CN107213166A - 具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液及其制备方法，其主要成分为脐血浆小分子精华液65‑75％、甘露醇2‑4％、山梨醇2‑5％、高甲氧基果胶和丙二醇藻酸盐各占1‑4％、海藻糖1‑2％、甘油8‑10％、电解质溶液8‑10％。上述产品的制备经过分离、过滤先制备脐血浆小分子精华液后，再按配比进行混合，得到注射液。本发注射液含有丰富的人体蛋白因子如Neuritin、FGF、PDGF、SCF、CXCL4等，能够提高细胞免疫机制，促细胞分裂、促血管形成、快速修复组织损伤，及时为人体细胞补充所需蛋白因子，从而提高机体抗衰机制，增强组织和器官的修复功能，增强人体免疫力，进而达到抗衰老的目的。
Description
技术领域
本发明涉及注射液及制备方法，确切地说是具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液及其制备方法。
背景技术
随着生活水平的提高，人们对衰老问题越来越重视，探索各种抗衰老的方法，已有文献资料报道年轻的血液可以明显改善年老小鼠的认知障碍问题、心肌肥大症，并且增强年老小鼠的肌肉能力，说明年轻的血液中含有一些年轻因子对抗衰老有一定的作用，脐血浆比静脉血含有更丰富的因子，脐血浆中含有丰富的造血生长因子、神经营养因子、以及一些创伤愈合相关的细胞因子，对抗衰老有一定的作用，通过探索脐血浆中对抗衰老有作用的有效的成分，对于我们脐血库废弃资源的利用具有重要价值，这对于提高脐血浆的利用率以及对抗衰老均有重要意义。
衰老又称老化，通常是指在正常情况下生物发育成熟后，随年龄增加，自身机能减退，内环境稳定能力与应急能力下降，结构、组分逐步退行性变，趋向死亡，不可逆转的现象。骨骼系统骨组织随着年龄衰老，骨质变脆，易骨折，创伤愈合比较慢；肌肉萎缩；神经系统的传导变慢，记忆力减退，反应降低；衰老还常伴随心血管系统的变化，心脏体积增大，动脉血管变性。
对衰老的常见病症，心肌肥厚等研究发现，与年轻小鼠共享循环系统的老年小鼠的心肌肥厚有明显的改善，心肌细胞减小，并伴随分子的重构，用蛋白组学的分析发现年轻血液中GDF-11起到关键作用。而且在衰老小鼠体内增加GDF-11水平不但改善肌肉结构和功能特性，而且还会增加力量和耐力运动能力。这些研究说明在年轻的血液较年老的血液有很大的优势，富含一些抗衰老的因子对衰老的过程起到延缓的作用，脐血相对于静脉血，有较低的免疫原性，较强的增值能力，并且在脐血血浆中富含不同阶段的造血生长因子，高表达多种神经营养因子，如纤维细胞生长因子(FGF-4、FGF-8、FGF-23)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经调节素(NRG1)等，骨生长因子(BMP-2、BMP-7)以及一些创伤愈合相关的细胞因子在脐血血浆中也表达上调。脐血浆中神经营养作用的活性蛋白成分，其含量显著高于静脉血浆，其中FGF-4、Frizzled-3、IL-3、RAGE在脐血浆中的含量是静脉血浆含量的4倍以上。脐血浆中与细胞增殖、分化和胚胎发育相关的多种蛋白成分含量也显著高于静脉血浆，如干细胞因子和胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP-7)在脐血浆的含量分别是静脉血浆的10倍、8倍，它们在促进干细胞增殖、调控细胞生长等方面有十分重要的作用。因此脐血浆相对于年轻血液有更大的优势。
对于衰老的研究，至今已有数以百计的学说，主要的几种学说有基因程控学说、细胞突变学说、差错灾变学说、自由基学说、交联学说、神经内分泌学说、免疫衰老学说等，自由基学说认为在生物代谢过程中，不断产生各种自由基，这些自由基可对自身组织产生毒性作用，破坏细胞膜，并可使蛋白质羰基化和硫基丢失，从而使酶的活性下降或消失。神经内分泌学说认为，下丘脑—垂体—肾上腺是调节衰老过程的主要生物钟，已知神经-内分泌系统调节人体早期的发育、生长和生殖、代谢功能，内分泌功能的改变会影响衰老的过程。免疫衰老学说认为，随着个体年龄的增长，机体免疫功能下降，同时伴随着机体老化，自身免疫性疾病的发病率也呈上升趋势，因而认为免疫功能下降与衰老密切相关。而人体血浆中含有丰富的可以中和自由基、调节人体中主要腺体的激素，但是如何去除血浆中容易致敏的大分子物质，富集拥有这些功能的小分子，并且稳定这些活性物质的半衰期将是技术难点。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液及其制备方法，该注射液优势在于可以促进动物器官快速修复衰老的器官和组织，尤其是免疫器官、生殖器官，增强机体血液循环，增强自身免疫功能，提高免疫力对抗衰老。其中该制备方法优势是将保存脐血过程中作为废品直接废弃处理的脐血浆进行利用，变废为宝，制备为注射液产品。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术手段：
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液，包括以下质量比的组分：脐血浆小分子精华液65-75％，甘露醇2-4％、山梨醇2-5％、高甲氧基果胶0.5-2％、丙二醇藻酸盐0.5-2％、海藻糖1-2％、甘油8-10％及电解质溶液8-10％。
本发明所使用的脐血浆是血液类相关血浆，提取出的脐血浆小分子精华液含有丰富的人体蛋白因子如Neuritin、FGF、PDGF、SCF、CXCL4等，能够提高细胞免疫机制，促细胞分裂、促血管形成、快速修复组织损伤，及时为人体细胞补充所需蛋白因子，从而提高机体抗衰机制，增强组织和器官的修复功能，增强人体免疫力，进而达到抗衰老的目的。
注射液中的甘露醇、山梨醇、高甲氧基果胶、丙二醇藻酸盐、海藻糖、甘油及电解质溶液主要作用是维持蛋白稳定以及与体液保持相同渗透压的作用。
如有需要，可加入氢氧化钠调节pH值，以达到更理想的效果。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液，电解质溶液，每1000mL溶液中含有氯化钠2.34g；葡萄糖酸钠5.02g；乳酸钠2.24g；氯化钾0.75g；氯化镁0.30g。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，所述的脐血浆小分子精华液，由身体健康产妇的脐血浆制取而成，其制取包括以下步骤：
S1.脐血的采集及保存：采集健康产妇志愿者脐带血，放置于脐血保存袋中4℃中保存，并于48小时内对脐血进行血浆和血液的分离；
S2.将新鲜血浆在4℃下4200r/min离心15min，收集上清；
S3.取上清液，分到两个离心管中，分别向其中加入1mol/L CaCl2溶液0.51ml，颠倒混匀；
S4.常温常压下静置150min或者37℃水浴30min待凝血系统析出后在4℃下12000r/min离心30min，弃去沉淀，收集上清液；
S5.用0.22μm滤器过滤，分装；
S6.分装后加入淋巴细胞分离液，离心后分离出脐血浆和血细胞，得到所需要的脐血浆小分子精华液；
S7.将所获得的脐血浆小分子精华液与冷冻保护剂进行冷冻保存。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，所采用的冷冻保护液为甘油，即冻存的为甘油及脐血浆小分子精华液比例为1:7。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，用0.22μm滤器过滤，分装后，在4℃下采用超滤方法除去脐血浆中大分子白蛋白，获得小分子及多肽类的蛋白因子的脐血浆小分子精华注射液，然后将甘露醇、电解质溶液、人体白蛋白按配比加入超滤后的脐血浆小分子精华液中混匀，即得到上述脐血浆小分子精华注射液。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，包括以下步骤：
S1.在37.5℃下将检测合格的脐血浆精华液水浴2-3min，防止脐血浆小分子精华液中蛋白失活；
S2.按如下比例加入脐血浆小分子精华液70％、甘露醇3％、山梨醇3％、高甲氧基果胶2％、丙二醇藻酸盐2％、海藻糖2％、甘油10％及电解质溶液10％。
为使效果达到最优，采血前对产妇进行筛选检测。
为使效果达到最优，加入的淋巴细胞分离液符合临床级别。
为使效果达到最优，CaCl2溶液用0.22μm滤器过滤。
为使效果达到最优，超滤时所用超滤膜需达到医用级别。
本技术方案主要利用脐血浆制备此注射液，在正常情况中为保存脐血，脐血浆将成为废品直接废弃，我们的此种方法实现了“变废为宝”“废物利用”，对于脐血的废弃资源的利用具有重要价值。本发明从采集脐血至产品的生产制备环境全过程进行临床级别监控，以实现脐血浆注射液符合临床标准产品。本发明制备的注射液可以促进动物器官快速修复衰老的器官和组织，尤其是免疫器官、生殖器官，增强机体血液循环，增强自身免疫功能，提高免疫力对抗衰老有十分显著的效果。
本产品与现有技术相比，具体有点有：
①产品的原材料为脐血冻存的废弃附产物，无成本价值。
②产品中无血细胞成分，有效防止产品进入体内后凝血现象的发生。
③本产品制备条件全过程全面质量监控，采集脐血至产品的生产制备环境全过程进行临床级别监控，以实现脐血浆注射液符合临床标准产品。
③产品新鲜血浆在4℃下制备，因为在此温度下能保持脐血浆中的蛋白因子的活性。
⑤在生产制备过程中没有加入任何抗生素和异源蛋白，避免了过敏反应的发生。
⑥此产品对免疫器官、生殖器官的修复作用效果显著，同时加强机体血液循环，增强自身免疫功能，提高免疫力对抗衰老有十分显著的效果。
附图说明
图1为本发明产品实例1中衰老大鼠模型的建立及分组实验图。
图2为本发明中正常组大鼠(A)、注射PBS注射液(B)、注射脐血浆小分子精华注射液(C)、注射间充质干细胞注射液(D)、成人血浆注射液(E)对大鼠胸腺的治疗效果图。
图3为本发明中正常组大鼠(A)、注射PBS注射液(B)、注射脐血浆小分子精华注射液(C)、注射间充质干细胞注射液(D)、成人血浆注射液(E)对大鼠脾脏的治疗效果图。
图4为本发明中正常组大鼠(A)、注射PBS注射液(B)、注射脐血浆小分子精华注射液(C)、注射间充质干细胞注射液(D)、成人血浆注射液(E)对大鼠卵巢的治疗效果图。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步说明本发明。
实施例1：具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液，由以下质量分数比的组分组成，脐血浆小分子精华液65％，甘露醇2％、山梨醇2％、高甲氧基果胶0.5％、丙二醇藻酸盐0.5％、海藻糖1％、甘油8％及电解质溶液8％组成。
实施例2：具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液，由以下质量比的组分组成，脐血浆小分子精华液75％，甘露醇4％、山梨醇5％、高甲氧基果胶2％、丙二醇藻酸盐2％、海藻糖2％、甘油10％及电解质溶液10％组成。
实施例1：具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液，由以下质量比的组分组成，脐血浆小分子精华液65-75％，甘露醇2-4％、山梨醇2-5％、高甲氧基果胶0.5-2％、丙二醇藻酸盐0.5-2％、海藻糖1-2％、甘油8-10％及电解质溶液8-10％组成。
实施例3：脐血浆小分子精华液70％、甘露醇3％、山梨醇3％、高甲氧基果胶2％、丙二醇藻酸盐2％、海藻糖2％、甘油10％及电解质溶液10％。
如有需要，本产品可加入氢氧化钠调节pH值，以达到更理想的效果。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液，电解质溶液，每1000mL溶液中含有氯化钠2.34g；葡萄糖酸钠5.02g；乳酸钠2.24g；氯化钾0.75g；氯化镁0.30g。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，所述的脐血浆小分子精华液，由身体健康产妇的脐血浆制取而成，其制取包括以下步骤：
S1.脐血的采集及保存：采集健康产妇志愿者脐带血，放置于脐血保存袋中4℃中保存，并于48小时内对脐血进行血浆和血液的分离；
S2.将新鲜血浆在4℃下4200r/min离心15min，收集上清；
S3.取上清液，分到两个离心管中，分别向其中加入1mol/L CaCl2溶液0.51ml，颠倒混匀；
S4.常温常压下静置150min或者37℃水浴30min待凝血系统析出后在4℃下12000r/min离心30min，弃去沉淀，收集上清液；
S5.用0.22μm滤器过滤，分装；
S6.分装后加入淋巴细胞分离液，离心后分离出脐血浆和血细胞，得到所需要的脐血浆小分子精华液；
S7.将所获得的脐血浆小分子精华液与冷冻保护剂进行冷冻保存。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，所采用的冷冻保护液为甘油，即冻存的为甘油及脐血浆小分子精华液混合物比例为1:7。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，用0.22μm滤器过滤，分装后，在4℃下采用超滤方法除去脐血浆中大分子白蛋白，获得小分子及多肽类的蛋白因子的脐血浆小分子精华注射液，然后将甘露醇、电解质溶液、人体白蛋白按配比加入超滤后的脐血浆小分子精华液中混匀，即得到上述脐血浆小分子精华注射液。
具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，包括以下步骤：
S1.在37.5℃下将检测合格的脐血浆精华液水浴2-3min，防止脐血浆小分子精华液中蛋白失活；
S2.按如下比例加入脐血浆小分子精华液70％、甘露醇3％、山梨醇3％、高甲氧基果胶2％、丙二醇藻酸盐2％、海藻糖2％、甘油10％及电解质溶液10％。
为使效果达到最优，采血前对产妇进行筛选检测。
为使效果达到最优，加入的淋巴细胞分离液符合临床级别。
为使效果达到最优，CaCl2溶液用0.22μm滤器过滤。
为使效果达到最优，超滤时所用超滤膜需达到医用级别。
对比实验：
实验内容：实施例3的本注射液产品与PBS注射液、间充质干细胞注射液、成人血浆注射液对大鼠衰老模型尾静脉输注的动物实验。
实验测定内容：
一、外部特征：大鼠毛发、体重、抓握能力、皮脂厚度及活跃度。二、切片观察：衰老大鼠脾脏、胸腺及卵巢的切片观察。
实验步骤：参见图1可知：
1.分组及大鼠衰老模型的建立：取6-8周龄SD雌性大鼠40只，随机分出8只设置为正常组，剩余32只大鼠建立衰老模型，即颈部皮下注射D-半乳糖0.125g/kg，每日一次连续42天，正常组不做处理，正常喂食连续42天。
2.注射本发明产品注射液及相关对照注射液从衰老大鼠建模结束开始即第43天，正常组大鼠注射0.8mL电解质溶液，每周两次，连续4周，作为空白对照组；32只衰老大鼠随机分成4组，每组8只，分别注射0.8mL PBS注射液、注射0.8mL脐血浆发明产品注射液、注射0.8mL间充质干细胞注射液、注射0.8mL成人血浆注射液，每周两次，连续4周。其中PBS注射液作为衰老大鼠空白对照组；间充质干细胞注射液作为阳性对照组。
3.对大鼠衰老指标外部特征的观测分别对大鼠毛发、体重、抓握能力、皮脂厚度及活跃度观测如表1所示。
表1五组大鼠实验结束后外观特征
| 正常组 | PBS组 | 产品组 | MSC组 | 成人血浆组 | |
| 毛发 | 正常 | 枯黄 | 正常 | 正常 | 枯黄 |
| 体重(平均) | 286±5g | 259±7g | 276±4g | 279±6g | 253±8g |
| 抓握能力 | 20±2s | 5±1s | 17±2s | 16±1s | 6±2s |
| 皮脂厚度 | 3.1±0.5mm | 2.2±0.6mm | 2.8±0.3mm | 2.9±0.5mm | 2.1±0.6mm |
| 活跃度 | 正常 | 较低 | 正常 | 正常 | 较低 |
4.切片观察：对实验中SD大鼠的胸腺、脾脏及卵巢的进行HE染色石蜡切片观察，如附图图2、图3、图4所示。
图2(放大倍数为10×10)所示，脐血浆小分子精华注射液对衰老大鼠胸腺的修复作用；图A为正常对照；图B为注射PBS衰老模型组；图C为脐血浆小分子精华注射液治疗组；图D为MSC阳性治疗组；图E为成人血浆组；图中正常组对照组(A)中胸腺皮质较厚，其髓质体积较小，胸腺小叶分化明显，并且界限清楚；注射PBS衰老模型组(B)及成人血浆组(E)其胸腺皮质明显变薄，并且髓质体积逐渐增大，胸腺小叶较少，同时界限不清；脐血浆小分子精华注射液(C)治疗组及MSC治疗组(D)介于二者之间，与衰老组比较，有显著改善，接近正常组的组织结构，胸腺小叶内皮质，髓质分界清晰，皮质厚度明显增加
图3(放大倍数为10×10)所示，脐血浆小分子精华注射液对衰老大鼠脾脏的修复作用；图A为正常对照；图B为注射PBS衰老模型组；图C为脐血浆小分子精华注射液治疗组；图D为MSC阳性治疗组；图E为成人血浆组。图中正常对照组(A)脾小结大小均匀，白髓较多，白髓和红髓界限分明；PBS衰老模型组(B)及成人血浆组(E)脾脏白髓比例相对较少，并且白髓和红髓界限不清晰，其特点符合衰老大鼠脾脏的组织学特征；脐血浆小分子精华注射液治疗组(C)及MSC治疗组(D)大鼠白髓区明显扩大，并且白髓和红髓界限十分清晰，说明其衰老病理损伤明显改善。
图4(放大倍数为10×4)所示，具脐血浆小分子精华注射液对衰老大鼠卵巢的修复作用；图A为正常对照；图B为注射PBS衰老模型组；图C为脐血浆小分子精华注射液治疗组；图D为MSC阳性治疗组；图E为成人血浆组。图中正常对照组(A)卵巢组织镜下可见多个黄体及不同发育阶段的卵泡，并且成熟卵泡较多；PBS衰老模型组(B)及成人血浆组(E)镜下卵泡及黄体数目减少，并呈现卵泡发育受阻，成熟卵泡较少；脐血浆小分子精华注射液治疗组(C)及MSC治疗组(D)镜下可见多个黄体及不同发育阶段的卵泡，并且卵泡内呈多层颗粒细胞，治疗效果显著。
综上所述，这种具有抗衰及胸腺、卵巢、脾脏等组织损伤修复功效的脐血浆小分子精华注射液能够明显改善衰老大鼠器官的衰老特征，并且可以修复其免疫器官及生殖器官衰老的状态。
本技术方案主要利用脐血浆制备此注射液，在正常情况中为保存脐血，脐血浆将成为废品直接废弃，我们的此种方法实现了“变废为宝”“废物利用”，对于脐血的废弃资源的利用具有重要价值。本发明从采集脐血至产品的生产制备环境全过程进行临床级别监控，以实现脐血浆注射液符合临床标准产品。本发明制备的注射液可以促进动物器官快速修复衰老的器官和组织，尤其是免疫器官、生殖器官，增强机体血液循环，增强自身免疫功能，提高免疫力对抗衰老有十分显著的效果。
本产品与现有技术相比，具体有点有：
④产品的原材料为脐血冻存的废弃附产物，无成本价值。
⑤产品中无血细胞成分，有效防止产品进入体内后凝血现象的发生。
③本产品制备条件全过程全面质量监控，采集脐血至产品的生产制备环境全过程进行临床级别监控，以实现脐血浆注射液符合临床标准产品。
④本产品新鲜血浆在4℃下制备，因为在此温度下能更好的保持脐血浆中的蛋白因子的活性。
⑤在生产制备过程中没有加入任何抗生素和异源蛋白，避免了过敏反应的发生。
⑥此产品对免疫器官、生殖器官的修复作用效果显著，同时加强机体血液循环，增强自身免疫功能，提高免疫力对抗衰老有十分显著的效果。
由于以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护不限于此，任何本技术领域的技术人员所能想到本技术方案技术特征的等同的变化或替代，都涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液，其特征在于，包括以下质量比的组分：脐血浆小分子精华液65-75％，甘露醇2-4％、山梨醇2-5％、高甲氧基果胶0.5-2％、丙二醇藻酸盐0.5-2％、海藻糖1-2％、甘油8-10％及电解质溶液8-10％。
2.根据权利要求1所述的具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液，其特征在于，所述的电解质溶液，每1000mL溶液中含有氯化钠2.34g；葡萄糖酸钠5.02g；乳酸钠2.24g；氯化钾0.75g；氯化镁0.30g。
3.根据权利要求1所述的具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，其特征在于，所述的脐血浆小分子精华液，由身体健康产妇的脐血浆制取而成，其制取包括以下步骤：
S1.脐血的采集及保存：采集健康产妇志愿者脐带血，放置于脐血保存袋中4℃中保存，并于48小时内对脐血进行血浆和血液的分离；
S2.将新鲜血浆在4℃下4200r/min离心15min，收集上清；
S3.取上清液，分到两个离心管中，分别向其中加入1mol/L CaCl2溶液0.51ml，颠倒混匀；
S4.常温常压下静置150min或者37℃水浴30min待凝血系统析出后在4℃下12000r/min离心30min，弃去沉淀，收集上清液；
S5.用0.22μm滤器过滤，分装；
S6.分装后加入淋巴细胞分离液，离心后分离出脐血浆和血细胞，得到所需要的脐血浆小分子精华液；
S7.将所获得的脐血浆小分子精华液与冷冻保护剂进行冷冻保存。
4.根据权利要求3所述的具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，其特征在于，所采用的冷冻保护液为甘油，即冻存的为甘油及脐血浆小分子精华液混合物比例为1:7。
5.根据权利要求3所述的具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，其特征在于，用0.22μm滤器过滤，分装后，在4℃下采用超滤方法除去脐血浆中大分子白蛋白，获得小分子及多肽类的蛋白因子的脐血浆小分子精华液，然后将甘露醇、电解质溶液、人体白蛋白按配比加入超滤后的脐血浆小分子精华液中混匀，即得到上述脐血浆小分子精华注射液。
6.根据权利要求5所述的具有抗衰及器官修复功效的脐血浆注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.在37.5℃下将检测合格的脐血浆精华液水浴2-3min，防止脐血浆小分子精华液中蛋白失活；
S2.按如下比例加入脐血浆小分子精华液70％、甘露醇3％、山梨醇3％、高甲氧基果胶2％、丙二醇藻酸盐2％、海藻糖2％、甘油10％及电解质溶液10％。
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| CN113143791A (zh) * | 2021-05-17 | 2021-07-23 | 威海萨维诺健康管理有限公司 | 一种具有美白抗衰功效的复配注射液及其制备方法 |
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|---|---|---|---|---|
| CN105816481A (zh) * | 2016-04-13 | 2016-08-03 | 上海华颜医药科技有限公司 | 具有抗衰老功效的脐血干细胞注射液及其制备方法 |
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