CN1072509C - Re－188－硫化铼混悬液制剂、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

一种标记率高、稳定性好、颗粒度适中的¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂，以及用KReO₄、¹⁸⁸ReO₄ ^-、Na₂S₂O₃和HCl反应加上明胶或PVP制备¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂的制备方法，最高标记率可达100%。动物试验证实¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂对治疗肿瘤和类风湿性关节炎有极佳的效果，显示该制剂可作为介入法治疗肿瘤和类风湿性关节炎的放射性药物。

Description

Re-188-硫化铼混悬液制剂、制备方法及其应用

本发明涉及放射性药物及核医学的领域。

近年来，治疗用放射性药物在核医学领域得到了越来越广泛的应用。¹⁸⁸Re由于其优良的核性质(T_1/2为17小时，其2.12MeV和1.96MeV的β射线适于治疗，0.155MeV的γ射线又可同时显像)，已在治疗药物研究中崭露头角。台湾学者Shyh-Jen Wang(参阅Shyh-Jen Wang,et al.Eur J Nucl Med,1995；22:505-507)制备的¹⁸⁸Re-硫化铼胶体颗粒度较小(约17.5％的颗粒小于1μm)，从而导致约13％的放射性从关节中泄漏，且并无疗效的报道。国内尚未见有关¹⁸⁸Re-硫化铼的报道。因此对¹⁸⁸Re-硫化铼制剂、制备方法及其应用的研究，是一项很有意义的科题。

本发明的目的是提供一种标记率高、稳定性好、颗粒度适中的¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂，以及用KReO₄、¹⁸⁸ReO₄ ^-、Na₂S₂O₃和HCl反应加上明胶或PVP来制备¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂的制备方法，动物试验证实该制剂能应用于治疗肿瘤和类风湿性关节炎。

本发明提供一种¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂，其特性如下：

性状：黑色不透明混悬液

pH值：6-7

放射化学纯度：100％为¹⁸⁸Re-硫化铼

颗粒度：＜1μm:0-0.5％；1-5μm:62.3-89.6％；5-10μm:8.0-26.2％；＞10μm:2.4-17.1％

无菌检查：无细菌及霉菌生长

内毒素检查：＜0.25Eu/ml

急性毒性试验：对小鼠皮下注射的LD₅₀大于28.82g/kg

异常毒性检查：无异常毒性

贮藏稳定性：三天内¹⁸⁸Re全部以硫化铼的形式存在，颗粒稍有沉降，但只需稍微晃动摇匀即可，仍有效。

本发明¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂的制备方法：

(1)¹⁸⁸Re-NaReO₄的淋洗(参阅尹端沚等，核技术，1998；21(1):51-55)

用蠕动泵将生理盐水泵入¹⁸⁸W/¹⁸⁸Re发生器(用氧化铝作为吸附剂)，控制约1ml/min的流速淋洗，可获得高纯度无载体的¹⁸⁸Re-NaReO₄,HPGe探测器(HPGe多道分析仪，美国ORTEC公司出品)分析¹⁸⁸Re-NaReO₄核纯度为99-100％,0.9％NaCl作展开剂纸层析得出¹⁸⁸Re-NaReO₄的放化纯度为95-100％。

(2)¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂的制备

取摩尔比为10～120∶1的Na₂S₂O₃和KReO₄配制成水溶液，再按制剂放射性强度的要求加入一定量的¹⁸⁸Re-NaReO₄，再加入浓度为1～10M的HCl溶液1ml/2.8mmol KReO₄，然后水浴加热8～35分钟，冷却后离心，分离上清液后加入少量蒸馏水洗涤沉淀，再离心，去上清液后加入浓度为5-40mg/ml的明胶溶液5ml/2.8mmol KReO₄或浓度为40-150mg/ml的PVP溶液5ml/2.8mmol KReO₄，超声5-20分钟，控制颗粒度大小，得到¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液，标记率80～100％。

本发明¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂在制备过程中按下述方法对各项性能进行测定(1)标记率的测定

在制备混悬液制剂过程中，当冷却后，用混合器将溶液混匀后测放射性计数率(N₁)，然后离心去上清液，加水洗涤再离心去上清液，两份上清液一起测放射性计数率(N₂)。两者测放射性计数率的几何条件(如试管大小、液面高低等)保持一致。

标记率=(1-N₂/N₁)×100％。

(2)颗粒度的测定

将制得的混悬液制剂取1滴滴于载玻片上，覆盖盖玻片。在油镜[放大1000倍，用标准物镜测微尺校正目镜测微尺刻度，1μm=1.5格，5μm=7.2格，9μm=13.5格，10μm=14.5格]下观察，分别查出＜1.5格，1.5～7格，7～14.5格，＞14.5格的颗粒数。颗粒总数200～300个，分别计算其占总数的百分比，从而得出混悬液颗粒的分布。

(3)稳定性实验

将制得的混悬液静置，分不同的时间点测量颗粒度和硫化铼混悬液的放化纯度(纸层析：用新华一号层析纸，0.9％NaCl为展开剂，室温上行法展开10-15cm,¹⁸⁸Re-硫化铼，Rf=0；¹⁸⁸Re-NaReO₄,Rf=0.70)。

另将制得的混悬液各取1ml分别加入1ml的磷酸盐缓冲中液(PH=7)、1％BSA、生理盐水及病人无菌性关节炎渗出液中，37℃温浴24小时、48小时和72小时后分别纸层析测量其放化纯度。

(4)无菌、无热原检查以及异常毒性和急性毒性试验

无菌、无热原检查以及异常毒性按95版中国药典规定方法检查。异常毒性检查中的小鼠为昆明种，17-20g。皮下注射¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液0.5ml，全部小鼠在给药后48小时内无死亡，说明无异常毒性。

急性毒性试验按《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》(1993年)小鼠急性毒性试验方法进行。供试小鼠为昆明种，17-20g。因为小鼠在注射¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液最大体积和浓度下不死亡，故进行最大耐受试验。皮下注射¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液0.5ml(0.49g)，全部小鼠(20只，雌雄各半)在给药后7-14天内无死亡，对小鼠皮下注射的LD₅₀大于28.82g/kg。

将本发明¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂采用介入法用于治疗肿瘤和类风湿性关节炎的动物试验：

(1)用于荷瘤鼠的肿瘤治疗，三天内约90％的¹⁸⁸Re集中在肿瘤中，肿瘤抑制率大于96％。

(2)用于关节滑膜增生的兔子模型治疗类风湿性关节炎，¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂在关节腔内注入后，在关节内滞留率分别为1小时98％,24小时95％，72小时92％。8天后的病理切片显示，髌骨脂肪垫中炎性细胞明显减少，滑膜变薄。

由上述动物试验证实，本发明¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂显示可作为介入法治疗肿瘤和类风湿性关节炎的放射性药物。

本发明优点：

本发明¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂颗粒度适中，主要以1-5μm为主。在放置过程中逐渐沉降，但均很细微，晃动容器即可使其重新分布均匀，72小时内颗粒度基本不变。稳定性好，其放化程度72小时内放射性全部以硫化铼的形式存在。无菌，内毒素＜0.25Eu/ml。无异常毒性，对小鼠皮下注射的LD₅₀大于28.82g/kg。本发明¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂的制备方法，工艺简单，最高标记率可达100％。

动物试验证实对治疗肿瘤和类风湿性关节炎有极佳的效果。显示本发明¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂作为治疗肿瘤和类风湿性关节炎的放射性药物有很大的实用意义。

本发明通过以下的附图及实施例作进一步阐述，但并不限制本发明的范围。

附图说明：

图1是注射生理盐水，无放射性硫化铼混悬液及¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液后的肿瘤生长曲线图。

实施例1    ¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂的制备

在试管中放入Na₂S₂O₃ 5.01mg和KReO₄ 0.8mg，加入2ml水配制成溶液，然后加入2ml(2.0mCi/ml)¹⁸⁸Re-NaReO₄溶液，再加入8M的HCl 1ml，水浴(100℃)加热35分钟。冷却后，4000rpm离心10分钟，分离上清液后加入少量蒸馏水洗涤沉淀。4000rpm再离心5分钟，去上清液后加入明胶溶液5ml(6.4mg/ml)。超声20分钟，即得¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂。标记率为80％，颗粒度为＜1μm:0.5％；1-5μm:84.5％；5-10μm:12.1％；＞10μm:2.9％。

实施例2    ¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂的制备

在试管中放入Na₂S₂O₃ 25.5mg和KReO₄ 0.8mg，加入2ml(6.2mCi/ml)¹⁸⁸Re-NaReO₄溶液，再加入5M的HCl 1ml，水浴(100℃)加热20分钟。两次离心后加入PVP溶液5ml(40mg/ml)，超声10分钟，其余步骤同实施例1。标记率为90％，颗粒度为＜1μm:0.3％；1-5μm:75.4％；5-10μm:19.4％；＞10μm:4.9％。

实施例3    ¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂的制备

在试管中加入Na₂S₂O₃ 56.1mg和KReO₄0.8mg，加入2ml(10.3mCi/ml)¹⁸⁸Re-NaReO₄溶液，再加入2M的HCl 1ml，水浴(100℃)加热8分钟。两次离心后加入明胶溶液5ml(25mg/ml)超声5分钟，其余步骤同实施例1。标记率为100％，颗粒度为＜1μm:0％；1-5μm:62.8％；5-10μm:23.2％；＞10μm:14.0％。

实施例4 ¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂治疗荷瘤鼠的试验

(1)采取肿瘤直接注入法，将¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液直接注入16只S-180肉瘤荷瘤鼠内(每只注射0.2mCi/0.1ml)肿瘤内，其生物分布见下表1。放射性在瘤内的保持率分别为90.5±7.7％(1小时)，92.2±8.6％(24小时)，88.3±10.9％(48小时)and 91.5±7.6％(72小时)。

(2)将0.5mCi/0.1ml ¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液分别注入10只荷瘤鼠(S-180肉瘤)肿瘤内，6天后再分别注入0.6mCi/0.1ml ¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液，对比组(19只荷瘤鼠)分别注入0.1ml生理盐水和0.1ml无放射性硫化铼混悬液，每三天测量肿瘤的长(a)、短径(b)，计算其体积(V=1/2ab²)，其生长曲线见图1。肿瘤抑制率(=(治疗组瘤重-对比组瘤重/对比组瘤重)×100％)为96.5％。因此可以看出¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液对治疗肿瘤有极佳的效果。

实施例5 ¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂治疗兔子类风湿性关节炎的试验

取患类风湿性关节炎的兔子模型10只，分别于模型兔的一个膝关节内注射¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液(0.6mCi/0.2ml)，另一个膝关节内注射0.2ml生理盐水作为对照组，注射1小时(10只)24小时(5只)和72小时(5只)后分别做显像研究，计算¹⁸⁸Re在膝关节的滞留率(西门子Z3700型号SPECT)分别为1小时98％；24小时95％；72小时92％。膝关节内注射¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液后24小时和72小时，计算其生物分布(见下表2)。仔细打开治疗组与对照组膝关节，取出关节腔滑膜，分别做病理切片。病理切片显示模型兔对照组膝关节表面红肿，充血，显微镜下滑膜中细胞增多，有血管化的纤维结缔组织，炎性细胞和增生的滑膜。而关节腔内注射¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液8天后的治疗组膝关节的病理切片显示，髌骨脂肪垫中炎性细胞明显减少，滑膜变薄。表1瘤内注射¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂在小鼠体内的生物分布(％ID/g^*，平均值±SD,n=4)

注射后时间(小时)	肿瘤	血	心	肺	肝	脾	肾	脑	肌肉	骨
											1	231.34±97.24	0.01±0.01	＜0.01	0.59±0.55	0.07±0.02	0.06±0.06	0.03±0.01	＜0.01	＜0.01	＜0.01
24	300.88±113.91	0.10±0.06	＜0.01	0.15±0.11	0.25±0.25	0.14±0.21	0.27±0.12	＜0.01	0.03±0.02	＜0.01
											48	230.44±89.23	0.06±0.07	0.04±0.05	＜0.01	0.23±0.16	0.22±0.23	0.40±0.25	＜0.01	＜0.01	＜0.01
72	263.43±74.35	＜0.01	＜0.01	＜0.01	0.32±0.40	0.65±0.79	0.14±0.18	＜0.01	＜0.01	＜0.01

^*％ID/g为注射剂量的百分比/组织克数(％injected dose/tissue gram)

表2关节腔内注射¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂在兔子体内的生物分布

时间(天)	％ID/g×10-2
										肝	肺	肾	脾	肌肉	骨	血	尿	心
	1(n=5)	0.062	0.078	0.12	0.088	0.045	0.042	0.015	0.17										0.028
3(n=5)										0.015	0.018	0.0081	0.023	0.018	0.014	0.011	0.0043	0.0055

Claims (3)

1、一种¹⁸⁸Re标记的硫化铼混悬液制剂，其特征在于所述的¹⁸⁸Re-硫化铼混悬液制剂中的¹⁸⁸Re-硫化铼颗粒度为：＜1μm    0-0.5％1-5μm    62.3-89.6％5-10μm   8.0-26.2％＞10μm   2.4-17.1％。

2、一种¹⁸⁸Re标记的硫化铼混悬液制剂的制备方法，其特征在于通过KReO₄、Na₂S₂O₃、¹⁸⁸ReO₄ ^-和HCl反应，KReO₄和Na₂S₂O₃的摩尔比为1∶10-120，每2.8mmol KReO₄加入1-10M HCl 1ml，水浴加热8-35分钟，离心分离弃去上清液，在沉淀中每2.8mmol KReO₄再加入浓度为5-40mg/ml的明胶溶液5ml或浓度为40-150mg/ml的PVP溶液5ml，超声5-20分钟成混悬液制剂。

3、权利要求1所述的¹⁸⁸Re标记的硫化铼混悬液制剂在制备治疗肿瘤和类风湿性关节炎的放射性药物中的应用。