CN107228833A - 一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107228833A
CN107228833A CN201710269527.8A CN201710269527A CN107228833A CN 107228833 A CN107228833 A CN 107228833A CN 201710269527 A CN201710269527 A CN 201710269527A CN 107228833 A CN107228833 A CN 107228833A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sapindusmukerossi
total saponin
solution
extractant
indicator
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710269527.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107228833B (zh
Inventor
段志贵
黄硕泉
陈爽
刘炅峰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dongguan Micro Bio Technology Co Ltd
Original Assignee
Dongguan Micro Bio Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dongguan Micro Bio Technology Co Ltd filed Critical Dongguan Micro Bio Technology Co Ltd
Priority to CN201710269527.8A priority Critical patent/CN107228833B/zh
Publication of CN107228833A publication Critical patent/CN107228833A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107228833B publication Critical patent/CN107228833B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
    • G01N21/33Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using ultraviolet light

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本公开揭示了一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法,所述试剂盒包括干燥辅助剂、提取剂、水解剂、指示剂、显色剂和标准品。所述干燥辅助剂为硅藻土或石英砂,所述提取剂为甲醇和乙酸,所述水解剂为盐酸,所述指示剂为酚酞,所述中和剂为氢氧化钠,所述显色剂为3、5‑二硝基水杨酸,所述标准品为高纯度无患子总皂苷。本公开成本低、灵敏度高、线性范围宽,兼容性好,保质期长,对环境无危害,操作简单快捷,非专业人员根据说明书也能很好完成检测。

Description

一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法
技术领域
本公开涉及生物技术检测领域,尤其涉及一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法。
背景技术
无患子为无患子科,属乔木,其果实含有大量的皂苷成分可作为制作天然洗涤剂的原材料,因此经济效益显著。目前检测无患子总皂苷的方法主要有液相色谱质谱法、高效液相色谱法和香草醛-高氯酸/浓硫酸法两种。液相色谱质谱法能准确的测定和定量无患子皂苷,但是所用仪器设备造价昂贵,维护成本高,不易携带,所需操作人员的专业水平高,且线性范围窄,难以广泛应用于一般的工业快速检测。液相色谱质谱法高效液相色谱法存在所需设备昂贵、操作要求较高、需要昂贵的标准品等一系列的缺点。香草醛-高氯酸/浓硫酸法是以齐墩果酸为标准品,利用浓硫酸或高氯酸对无患子总皂苷脱水后与香草醛反应显色,通过对显色液光密度值得检测来定量总皂苷;此方法对假果皮或假果皮提取物等来源复杂样品的兼容性差,显色溶液的稳定性差,且采用浓硫酸或高氯酸对操作人员和环境的危害性大。因此,现有技术存在设备昂贵、没有无患子总皂苷标准品、兼容性差和方法危险性大等一系列问题,不太适合无患子皂苷原料或制品的质量控制和工业生产过程中的快速抽检。
发明内容
基于此,本公开揭示了一种无患子总皂苷快速检测试剂盒;
所述试剂盒包括:干燥辅助剂、提取剂、水解剂、指示剂、中和剂、显色剂和标准品;
所述干燥辅助剂用于辅助液体样品的干燥;
所述提取剂用于提取固体样品中的无患子总皂苷;
所述水解剂用于无患子总皂苷的水解;
所述指示剂用于无患子总皂苷水解液的酸碱度指示;
所述中和剂用于中和无患子总皂苷水解液中的盐酸;
所述显色剂用于无患子总皂苷水解液的显色;
所述标准品用于无患子总皂苷定量的标准参照物。
本公开还揭示了一种无患子总皂苷快速检测方法,所述方法包括以下步骤:
S100、将待测样品溶液加入到干燥剂中,进行干燥;
S200、向干燥后的待测样品溶液和干燥剂的混合物或者固体样品中加入提取剂,充分振荡溶解后,置于离心机中,得到沉淀和上清液;
S300、取步骤S200中的上清液,加入水解剂,沸水浴至100℃后水解得到水解液;
S400、对所述水解液中加入指示剂;
S500、加入中和剂至溶液显红色为止;
S600、加入显色剂,沸水浴加热,得到显色液;
S700、将显色液定容至5mL-25mL,利用紫外可见光分光光度计在540nm波长下测定显色液的光密度值;
S800、将无患子总皂苷粉末用提取剂溶解配制成溶液,根据无患子总皂苷的质量,按照等比或者等差数列设定n个递增的梯度标准样品,并按照步骤S100-S700完成无患子总皂苷标准品的光密度值的测定;
S900、根据无患子总皂苷标准品的浓度和光密度值的线性关系制作标准曲线,并以其作为参考,利用步骤S700中得到的光密度值计算待测样品中的无患子总皂苷含量。
本公开具有以下有益效果:
本公开能够检测无患子果皮、无患子果皮提取液和含无患子皂苷日化用品等样品中的无患子总皂苷含量,兼容性强。目前尚无针对无患子总皂苷含量测定的试剂盒。目前的定量方法主要有香草醛比色法、高效液相谱法和液质联用质谱仪法,本公开与之相比较,具有操作简单、试剂安全性高、准确度高和成本低等综合优势。
说明书附图
附图1为本公开一个实施例中一种无患子总皂苷快速检测方法流程图。
具体实施方式
在一个实施例中,结合图1进行说明,本公开揭示了一种无患子总皂苷快速检测试剂盒,其特征在于,
所述试剂盒包括:干燥辅助剂、提取剂、水解剂、指示剂、中和剂、显色剂和标准品;
所述干燥辅助剂用于辅助液体样品的干燥;
所述提取剂用于提取无患子总皂苷;
所述水解剂用于无患子总皂苷的水解;
所述指示剂用于无患子总皂苷水解液的酸碱度指示;
所述中和剂用于中和无患子总皂苷水解液中的盐酸;
所述显色剂用于无患子总皂苷水解液的显色;
所述标准品用于无患子总皂苷定量的标准参照物。
本实施例能够检测无患子果皮、无患子果皮提取液和含无患子皂苷日化用品等样品中的无患子总皂苷含量,兼容性强。目前尚无针对无患子总皂苷含量测定的试剂盒。
在一个实施例中,所述干燥辅助剂包括硅藻土、石英砂或者不溶于所述提取剂的固体颗粒。
在本实施例中,所述干燥剂可选不溶于所述提取剂的固体颗粒,优选硅藻土和石英砂。
在一个实施例中,所述提取剂包括1∶1-1∶2的甲醇、乙酸溶液或其他不溶解糖类和水溶性物质的溶液。
在本实施例中,所述提取剂可以为不溶解糖类和水溶性物质的溶液,优选1∶1-1∶2的甲醇、乙酸溶液。
在一个实施例中,所述水解剂包括3-6mol/L的盐酸溶液。
在本实施例中,所述水解剂优选盐酸,是因为相对硫酸、磷酸等酸性溶液,盐酸的水解效果和安全性的综合性能最佳。
在一个实施例中,所述指示剂为0.1-0.5%的酚酞溶液。
在本实施例中,选择pH8.0变色的指示剂均可,酚酞最佳。
在一个实施例中,所述中和剂为3-6mol/L的氢氧化钠溶液。
在本实施例中,所述中和剂选择碱性溶液均可,氢氧化钠最佳。
在一个实施例中,所述显色剂为0.3-1%的3、5-二硝基水杨酸溶液。
在本实施例中,所述显色剂选择具有氧化性且能显色定量的试剂,比如磷钼酸溶液,而3、5-二硝基水杨酸溶液为最佳选择。
在一个实施例中,所述标准品为无患子总皂苷粉末。
在一个实施例中,本公开揭示了一种无患子总皂苷快速检测方法,所述方法包括以下步骤:
S100、将待测样品溶液加入到干燥剂中,进行干燥;
S200、向步骤S100中得到的待测样品溶液和干燥剂的混合物或者固体样品中加入提取剂,充分振荡溶解后,置于离心机中,得到沉淀和上清液;
S300、取步骤S200中的上清液,加入水解剂,沸水浴至100℃后水解得到水解液;
S400、向步骤S300的水解液中加入指示剂;
S500、向步骤S400的溶液中加入中和剂至溶液显红色为止;
S600、向步骤S500中加入显色剂,沸水浴加热,得到显色液;
S700、将步骤S600中的显色液定容至5mL-25mL(该体积兼容一般的紫外可见光分光光度计用量,太多造成不必要的浪费),利用紫外可见光分光光度计在540nm波长下测定显色液的光密度值(显色后溶液的特征吸收波长为540nm);
S800、将无患子总皂苷粉末用提取剂溶解配制成溶液,根据无患子总皂苷的质量,按照等比或者等差数列设定n个递增的梯度标准样品,并按照步骤S200-S700完成无患子总皂苷标准品的光密度值的测定;
S900、根据无患子总皂苷标准品的浓度和光密度值的线性关系制作标准曲线,并以其作为参考,根据步骤S700中得到的光密度值计算待测样品中的无患子总皂苷含量。
在本实施例中,目前的定量方法主要有香草醛比色法、高效液相谱法和液质联用质谱仪法,本实施例所述的方法与香草醛比色法、高效液相谱法和液质联用质谱仪法相比较,具有操作简单、试剂安全性高、准确度高和成本低等综合优势。
在一个实施例中,步骤S100中所述将待测溶液与干燥剂的质量体积比为1∶2-1∶5
在本实施例中,1∶2-1∶5的干燥剂用量可使液体分散成细小液体,低于1∶2则不利于液体分散。
在一个实施例中,步骤S200中所述待测样品溶液和干燥剂的混合物与提取剂的质量体积比为1∶2;
所述离心机的转速为8000-12000rpm,离心时间为5-10分钟。
在本实施例中,实验结果表明,12000rpm、5分钟和8000rpm、10分钟即可达到较好的固液分离效果。
在一个实施例中,步骤S300中所述上清液和水解剂的体积比为1∶1-1∶3,沸水浴至100℃后水解的时间为15-25分钟。
在本实施例中,上清液和水解剂的体积比为1∶1-1∶3可以保证合适的水解剂浓度,过高过低会使水解产生副反应或不充分。
实验结果表明,太短的水解时间导致水解不充分,太长的水解时间不经济。
在一个实施例中,步骤S400中水解液与指示剂的具体比例为:50mL水解液中加入40-60μL指示剂。
在一个实施例中,步骤S600中沸水浴的加热温度为100℃,加热时间为5-10分钟。
在本实施例中,实验结果表明,低于5分钟不能够充分反应,太长的水解时间不经济。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解;其依然可以对上述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替代;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术所述的精神范围。

Claims (10)

1.一种无患子总皂苷快速检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:干燥辅助剂、提取剂、水解剂、指示剂、中和剂、显色剂和标准品;
所述干燥辅助剂用于辅助液体样品的干燥;
所述提取剂用于提取固体样品中的无患子总皂苷;
所述水解剂用于无患子总皂苷的水解;
所述指示剂用于无患子总皂苷水解液的酸碱度指示;
所述中和剂用于中和无患子总皂苷水解液中的盐酸;
所述显色剂用于无患子总皂苷水解液的显色;
所述标准品用作无患子总皂苷定量时的标准参照物。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,优选的,所述干燥辅助剂包括硅藻土、石英砂或者不溶于所述提取剂的固体颗粒;
所述提取剂包括1∶1-1∶2的甲醇、乙酸溶液或其他不能溶解糖类和水溶性物质的溶液;
所述水解剂包括3-6mol/L的盐酸溶液;
所述指示剂包括0.1-0.5%的酚酞溶液。
3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述中和剂包括3-6mol/L的氢氧化钠溶液;
所述显色剂包括0.3-1%的3、5-二硝基水杨酸溶液。
4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述标准品为无患子总皂苷粉末。
5.一种无患子总皂苷快速检测方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
S100、将待测样品溶液加入到干燥剂中,进行干燥;
S200、向干燥后的待测样品溶液和干燥剂的混合物或者固体样品中加入提取剂,充分振荡溶解后,置于离心机中,得到沉淀和上清液;
S300、取步骤S200中的上清液,加入水解剂,沸水浴至100℃后水解得到水解液;
S400、对所述水解液中加入指示剂;
S500、加入中和剂至溶液显红色为止;
S600、加入显色剂,沸水浴加热,得到显色液;
S700、将显色液定容至5mL-25mL,利用紫外可见光分光光度计在540nm波长下测定显色液的光密度值;
S800、将无患子总皂苷粉末用提取剂溶解配制成溶液,根据无患子总皂苷的质量,按照等比或者等差数列设定n个递增的梯度标准样品,并按照步骤S100-S700完成无患子总皂苷标准品的光密度值的测定;
S900、根据无患子总皂苷标准品的浓度和光密度值的线性关系制作标准曲线,并以其作为参考,利用步骤S700中得到的光密度值计算待测样品中的无患子总皂苷含量。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤S100中所述将待测溶液与干燥剂的质量体积比为1∶2-1∶5。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:步骤S200中所述待测样品溶液和干燥剂的混合物与提取剂的质量体积比为1∶2;所述离心机的转速为8000-12000rpm,离心时间为5-10分钟。
8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:步骤S300中所述上清液和水解剂的体积比为1∶1-1∶3;
沸水浴至100℃后水解的时间为15-25分钟。
9.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤S400中水解液与指示剂的具体比例为:50mL水解液中加入40-60μL指示剂。
10.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:步骤S600中沸水浴的加热温度为100℃,加热时间为5-10分钟。
CN201710269527.8A 2017-04-21 2017-04-21 一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法 Active CN107228833B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710269527.8A CN107228833B (zh) 2017-04-21 2017-04-21 一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710269527.8A CN107228833B (zh) 2017-04-21 2017-04-21 一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107228833A true CN107228833A (zh) 2017-10-03
CN107228833B CN107228833B (zh) 2020-07-17

Family

ID=59933120

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710269527.8A Active CN107228833B (zh) 2017-04-21 2017-04-21 一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107228833B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110702843A (zh) * 2019-09-30 2020-01-17 佛山市欧若拉生物科技有限公司 无患子皂苷标准品的非标定量测定试剂盒及测定方法
CN112067564A (zh) * 2020-09-14 2020-12-11 湖南中医药大学 一种快速测定中药复方中总苷含量的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101810752A (zh) * 2010-05-06 2010-08-25 陕西康惠制药股份有限公司 一种治疗前列腺炎的中药质量检测方法
CN103083388A (zh) * 2012-12-31 2013-05-08 山东省中医药研究院 猪牙皂总皂苷的制备方法
CN106083983A (zh) * 2016-06-20 2016-11-09 福州大学 一种从无患子中制备常春藤皂苷元的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101810752A (zh) * 2010-05-06 2010-08-25 陕西康惠制药股份有限公司 一种治疗前列腺炎的中药质量检测方法
CN103083388A (zh) * 2012-12-31 2013-05-08 山东省中医药研究院 猪牙皂总皂苷的制备方法
CN106083983A (zh) * 2016-06-20 2016-11-09 福州大学 一种从无患子中制备常春藤皂苷元的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
伍恒等: "无患子总皂苷质控品的制备", 《食品工业科技》 *
杨志斌 等: "无患子有效化学成分的分析研究", 《湖北林业科技》 *
鲁鑫焱等: "薯蓣皂苷元的提取与分离分析方法", 《沈阳药科大学学报》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110702843A (zh) * 2019-09-30 2020-01-17 佛山市欧若拉生物科技有限公司 无患子皂苷标准品的非标定量测定试剂盒及测定方法
CN110702843B (zh) * 2019-09-30 2022-05-17 东莞微领生物科技有限公司 无患子皂苷标准品的非标定量测定试剂盒及测定方法
CN112067564A (zh) * 2020-09-14 2020-12-11 湖南中医药大学 一种快速测定中药复方中总苷含量的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107228833B (zh) 2020-07-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Nielsen Rapid determination of starch-An index to maturity in starchy vegetables
Moo et al. New development of optical fibre sensor for determination of nitrate and nitrite in water
CN103439312B (zh) 一种基于表面增强拉曼光谱技术对牛奶中硫氰酸钠的含量进行快速检测的方法
Sanchez-Machado et al. High-performance liquid chromatography with fluorescence detection for quantitation of tryptophan and tyrosine in a shrimp waste protein concentrate
GB2025047A (en) Test reagent insolubilised in silica gel
CN107228833A (zh) 一种无患子总皂苷快速检测试剂盒及检测方法
CN103149167A (zh) 检测牛奶及饮用水中四环素残留的方法
CN107144558B (zh) 一种利用拉曼光谱技术鉴定地沟油的方法
CN103837396B (zh) 一种水晶玻璃的消解方法和水晶玻璃铅含量的测定方法
Smit et al. Determination of tannins and related polyphenols in foods
CN110702843B (zh) 无患子皂苷标准品的非标定量测定试剂盒及测定方法
CN105527259B (zh) 一种橡胶产品中2-巯基苯并噻唑的检测方法
CN102042976A (zh) 肥料中磷钾含量的测定方法
CN110530806B (zh) 一种快速测定阔叶材原料中聚戊糖和纤维素含量的方法
CN102004098A (zh) 肥料中微量元素的测定方法
CN103207160B (zh) 以纳米金为显色探针的硫氰酸盐快速测定方法
Abdulkareem et al. Determination of Nickel and Cobalt in Cosmetic Products Marketed in Iraq Using Spectrophotometric and Microfluidic Paper-based Analytical Device (µPADs) Platform
CN100535637C (zh) 塑料样品中铅镉的连续测定方法
CN111610182B (zh) 一种检测芝麻油纯度的试纸的检测方法
CN109425609B (zh) 一种用于定量测定腐植酸的色板及其制备方法和用途
CN104535503A (zh) 一种测定水体中钴含量的检测剂的制备和使用方法
CN113433291B (zh) 一种土壤中全氮磷钾的消解方法及测定方法
CN114149593B (zh) 金属有机框架UiO-66-NH2及其制备方法和应用
Covington et al. Purity of potassium hydrogen phthalate for use as a pH standard
CN106966963A (zh) 一种荧光探针及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant