CN107281011A

CN107281011A - 食用菌菌根提取物及利用其制备的漱口水

Info

Publication number: CN107281011A
Application number: CN201710532732.9A
Authority: CN
Inventors: 程抒劼; 黄睿洁; 胡凯宇; 徐辉; 崔晨; 向雨; 陈韡亚; 文质; 李炳轩; 蒋耀瑛; 陈贵堂; 王岁楼
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2017-07-03
Filing date: 2017-07-03
Publication date: 2017-10-24
Anticipated expiration: 2037-07-03
Also published as: CN107281011B

Abstract

本发明涉及一种食用菌菌根提取物，由如下步骤制备而成：将食用菌菌根干燥后磨粉，过筛，得到菌根粉末，密封保存备用；往提取溶剂中加入菌根粉末，室温下搅拌，然后过滤，将滤液冷冻干燥后，即得食用菌菌根提取物，保存于‑20℃。本发明采用废弃食用菌菌根作为原料，提高了食用菌工厂化生产的附加值，增了加企业利润。制得的食用菌菌根提取物能够有效抑制口腔变异链球菌生长和生物膜形成，最小抑菌浓度为10mg/ml，最小杀菌浓度为20mg/ml，并且对变异链球菌生长和生物膜形成的抑制作用呈浓度和时间依赖性。

Description

食用菌菌根提取物及利用其制备的漱口水

技术领域

本发明涉及一种食用菌菌根提取物。

背景技术

我国是食用菌生产大国，食用菌工厂化生产过程中产生的废弃菌根大多就地堆置，或直接施入田中，这造成了农业有机资源的巨大浪费。菌根来源于食用菌的子实体，和药材相比安全性更高，并且其中含有大量多糖、有机酸、果胶、酶等生物活性物质，具有高值化利用的潜力。

龋齿又称龋病，俗称虫牙或蛀牙，是由于口腔内的细菌菌斑侵蚀作用造成的。有许多细菌，在适宜条件下，滞留牙齿表面的食物残渣会被口腔内的变异链球菌等发酵分解生成酸性物质，对牙齿硬组织进行龋蚀。目前我国市面上的防龋病口腔保健功能产品以牙膏为主，产品品种比较单一。漱口水作为新型口腔保健产品，具有软化口腔隐藏污垢，清除口腔垃圾同时吸附异味、抑菌、携带方便等优点，市场前景广阔。但是对于含有天然抑菌成分的温和、安全、有效且成本低廉的国产保健漱口水开发较少，导致国外代购品牌热销。

本发明人首次以废弃菌根为原料制备出生物活性提取物，并在此基础上开发出具有防龋病口腔保健功能的产品，可以变废为宝，进一步提高食用菌工厂化生产的附加值，增加企业利润。

现有技术中，有采用牛樟芝作为原料提取抑菌活性物质的，牛樟芝是中国台湾、岭南地区特有的真菌，仅生长于牛樟树腐朽之内壁的中空处，或枯死伏倒之牛樟树阴暗潮湿的表面，数量非常稀少，且生长速度非常缓慢，每年生长厚度仅几公分而已。由于数量稀少，采集不易，市价高达每台斤数十万新台币，价值远远凌驾于灵芝、人参、冬虫夏草等名贵药材之上，被称作药材中的王中之王。因此，该提取方法成本极高，难以满足大规模的工业化生产，开发潜力十分有限。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中废弃菌根浪费的问题以及采用牛樟芝提取抑菌活性物质存在的不足，提供一种食用菌菌根提取物，其能有效利用食用菌废弃菌根，变废为宝，并且制备工艺简单、成本低。

技术方案

一种食用菌菌根提取物，由如下步骤制备而成：

(1)将食用菌菌根干燥后磨粉，过筛，得到菌根粉末，密封保存备用；

(2)往提取溶剂中加入菌根粉末，室温下搅拌，然后过滤，将滤液冷冻干燥后，即得食用菌菌根提取物，保存于-20℃；

所述食用菌选自金针菇、杏鲍菇、香菇、草菇、猴头菇或双胞蘑菇中的一种或两种以上任意比例的混合物。

步骤(2)中，所述提取溶剂为去离子水、乙酸乙酯或50-95wt％的乙醇溶液，优选为50wt％的乙醇溶液，效果最好。

步骤(1)中，所述干燥温度为50-70℃，时间为10-20h。

步骤(1)中，所述过筛为过60目筛。

步骤(2)中，所述搅拌转速为100-300r/min，搅拌时间为24-60h。

步骤(2)中，每100ml的提取溶剂中菌根粉末的加量为8-15g。

一种利用上述食用菌菌根提取物制备的漱口水，每100ml漱口水由如下成分组成：1-2g食用菌菌根提取物，0.5-0.6g薄荷脑，0.5-0.6g十二烷基硫酸钠，0.4-0.6g尼泊金甲酯，1-2ml吐温80，2-4ml甘油，10-15ml食用级乙醇，余量为去离子水。

上述漱口水的制备方法：将食用菌菌根提取物、薄荷脑、十二烷基硫酸钠、尼泊金甲酯、吐温80、甘油、食用级乙醇溶解在去离子水中，定容，即得。

有益效果：本发明的食用菌菌根提取物能够有效抑制口腔变异链球菌生长和生物膜形成，最小抑菌浓度为10mg/ml，最小杀菌浓度为20mg/ml，并且对变异链球菌生长和生物膜形成的抑制作用呈浓度和时间依赖性。在此基础上成功制备出含有食用菌菌根提取物(浓度为10mg/ml)的具有显著防龋病口腔保健功效的漱口水样品。本发明采用废弃食用菌菌根作为原料，提高食用菌工厂化生产的附加值，增加企业利润，具有一定的经济价值。本发明的食用菌菌根提取物还可应用于相关防龋病人类和宠物口腔保健产品，例如牙膏、牙线、口香糖、宠物咬胶等。

附图说明

图1为实施例3的菌根提取物的浓度对浮游变异链球菌生长的关系图；

图2为实施例3的菌根提取物的浓度对变异链球菌生物膜形成的关系图；

图3为实施例3的菌根提取物的浓度对变异链球菌生长的曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

将金针菇菌根70℃干燥15h后磨粉，过60目筛，得到菌根粉末，密封保存备用；往200ml去离子水中加入20g菌根粉末，室温下搅拌48h，转速为150r/min，然后过滤，将滤液冷冻干燥后，即得食用菌菌根提取物，保存于-20℃。产物记为TG01。

实施例2

将金针菇菌根60℃干燥12h后磨粉，过60目筛，得到菌根粉末，密封保存备用；往200ml95wt％乙醇溶液中加入20g菌根粉末，室温下搅拌48h，转速为125r/min，然后过滤，将滤液冷冻干燥后，即得食用菌菌根提取物，保存于-20℃。产物记为TG02。

实施例3

将金针菇菌根60℃干燥12h后磨粉，过60目筛，得到菌根粉末，密封保存备用；往200ml50wt％乙醇溶液中加入20g菌根粉末，室温下搅拌48h，转速为125r/min，然后过滤，将滤液冷冻干燥后，即得食用菌菌根提取物，保存于-20℃。产物记为TG03。

制备100ml漱口水，漱口水成分：1g食用菌菌根提取物，0.5012g薄荷脑，0.5002g十二烷基硫酸钠，0.4996g尼泊金甲酯，1ml吐温80，2ml甘油，12ml食用级乙醇，余量为去离子水。

制备方法：(1)将提取物TG03加入食用级8ml乙醇中，搅拌；加入40ml去离子水，搅拌至溶解；(2)将甘油和聚山梨酸酯80混合，充分搅拌均匀，加入步骤(1)中所制得溶液中，搅拌；(3)依次往步骤(2)所制得溶液中加入薄荷脑，十二烷基硫酸钠，尼泊金甲酯，搅拌，再向其中加入10ml去离子水水，4ml乙醇，搅拌；(4)将装有步骤(4)所制样品的烧杯放入数显恒温搅拌循环水箱中，37℃恒温水浴加热并搅拌15min；(5)将步骤(4)所制得溶液转移至100ml容量瓶中，洗涤烧杯与玻璃棒，用去离子水定容至50ml，制得漱口水样品。

将漱口水进行抑菌和杀菌实验，结果显示200倍稀释的漱口水样品对口腔变形链球菌的生长产生抑制作用，160倍稀释的漱口水样品能够杀灭口腔变形链球菌。

实施例4

将金针菇菌根55℃干燥16h后磨粉，过60目筛，得到菌根粉末，密封保存备用；往200ml乙酸乙酯中加入20g菌根粉末，室温下搅拌48h，转速为125r/min，然后过滤，将滤液冷冻干燥后，即得食用菌菌根提取物，保存于-20℃。产物记为TG04。

实验测试：

将实施例1-4制得的菌根提取物进行抗菌抑菌功效评价：分别通过最小抑菌和杀菌浓度测定、生长和生物膜形成抑制实验进行筛选，方法和结果如下：

1.最小抑菌浓度和杀菌浓度测定

最小抑菌浓度(MIC)是指可以抑制微生物生长的最低浓度，最小杀菌浓度(MBC)是指可以杀灭微生物的最低浓度。本实验由双倍稀释法确定菌根提取物对变异链球菌(Streptococcus mutans，UA159)的MIC和MBC。将过夜培养的变异链球菌(10⁶CFU/ml)分别加在含有0、2.5、5.0、10.0和20.0mg/ml不同菌根提取物的TSB培养基中并在96孔板内培养24h(5％CO₂，37℃)。培养结束后，使用酶标仪读取菌液的浊度(OD＝595nm)。MIC是浊度小于0.050的菌根提取物的最低浓度。后取浓度大于等于MIC的菌液滴于TSA平板上，孵育48小时。MBC是平板上无菌落的菌根提取物的最低浓度。结果显示提取物TG03的效果最好(表1)，因此选取提取物TG03进行后续实验。

表1不同菌根提取物对变异链球菌的MIC和MBC

	TG01	TG02	TG03	TG04
					MIC(mg/ml)	>20	20	10	>20
MBC(mg/ml)	>20	>20	20	>20

2.对浮游变异链球菌生长的影响测定

将过夜培养的变异链球菌(10⁶CFU/ml)分别加在含有0，0.31，0.63，1.25，2.5，5.0和10.0mg/ml菌根提取物TG03的TSB培养基中并在96孔板内培养24小时(5％CO₂，37℃)，培养结束后，使用酶标仪读取菌液的浊度(OD＝595nm)，结果见图1。由图1可以看出，提取物TG03对浮游变异链球菌生长的抑制作用呈浓度依赖性。

3.对变异链球菌生物膜形成的影响测定

将过夜培养的变异链球菌(10⁶CFU/ml)分别加在含有0,2.5,5.0,和10.0mg/ml菌根提取物TG03的TSBS(TSB+1％蔗糖)培养基中并在96孔板内培养24h(5％CO₂，37℃)。培养结束后，使用移液器去除培养基和未粘附的细菌，生理盐水清洗生物膜两次，使用10％福尔马林固定生物膜30分钟，再使用生理盐水清洗生物膜两次，使用0.5％结晶紫染色生物膜30分钟。后用生理盐水清洗生物膜三次以除尽多余的结晶紫，再使用异丙醇萃取生物膜内的结晶紫1小时，最后将已萃取了结晶紫的异丙醇转移至新的96孔板中，再使用酶标仪读取吸光度(OD＝490nm)，结果见图2。由图2可以看出，提取物TG03对变异链球菌生物膜形成的抑制作用呈浓度依赖性。

4.对变异链球菌生长曲线的影响

将过夜培养的变异链球菌(10⁶CFU/ml)分别加在含有0,1.25,2.5,5.0,和10.0mg/ml菌根提取物TG03的TSB培养基中并在96孔板内培养24h(5％CO₂，37℃)，实验过程中使用矿物油遮盖菌液，以防菌液挥发。使用酶标仪每隔30min读取一次菌液的浊度(OD＝595nm)直至24h后培养结束，测试结果见图3。由图3可以看出，提取物TG03对变异链球菌生长的抑制作用呈浓度和时间依赖性。

Claims

1.一种食用菌菌根提取物，其特征在于，由如下步骤制备而成：

所述食用菌选自金针菇、杏鲍菇、香菇、草菇、猴头菇或双胞蘑菇中的一种或两种以上任意比例的混合物；

步骤(2)中，所述提取溶剂为去离子水、乙酸乙酯或50-95wt％的乙醇溶液。

2.如权利要求1所述的食用菌菌根提取物，其特征在于，步骤(2)中，所述提取溶剂为50wt％的乙醇溶液。

3.如权利要求1所述的食用菌菌根提取物，其特征在于，步骤(1)中，所述干燥温度为50-70℃，时间为10-20h。

4.如权利要求1所述的食用菌菌根提取物，其特征在于，步骤(1)中，所述过筛为过60目筛。

5.如权利要求1所述的食用菌菌根提取物，其特征在于，步骤(2)中，所述搅拌转速为100-300r/min，搅拌时间为24-60h。

6.如权利要求1至5任一项所述的食用菌菌根提取物，其特征在于，步骤(2)中，每100ml的提取溶剂中菌根粉末的加量为8-15g。

7.利用权利要求1-6任一项所述的食用菌菌根提取物制备的漱口水，其特征在于，每100ml漱口水由如下成分组成：1-2g食用菌菌根提取物，0.5-0.6g薄荷脑，0.5-0.6g十二烷基硫酸钠，0.4-0.6g尼泊金甲酯，1-2ml吐温80，2-4ml甘油，10-15ml食用级乙醇，余量为去离子水。