CN107254422A

CN107254422A - 一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基

Info

Publication number: CN107254422A
Application number: CN201710532098.9A
Authority: CN
Inventors: 涂彩虹; 张驰松; 刘静; 刘一静; 郑旗; 刘继; 冯骏; 张正周
Original assignee: Chengdu Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Current assignee: Chengdu Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Priority date: 2017-07-03
Filing date: 2017-07-03
Publication date: 2017-10-17

Abstract

本发明公开了一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，包括脱脂大豆粉、葡萄糖、L‑半胱氨酸、L‑丝氨酸、NaCl、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂和水，所述培养基中各物质的质量百分比含量为：脱脂大豆粉10‑30%、葡萄糖1~3%、L‑半胱氨酸0.01~0.1%、L‑丝氨酸0.01~0.1%、NaCl0.3~0.5%、MgSO₄·7H₂O0~0.1%、CaCl₂0.01~0.1%，余量为水。本发明能够促进较大比例细菌产生芽胞，而芽孢具有较强的抗性，对高温、紫外线、干燥、电离辐射和很多有毒的化学物质都有很强的抗性，从而可提升培养物的稳定性；利用本发明的培养基得到的纳豆激酶产生菌能获得高纳豆激酶活性的发酵物。

Description

一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基。

背景技术

纳豆激酶(nattokinase简称NK)是一种枯草杆菌蛋白激酶，是在纳豆发酵过程中由纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilisl natto)产生的一种丝氨酸蛋白酶，于1980年在纳豆中被发现，由275个氨基酸按照固定排列方式组成，分子量是27724，有分解血栓的独特功能。纳豆激酶具有溶解血栓，降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。

最开始的纳豆激酶都是从纳豆中分离提取得来的，纳豆的制作属于固态发酵，固态发酵的缺点在于易染菌、难散热、回收率低，很难满足有严格要求的药品尤其是生物制品的生产要求。因此近年来，成本低廉、产量高并更易于工业化的液态发酵逐步替代了固态发酵，成为工业化生产纳豆激酶的主要方式。但是不管是固态发酵还是液态发酵，要提高纳豆激酶产品的质量，同时降低其生产成本，最关键的都是要提高纳豆激酶的单位产物的酶活力。

目前对于纳豆激酶液态发酵的研究虽然比较多，但主要都集中在优良菌种选育、发酵工艺的优化和分离纯化方法的选择方面，而对于培养基成分的筛选和匹配则研究比较少。事实上，培养基的性状、所含成分及其配比，对其发酵过程和发酵结果都有很大影响，因此，对纳豆激酶产生菌的培养基的优化研究具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，提高纳豆激酶产生菌的稳定性和纳豆激酶的活性。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，包括下述质量百分比含量的组分：脱脂大豆粉10-30%、葡萄糖1~3%、L-半胱氨酸0.01~0.1%、L-丝氨酸0.01~0.1%、NaCl0.3~0.5%、MgSO₄·7H₂O0~0.1%、CaCl₂0.01~0.1%，余量为水。

优选的，所述培养基的pH值为7.0-7.8。

优选的，所述脱脂大豆粉的质量百分比含量为20%、葡萄糖的质量百分比含量为1.5%、L-半胱氨酸的质量百分比含量为0.07%、L-丝氨酸的质量百分比含量为0.02%、NaCl的质量百分比含量为0.3%、MgSO₄·7H₂O的质量百分比含量为0.02%、CaCl₂的质量百分比含量为0.03%，余量为水。

优选的，所述培养基的pH值为7.4。

本发明的有益效果是：

（1）本发明能够促进较大比例细菌产生芽胞（细菌的休眠体），而芽孢具有较强的抗性，对高温、紫外线、干燥、电离辐射和很多有毒的化学物质都有很强的抗性，从而可提升培养物的稳定性；

（2）利用本发明的培养基得到的纳豆激酶产生菌能获得高纳豆激酶活性的发酵物。

具体实施方式

下面进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

【实施例一】该实施例描述了一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，包括下述质量百分比含量的组分：10%脱脂大豆粉、1%葡萄糖、0.01%L-半胱氨酸、0.01%L-丝氨酸、0.3%NaCl、0.01%CaCl₂，余量为水，培养基的pH值为7.0。

按接种量1.5%的比例接种纳豆激酶产生菌培养物（浓度1×10⁶CFU/mL）——枯草芽胞杆菌枯草亚种，购买自CICC（中国工业微生物菌种保藏中心），菌株编号：21076），在37℃、150r/min的条件下恒温振荡培养24h，芽胞数量达到5.6×10⁸ CFU/mL。取发酵上清液，用紫外分光光度法测得产品酶活为51960 u/mL。

【实施例二】该实施例描述了一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，包括下述质量百分比含量的组分：15%脱脂大豆粉、2%葡萄糖、0.07%L-半胱氨酸、0.02%L-丝氨酸、0.3%NaCl、0.02%MgSO₄·7H₂O、0.03%CaCl₂，余量为水，培养基的pH值为7.4。

按接种量1%的比例接种纳豆激酶产生菌培养物（浓度1×10⁶CFU/mL）——枯草芽胞杆菌枯草亚种，购买自CICC（中国工业微生物菌种保藏中心），菌株编号：21076），在36℃、150r/min的条件下恒温振荡培养24h，芽胞数量达到6×10⁸ CFU/mL。取发酵上清液，用紫外分光光度法测得产品酶活为74250 u/mL。

【实施例三】该实施例描述了一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，包括下述质量百分比含量的组分：30%脱脂大豆粉、3%葡萄糖、0.1%L-半胱氨酸、0.1%L-丝氨酸、0.5%NaCl、0.1%MgSO₄·7H₂O、0.1%CaCl₂，余量为水，培养基的pH值为7.8。

按接种量2%的比例接种纳豆激酶产生菌培养物（浓度1×10⁶CFU/mL）——枯草芽胞杆菌枯草亚种，购买自CICC（中国工业微生物菌种保藏中心），菌株编号：21076，在36℃、180r/min的条件下恒温振荡培养24h，芽胞数量达到7×10⁸ CFU/mL。取发酵上清液，用紫外分光光度法测得产品酶活为72120u/mL。

尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims

1.一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，其特征在于，包括下述质量百分比含量的组分：脱脂大豆粉10-30%、葡萄糖1~3%、L-半胱氨酸0.01~0.1%、L-丝氨酸0.01~0.1%、NaCl0.3~0.5%、MgSO₄·7H₂O0~0.1%、CaCl₂0.01~0.1%，余量为水。

2.根据权利要求1所述的一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，其特征在于，所述培养基的pH值为7.0-7.8。

3.根据权利要求1所述的一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，其特征在于，所述脱脂大豆粉的质量百分比含量为20%、葡萄糖的质量百分比含量为1.5%、L-半胱氨酸的质量百分比含量为0.07%、L-丝氨酸的质量百分比含量为0.02%、NaCl的质量百分比含量为0.3%、MgSO₄·7H₂O的质量百分比含量为0.02%、CaCl₂的质量百分比含量为0.03%，余量为水。

4.根据权利要求3所述的一种提高纳豆激酶产生菌稳定性与纳豆激酶活性的培养基，其特征在于，所述培养基的pH值为7.4。