd,J＝13.7,6.5Hz,4H)ppm；13C NMR(126MHz,DMSO)δ168.79,165.68,161.69,142.60,131.11,124.89(q,J＝283.8Hz),124.37(d,J＝14.3Hz),123.23,118.04,117.28,116.01,86.97,62.68,52.04(q,J＝28.8Hz),50.71,26.70,13.80ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.66(s,3F)ppm；The enantiomeric excess is determined by HPLC with a ChiralpakIC-H column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝16.89min(major),tR＝23.59min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd for C18H14F3N3O4 +[M+Na+]:416.0829；found:416.0851；[α]D 25＝-20.2(c＝0.5,CHCl3)。
实施例3 9-苄基4-乙基(S)-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸酯(化合物3)和9-苄基4-乙基-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸酯(化合物3-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物3和3-a。产率96％，ee值93％。3-a产率98％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25–7.94(m,1H),7.60–7.37(m,6H),7.35–6.93(m,3H),5.59–5.37(m,2H),5.28(s,2H),4.49–4.18(m,2H),1.27(t,J＝7.1Hz,3H)ppm；13C NMR(126MHz,CDCl3)δ165.65,161.43,149.36,142.55,134.53,131.46,129.29,129.03,128.71,124.89,124.55,124.59(q,J＝283.8Hz),123.76,119.89,117.01,115.29,89.22,77.41,77.16,76.91,69.75,63.40,55.79,52.45(q,J＝30.0Hz),14.10ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.78(s,3F)ppm；The enantiomeric excess is determined by HPLCwith a Chiralpak IC-H column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝22.91min(major),tR＝28.23min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd forC24H19F3IN3O5 +[M+H+]:486.1271；found:486.1304；[α]D 25＝-10.0(c＝0.5,CHCl3)。
实施例4(S)-2-氨基-6-氯-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物9)和2-氨基-6-氯-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物9-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物9和9-a。产率99％，ee值92％。9-a产率99％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.00(d,J＝9.0Hz,1H),7.48(s,1H),7.25-7.27(m,1H),5.48(s,2H),4.29-4.42(m,2H),1.69(s,9H),1.31(t,J＝7.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.5,161.4,147.5,143.5,129.9,129.8,124.8,123.4(q,J＝283.8Hz),119.5,117.0,116.4,88.0,86.3,63.6,55.6,52.2(q,J＝30.0Hz),28.2,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.45(s,3F)ppm；The enantiomeric excess is determined by HPLC with aChiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝12.70min(major),tR＝14.38min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd for C21H19ClF3N3O5 +[M+Na+]:508.0858；found:508.0864；[α]D 25＝-53.6(c＝1.0,CHCl3)。
实施例5(S)-2-氨基-3-氰基-6-甲基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物5)和2-氨基-3-氰基-6-甲基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物5-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物5和5-a。产率99％，ee值94％。5-a产率95％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.91(d,J＝8.5Hz,1H),7.26(s,1H),7.11(d,J＝8.5Hz,1H),5.43(s,2H),4.26-4.41(m,2H),2.40(s,3H),1.69(s,9H),1.28(t,J＝6.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.8,161.6,148.0,142.8,133.8,129.6,125.8,123.7,123.5(q,J＝285Hz),119.6,117.2,114.9,88.4,85.6,63.3,55.7,52.5(q,J＝30.0Hz),28.2,21.5,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.88(s,3F)ppm；The enantiomeric excess isdetermined by HPLC with a Chiralpak AD-H column(hexanes:isopropanol＝98:2,flow rate:0.5mL/min,λ＝254nm):tR＝40.61min(minor),tR＝43.14min(major)；HRMS-EI(m/z):calcd for C22H22F3N3O5 +[M+Na+]:488.1404；found:488.1405；[α]D 25＝-12.4(c＝1.0,CHCl3)。
实施例6(S)-2-氨基-3-氰基-6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物6)和2-氨基-3-氰基-6-甲氧基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物6-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物6和6-a。产率99％，ee值94％。6-a产率98％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.93(d,J＝9.0Hz,1H),6.97(s,1H),6.88(dd,J＝9.5,2.5Hz,1H),5.52(s,2H),4.26-4.39(m,2H),3.81(s,3H),1.68(s,9H),1.28(t,J＝7.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.7,161.6,156.7,147.9,143.1,125.8,124.5,124.3(q,J＝283.8Hz),117.2,116.1,112.7,103.0,88.5,85.7,63.3,55.6(d,J＝30.0Hz),52.4(q,J＝29.5Hz),28.2,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.71(s,3F)ppm；HRMS-EI(m/z):calcd for C22H22F3N3O6 +[M+Na+]:504.1353；found:504.1360；[α]D 25＝-9.8(c＝1.0,CHCl3)。
实施例7(S)-2-氨基-6-溴-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物7)和2-氨基-6-溴-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物7-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物7和7-a。产率99％，ee值90％。7-a产率98％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.95(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(s,1H),7.40(dd,J＝9.0,2.0Hz,1H),5.51(s,2H),4.29-4.42(m,2H),1.69(s,9H),1.31(t,J＝6.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.6,161.4,147.5,143.4,130.2,127.5,125.2,122.5,121.1(q,J＝283.8Hz),117.5,117.0,116.7,87.9,86.4,63.6,55.5,52.0(q,J＝30.0Hz),28.2,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.42(s,3F)ppm；The enantiomeric excess isdetermined by HPLC with a Chiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flowrate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝13.43min(major),tR＝15.06min(minor)。HRMS-EI(m/z):calcd for C21H19BrF3N3O5 +[M+Na+]:552.0352；found:552.0355；[α]D 25＝-60.4(c＝1.0,CHCl3)。
实施例8(S)-2-氨基-6-氟-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物8)和2-氨基-6-氟-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物8-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物8和8-a。产率99％，ee值94％。8-a产率97％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.01(dd,J＝9.0,4.5Hz,1H),7.18(d,J＝9.0Hz,1H),6.99-7.03(m,1H),5.51(s,2H),4.27-4.41(m,2H),1.69(s,9H),1.29(t,J＝7.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.5,161.4,160.8,158.9,147.6,143.7,127.5,124.6(d,J＝11.3Hz),124.5(q,J＝283.8Hz),117.0,116.5(d,J＝8.8Hz),112.2(d,J＝24.5Hz),106.1(d,J＝27.5Hz),88.5,86.2,63.5,55.5,52.4(q,J＝30.0Hz),28.2,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-60.23(s,3F),-116.48(m,1F)ppm；The enantiomeric excess isdetermined by HPLC with a Chiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flowrate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝12.42min(major),tR＝14.20min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd for C21H19F4N3O5 +[M+Na+]:492.1153；found:492.1160；[α]D 25＝-41.4(c＝1.0,CHCl3)。
实施例9(S)-2-氨基-3-氰基-9-甲基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物4)和2-氨基-3-氰基-9-甲基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物4-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物4和4-a。产率61％，ee值54％。4-a产率88％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.91(s,2H),7.49(d,J＝8.1Hz,1H),7.32(d,J＝7.9Hz,1H),7.20(t,J＝7.1Hz,1H),7.13(t,J＝7.2Hz,1H),4.43–4.00(m,2H),3.70(s,3H),1.13(t,J＝7.1Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,DMSO)δ166.31,162.05,143.55,132.12,125.21(q,J＝283.8Hz),121.96,121.36,120.95,118.06,117.86,109.99,80.35,62.26,52.67(q,J＝27.5Hz),51.42,27.97,13.86ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.69(s,3F)ppm；Theenantiomeric excess is determined by HPLC with a Chiralpak IC-H column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝33.31min(major),tR＝45.65min(minor)。HRMS-EI(m/z):calcd for C17H15F3N3O3 +[M+H+]:366.1060；found:366.1063；[α]D 25＝10.2(c＝0.5,CHCl3)。
实施例10(S)-2-氨基-6-碘-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物10)和2-氨基-6-碘-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物10-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物10和10-a。产率97％，ee值91％。10-a产率98％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.82-7.84(m,2H),7.59(dd,J＝9.0,1.0Hz,1H),5.52(s,2H),4.30-4.42(m,2H),1.69(s,9H),1.32(t,J＝6.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.6,161.4,147.5,143.1,133.2,130.9,128.5,125.7,121.1(q,J＝283.8Hz),117.1,88.2,87.6,86.4,63.6,55.5,52.3(q,J＝28.8Hz),28.2,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.39(s,3F)ppm；The enantiomeric excess is determined by HPLC with aChiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝14.45min(major),tR＝15.84min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd for C21H19IF3N3O5 +[M+Na+]:600.0214；found:600.0219；[α]D 25＝-76.6(c＝1.0,CHCl3)。
实施例11(S)-2-氨基-3-氰基-6-(三氟甲氧基)-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸(化合物11)和2-氨基-3-氰基-6-(三氟甲氧基)-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸(化合物11-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物11和11-a。产率93％，ee值86％。11-a产率96％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(s,1H),7.18(dd,J＝7.2,1.2Hz,1H),5.44(s,2H),4.31-4.36(m,2H),1.69(s,9H),1.29(t,J＝5.6Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.5,161.4,147.5,145.8,143.8,129.7,124.5,124.5(q,J＝276.3Hz),122.4(q,J＝258Hz),117.9,116.9,116.4,112.7,88.5,86.5,63.6,55.7,52.2(q,J＝29.6Hz),28.2,14.0ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-58.19(s,3F),-70.41(s,3F)ppm；Theenantiomeric excess is determined by HPLC with a Chiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝8.21min(major),tR＝9.94min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd for C22H19F6N3O6 +[M+Na+]:558.1070；found:558.1073；[α]D 25＝-11.6(c＝1.0,CHCl3)。
实施例12(S)-2-氨基-7-溴-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物12)和2-氨基-7-溴-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物12-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物12和12-a。产率94％，ee值98％。12-a产率92％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.28(s,1H),7.34-7.39(m,2H),5.48(s,2H),4.25-4.38(m,2H),1.69(s,9H),1.26(t,J＝7.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.6,161.4,147.5,142.9,132.1,127.4,124.5(q,J＝283.8Hz),121.0(d,J＝18.8Hz),118.5,117.9,117.0,88.5,86.5,63.4,55.5,52.3(q,J＝30.0Hz),28.2,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.62(m,3F)ppm；The enantiomeric excess is determined by HPLC with aChiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝13.03min(major),tR＝15.31min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd for C21H19BrF3N3O5 +[M+Na+]:522.0352；found:552.0358；[α]D 25＝-32.2(c＝1.0,CHCl3)。
实施例13(S)-2-氨基-3-氰基-8-氟-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物13)和2-氨基-3-氰基-8-氟-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物13-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物13和13-a。产率99％，ee值98％。13-a产率99％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.28(d,J＝8.0Hz,1H),7.18-7.22(m,1H),7.00-7.04(m,1H),5.58(s,2H),4.26-4.40(m,2H),1.65(s,9H),1.28(t,J＝7.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.6,161.5,150.8,148.8,146.7,143.5,127.0(d,J＝3.3Hz),124.8(d,J＝7.4Hz),123.4(q,J＝283.8Hz),118.6(d,J＝9.9Hz),117.0,115.6,111.5(d,J＝20.8Hz),88.0,86.5,63.4,55.6,52.1(q,J＝30.1Hz),27.8,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-60.48(s,3F),-133.54(m,1F)ppm；The enantiomeric excess is determined byHPLC with a Chiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝11.54min(major),tR＝12.83min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd forC21H19F4N3O5 +[M+Na+]:492.1153；found:492.1158；[α]D 25＝-16.8(c＝1.0,CHCl3)。
实施例14(S)-2-氨基-3-氰基-8-溴-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物14)和2-氨基-3-氰基-8-溴-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸9-(叔丁基)-4-乙酯(化合物14-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物14和14-a。产率98％，ee值97％。14-a产率97％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.46-7.50(m,2H),7.10-7.13(m,1H),5.37(s,2H),4.26-4.40(m,2H),1.67(s,9H),1.29(t,J＝7.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.6,161.2,146.3,143.5,129.8,129.0,126.9,125.0,124.5(q,J＝283.8Hz),119.2(d,J＝2.5Hz),117.0,107.3,87.1,86.5,63.5,56.3,52.5(q,J＝30.0Hz),27.9,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.62(m,3F)ppm；The enantiomeric excess is determined by HPLCwith a Chiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝10.77min(major),tR＝12.46min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd forC21H19BrF3N3O5 +[M+Na+]:552.0352；found:552.0356；[α]D 25＝-44.4(c＝0.5,CHCl3)。
实施例15(S)-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[3'，2'：4,5]吡咯并[2,3-b]吡啶-4，9(4H)-二羧酸酯(化合物15)和2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[3'，2'：4,5]吡咯并[2,3-b]吡啶-4，9(4H)-二羧酸酯(化合物15-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物15和15-a。产率95％，ee值85％。15-a产率94％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.44(dd,J＝5.0,1.5Hz,1H),7.87(d,J＝6.4Hz,1H),7.22-7.24(m,1H),5.35(s,2H),4.27-4.39(m,2H),1.69(s,9H),1.28(t,J＝5.6Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ165.4,161.0,146.4,144.8,144.4,142.8,128.4,124.5(q,J＝283.8Hz),120.0,117.4,116.9,86.1,85.7,63.5,56.0,52.0(q,J＝30.1Hz),28.2,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.55(s,3F)ppm；The enantiomeric excess isdetermined by HPLC with aChiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝97:3,flowrate:0.8mL/min,λ＝254nm):tR＝42.83min(minor),tR＝50.65min(major)；HRMS-EI(m/z):calcd for C20H20F3N4O5 +[M+H+]:453.1380；found:453.1382；[α]D 25＝-24.0(c＝0.5,CHCl3)。
实施例16(S)-2-氨基-3-氰基-6,8-二甲基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸(化合物16)和2-氨基-3-氰基-6,8-二甲基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸(化合物16-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物16和16-a。产率94％，ee值88％。16-a产率98％。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.11(s,1H),6.91(s,1H),5.38(s,2H),4.25-4.41(m,2H),2.40(s,3H),2.36(s,3H),1.65(s,9H),1.28(t,J＝7.0Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ166.0,161.6,147.7,142.8,133.7,128.9,128.7,124.9,124.2,124.5(q,J＝283.8Hz),117.4,86.8,85.7,63.2,56.0,52.5(q,J＝28.8Hz),28.1,21.4,20.6,14.1ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-70.88(s,3F)ppm；HRMS-EI(m/z):calcd for C23H24F3N3O5 +[M+Na+]:502.1560；found:502.1566；[α]D 25＝-9.2(c＝1.0,CHCl3)。
实施例17(S/R)-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-9(4H)-羧酸叔丁酯(化合物17)和2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-9(4H)-羧酸叔丁酯(化合物17-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物17和17-a。产率99％，ee值86％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.03-8.05(m,1H),7.46-7.48(m,1H),7.28-7.33(m,2H),5.28(s,2H),4.39(q,J＝5.2Hz,1H),1.69(s,9H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ162.3,148.1,143.2,131.7,124.5,124.3(q,J＝280Hz),124.1,118.9,118.5,115.3,88.7,85.6,52.7,37.7(q,J＝32.5Hz),28.3ppm；19F NMR(471MHz,CDCl3)δ-72.19(m,3F)ppm；Theenantiomeric excess is determined by HPLC with a Chiralpak IC column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝7.63min(major),tR＝8.34min(minor)；HRMS-EI(m/z):calcd for C18H16F3N3O3 +[M+Na+]:402.1306；found:402.1320；[α]D 25＝-7.4(c＝1.0,CHCl3)。
实施例18(S)-2-氨基-3-氰基-6-甲氧基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物18)和2-氨基-3-氰基-6-甲氧基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物18-a)的制备
将实施例6中的化合物6加入到0.5mL二氯甲烷中，滴加0.1mL三氟乙酸，室温反应，反应完毕，浓缩，柱层析得到化合物18和18-a。产率92％，ee值94％。18-a产率99％。
1H NMR(400MHz,DMSO-6d)δ12.29(br,1H),7.79(s,2H),7.24(d,J＝9.6Hz,1H),6.75-6.77(m,2H),4.15-4.30(m,2H),3.69(s,3H),1.14(t,J＝7.2Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,DMSO-6d)δ167.3,163.1,155.1,145.2,126.6,126.2(q,J＝283.8Hz),124.2,119.0,113.4,111.0,102.0,81.5,63.1,56.2,53.3(q,J＝27.6Hz),14.8ppm.Theenantiomeric excess is determined by HPLC with a Chiralpak AS-H column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝14.19min(minor),tR＝17.84min(major)；HRMS-EI(m/z):calcd for C17H14F3N3O4 +[M+Na+]:404.0829；found:404.0836；[α]D 25＝-10.4(c＝1.0,CHCl3)。
实施例19(S)-2-氨基-3-氰基-6,8-二甲基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物19)和2-氨基-3-氰基-6,8-二甲基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物19-a)的制备
参考实施例1与实施例18化合物的合成方法，制备得到化合物19和19-a。产率95％，ee值88％。19a产率96％。
1H NMR(400MHz,DMSO-6d)δ11.93(br,1H),7.75(s,2H),6.89(s,1H),6.74(s,1H),4.12-4.30(m,2H),2.37(s,3H),2.28(s,3H),1.14(t,J＝7.2Hz,3H)ppm；13C NMR(125MHz,DMSO-6d)δ167.4,163.1,145.0,130.2,129.3,124.6,123.8(q,J＝283.8Hz),123.6,121.6,119.1,116.1,80.0,63.0,53.3(q,J＝27.5Hz),52.0,22.1,17.4,14.8ppm；Theenantiomeric excess is determined by HPLC with a Chiralpak AD-H column(hexanes:isopropanol＝95:5,flow rate:1.0mL/min,λ＝254nm):tR＝8.81min(minor),tR＝10.19min(major)；HRMS-EI(m/z):calcd for C18H16F3N3O5 +[M+Na+]:402.1036；found:402.1046；[α]D 25＝-12.0(c＝1.0,CHCl3)。
实施例209-(叔丁基)-4-甲基(S)-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸酯(化合物20)和9-(叔丁基)-4-甲基-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)吡喃并[2,3-b]吲哚-4,9(4H)-二羧酸酯(化合物20-a)的制备
参考实施例1化合物的合成方法，制备得到化合物20和20-a。产率99％，ee值86％。20-a产率98％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.05-8.07(m,1H),7.46-7.48(m,1H),7.25-7.33(m,2H),5.47(s,2H),3.84(s,3H),1.70(s,9H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ166.3,161.7,147.9,142.9,131.5,128.0,125.7(q,J＝280Hz),124.6,124.3,123.6，123.4,121.2,119.5,117.2,115.3,88.5,85.9,55.5,52.6(q,J＝32.5Hz),28.3ppm；HRMS-EI(m/z):calcd forC20H18F3N3O5 +[M+H+]:437.1199；found:402.1320。
实施例21(S)-2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物21)和2-氨基-3-氰基-4-(三氟甲基)-4,9-二氢吡喃并[2,3-b]吲哚-4-羧酸乙酯(化合物21-a)的制备
参考实施例1与实施例18化合物的合成方法，制备得到化合物21和21-a。产率95％，ee值88％。21-a产率97％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.58(s,H),7.58(m,1H),7.17-7.26(m,3H),5.24(br,2H),4.34-4.41(m,2H),1.26-1.43(m,3H)ppm；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ166.9,161.5,143.1,130.7,123.3,122.5,121.6(q,J＝283.8Hz),119.8,111.2,82.7,63.3,14.0ppm；HRMS-EI(m/z):calcd for C16H12F3N3O3 +[M+H+]:402.1036；found:351.0831。
实施例22
在本实施例中，利用HIV潜伏感染库细胞系J-Lat A10.6筛选有效的激活化合物，方法如下：
实验材料
细胞J-Lat A10.6，7-AAD抗体
实验操作
复苏细胞：从液氮中取出的J-Lat细胞，盖紧冻存管的瓶盖，于37℃水浴锅中复苏，快速摇晃，直到细胞全部溶解。迅速将溶解后的细胞置于离心机中1000rpm离心约3min。吸去上清，用1mL 1640完全培养基重悬细胞，转移至5cm培养皿，另外加入3mL新鲜1640完全培养基，于37℃，5％CO2恒温培养箱中复苏2天。待细胞恢复活力后，收集J-Lat细胞。取LymphoPrep淋巴细胞分离液4mL加入一新的15mL离心管，用2.5mL巴氏吸管将细胞沿管壁逐滴加入到分离液液面，共加入10mL细胞液，1000g离心30min，控制开始加速度为3。离心后将J-Lat细胞层吸出，加入8mL的RPMI1640重悬细胞，350g离心7分钟。离心后，倒出上清，沉淀细胞用2mL RPMI1640完全培养基重悬，计数，计算细胞浓度。得出细胞浓度后，将J-Lat细胞稀释成1500万/mL的浓度。重悬细胞后，将J-Lat加入到96孔U底板，每孔200μL。加入稀释好的刺激物，一般先将化合物稀释为终浓度的20倍，后每孔加入10μL化合物到200μL的J-lat细胞中即得最终浓度。37℃，5％CO2恒温培养箱中培养24h，此时间可根据实验调整。J-Lat被激活后，进行7-AAD(BD)死细胞染料染色，每孔加入7-AAD 10μL。37℃恒温培养箱培养2h。将细胞转移至1.5mL EP管内，加入1mL PBS洗涤细胞后350g离心5min，弃培养基。重复(3)加入1mL PBS重悬细胞，350g离心5min，弃上清。用300μL PBS重悬细胞。用BD C6流式检测，Flow jow分析。
实验结果
在本实施例中设置了1uM、10uM、100uM、100nM浓度的化合物实验组，以Mock代表阴性对照刺激组(DMSO作为溶剂对照)，阳性对照PMA组或阳性对照PMA+Iono组和阳性对照VPA组，其中PMA为佛波酯，VPA为丙戊酸钠，Iono为离子霉素，结果如图1所示，化合物9(本发明中将其命名为GIBH-LRA002)显示出了很好的激活效果。图1A显示我们筛选细胞系J-Lat可以通过表达GFP(绿色萤光蛋白)显示药物的激活效果；图1B显示了不同化合物的激活效果，编号1-12对应本发明实施例制备得到的化合物1-12，可以看出化合物9的激活效果最好，表现为GFP表达水平最高；图1C显示化合物9(GIBH-LRA002)可以使J-Lat表达的GFP从5.06％升高至23.0％，其效果在100μM用量下达到最大。阳性刺激化合物PMA以及VPA可高水平地激活J-Lat细胞系中的潜伏HIV，表明我们的筛选模型是良好的，化合物9表现出了较好的激活水平。
实验例23
在本实施例中，对化合物9(GIBH-LRA002)能有效激活SIV感染的猕猴CD4+T细胞进行验证，方法如下：
实验材料
SIV感染的猕猴；非人灵长类CD4+T细胞分选试剂盒；
实验操作
取SIV感染猕猴的抗凝血，将抗凝血分离PBMC，将PBMC通过磁珠分选出CD4+T细胞，将CD4+T细胞与不同浓度的GIBH-LRA002共孵育24h，收集共孵育后的CD4+T细胞，提取胞内RNA，对RNA进行逆转录变为cDNA，将cDNA分别用msRNA和usRNA的引物进行第一轮PCR。对msRNA和usRNA的第一轮PCR产物进行稀释，并作为第二轮荧光定量PCR的模板，利用两种RNA的标准品进行绝对定量，得出一定数量CD4+T细胞中msRNA和usRNA的绝对数量。
实验结果
图2A显示了该实验流程，具体是：猕猴SIV感染模型作为模拟人感染HIV的最佳模型，选用SIV感染的猕猴PBMC，分选出SIV感染的靶细胞CD4+T细胞，对携带有SIV储存库的CD4+T细胞进行激活检测；设置了100nM、1uM、10uM的化合物实验组，并以Mock为阴性对照(DMSO作为溶剂对照)，以本领域常用的化合物PMA+Ion(佛波酯+离子霉素)和VPA(丙戊酸钠)作为阳性对照，结果发现化合物9(GIBH-LRA002)能有效激活SIV感染的猕猴CD4+T细胞，选用前病毒转录出来的胞内RNA作为检测指标：msRNA(如图2B所示)和usRNA(如图2C所示)，发现在GIBH-LRA002刺激CD4+T细胞24小时后，两种RNA的量都上升了，因此说明GIBH-LRA002能够有效激活原代细胞的SIV病毒PMA+Ion可高水平地激活潜伏SIV病毒的转录，而VPA尽管可在J-Lat细胞中激活潜伏HIV，但在感染猕猴的原代CD4+T细胞中激活很低。值得说明地是，GIBH-LRA002化合物的激活水平很高，介于VPA和PMA+Ion的激活水平之间。
实验例24
在本实施例中，对GIBH-LRA002能有效激活HIV感染患者的CD4+T细胞进行验证，方法如下：
实验材料
HIV感染患者的新鲜血液；CD4+T细胞磁珠分选试剂盒；
实验操作
取HIV感染患者的抗凝血，将抗凝血分离PBMC，将PBMC通过磁珠分选出CD4+T细胞，将CD4+T细胞与不同浓度的GIBH-LRA002共孵育24h，收集共孵育后的CD4+T细胞，提取胞内RNA，对RNA进行逆转录变为cDNA，将cDNA分别用msRNA和usRNA的引物进行第一轮PCR。对msRNA和usRNA的第一轮PCR产物进行稀释，并作为第二轮荧光定量PCR的模板，利用两种RNA的标准品进行绝对定量，得出一定数量CD4+T细胞中msRNA和usRNA的绝对数量。
实验结果
图3A显示了对携带有HIV储存库的CD4+T细胞进行激活检测的流程。本实施例中，我们随机使用了4个艾滋病人的标本，编号分别为#1，#2，#3，#4。我们发现GIBH-LRA002能有效激活HIV感染者的CD4+T细胞，选用前病毒转录出来的胞内RNA作为检测指标：msRNA(如图3B所示)和usRNA(如图3C所示)；设置了10uM、100uM的化合物浓度组，并以Mock为阴性对照(DMSO作为溶剂对照)，以本领域常用的化合物PMA+Ion(佛波酯+离子霉素)和VPA(丙戊酸钠)作为阳性对照，结果显示在GIBH-LRA002刺激CD4+T细胞24小时后，两种RNA的量都上升了，因此说明GIBH-LRA002能够有效激活原代细胞的HIV病毒。PMA+Ion可高水平地激活潜伏HIV病毒的转录，而VPA尽管可在J-Lat细胞中激活潜伏HIV，但在病人的原代CD4+T细胞中没有激活效果。值得说明地是，GIBH-LRA002化合物的激活水平很高，可达到PMA+Ion的激活水平。
实施例25
在本实施例中，对GIBH-LRA002在效应浓度处的细胞毒性以及对T细胞的激活作用进行测定，方法如下：
实验材料
J-Lat A10.6细胞系；猕猴PBMC；qPCR检测试剂；流式抗体；CCK8试剂盒
实验操作
用CCK8试剂盒检测不同浓度的GIBH-LRA002对J-Lat细胞系和猕猴PBMC细胞活力的影响：通过加入细胞培养体积10％的CCK8到培养基中培养2h，后检测发射广谱的荧光强度确定细胞活力；检测GIBH-LRA002对T细胞激活的影响：分泌猕猴PBMC，将As2O3与猕猴PBMC孵育24小时，收集细胞后，流式染色分析，检测CD25、CD38、CD69、HLA-DR的差异，染色后洗涤，流式检测。
实验结果
在本实施例中，设置了10uM、100uM和500uM的化合物浓度组，以Mock为阴性对照(即以DMSO作为溶剂对照)，以本领域常用的化合物PMA+Ion(佛波酯+离子霉素)作为阳性对照，结果如图4所示，使用猕猴细胞以及J-Lat细胞，验证了化合物9(GIBH-LRA002)在100μM以内对细胞活性影响很小。如图5所示，同时通过流式检测CD4+T细胞的激活标志物CD25即CD4+CD25+(如图5A所示)，CD4+CD69+(如图5C所示)和CD4+CCR5+(如图5E所示)，CD3+CD25+(如图5B所示)，CD69+CD3+(如图5D所示)和CCR5+CD3+(如图5F所示)，发现GIBH-LRA002也不会引起T细胞的非特异性激活，表现为上述激活标记物(CD25，CD69，CCR5)没有表达上升，而阳性刺激物(PMA+Iono)可刺激这些激活标记物的大幅度上升。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的吡喃并吲哚类化合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种吡喃并吲哚类化合物，其特征在于，所述吡喃并吲哚类化合物具有如式I所示的结构：
其中，R1选自H、低级烷基、-COOR7、酰基、卤素、苯基或杂环基；R2选自H、-COOR7、酰基、卤素、低级烷基、烷氧基、苯基或杂环基；R3和R4独立地选自H、-COOR7、低级烷基、卤素、烷氧基、苯基或芳杂环基；R5选自H、低级烷烃、氰基，-COOR7、卤素、烷氧基、苯基或芳杂环基；R6选自H、低级烷烃、氨基，-COOR7、卤素、烷氧基、苯基或芳杂环基；其中R7选自低级烷基，苄基、苯基或芳杂环基；A选自C3～C10环烷基、苯基或芳杂环基。
2.根据权利要求1所述的吡喃并吲哚类化合物，其特征在于，所述R1选自H、低级烷基、酰基、-COOR7；
优选地，所述R2选自H、-COOR7、低级烷烃、苯基或芳杂环基，其中R7选自低级烷基；
优选地，所述R3和R4独立地选自H、低级烷烃、卤素、烷氧基、基苯基或芳杂环基；
优选地，所述R5选自H、低级烷烃、氰基，-COOR7、苯基或芳杂环基；
优选地，所述R6选自低级烷烃、氰基，-COOR7、苯基或芳杂环基；
优选地，所述A选自苯基或芳杂环基；
更优选地，所述R1选自H、甲基、乙基、环丙基、乙酰基、-COOR7或苄基，其中R7选自低级烷基或苄基；
更优选地，所述R2选自H或-COOR7，其中R7选自低级烷基；
更优选地，所述R3和R4独立地选自H、甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基或卤素；
更优选地，所述R5选自H、低级烷烃或氰基；
更优选地，所述R6选自H、低级烷烃或氨基；
更优选地，所述A选自苯基、呋喃基、吡啶基或噻吩基。
3.根据权利要求1或2所述的吡喃并吲哚类化合物，其特征在于，所述低级烷基为由1-4个碳原子组成的直链或支链的饱和烷基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的吡喃并吲哚类化合物，其特征在于，所述吡喃并吲哚类化合物为选自如下化合物1-21以及化合物1-a～21-a中的任意一种或至少两种的组合：
5.根据权利要求1-4中任一项所述的吡喃并吲哚类化合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
(I)当式I所示吡喃并吲哚类化合物中R2为-COOR7时，以三氟丙酮酸酯和取代的2-吲哚酮为原料，制备方法包括以下步骤：
a、式II所示的取代的2-吲哚酮与式III所示三氟丙酮酸酯反应得到式IV所示化合物，反应式如下：
b、步骤a得到的式IV所示化合物与氯化物R1Cl反应，得到式V所示化合物，反应式如下：
c、步骤b得到的式V所示化合物与丙二腈反应，得到式I'所示吡喃并吲哚类化合物，反应式如下：
(II)当式I所示吡喃并吲哚类化合物中R2为H时，制备方法包括以下步骤：
A、式II所示的取代的2-吲哚酮与式iii所示的化合物反应得到式iv所示化合物，反应式如下：
B、步骤A得到的式iv所示化合物与氯化物R1Cl反应，得到式v所示化合物，反应式如下：
C、步骤B得到的式v所示化合物与丙二腈反应，得到式I”所示吡喃并吲哚类化合物，反应式如下：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤a所述式II所示的取代的2-吲哚酮与式III所示三氟丙酮酸酯的摩尔比为1:(1-2)；
优选地，步骤a所述反应在弱碱性物质存在下进行；
优选地，所述弱碱性物质为吡啶、哌啶、三乙胺或4-二甲氨基吡啶中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，步骤a所述反应的溶剂为甲苯、二甲苯、二氯甲烷或四氢呋喃中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，步骤a所述反应的温度为100-130℃；
优选地，步骤a所述反应的时间为1-8小时；
优选地，步骤b所述式IV所示合物与氯化物R1Cl的摩尔比为1:(1-2)；
优选地，步骤b所述反应在碱性物质存在下进行；
优选地，所述碱性物质为三乙胺、吡啶或4-二甲氨基吡啶中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，步骤b所述反应的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺；
优选地，步骤b所述反应的温度为室温；
优选地，步骤b所述反应的时间为1-8小时；
优选地，步骤c所述式V所示化合物与丙二腈的摩尔比为1:(1-2)；
优选地，步骤c所述反应在催化剂存在下进行，所述催化剂优选如下式A或式B所示的化合物：
优选地，所述催化剂的用量为步骤c所述式V所示化合物摩尔量的5％-20％，优选10-15％，更优选10％；
优选地，步骤c所述反应的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或三氯甲烷中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，步骤c所述反应的温度为0℃～-30℃；
优选地，步骤c所述反应的时间为8-72小时。
7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，优选地，步骤A所述式II所示的取代的2-吲哚酮与式iii所示的化合物的摩尔比为1:(1-2)；
优选地，步骤A所述反应在碱性物质存在下进行；
优选地，所述弱碱性物质为叔丁醇钾；
优选地，步骤A所述反应的溶剂为四氢呋喃；
优选地，步骤A所述反应的温度为60-130℃；
优选地，步骤A所述反应的时间为8-72小时；
优选地，步骤B所述式iv所示化合物与氯化物R1Cl的摩尔比为1:(1-2)；
优选地，步骤B所述反应在碱性物质存在下进行；
优选地，所述碱性物质为三乙胺、吡啶或4-二甲氨基吡啶中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，步骤B所述反应的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃；
优选地，步骤B所述反应的温度为室温；
优选地，步骤B所述反应的时间为1-8小时；
优选地，步骤C所述式V所示化合物与丙二腈的摩尔比为1:(1-2)；
优选地，步骤C所述反应在催化剂存在下进行，所述催化剂优选如下式A或式B所示的化合物：
优选地，所述催化剂的用量为步骤C所述式v所示化合物摩尔量的5％-20％，优选10-15％，更优选10％；
优选地，步骤C所述反应的溶剂为为N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或三氯甲烷中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，步骤C所述反应的温度为0℃～-30℃；
优选地，步骤C所述反应的时间为8-72小时。
8.一种药物组合物，其特征在于，其包括治疗有效量的如上所述的吡喃并吲哚类化合物、或其药学上可接受的盐、异构体、外消旋体、前体药物共结晶复合物、水合物或溶剂合物以及药用辅料；
优选地，所述药物组合物为液体、半液体或固体形式。
9.根据权利要求1-4中任一项所述的吡喃并吲哚类化合物或权利要求8所述的药物组合物在制备激活HIV潜伏感染病毒储存库的药物中的应用。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的吡喃并吲哚类化合物或权利要求8所述的药物组合物在在制备用于与其他抗HIV病毒药物联合用于治疗艾滋病的药物中的应用。
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