CN107182344A - 一种促进低温保存后白楸种子萌发的方法 - Google Patents
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Abstract
一种促进低温保存后白楸种子萌发的方法，包括：将‑18℃至‑20℃低温保存的干燥种子连同存放种子的密闭容器取出，在温度为15℃、相对湿度15％的环境中放置24小时，取出种子；将种子放置在温度为60℃的培养箱中，热处理6小时后取出。将种子放置在室温下，待种子温度恢复到室温后播种于含200毫克/升赤霉素的1％琼脂培养基上。将培养基放置于20℃下萌发，光照强度为1000勒克斯，光周期为12小时光照/12小时黑暗。该方法显著提高了不同产地，低温下储存不同时间的白楸种子的萌发。解决了白楸种子低温保藏后不能萌发的问题。处理方法简便易行，60℃热处理6小时有显著效果。
Description
技术领域
本发明属于植物种子保存及萌发技术领域，具体地，涉及一种促进低温(-18℃至-20℃)保存后白楸种子萌发的方法。
背景技术
白楸(Mallotus paniculatus(Lam.)Muell.Arg.)是大戟科(Euphorbiaceae)野桐属(Mallotus Lour.)灌木或乔木树种。主要分布于云南、贵州、广西、广东、海南、福建和台湾等省。以根入药，味微苦、涩，性平，具有消热利湿、止痛、解毒等功效，广西民间常用于治疗痢疾、子宫脱垂、中耳炎等；其树皮纤维可制麻绳和麻布袋，从果实提炼出来的油则可作工业用途。目前未见其种子萌发及种子储藏特性方面的报道。
将正常型种子干燥后低温(-18℃至-20℃)保藏可以极大的延长其寿命，这在国际上已经形成共识，并且基于这一理论建立了多个农作物及野生植物种子库；但一些植物的种子在干燥和/或冷藏后萌发特性会发生变化，如本发明所涉及的白楸种子低温(-18℃至-20℃)保存一段时间后则几乎完全不能萌发。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术中在低温(-18℃至-20℃)保存一段时间后的白楸种子几乎完全不能萌发的技术难题，提供一种简便高效萌发低温保存后白楸种子的方法。为实现该物种的长期有效保存及利用提供技术支持。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
一种促进低温保存后白楸种子萌发的方法，包括如下步骤：
(1)将在-18℃至-20℃冷藏保存后的种子连同其密闭容器取出，在温度为15℃、相对湿度15％的环境中放置24小时回温；
(2)将回温后的种子从密闭容器中取出，放置在温度为60℃的培养箱中，热处理6小时后取出；
(3)将步骤(2)处理后的种子放置在室温下，待种子温度恢复到室温后播种于含200毫克/升赤霉素的1％琼脂培养基中，放置于20℃下萌发，光照强度为1000勒克斯，光周期为12小时光照/12小时黑暗。
根据所述的一种促进低温保存后白楸种子萌发的方法，其中所述步骤(1)在-18℃至-20℃冷藏保存的种子是采集成熟饱满的种子，先将种子置于温度为15℃、相对湿度15％的环境中直到种子的平衡相对湿度达到15％(此时种子的含水量通常低于10％)，然后再将种子放入密闭容器中，保存于-18℃至-20℃。
本发明为一种促进低温保存后白楸种子萌发的方法，更具体的步骤是：
采集成熟饱满的种子，将种子置于温度为15℃、相对湿度15％的环境中，至种子的平衡相对湿度达到15％时，将种子放入密闭容器，保存于-18℃至-20℃中，以上为国际通用的正常型种子保存方法。种子保存一段时间后，根据需要，将装有种子的密闭容器取出，在温度为15℃、相对湿度15％的环境中；随后将种子从容器中取出，放置在温度为60℃的培养箱中，热处理6小时后取出；待种子恢复到室温后播种于含200毫克/升赤霉素的1％琼脂培养基上，将培养基放置于20℃下萌发，光照强度为1000勒克斯，光周期为12小时光照/12小时黑暗。
具体实施方式
下面用本发明实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
实施例1：
1.材料和方法：
1.1研究材料：
2014年1月，云南普洱思茅区大开河村采集成熟的新鲜白楸(Mallotuspaniculatus)种子。采集后运回昆明植物研究所西南野生生物种质资源库种子保藏中心。
1.2研究方法：
1.2.1干燥冷藏及冷藏后的回温：将1.1步骤采集到的种子置于15℃，15％相对湿度的干燥间中干燥。定期以Rotronic Ltd.公司生产的Hygrolab C1unit相对湿度测定仪结合同一公司生产的Rotronic HC 2-AW探头对种子相对湿度进行测定，待平衡相对湿度达到15％后装入密闭的容器中。2014年12月将装有种子的密闭容器放入-18℃至-20℃冷藏。冷藏处理2年2个月后将装有种子的密闭容器取出。放入15℃，15％相对湿度的干燥间中回温24小时后打开装有种子的容器，随机取出实验所需种子。
1.2.2实验设计：将种子分为2组处理，分别为对照组和热处理组；热处理温度设置45、60、和70℃三个梯度，处理时间均为6小时。每个处理3个重复，每个重复20粒种子。
1.2.3热处理方法：将种子放入培养箱，培养箱温度设定为45、60、和70℃。处理6小时后取出60粒种子用于萌发实验。
1.2.4萌发：将种子播种于含有200毫克每升赤霉素的1％琼脂培养基上，将培养基装入透明自封袋中防止水分散失，然后置于于20℃的光照培养箱中，光照强度为1000勒克斯，光周期为12小时光照/12小时黑暗。每间隔2-3天检查一次萌发，胚根伸长超过5mm即认为种子萌发，将萌发种子取出，并记录萌发数量；实验开始4周后连续2周无萌发即结束实验。
1.2.5数据分析：利用SPSS16.0软件对萌发数据进行分析，采用One-Way ANOVA进行方差分析，并用S-N-K法对不同处理的萌发率做多重比较。
2.结果
2.1不同热处理稳定对冷藏后云南普洱白楸种子萌发的影响。
表1不同热处理温度对冷藏后云南普洱白楸种子萌发率(％)的影响
注：数字为平均值±标准误，不同字母表示不同处理间的萌发率具有显著差异
由表1可以看出，-20℃下冷藏2年2个月的白楸种子，未经热处理的萌发率为0；45℃的热处理没有效果，60℃热处理6小时后萌发率得到显著提高，可达26.7％，70℃处理后萌发率下降为0。因此60℃处理6小时是比较好的处理方法,在以下具体实施例2中采用60℃处理6小时的方法。
实施例2：
1.材料和方法：
1.1研究材料：
2007年12月07日，云南文山麻栗坡南温河镇采集成熟的新鲜白楸(Mallotuspaniculatus)种子。采集后运回昆明植物研究所西南野生生物种质资源库种子保藏中心。
1.2研究方法：
1.2.1干燥冷藏及冷藏后的回温：将1.1采集到的种子置于15℃，15％相对湿度的干燥间中干燥。定期以Rotronic Ltd.公司生产的Hygrolab C1unit相对湿度测定仪结合同一公司生产的Rotronic HC 2-AW探头对种子相对湿度进行测定，待平衡相对湿度达到15％后装入密闭的容器中。2009年9月将装有种子的密闭容器放入-18℃至-20℃冷藏。冷藏7年零5个月后将装有种子的容器取出。放入15℃，15％相对湿度的干燥间中回温24小时后打开装有种子的容器，随机取出实验所需种子。
1.2.2实验设计：将种子分为2组处理，分别为对照组和热处理组；热处理温度设置60℃，处理时间为6小时。每个处理3个重复，每个重复20粒种子。
1.2.3热处理方法：将种子放入培养箱，培养箱温度设定为60℃。处理6小时后取出60粒种子用于萌发实验。
1.2.4萌发：将种子播种于含有200毫克每升赤霉素的1％琼脂培养基上，将培养基装入透明自封袋中防止水分散失，然后置于20℃的光照培养箱中，光照强度为1000勒克斯，光周期为12小时光照/12小时黑暗。每间隔2-3天检查一次萌发，胚根伸长超过5mm即认为种子萌发，将萌发种子取出，并记录萌发数量；实验开始4周后连续2周无萌发即结束实验。
1.2.5数据分析：利用SPSS16.0软件对萌发数据进行分析，采用One-Way ANOVA进行方差分析。
2.结果
2.1热处理方法对冷藏后云南文山麻栗坡白楸种子萌发的影响。
表2热处理对冷藏后云南麻栗坡白楸种子萌发率(％)的影响
注：数字为平均值±标准误，不同字母表示不同处理间的萌发率具有显著差异
由表2可以看出，-20℃下冷藏7年零5个月的白楸种子，未经热处理的萌发率为0；经60℃热处理后，萌发率达6.7％；该份种子储存时间较长(冷藏超过7年，采集到实验相隔超过9年)，活力可能已比较低，因此萌发率也较低；虽然效果不甚理想，但与完全不能萌发的对照相比也有显著差异；因此该方法对白楸种质资源的保存和利用有积极的意义。
3、本发明的积极效果如下：
与现有技术相比，本发明显著提高了不同产地(云南普洱及文山)，干燥后低温(-18℃至-20℃)下储存不同时间(2年2个月及7年5个月)的白楸种子的萌发。较好的解决了白楸种子低温保藏后不能萌发的问题。且处理方法简便易行，60℃处理6小时即有显著效果，而且无任何危险性及毒副作用。
Claims (3)
1.一种促进低温保存后白楸种子萌发的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
(1)将在-18℃至-20℃低温保存后的干燥种子连同储存种子的密闭容器取出，在温度为15℃，相对湿度15％的环境中放置24小时回温；
(2)将回温后的种子放置在温度为60℃的培养箱中，热处理6小时；
(3)将步骤(2)处理后的种子取出，待种子温度恢复到室温后播种于含200毫克/升赤霉素的1％琼脂培养基中，放置于20℃下萌发，光照强度为1000勒克斯，光周期为12小时光照/12小时黑暗。
2.根据权利要求1所述的一种促进低温保存后白楸种子萌发的方法，其特征在于，所述步骤(1)在-18℃至-20℃冷藏保存的种子是采集成熟饱满的种子，先将种子置于温度为15℃、相对湿度15％的环境中直到种子的平衡相对湿度达到15％，种子含水量低于10％时，再将种子放入密闭容器中，保存于-18℃至-20℃。
3.根据权利要求1所述的一种促进低温保存后白楸种子萌发的方法，其特征在于：采集成熟饱满的种子，将种子置于温度为15℃、相对湿度15％的环境中，至种子的平衡相对湿度达到15％时，将种子放入密闭容器，保存于-18℃至-20℃中；根据需要在一段时间后将装有种子的密闭容器取出，在温度为15℃、相对湿度15％的环境中放置24小时；随后将种子从容器中取出，放置在温度为60℃的培养箱中，热处理6小时后取出；将种子放置在室温下，待种子温度恢复到室温后播种于含200毫克/升赤霉素的1％琼脂培养基上，将培养基放置于20℃下萌发，光照强度为1000勒克斯，光周期为12小时光照/12小时黑暗。
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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| OL01 | Intention to license declared |