CN107217012A

CN107217012A - 一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法

Info

Publication number: CN107217012A
Application number: CN201710672787.XA
Authority: CN
Inventors: 赵坤
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2017-08-08
Filing date: 2017-08-08
Publication date: 2017-09-29

Abstract

本发明公开了一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，按如下步骤进行：将牛蒡进行切片洗净，烘干至含水率低于3%；将烘干的牛蒡片，粉碎处理，过200目筛网，紫外线杀菌处理；配置试管培养基，将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，在无氧条件下培养制得试管菌种；配制种子罐培养基，温度28‑30℃，无氧条件下，在种子罐中培养5‑10天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养30‑45天，制得蛹虫草菌丝体；干燥及粉碎：真空干燥，干燥后用粉碎机进行粉碎，得到粉末状菌丝体产品。本发明生产的蛹虫草菌丝体具有增强机体免疫，抗疲劳、抗癌以及活血通络，老少皆宜。发酵菌丝体还含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、Ca等金属元素，尤以Ca的含量为高。

Description

一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法

技术领域

本发明涉及一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，属于生药学技术领域。

背景技术

蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link) 又称为北虫草、北冬虫夏草、蛹草，隶属于真菌界(Fungi)、子囊菌门(Ascomycota)、盘菌亚门(Pezizomycotina)、粪壳菌纲(Sordarimycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、麦角菌科(Clavicipiaceae)、虫草属[Cordyceps(Fr.)Link]，是虫草属真菌的模式种。蛹虫草在世界各地均有分布，是一种虫生真菌，也是药用真菌中的一种，该真菌侵染寄主昆虫的幼虫、成虫或蛹，使其僵化，在一定条件下，该僵虫形成具有虫( 僵虫菌核)、草( 真菌子座) 复合形态的真菌结构。现代研究表明：蛹虫草含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、核苷、甾醇等多种生物活性物质；对人体具有多种显著的生理功能，具有增强免疫力、调节内分泌、抗疲劳、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗肿瘤、抗缺氧、镇静、降血糖、保护肝肾及呼吸系统等多种生理功能。其活性成分和功能与著名的药用真菌冬虫夏草〔Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc〕极其相似，某些活性成分如虫草素、核苷等物质含量还高于冬虫夏草生药。

安徽农业大学曾经对蛹虫草菌丝体进行了有效成分的分析，其结果表明：菌丝体中氨基酸种类和冬虫夏草生药一致，但氨基酸总量和必需氨基酸总量明显高于冬虫夏草生药，必需氨基酸占总氨基酸的比例也高于后者，必需氨基酸中苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸的含量更远远高于后者，菌丝体中粗蛋白、总糖及甘露醇的含量均高于冬虫夏草生药；菌丝体的脂肪酸组成中，不饱和脂肪酸占脂肪酸组成的85.38%，其中亚油酸、亚麻酸等多价不饱和脂肪酸占脂肪酸组成的58.87%，而亚油酸的含量占整个脂肪酸组成的一半以上(51.04%)；发酵菌丝体还含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、 Ca等金属元素，尤以Ca的含量为高。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，按如下步骤进行：

步骤1）、将牛蒡进行切片洗净，并在45-50℃下烘干，烘干至含水率低于3%即可停止烘干；

步骤2）、将烘干的牛蒡片，放入粉碎机进行粉碎处理，过200目筛网，利用紫外线进行杀菌处理，制得牛蒡粉，备用；

步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.0-1.3%，牛蒡粉10-20%，葡萄糖2.0 - 2.5%，蛋白胨 0.8 -1.0%，酵母粉0.5 -1.0%，琼脂粉1.2 - 1.6%，水余量，其 pH 值为 6.0-7.5 ；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为15-20 %；在25 - 32℃无氧条件下培养 8-12 天，制得试管菌种；

步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.0-1.3%，牛蒡粉30-40%，豆粕粉0.6 - 0.8%，二氧化锗粉末0.01 - 0.02%，硫酸锌1.0 - 2.0%，葡萄糖 2.0 - 2.5%，蛋白胨0.5 - 0.8%，酵母提取物 1.0 -1.1%，水余量，其 pH 值为 6.5-7.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的60% - 80%，温度 28 - 30℃，无氧条件下，在种子罐中培养 5-10 天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养 30-45 天，制得蛹虫草菌丝体；

步骤5）干燥及粉碎：将得到的蛹虫草菌丝体 55 -60℃真空干燥，干燥后用粉碎机进行粉碎，得到粉末状菌丝体产品。

进一步优化的，所述步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.2%，牛蒡粉18%，葡萄糖2.2%，蛋白胨1.0%，酵母粉0.8%，琼脂粉1.4%，水余量，其 pH 值为 6.5 ；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为16 %；在29.5℃无氧条件下培养 10 天，制得试管菌种。

进一步优化的，所述步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.2%，牛蒡粉35%，豆粕粉0.7%，二氧化锗粉末0.01%，硫酸锌1.0%，葡萄糖 2. 2%，蛋白胨 0.7%，酵母提取物 1.1%，水余量，其 pH 值为 6.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的78%，温度 29.5℃，无氧条件下，在种子罐中培养 6 天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养 36 天，制得蛹虫草菌丝体。

本发明蛹虫草菌丝体具有的功效：

(1)补充必需氨基酸：含有十余种氨基酸，其中6种属EAA，冬虫夏草可能是通过补充CRF病人所缺乏的EAA，促使蛋白质的合成，减轻氮质潴留，从而达到治疗作用。

(2)调节钙磷代谢：有效地控制高磷血症是延缓肾功能恶化的重要措施之一。冬虫夏草具有升高血钙、降低血磷的作用，使钙磷代谢恢复正常，且与临床症状改善相符合，但机理不明。

(3)补充微量元素：CRF患者体内微量元素如锌、铬、锰等明显低于常人。人工虫草和野生虫草均含有15种微量元素，上述微量元素含量较高，特别是锌含量较高。锌是多种金属的活化剂，是RNA、DNA聚合酶的主要成分，参与肌体蛋白质的合成，在改善CRF临床症状中起重要作用。因此，冬虫夏草治疗CRF可能与其补充微量元素有关。

(4)影响蛋白代谢：虫草对尿毒症病人体蛋白有明显影响。现已证明，尿毒症毒素对蛋白质代谢有抑制作用，虫草能降低CRF患者血清中分子物质水平，且能使Scr、BUN水平明显下降，说明病人蛋白代谢的改善可能与尿毒症毒素的排泄有关。

(5)调节免疫功能：虫草的免疫药理作用概括起来有以下几方面：①对免疫器官的影响，主要表现为免疫器官(胸腺、脾脏)重量的增加；②对单核—巨噬细胞系统功能的增强作用；③对体液免疫功能的增强作用；④对细胞免疫功能的调节作用；⑤对自然杀伤细胞活性的增强作用。

本发明有益技术效果：

1、本发明使用的原料简单、易购、成本低。

2、本发明使用的容具亦简单、易购、成本低。

3、本发明采用旋转式摇床进行液体菌种培养，同时液体菌种在培养过程不需多级培养，不但缩短生产周期，同时也降低了因多级转接菌种培养而容易感染之风险。

4、本发明所培养的是菌丝体是通过培养至转色后使其生理性能成熟，含有虫草特有的虫草素、SOD、虫草多糖等高活性物质。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，本领域技术人员应该清楚实施例是对本发明的解释，不应视为对本发明具体的保护。

实施例1

一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，按如下步骤进行：

步骤1）、将牛蒡进行切片洗净，并在50℃下烘干，烘干至含水率低于3%即可停止烘干；

所述步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.2%，牛蒡粉18%，葡萄糖2.2%，蛋白胨1.0%，酵母粉0.8%，琼脂粉1.4%，水余量，其 pH 值为 6.5 ；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为16 %；在29.5℃无氧条件下培养 10 天，制得试管菌种。

步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.0%，牛蒡粉30%，豆粕粉0.6%，二氧化锗粉末0.01%，硫酸锌1.0%，葡萄糖 2.0%，蛋白胨 0.5%，酵母提取物 1.0%，水余量，其 pH 值为 6.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的60%，温度 28℃，无氧条件下，在种子罐中培养 5天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养 30 天，制得蛹虫草菌丝体；

步骤5）干燥及粉碎：将得到的蛹虫草菌丝体 55℃真空干燥，干燥后用粉碎机进行粉碎，得到粉末状菌丝体产品。

实施例2

一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，按如下步骤进行：

步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.0%，牛蒡粉10%，葡萄糖2.0%，蛋白胨 0.8%，酵母粉0.5%，琼脂粉1.2%，水余量，其 pH 值为 7.5 ；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为20%；在32℃无氧条件下培养 12 天，制得试管菌种；

步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.0%，牛蒡粉30%，豆粕粉0.6%，二氧化锗粉末0.02%，硫酸锌2.0%，葡萄糖 2.0%，蛋白胨 0.5%，酵母提取物 1.0%，水余量，其pH 值为 6.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的80%，温度 30℃，无氧条件下，在种子罐中培养 10 天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养 45 天，制得蛹虫草菌丝体；

步骤5）干燥及粉碎：将得到的蛹虫草菌丝体 60℃真空干燥，干燥后用粉碎机进行粉碎，得到粉末状菌丝体产品。

实施例3

一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，按如下步骤进行：

步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.2%，牛蒡粉18%，葡萄糖2.2%，蛋白胨1.0%，酵母粉0.8%，琼脂粉1.4%，水余量，其 pH 值为 6.5 ；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为16 %；在29.5℃无氧条件下培养 10 天，制得试管菌种。

步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.2%，牛蒡粉35%，豆粕粉0.7%，二氧化锗粉末0.01%，硫酸锌1.0%，葡萄糖 2. 2%，蛋白胨 0.7%，酵母提取物 1.1%，水余量，其 pH 值为 6.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的78%，温度 29.5℃，无氧条件下，在种子罐中培养 6 天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养 36 天，制得蛹虫草菌丝体。

步骤5）干燥及粉碎：将得到的蛹虫草菌丝体 55℃℃真空干燥，干燥后用粉碎机进行粉碎，得到粉末状菌丝体产品。

Claims

1.一种牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，其特征在于：按如下步骤进行：

步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.0-1.3%，牛蒡粉30-40%，豆粕粉0.6-0.8%，二氧化锗粉末0.01-0.02%，硫酸锌1.0-2.0%，葡萄糖 2.0 -2.5%，蛋白胨 0.5 -0.8%，酵母提取物 1.0 -1.1%，水余量，其 pH 值为 6.5-7.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的60% - 80%，温度 28 - 30℃，无氧条件下，在种子罐中培养 5-10 天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养 30-45 天，制得蛹虫草菌丝体；

2.根据权利要求1所述的牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，其特征在于：所述步骤3）、配置试管培养基，其重量百分比为：氨基酸1.2%，牛蒡粉18%，葡萄糖2.2%，蛋白胨1.0%，酵母粉0.8%，琼脂粉1.4%，水余量，其 pH 值为 6.5 ；将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面，接入量为16 %；在29.5℃无氧条件下培养 10 天，制得试管菌种。

3.根据权利要求1所述的牛蒡基蛹虫草菌丝体制备方法，其特征在于：所述步骤4）配制种子罐培养基，其重量比组分为：氨基酸1.2%，牛蒡粉35%，豆粕粉0.7%，二氧化锗粉末0.01%，硫酸锌1.0%，葡萄糖 2. 2%，蛋白胨 0.7%，酵母提取物 1.1%，水余量，其 pH 值为6.5，灭菌；接入步骤3）培养好的试管菌种，并接入蛹虫草菌种占种子罐培养基体积的78%，温度 29.5℃，无氧条件下，在种子罐中培养 6 天，并逐级扩大至生产规模搅拌培养 36天，制得蛹虫草菌丝体。